Journal
/
/
Saccharomyces cerevisiae Metaboliska märkning med 4-thiouracil och kvantifiering av nyligen syntetiseras mRNA som en Proxy för RNA-polymeras II aktivitet
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity
DOI:

09:21 min

October 22, 2018

,

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:41Cell Culturing
  • 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
  • 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
  • 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
  • 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
  • 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
  • 08:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Protokollet beskrivs här baseras på genome-wide kvantifiering av nyligen syntetiserade mRNA renas från jästceller märkta med 4-thiouracil. Denna metod gör det möjligt för att mäta mRNA-syntesen bortkopplat mRNA förfall och ger således en exakt mätning av RNA-polymeras II transkription.

Related Videos

Read Article