A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 01:46Construction of Strains Containing FFL-GFP Plasmid
- 02:23Preparations Prior to FFL-GFP Induction and Enzymatic Recovery Assay
- 03:48Induction of FFL-GFP
- 06:22Enzymatic FFL-GFP Recovery Assay
- 07:35Fluorescence Microscopy
- 08:55Single Cell Microscopy
- 10:47Results: Hsp104 is Required for Efficient Refolding of Heat-denatured FFL-GFP
- 13:36Conclusion
Cet article décrit l'utilisation d'une protéine de fusion GFP-luciférase Firefly pour enquêter<em> In vivo</em> Le repliement des protéines à<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. L'utilisation de ce réactif, le repliement d'un modèle de protéine dénaturée par la chaleur peut être surveillé simultanément par microscopie à fluorescence, et un dosage enzymatique pour sonder les rôles des éléments du réseau de proteostasis dans le contrôle de la qualité des protéines.
