A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En i Vivo metode for å vurdere Gut-Blood bommen og leveren metabolismen av bakterieflora produkter
Chapters
Summary October 20th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Tilgang til næringsstoffer, bakterieflora metabolitter og medisiner til sirkulasjon styres av gut-blod barrieren (GBB). Vi beskriver en direkte metode for å måle på GBB permeabilitet i vivo, som, i motsetning til vanlige indirekte metoder, nesten ikke påvirkes av leveren og nyre funksjoner.
Transcript
Tarm-blod barrieren er et flerlagssystem som styrer passasjen av næringsstoffer, bakterielle metabolitter, narkotika og andre eksogene forbindelser fra tarmlumen til blodet. Som vi vet, kan integriteten til barrieren bli svekket i gastrointestinale så vel som i kardiovaskulære og noen metabolske sykdommer som kan føre til lettere tilgang av biologisk aktive forbindelser som tarmbakterielle metabolitter til blodet og kan påvirke funksjonen av hele organismen. Derfor kan permeabiliteten av tarm-blodbarrieren være en markør for både tarm- og ekstraintestinale sykdommer.
I denne videoen presenterer vi en direkte måling av tarm-blodbarrieren permeabilitet hos rotter ved hjelp av portalblodprøvetaking etter administrering av et teststoff i fordøyelseskanalen. Vi beskriver i detalj kategoriseringen av portalvenen og dårligere vena cava like over levervenen sammenføyning. Blodprøvetaking fra portal vene og dårligere vena cava gjør det mulig å evaluere ikke bare tarm-blod barriere permeabilitet, men også en leverclearance og absorpsjonsvei av molekyler av interesse som tarmbakterier metabolitter eller medisiner.
Denne metoden er nesten ikke påvirket av lever- og nyrefunksjon og bevarer tarmblodstrømmen som er en sterk fordel over vanlig brukte in vivo- og in vitro-metoder. Dyr bør fastes over natten før prosedyren. Utfør alle prosedyrer under generell anestesi.
Dyr blir eutanisert etter eksperimentet. Vår prosedyre starter med innsetting av linjen for intraintestinal administrasjon. Her foreslår vi intrakolonisk administrasjon av markør.
Det kan endres ved administrasjon på ulike nivåer av fordøyelseskanalen. For eksempel mage eller tolvfingertarm. Ta imidlertid hensyn til den variable hastigheten på peristaltikk og mulige interaksjoner med enzymer og magesyrer mens du administrerer en markør i øvre deler av mage-tarmkanalen.
Bruk pediatrisk Foley kateterstørrelse 10 F eller 8 F som et kolonkateter. Merk kateteret for å indikere den delen som vil bli satt inn i tykktarmen omtrent åtte centimeter. Kontroller analområdet og tellingen av avføringen i endetarmen før du setter kateteret inn i tykktarmen.
Hvis avføringen er tilstede, tøm endetarmen ved å massere rektalområdet. Sett et smøremiddel langs kateteret. Deretter fukter anus og omgivelsene med et smøremiddel.
Sett kateteret inn med en ledevaier gjennom den eksterne analsphincteren. Gjør sakte fremover, bakover og sirkulære bevegelser. Fortsett å kontrollere plasseringen av kateteret ved abdominal palpasjon mens du setter inn kateteret.
Neste trinn er dårligere vena cava kateterisering. Du kan hoppe over denne prosedyren i tarmpermeabilitetsstudier. Prøv å føle pulsen på lårarterien og kutt huden langsgående for lengden på omtrent to centimeter på stedet der pulsen er håndgripelig.
Dissekere fascia og muskler for å visualisere den nevrovaskulære bunten. Deretter dissekere lårvenen fra den nevrovaskulære bunten. Først nerver, deretter lårarterien og deretter venen.
Vær forsiktig under disseksjon av bunten siden flere små grener av lårvenen lett kan bli skadet. Deretter satte to ligaturer på lårvenen. Ikke bind knutene ennå.
Fang endene av den proksimale ligaturen med en nålholder. Trekk deretter ligaturendene forsiktig med holderen oppover for å lukke den proksimale delen av venen. Vent til venen er fylt med blod og bind den distale knuten.
Deretter gjør et lite snitt på venen mellom knuten og proksimal ligatur ved hjelp av mikrokirurgisk saks. Sett deretter inn kateteret ved hjelp av pinsett eller en nål med en buet ende som vi gjør i videoen. Punkter venen og bruk den bøyde spissen av nålen som en veiledning for kateteret.
Løsne den proksimale ligaturen mens du setter inn kateteret. Sett inn kateteret i omtrent seks til syv centimeter avhengig av størrelsen på et dyr for å plassere kateterets proksimale spiss i den dårligere vena cava like over levervenen. Riktig plassering av kateteret bør bekreftes etter forsøket.
Fest kateteret i lårvenen med to enkle kirurgiske knuter. Bind den proksimale ligaturen også. Kontroller kateterets pateter ved å forsøke å trekke blod med en sprøyte.
Skyll kateteret med 0,3 milliliter av heparinisert saltvann. Lukk det kirurgiske såret med to lag med enkle masker. Nå går vi videre til portal vene kateterisering.
Klargjør portalkateteret. Den består av en nål, fleksibel polyuretankateter, fleksibel polyetylenspiss av kateteret, pluggen og ligaturen. Første trinn i prosedyren utfører en midline laparotomi.
Etter å ha forberedt operasjonsfeltet, kutt huden langsgående fra brystbenets xiphoid til navlen. Klipp musklene i bukveggen langs den hvite linjen. Deretter utvider du kuttet rostrally i y-formen slik at xiphoid brusk er mellom to kutt.
Neste trinn er portalvenisseksjonen. Først fukte vattpinnene med saltvann. Og deretter eksteriere cecum, stigende og tverrgående kolon, og tynntarmen sløyfe.
Sett tarmene på venstre side for å avsløre roten av mesenteriet. Dekk tarmene med gasbind fuktet med en fysiologisk saltvann for å beskytte dem mot tørking. For å eksponere portalvenen beveger du forsiktig hepatiske fliker til sidene eller oppover mot membranen med de fuktede vattpinnene.
Her kan vi se portalvenen og øvre mesenteriske vene. Lokaliser den delen av portalvenen som ikke er dekket med mesenteriet og passerer ligaturen under portalvenen. For å beskytte vev mot skade, fukt ligaturen med en fysiologisk saltløsning.
Klem med tang endene av ligaturen og stram den forsiktig for å stabilisere fartøyet. Pass den lengre delen av kateterets ligatur under den frie delen av portalvenen og trekk det slik at kateteret ligger like ved portalvenen. Sett nålen inn i den øvre mesenteriske venen tre millimeter under krysset mellom øvre mesenteriske vene og portalvene.
Hold nålen i en 30 graders vinkel og etter inn i venen redusere vinkelen og avansere nålen nesten horisontalt parallelt med portalvenen i en lengde på ca seks til syv millimeter. Påfør en eller to dråper vevlim på stedet der nålen er satt inn. Fjern vattpinnene som dekket leveren.
Etterpå legger tarmene tilbake til bukhulen. Fukt tarmene med en oppvarmet saltvannsløsning og dekk den med en fuktet steril gasbind. Kontroller kateterets patency og skyll kateteret med heparinisert saltvann.
Venøst blod rygger spontant i kateteret. Etter fem minutter kontrollerer du tarmens farge og peristaltiske bevegelser for å sikre at riktig mesenterisk blodstrøm opprettholdes. Til slutt lukker du bukhulen med tre lag sting som eksterierer den distale delen av kateteret rundt navlen.
For å samle blod fra portalvenen, åpne portalkateterpluggen og la blodet strømme fritt. Bruk en sprøyte og en stump kanyle og samle ikke mer enn 0,7 milliliter blod. Skyll kateteret med heparinisert saltvann og lukk kateterpluggen.
Her presenterer vi eksemplariske portal blod prøvetaking protokoller for gut permeability vurdering. Blodprøver fra dårligere vena cava er nødvendig for leverclearance og absorpsjonsstudier. For å samle blod fra dårligere vena cava fortsette akkurat som når du tar blod fra portalvenen.
Her presenterer vi en eksemplarisk blodprøveprotokoll for leverclearance måling og for å spore gut-portal blod-lever-systemisk blodbanen av utvalgte forbindelser. I våre studier brukte vi en bakteriell metabolitt, trimetylamin som en markør for permeabilitet. Men mange andre stoffer, inkludert klassepermeabilitetsmarkører, kan også brukes.
Ulike bakterier og metabolitter og traktater kan også brukes til å kanalisere absorpsjonsveien eller leverclearance. Fjern ledetråden og blås ballongen ved hjelp av tilstrekkelig volum sterilt vann vanligvis en milliliter, men sjekk faktisk ballongstørrelse før innsetting. Ballongdiameteren bør ikke overstige en centimeter.
Plasser rottehodet ned for å minimere risikoen for utstrømning av den administrerte oppløsningen fra tykktarmen. Administrer langsomt det testede stoffet ved hjelp av dreneringsport og kolonkateter. Vi brukte trimetyamin i en dose på 100 milligram per kilo kroppsvekt oppløst i 0,7 milliliter saltvann.
Etter ti minutter tømme kateterballongen. Leverclearance forstås som en leveravsug kan uttrykkes av forskjellen mellom portal blodkonsentrasjon og dårligere vena cava blodkonsentrasjon eller ved forholdet mellom dårligere vena cava og portal blodkonsentrasjon. Vi har målt tarmblodbarrieren permeabilitet og leverclearance av trimetylamin hos rotter.
Her er de representative resultatene som viser at hypertensive rotter har økt kolonpermeabilitet til TMA i forhold til normotensive rotter. I en annen forskning studerte vi om høyt saltinntak påvirker tarm-blod barriere permeabilitet og leverklarering av trimetylamin. Intrakolonisk administrasjon av trimetylamin ga en signifikant økning i tmakonsentrasjonen av portalblod.
Størrelsen på økningen og leverclearance var lik mellom gruppene. Vi sporet også absorpsjonsveien til kortkjedede fettsyrer. Vi målte konsentrasjonen i avføring, portalblod og perifert blod.
I denne videoen beskrev vi en omfattende protokoll som inkluderer direkte måling av tarm-blod barriere permeabilitet in vivo som, i motsetning til vanlige metoder, ikke påvirkes av lever- og nyrefunksjoner, leverclearance måling, og tredje, evaluering av absorpsjonsveien av eksogene forbindelser. Den presenterte teknikken kan justeres til andre eksperimentelle formål. For eksempel portal blodtrykksmåling eller narkotikaadministrasjon direkte til portalvenen.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
