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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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In Vivo Eletroporação

 
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In Vivo Eletroporação: Um método específico do local para transfetar zebrafish

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- Primeiro, coloque um peixe anestesiado com o lado dorsal virado para cima em uma esponja pré-molhada. Antes da eletroporação, injete material genético no tecido alvo, neste caso, uma parte do cérebro chamado telencephalon. Em seguida, coloque uma pequena quantidade de gel de ultrassom na cabeça. Além disso, aplique o gel na ponta dos eletrodos para facilitar a operação eficiente. Coloque o eletrodo positivo no lado ventral da cabeça e o eletrodo negativo no lado dorsal.

Agora, pressione os eletrodos suavemente contra a cabeça e administre vários pulsos de corrente elétrica. A corrente também facilita o movimento de partículas carregadas negativamente, como plasmídeos de expressão de DNA ou oligonucleotídeos RNAi presentes no entorno, para as células. No exemplo a seguir, usaremos a eletroporação para introduzir um plasmídeo recombinante em células ependymoglial, células-tronco responsáveis pela geração de novos neurônios.

- Cubra o telencephalon de peixe com uma pequena quantidade de gel de ultrassom. Para eletroporação do animal injetado por plasmídeos, remova a esponja da ejeção configurada e mergulhe o lado interno das pontas do eletrodo em gel de ultrassom. Posicione a cabeça do peixe entre os eletrodos, com o eletrodo positivo no lado ventral da cabeça e o eletrodo negativo no lado dorsal. Em seguida, enquanto ainda segura o corpo do peixe na esponja, pressione os eletrodos suavemente e precisamente contra o telencephalon e administre a corrente com o pedal do pé, segurando os eletrodos no lugar até todos os cinco pulsos estão acabados.

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