Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.

النيل الأحمر تلطيخ من C. elegans

 
Click here for the English version

النيل الأحمر تلطيخ من C. elegans: طريقة لتصور قطرات الدهون في الحيوانات الثابتة

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- عند تصور قطرات الدهون، العضيات التخزين داخل الخلايا للدهون المحايدة، تبدأ بإضافة محلول المنظفات، مثل واحد يحتوي على تريتون X-100، إلى العينة.

ثم، أضف النيل الأحمر إلى العينة وحمايته من الضوء، حيث أن الصبغة حساسة للضوء.

عند التعرض للدهون القطبية، مثل الفوسفوليبيدات، يكون طيف انبعاثات النيل الأحمر في الأطوال الموجية الحمراء الأعلى.

لذلك، استخدم القناة الخضراء للمجهر الفلوري، الذي سيجمع انبعاثات الطول الموجي الأصفر والذهبي، لتصور تلطيخ النيل الأحمر لقطرات الدهون في جميع أنحاء الحيوان.

- لتنفيذ تلطيخ الدهون الأحمر النيل، والديدان لوحة على المتوسط نمو النيماتودا، أو NGM، المصنف مع سجل في وقت متأخر OP50 E. القولونية، وتنمو الديدان في 20 درجة مئوية إلى مرحلة L4 في وقت مبكر. غسل الديدان مع 1 ملليلتر من محلول PBST ونقل تعليق الدودة إلى أنبوب ميكروفوج 1.5 ملليلتر.

الطرد المركزي الديدان في 560 مرة الجاذبية لمدة دقيقة واحدة، ثم إزالة supernatant وتكرار غسل PBST حتى يتم مسح القولونية E. من التعليق.

- إضافة الأيزوبروبانول أمر بالغ الأهمية لبيرميليبيليشن السليم من الديدان قبل تلطيخ.

- الطرد المركزي الديدان في 560 مرة الجاذبية لمدة دقيقة واحدة وإزالة supernatant دون تعطيل بيليه دودة.

- من المهم تقليل التعرض للضوء أثناء خطوات الطرد المركزي.

- الآن، بينما في الظلام، إضافة 600 ميكرولتر من محلول العمل NR المعدة سابقا لكل عينة. عكس الأنابيب ثلاث مرات وخلط تماما الديدان والحل.

بعد الحضانة، والطرد المركزي الديدان وإزالة supernatant. ثم إضافة 600 ميكرولتر من PBST واحتضان العينات في الظلام لمدة 30 دقيقة لإزالة وصمة عار NR الزائدة.

Tags

قيمة فارغة، مشكلة ،
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter