Spontan aktivitet för att utveckla neuronala nätverk kan mätas med AM-ester former av kalcium-känslig indikator färgämnen. Förändringar i intracellulär kalcium, vilket indikerar neuronal aktivering, upptäcks som övergående förändringar i indikatorn fluorescens med ett eller två foton avbildning. Detta protokoll kan anpassas för en rad utvecklingsmässigt beroende neuronala nätverk<em> In vitro</em>.