Journal
/
Genetics
/
Saccharomyces cerevisiae Metaboliska märkning med 4-thiouracil och kvantifiering av nyligen syntetiseras mRNA som en Proxy för RNA-polymeras II aktivitet
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Saccharomyces cerevisiae Metaboliska märkning med 4-thiouracil och kvantifiering av nyligen syntetiseras mRNA som en Proxy för RNA-polymeras II aktivitet

DOI:
10.3791/57982-v

•

09:21 min

•

October 22, 2018

•

,
1Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Illkirch, France, 2Centre National de la Recherche Scientifique, Illkirch, France, 3Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Illkirch, France, 4Université de Strasbourg

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:41Cell Culturing
  • 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
  • 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
  • 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
  • 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
  • 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
  • 08:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Protokollet beskrivs här baseras på genome-wide kvantifiering av nyligen syntetiserade mRNA renas från jästceller märkta med 4-thiouracil. Denna metod gör det möjligt för att mäta mRNA-syntesen bortkopplat mRNA förfall och ger således en exakt mätning av RNA-polymeras II transkription.

Tags

Saccharomyces CerevisiaeMetabolic Labeling4-thiouracilQuantificationNewly Synthesized MRNARNA Polymerase II ActivityMicroarray HybridizationHigh-throughput SequencingS. PombeYPD MediumYAS MediumCell CountingCell CentrifugationRNA ExtractionRNA Polymerase II

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Mätning av Differentiellt Methylated<em> INS</em> DNA Arter i humana serumprover som en biomarkör för Islet β celldöd

Inducerbart T7-RNA-polymeras-medierat multigenexpressionssystem, pMGX

Genomgående kartläggning av protein-DNA-interaktioner med ChEC-seq in<em> Saccharomyces cerevisiae</em

Mäta mRNA nivåer över tid under den jäst S. cerevisiae hypoxisk svar

Metaboliska märkning och profilering av överföring RNAs använder Macroarrays

Halvkvantitativ detektion av RNA-beroende RNA-polymeras aktivitet av mänskliga telomeras omvänt transkriptas Protein

Kromatin Immunoprecipitation (ChIP) Histon ändringar från Saccharomyces cerevisiae

Metodik för korrekt upptäckt av mitokondrie-DNA metylering

Kvantitativ analys av alternativa Pre-mRNA Splicing i mus hjärnan sektioner med RNA In Situ hybridisering analys

Utvärdering av en Universal kapslad omvänd transkription polymerase kedje reaktion för detektion av Lyssaviruses

Read Article