Journal
/
Biochemistry
/
Høj følsomhed måling af transskription faktor-DNA bindende tilhørsforhold ved konkurrencedygtige titrering med Fluorescens mikroskopi
JoVE Journal
Biochemistry
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochemistry
High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Høj følsomhed måling af transskription faktor-DNA bindende tilhørsforhold ved konkurrencedygtige titrering med Fluorescens mikroskopi

DOI:
10.3791/58763-v

•

06:38 min

•

February 07, 2019

•

, , , ,
1Gene Center and Department of Biochemistry, Center for Protein Science Munich (CIPSM),Ludwig-Maximilians-Universität München

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:00Oligomer Annealing
  • 01:45Gel Preparation
  • 03:35Addition of the Competitor DNA Solution and Image Acquisition
  • 04:41Competitive Titration Assay and the Fitting Procedure
  • 05:17Results: Determining TF-DNA Binding Affinities Using Fluorescence Microscopy
  • 06:07Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Her præsenterer vi en roman metode til fastsættelse af bindende tilhørsforhold ved ligevægt og i løsning med høj følsomhed på en stor skala. Dette forbedrer kvantitativ analyse af transskription faktor-DNA bindende. Metoden er baseret på automatiseret fluorescens anisotropy målinger i et kontrolleret levering system.

Tags

Transcription Factor-DNA BindingFluorescence MicroscopyDissociation ConstantCompetitive TitrationAnisotropy MeasurementBinding AffinityProtein-DNA InteractionDNA AnnealingAgarose GelTitration PlateCalibration WellNile Blue Dye

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Kvantificering af Bakteriel Histidin kinase Autophosphorylering Ved hjælp af en Nitrocellulose-bindingsassay

High-resolution single particle analyse fra elektronkryo-mikroskopi billeder ved hjælp af SPHIRE

Måling af proteinbinding til F-actin ved co-sedimentering

Bestemmelse af høj-affinitet antistof-antigen Bindende Kinetics Brug Fire Biosensor Platforme

Imaging Amyloid væv farves med selvlysende konjugeret Oligothiophenes af Hyperspectral Konfokal mikroskopi og fluorescens levetid Imaging

Rab10 fosforylering påvisning af LRRK2 aktivitet ved hjælp af SDS-PAGE med en fosfat-bindende Tag

Opsamling og identifikation af RNA-bindende proteiner ved hjælp af klik kemi-assisteret RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

DNA-sekvens genkendelse af DNA Primase ved hjælp af Primase profilering med høj gennemløb

Høj gennemløb total intern refleksion fluorescens og direkte stokastiske optisk genopbygning mikroskopi ved hjælp af en fotonisk chip

Myosin-specifikke tilpasninger af In vitro Fluorescens Mikroskopi-Baserede Motilitet Assays

Read Article