C. 예르건의나일 레드 스테인링 : 고정 동물의 지질 방울을 시각화하는 방법

- 중성 지질을 위한 세포내 저장 소기관은 트리톤 X-100을 함유하는 세제 용액을 시료에 첨가하는 것으로 시작합니다.

그런 다음, 염료가 빛에 민감하기 때문에 샘플에 나일 레드를 추가하고 빛으로부터 보호합니다.

인지질과 같은 극지 지질에 노출되면 나일 레드의 방출 스펙트럼은 더 높고 붉은 파장에 있습니다.

따라서, 황색-금 파장 방출을 수집하는 형광 현미경의 녹색 채널을 사용하여 동물 전체에 걸쳐 지질 방울의 나일 레드 염색을 시각화합니다.

- 나일 홍지질 염색, 선충 성장 배지또는 NGM에 판 벌레를 심기 위해 늦은 로그 OP50 E. 대장균으로 씨를 뿌리고, 20도에서 초기 L4 단계로 벌레를 성장시려면.

원심분리는 1분 동안 560배의 중력으로 벌레를 제거하고, 대장균이 현탁액에서 지워질 때까지 PBST 세척을 반복합니다.

- 이소프로판올의 첨가는 염색하기 전에 벌레의 적절한 투과화를 위해 중요합니다.

- 1 분 동안 560 배 중력에서 벌레를 원심 분리하고 벌레 펠릿을 방해하지 않고 상체를 제거합니다.

- 원심분리 단계에서 광 노출을 최소화하는 것이 중요합니다.

- 이제 어둠 속에서 도래한 NR 작업 용액 600마이크로리터를 각 샘플에 추가합니다.

인큐베이션에 따라, 원심분리및 상퍼를 제거합니다.