Touch Habituation Assay: een methode om niet-associatief leren te bestuderen bij C. elegans

- C. elegans beweegt op zijn kant door sinusvormige golven langs zijn lichaam te genereren. Het dier beweegt in voorwaartse richting wanneer de golven van het hoofd naar de staart worden gepropageerd. Omgekeerd, wanneer de sinusvormige golven van de staart naar het hoofd worden gepropageerd, beweegt de worm achteruit.

Achterwaartse voortbeweging, bekend als omkeringen, is kort en treedt spontaan op of wordt geactiveerd door een zintuiglijke stimulus, bijvoorbeeld een zachte aanraking van de voorste van de worm. Om de voorste aanrakings gewentestest uit te voeren, isoleer eerder gesynchroniseerde wormen van de gewenste ontwikkelingsfase op niet-geseed NGM-platen.

Voer met behulp van een gesteriliseerd fijn haar een zachte aanraking uit op het voorste deel van het lichaam. Dit zal een ontsnappingsreactie oproepen waarbij de worm een omkering uitvoert. Laat een interstimulusinterval van 10 seconden toe voor de worm om te herstellen en de aanraking te herhalen. Om gewenting te beoordelen, wat een vorm van niet-associatief leren is, registreert u het aantal aanrakingen totdat een omkering niet langer wordt waargenomen.

In het voorbeeldprotocol zullen we een demonstratie zien van de voorste touch habituation assay.

- Gebruik eerst een steriele 30-gauge platina draadpick om ongeveer 10 gesynchroniseerde jongvolwassen wormen over te brengen naar nieuwe ongeplaatste NGM-platen. Laat de wormen vijf minuten ongestoord zodat ze tijd hebben om te acclimatiseren aan de nieuwe plaat. Steriliseer vervolgens een wenkbrauwhaar dat aan het einde van een houten spies of tandenstoker is bevestigd door 70% ethanol in te dompelen.

Veeg af met een schoon, pluisvrij weefsel en wacht een minuut tot de ethanol is verdampt. Raak de worm voorzichtig op het hoofd aan met behulp van het wenkbrauwhaar. Herhaal de aanrakingen gedurende 10 seconden tussen de aanrakingen om de worm te laten herstellen.

Blijf aanraken, zodat interstimulus-intervallen van 10 seconden mogelijk zijn totdat de worm niet meer achteruit beweegt. Noteer het aantal aanrakingen dat nodig is om deze gewenting te laten plaatsvinden.

- Het toestaan van een interval van 10 seconden tussen aanrakingen is belangrijk, omdat dit de hersteltijd van het dier mogelijk maakt en helpt bij het verkrijgen van consistente gewenkingsgedragstesten.