Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Colocar un gusano transgénico que expresa GCaMP - una proteína de detección de calcio - en una cámara de imágenes junto con alimentos bacterianos para el gusano.
Los gusanos transgénicos expresan una proteína del sensor GCaMP bajo el control de un promotor que impulsa la expresión GCaMP en una neurona específica.
GCaMP en la neurona excitada une los iones de calcio. Esto hace que GCaMP fluoresce cuando los gusanos se imaginen con una luz de excitación de fluorescencia de baja intensidad.
- Las imágenes de calcio se realizan en un microscopio compuesto equipado para la epifluorescencia de campo ancho. Para limitar la exposición a la luz, utilice una señal lógica transistor-transistor que activa un LED para iluminar la muestra al mismo tiempo que la cámara graba un fotograma.
Ejecute una película de ráfaga durante 24 horas que imagine cada gusano cada 15 a 30 minutos. Primero, grabe 20 segundos con DIC, luego 20 segundos con fluorescencia GFP y, finalmente, una imagen de la señal mKate2 para controlar los niveles de expresión.
Para la inspección visual de datos, utilice un mapa de color falso para mejorar la visibilidad de pequeños cambios en la intensidad de la fluorescencia.
