Neuroscience
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निस्र्पक घावों के लिए एक माइक्रो-सीटी आधारित विधि और छोटे जानवर दिमाग में इलेक्ट्रोड का पता लगाने
Chapters
Summary November 8th, 2018
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यह लेख सूक्ष्म सीटी इमेजिंग, जिसमें घावों quantified और इलेक्ट्रोड पूरे मस्तिष्क के संदर्भ में उच्च परिशुद्धता के साथ स्थित किया जा सकता है के लिए छोटे जानवर दिमाग तैयार करने के लिए एक सीधी विधि का वर्णन करता है ।
Transcript
यह विधि घावों की पुष्टि करने और इलेक्ट्रोड स्थानों का पता लगाने के लिए एक सरल, कम त्रुटि प्रवण, और अधिक मात्रात्मक विधि प्रदान करके तंत्रिका विज्ञान के क्षेत्र में महत्वपूर्ण प्रश्नों का उत्तर देने में मदद कर सकती है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह खंड की आवश्यकता के बिना पूरे मस्तिष्क में घावों और इलेक्ट्रोड साइटों के सत्यापन के लिए अनुमति देता है। अंत उत्पाद मस्तिष्क की एक डिजिटल 3डी मात्रा है और कई दिमाग समानांतर में संसाधित किया जा सकता है।
हालांकि इस विधि को चूहे में प्रदर्शित किया जाएगा, लेकिन इसे चूहों और जेब्रा फिंच जैसे अन्य जीवों पर भी लागू किया जा सकता है। आम तौर पर, इस विधि के लिए नए व्यक्ति संघर्ष करेंगे क्योंकि कुछ चरणों को सर्वोत्तम परिणाम सुनिश्चित करने के लिए विशेष देखभाल की आवश्यकता होती है। शुरू करने के लिए, एक निकाले गए मस्तिष्क को 50 मिलीलीटर शंकु नली में प्रोफ्यूजेशन समाधान में रखें।
चार डिग्री सेल्सियस पर कोमल मिलाते हुए दो से तीन दिनों के लिए नमूना स्टोर करें। सुनिश्चित करें कि ऑस्मियम पानी में पतला है न कि बफर। इसका कारण यह है कि पानी एक हल्के डिटर्जेंट के रूप में कार्य करेगा, जिससे ऑस्मियम ऊतक में गहराई से प्रवेश कर सकेगा।
डबल डिस्टिल्ड पानी में 2% ऑस्मियम टेट्रोऑक्साइड के 50 मिलीलीटर तैयार करें। इसके बाद दिमाग को एक नई 50 मिलीलीटर शंकु नली में रखें और ऑस्मियम टेट्रोक्साइड सॉल्यूशन डालें। ट्यूब को बंद करें और लीक को रोकने के लिए पैराफिन फिल्म के साथ इसे सील करें।
दो सप्ताह के लिए कोमल मिलाते हुए के साथ चार डिग्री सेल्सियस पर सील ट्यूब स्टोर करें। सुनिश्चित करें कि ट्यूब क्षैतिज रखा गया है। मस्तिष्क बहुत मोटा होता है और प्रसार से यात्रा करने के लिए एक लंबा तरीका है।
ट्यूब को क्षैतिज रूप से रखने से ऑस्मियम ऊतक में गहरी यात्रा करने की अनुमति देगा। दो सप्ताह तक सैंपल इनक्यूबेटिंग के बाद इसे पांच बार डबल डिस्टिल्ड पानी से धोएं ताकि सैंपल से सभी अनबाउंड ऑस्मियम टेट्रोऑक्साइड को हटाया जा सके। इसके बाद, चार डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए डबल-डिस्टिल्ड पानी से नमूना धोएं।
नमूने को निर्जलित करने के लिए डबल-डिस्टिल्ड पानी को इथेनॉल के चार कमजोर पड़ने के साथ बदलें। राल घुसपैठ प्रक्रिया शुरू करने के लिए, तीन एसीटोन और तीन एसीटोन राल कमजोर पड़ने के माध्यम से नमूना ले जाएं, फिर घुसपैठ प्रक्रिया जारी रखने के लिए कमरे के तापमान पर 100% राल में नमूना विसर्जित करें। इसके बाद, नमूने को डिस्पोजेबल मोल्ड में स्थानांतरित करें।
कमरे के तापमान पर चार घंटे के लिए ताजा 100% राल के साथ नमूना इन्फ्यूज करें। 45 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए एक वैक्यूम ओवन में नमूना Degas। फिर 60 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे के लिए एक ओवन में नमूना का इलाज करें।
अंत में, जब नमूना इलाज समाप्त हो गया है, डिस्पोजेबल मोल्ड छील और यह माइक्रो सीटी मशीन के साथ स्कैन । पारंपरिक खंड में, मस्तिष्क का अभिविन्यास पूर्व निर्धारित होना चाहिए। इस माइक्रो सीटी विधि का उपयोग करना, नमूना मस्तिष्क की डिजिटल मात्रा तीन आयामों में हेरफेर किया जा सकता है और वस्तुतः किसी भी दिशा में कटा हुआ ।
तैयार चूहे के मस्तिष्क की स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी इस बात की पुष्टि करती है कि माइक्रो-सीटी इमेजिंग के प्रयोजनों के लिए ऊतक को काफी क्षतिग्रस्त नहीं किया गया था। अन्य छोटे जानवरों के दिमाग पर इस विधि की उपयोगिता का परीक्षण करने के लिए इस प्रोटोकॉल के अनुसार एक जेब्रा फिंच मस्तिष्क भी तैयार किया गया था और स्कैन किया गया था। इस तकनीक का उपयोग मस्तिष्क में सतह के घावों को खोजने के साथ-साथ मस्तिष्क के भीतर गहरे घावों को खोजने के लिए किया जा सकता है।
इस तकनीक को सीटू में एकल टेट्रारोड्स, इलेक्ट्रोलाइटिक घावों, इलेक्ट्रोड ट्रैक, सीटू में टेटरोड सरणी और सीटू में सिलिकॉन जांच के स्थान पर भी लागू किया जा सकता है। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, मस्तिष्क को लंबे समय तक और पर्याप्त आंदोलन के साथ इनक्यूबेट करने की अनुमति देना याद रखना महत्वपूर्ण है। इस प्रक्रिया के बाद, विभिन्न मस्तिष्क क्षेत्रों की भूमिका के बारे में अतिरिक्त प्रश्नों का उत्तर देने के लिए ऑप्टोजेनेटिक्स और दो-फोटॉन इमेजिंग जैसे अन्य तरीकों का प्रदर्शन किया जा सकता है।
यह तकनीक तंत्रिका विज्ञान के क्षेत्र में शोधकर्ताओं को चूहों, चूहों, सोंगबर्ड्स और अन्य छोटे जानवरों में मस्तिष्क और व्यवहार के बीच संरचना-कार्य संबंधों का बेहतर पता लगाने की अनुमति दे सकती है। यह न भूलें कि ऑस्मियम के साथ काम करना बेहद खतरनाक और सावधानियां हो सकती हैं, जैसे दस्ताने पहनना और वैक्यूम हुड में काम करना हमेशा इस प्रक्रिया को करते समय लिया जाना चाहिए।
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