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신경 조직 절편배양

Overview

척추 신경계의 복잡한 구조는 세포 분화, 세포 이동 및 세포 형태 변화와 관련된 복잡한 일련의 사건에서 발생합니다. 이러한 프로세스를 공부하는 것은 신경계 기능에 대한 우리의 이해뿐만 아니라 비정상적인 발달로 인한 장애를 진단하고 치료하는 능력에 필수적입니다. 그러나, 신경 조직은 실험 적인 조작을 위해 상대적으로 접근할 수 없습니다, 특히 배아 포유류에서. 그 결과, 많은 과학자들은 조직이 유기체에서 제거되지만 복잡한 세포 아키텍처가 유지된다는 것을 의미하는 "organotypic"환경에서 신경 발달 과정을 연구하기 위해 절제 문화를 활용합니다. 일반적으로, 절제 배양은 신경 조직의 주의 깊게 해부에 의해 만들어지며, 그 다음에 신중하게 설계된 성장 매체에 침수되고 시험관 내에서배양된다.

이 비디오는 먼저 신경 절제 문화에 대한 간략한 개요를 제공 할 것입니다, 다른 체외 방법에 비해 장점과 건강한 조직을 유지하기위한 중요한 고려 사항을 포함. 다음으로, 배아 마우스 뇌에서 절제 된 문화를 설정 하기 위한 일반적인 프로토콜 제공 됩니다., 어머니에서 배아의 격리와 뇌의 해부. 프리젠 테이션은 또한 개발 세포에 대한 향상된 시각적 접근을 위해 신경계 조직의 얇은 섹션이 생성되는 슬라이스 문화의 개요를 포함한다. 마지막으로, 이러한 기술의 몇 가지 응용 프로그램은 신경 발달 분야에서 중요한 질문에 대답하는 데 사용할 수있는 방법을 보여주기 위해 제공됩니다.

Procedure

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절제 배양은 특정 세포 인구와 신경 구조의 발달을 조사하는 기술 역할을 합니다. 발달 신경 과학 실험에서, 이병은 시험관 내지속적인발달을 위한 태아에서 절제된 신경 조직입니다. 이러한 문화권은 연구자에게 생체 내에서는불가능한 방식으로 개발 조직을 조작하고 시각화할 수 있는 능력을 제공합니다. 이 비디오는 이식된 조직, 문화를 이식하기 위한 두 가지 접근 방식에 대한 단계별 절차, 이 기술의 응용 분야와 함께 작업하는 데 중요한 몇 가지 원칙을 소개합니다.

메서드를 자세히 탐구하기 전에 몇 가지 기본 원칙을 거로 사용할 수 있습니다. 이종은 다수의 모형 유기체 및 각종 조직 모형에서 확립될 수 있습니다. 일반적으로 배양은 배아에서 신경 조직을 조심스럽게 제거하고 관심 영역을 해부하고 인공 환경으로 배치하여 만들어집니다.

조직은 또한 얇은 시트로 분할하고 "슬라이스 문화"에서 재배 할 수 있습니다. 문화 환경은 전체 기관의 생체 내 조건을 모방하도록 설계되었기 때문에 이 문화 전략은 종종 "organotypic"이라고 불립니다.

시작하기 전에 70 %의 에탄올로 악기를 소독하십시오. 다음으로, 실험실에서 선호하는 방법을 사용하여 임신 한 마우스를 안락사시하십시오. 그런 다음 외과적으로 자궁을 절제하고 얼음 차가운 버퍼에 놓습니다. 접시를 해부 현미경으로 옮기고 노른자 낭에서 개별 배아를 제거합니다. 다음으로, 뇌를 분리하고, 관심 지역을 신중하게 해부하고, 문화 매체가 들어있는 문화 요리로 옮는다. 박은 매 2 - 3 일마다 배지의 50 %를 대체하여 몇 주 동안 5 % CO2를 포함하는 37 °C 인큐베이터에서 유지 될 수 있습니다.

뇌 조직의 슬라이스 문화는 몇 가지 추가 단계가 필요합니다. 단면하기 전에, 조직은 아가로즈에 내장되어, 이는 그것이 슬라이스되는 동안 그대로 유지되도록 조직에 지원을 제공합니다. 이를 위해 아가로즈가 용해될 때까지 1.5% 낮은 융점 아가로즈 용액이 가열된다. 다음으로, 아가로즈는 금형을 포함시키기 위해 전달되고 조직을 손상시키지 않도록 약간 식힐 수 있습니다.

조직은 신중하게 잠기고 아가로즈가 굳어질 수 있습니다. 결과 블록은 트리밍된 다음 시편 단계에 접착한 다음 진동블레이드를 사용하여 살아있는 조직의 얇은 조각을 자르는 계측기를 사용하여 단면화됩니다. 슬라이스가 생성됨에 따라 배양 매체가 포함된 코팅된 플레이트로 조심스럽게 전송되고 앞에서 언급한 대로 배양됩니다.

생체 내 및 기타 체외 방법에 는 여러 가지 장점이 있습니다. 첫째, 이식된 조직에 있는 세포는 실험공구에 더 접근하기 쉽습니다. 둘째, 세포가 신경 조직 개발의 복잡한 세포 구조를 유지한다는 사실은 세포 상호 작용이 연구 될 수 있음을 의미합니다. 셋째, 배양 배지의 화학적 조성을 제어할 수 있기 때문에 과학자들은 이물질을 사용하여 특정 화합물이 조직 개발에 미치는 영향을 테스트할 수 있습니다.

그럼에도 불구하고, 그것은 그것의 자연 환경에서 제거 되 고 있기 때문에, 특별 한 주의 시험관 에서행복 하 고 건강 한 조직을 유지 하기 위해 취해야 한다. 예를 들어, 세포외 매트릭스 또는 ECM의 존재는 세포 거동에 큰 영향을 미치므로 정제 된 ECM 단백질은 종종 배양 접시를 코팅하는 데 사용됩니다. 또 다른 중요한 고려 사항은 이질이 목욕하는 솔루션입니다. 전통적인 세포 배양 매체가 수시로 이용되는 동안, 몇몇 실험은 중앙 신경계에 순환하는 액체를 밀접하게 닮은 해결책을 요구합니다: 뇌척수액, 당신이 보고 있는 것과 같은 실험에 있는 중요한 시약입니다.

이제 우리는 양식 방법을 간, 이러한 기술이 사용되는 방법을 볼 수 있습니다.

세포 이동 assays는 신경 세포 운동에 관여하는 반발하고 매력적인 신호를 검사하기 위하여 이식된 조직을 이용합니다. 이 실험에서, 이전에 성장 인자에 담근 구슬은 신경 세포 이동을 검토하기 위하여 힌드뇌 성소로 이식됩니다. 3 -4 일 동안 노출 된 후 뉴런은 공초점 현미경을 사용하여 이미지화되었습니다. 결과는 모터 뉴런이 혈관 내피 성장 인자에 담근 구슬로 이동하지만 완충액에 담근 구슬을 제어하지 는 않는다는 것을 보여줍니다.

공동 배양 작용은 종종 개발 중 세포 상호 작용을 조사하는 데 사용됩니다. 이 예에서 척수 의 세그먼트는 척수 운동 뉴런과 골격 근육 사이의 연결이 어떻게 이루어지는지 연구하기 위해 근육 세포 층 위에 배양되었습니다. 잠복 후 2 일 일찍, 뉴런에서 프로젝션, 또한 neurites로 알려진, 이 분야에서 나오는 볼 수 있습니다. 5 일 이내에, 기능적 내면은 근육 세포 층의 수축에 의해 관찰된다.

신경계의 발달 도중, 신경은 표적 조직과 중앙 신경계 사이 연결을 설치하기 위하여 그들의 축축을 길게 해야 합니다. 이 복잡한 과정을 공부하는 한 가지 방법은 축산 지침 에세이를 통해서입니다. 연구원은 그것의 적당한 위치에 축삭을 인도하는 것을 돕는 신경 세포 내및 주변 환경에서 요인을 검토하기 위하여 이식된 조직을 이용합니다.

당신은 신경 조직의 문화를 탐구하는 JoVE의 가이드를 보았다. 이 비디오는 절제 문화, 문화 전략, 일반적으로 사용되는 두 가지 각기 수술의 단계별 프로토콜 및 이러한 기술이 오늘날 실험실에서 사용되는 방법에 대한 개요를 다루었습니다.

시청해 주셔서 감사합니다!

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