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Encyclopedia of Experiments: Biology

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C. elegans Muskelbereichsmessungen
 
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C. elegans Muskelbereichsmessungen: Eine standardisierte Methode zur Quantifizierung der gestreiften Muskelmorphologie

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- C. elegans haben zwei Arten von Muskeln. Die einzelnen sarcomere oder nicht-gestreiften Muskeln umfassen diejenigen in der Pharynx und Vulva. Die multiplen sarcomere oder schräg gestreiften Muskeln sind rhomboid-förmige Körperwandmuskeln nach dem regelmäßigen gestreiften Muster ihrer Myosinfasern benannt.

Sie sind in gestaffelten Paaren als vier Bündel angeordnet, die längs in den vier Quadranten des im Querschnitt betrachteten Wurmkörpers ausgerichtet sind. Jede Zelle hat viele gleich verteilte Befestigungspunkte an der Hypodermis und der Nagelhaut. Diese Anordnung hilft, Wellen von Muskelkontraktionen in sanfte Fortbewegung zu übersetzen.

Um diese Muskeln zu visualisieren, Bild immobilisierte Würmer mit transgenistisch GFP- markiert Myosin durch fluoreszierende konfokale Mikroskopie. Verwenden Sie Analyse-Software, um die Fläche einer gestreiften Muskelzelle und alle Lücken im Fasermuster dieser Zelle zu messen. Lücken in der Muskelfaserorganisation könnte auf Störungen durch Faserabbau oder die Ansammlung von Zellablagerungen hinweisen. Berechnen Sie das Verhältnis der Spaltfläche zur Gesamtfläche, um die Menge der Störung zu definieren.

- Um den Muskelzellbereich zu messen, öffnen Sie das Bild in der Fidschi-Software und verwenden Sie Polygonauswahl, um sorgfältig eine einzelne schräge Muskelzelle zu verfolgen. Passen Sie die Linie des Polygons am Ende an, indem Sie den Ankerpunkt ziehen, um die Ablaufverfolgung zu verbessern. Navigieren Sie zur Registerkarte Analysieren oben in der Software und klicken Sie auf Messen, um den ausgewählten Bereich zu berechnen.

Verfolgen Sie bei Muskelzellen mit einem degenerierten oder fehlenden Bereich den fehlenden Bereich mit dem Polygonauswahlwerkzeug und klicken Sie erneut auf Messen. Wenn mehrere Lücken vorhanden sind, verfolgen Sie jede einzelne. Berechnen Sie das Verhältnis der Spaltfläche zur Fläche der gesamten Zelle. Ein hohes Verhältnis zeigt eine höhere Ausdehnung der Muskeldegeneration an, und wenn keine fehlenden Bereiche vorhanden sind, wird das Verhältnis als Null berechnet.

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