Encyclopedia of Experiments: Biology
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-将一种表达 GCaMP 的转基因蠕虫(一种钙感应蛋白)与蠕虫细菌食物一起放置在成像室中。 然后用盖子和实验室膜密封盘子,防止蒸发。 在配备用于宽场癫痫的复合显微镜下查看。 记录蠕虫的时间推移图像,以跟踪其行为,并使用成像软件捕获荧光。
转基因蠕虫在推动特定神经元中 GCaMP表达的促进器的控制下表达 GCaMP 传感器蛋白。当该神经元被激活时,它会激发一种行动潜力,从而去极化等离子膜。 去极化后,等离子膜中打开电压门钙通道。这会导致钙离子大量涌入细胞,导致神经元激发。
兴奋神经元的GCaMP结合了钙离子。当蠕虫用低强度荧光激发光成像时,这会导致GCaMP荧光。在示例协议中,我们将使用钙成像来可视化 AVA 内生菌活性在合成的C.
- 钙成像是在配备用于宽场表观荧光的复合显微镜上进行的。为了限制光线照射,使用晶体管晶体管逻辑信号触发 LED 在摄像机记录帧的同时照亮样品。
运行一个突发电影24小时,图像每个蠕虫每15至30分钟。首先,记录20秒与DIC,然后20秒与GFP荧光,最后,图像的mKate2信号控制表达水平。
对于可视数据检查,使用假彩色地图提高荧光强度小变化的可见性。最后,使用标准程序进行钙数据分析。