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Realizar la cromatografía en capa fina 1D
 

Realizar la cromatografía en capa fina 1D

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Cromatografía en capa fina o TLC, es un método cromatográfico para separar mezclas de compuestos no volátiles, de uso general en química orgánica.

TLC se realiza en una placa de respaldo de vidrio o plástico. Una línea de base está marcada en la placa, junto con las etiquetas. La mezcla se examina y referencia compuestos disueltos en un disolvente apropiado y aplicados cerca del borde inferior de la placa de TLC en pequeñas manchas. La placa se coloca en un frasco, y un solvente (fase móvil) separa la mezcla basada en propiedades físicas de cada componente.

A pesar de que más técnicas de separación de instrumentos pesados tienen más energía que el TLC, es la velocidad y bajo costo hace TLC una técnica atractiva para el análisis cualitativo de on-the-fly. Este vídeo demuestra la preparación, operación y análisis de cromatografía en capa fina.

Técnicas cromatográficas incluyen una fase estacionaria y móvil. En TLC, la fase estacionaria consiste en una capa delgada de material fijado a la placa. El material es una sustancia polar, como gel de sílice. La fase móvil es un líquido no polar que se mueve hacia arriba de la capa de adsorbente por acción capilar. Como fase móvil se mueve hacia arriba de la placa, arrastra a lo largo de los componentes de cada lugar, que posteriormente son separados basados en polaridad.

Compuestos que son menos polares pasarán más tiempo en la fase móvil como se tira encima de la placa. Compuestos más polares son más atraídos por la fase estacionaria y por lo tanto, no se moverán hacia arriba de la placa de la medida.

La separación lleva a cabo en un contenedor en vías de desarrollo. Estos pueden ser frascos con tapas o vasos cubiertos con papel de aluminio. Utilice el recipiente más pequeño disponible que se acomode la placa de TLC para acelerar la separación.

La fase móvil, o en vías de desarrollo solvente, debe ser como no polar como sea posible para una buena separación. Se muestra que aquí es una serie de eluotropic de gel de silicona, una lista de móviles comunes fases en orden creciente de energía de extracción.

Se puede probar simultáneamente un número de fases móviles. En un plato limpio, observar la muestra disuelta en múltiples ocasiones, por lo menos 2 cm de separación. Fase lo suficientemente móvil se aplica a cada punto para formar un círculo de 1-2 cm de diámetro.

Marcar la distancia que viaja la fase móvil. Si la fase móvil no polar lo suficiente, la muestra permanecerá cerca del punto inicial. Si la fase móvil es también polar, todos de la muestra se migrarán con el frente del solvente. Una fase móvil apropiada mostrará anillos bien separados, con el anillo exterior alrededor del 50% de la distancia al frente del solvente.

Si es necesario, se pueden mezclar dos fases móviles miscibles en diversas proporciones para obtener las propiedades deseadas. Aquí, una mezcla 1:1 de acetato de etilo y hexano fue demasiado polar, pero un 1:20 mezcla apropiadamente fue separada.

Con la fase móvil elegida, listo empezar a desarrollar la placa.

Para comenzar el procedimiento, cortar una placa de TLC comercialmente disponible al tamaño deseado. Si el plato tiene un cristal forro, cuenta con un cortador de vidrio y con cuidado romper a lo largo de la línea.

Con un lápiz, marque una línea de base 1 cm desde la parte inferior de la placa. Marque el lugar donde las muestras se ver a lo largo de la línea. Asegúrese de que las manchas son por lo menos 1 cm del borde y 3 mm de separación. Etiquetarlos adecuadamente.

Muestras sólidas deben disolverse en un solvente adecuado. Solventes comunes incluyen hexanes, acetato de etilo o diclorometano. Utilice el solvente menos polar que se disuelve la muestra.

Elaborar la mezcla muestra/disolvente con un capilar de vidrio. Suavemente de la punta hasta la posición deseada sobre la placa de TLC y retire inmediatamente. Es importante no molestar a la fase estacionaria.

Mantener el lugar tan pequeño como sea posible, mientras que esto conduce a una mejor separación. Si se necesita muestra más puntos pueden aplicarse sucesivamente en cada lugar. Permita que el disolvente se seque entre aplicaciones. Una corriente de aire se puede utilizar para secar solventes menos volátiles.

La placa de TLC está ahora lista para ser desarrollado. Coloque un pedazo de papel de filtro en la parte inferior de la jarra para aumentar la presión de vapor. Añadir la fase móvil a una profundidad que no alcanza la línea de base. Tapa de la jarra cuando no esté en uso para que no escapen los vapores del solvente.

Con cuidado coloque la placa de TLC manchada en la jarra en vías de desarrollo. Asegúrese de que la fase móvil está por debajo de la línea de base. Ver el avance del frente del disolvente, la vanguardia de la fase móvil, como se moverá rápidamente para arriba de la placa.

No permita que la fase móvil alcanzar el borde superior de la placa, como bandas de la muestra comenzará a expandirse por difusión. Una vez que el frente del disolvente se acerca a la parte superior, retire la placa de la cámara en desarrollo y marque el frente del disolvente con lápiz antes de que se seque el disolvente.

Si los compuestos no son coloreados, una lámpara ultravioleta puede utilizarse para visualizar los puntos. El compuesto bloquea la fluorescencia del fondo de la placa. Coloque la lámpara en el valor de la onda corta y se ilumina la placa seca. Utilizando un lápiz, delinear cualquier manchas visibles debajo de la lámpara. Utilizando un lápiz, delinear cualquier manchas visibles debajo de la lámpara.

Otra técnica posible de visualización es usar permanganato de potasio, un agente oxidante. Con unas pinzas, sumerja la placa en la mancha de permanganato.

Retire y frote lejos exceso de solución con una toalla de papel. En una campana de humos, calentar cuidadosamente la placa con una pistola de calor para visualizar los puntos. Use un lápiz para marcar cualquier manchas que aparecen.

Una vez que los puntos han sido visualizados, la sustancia de interés puede ser comparada con estándares, como se muestra aquí. En este ejemplo, lo desconocido es 1, 3-diphenylpropynone, un bloque de creación en síntesis orgánica. Mediante la comparación de la banda a un estándar conocido y cloruro de benzoilo, una de las materias primas, el producto puede ser identificado.

El factor de retraso, o Rf, se utiliza para identificar el compuesto desconocido. El Rf es el cociente de la distancia que viaja un compuesto por una placa de TLC a la distancia que viaja la fase móvil. El factor se determina midiendo la distancia desde la línea de base hasta el lugar y dividiendo por la distancia entre la línea de fondo y el frente del solvente.

Rf de un compuesto dado depende de las condiciones utilizadas en el experimento, incluyendo la opción solvente, espesor y la actividad del adsorbente, la temperatura y el tamaño de la muestra. Debe tener cuidado de mantener estos factores consistentes entre experimentos.

Sólo ha visto la introducción de Zeus para cromatografía en capa fina. Ahora debería entender la teoría subyacente de la separación, cómo elegir una fase móvil adecuada para su experimento y cómo configurar y utilizar una placa de TLC. ¡Gracias por ver!

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