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Vorbereitung der Chloroplasten Sub Fächer von Arabidopsis für die Analyse von Protein-Lokalisierung durch Immunoblotting oder Proteomics
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Chapters
- 00:04Title
- 01:01Harvesting of Arabidopsis Leaves
- 02:26Purification of Crude Chloroplasts Using Differential Centrifugation
- 03:30Purification of Intact Chloroplasts on Continuous Percoll Gradient
- 04:51Lysis of Intact Chloroplasts Using a Hypotonic Buffer and Purification of Chloroplast Sub-Compartments on Discontinuous Sucrose Gradients
- 06:05Washing and Concentration of Thylakoid and Envelope Membrane Systems
- 07:09Results: Analysis of Protein Localization by Immunoblotting or Proteomics
- 08:44Conclusion
Hier beschreiben wir eine Methode, um intakte Chloroplasten aus Arabidopsis Blättern und ihre drei Sub-Hauptfächer (Umschlag, Stroma und Thylakoids), reinigen mit einer Kombination von differenziellen Centrifugations, kontinuierliche Percoll Gradienten und diskontinuierliche Saccharose Steigungen. Die Methode ist wertvoll für Subplastidial und subzelluläre Lokalisierung der Proteine durch Immunoblotting und Proteomik.
