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Medições de lipossoma único para o estudo das enzimas de membrana de bombeamento de prótons usando microscopia fluorescente e eletroquímica
JoVE Journal
Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy
DOI:

12:15 min

February 21, 2019

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Chapters

  • 00:04Title
  • 00:28Preparation of a Lipid/UQ-10/FDLL Mix
  • 01:26Reconstitution of Cytochrome bo3
  • 05:06Fabrication of Semi-Transparent Gold Electrodes and Modification of the Gold Surface with Self-Assembled Monolayer (SAM)
  • 06:07Electrochemical Testing of Proteoliposomes Activity
  • 07:46Detection of Enzymatic Proton Pumping by Fluorescence Microscopy
  • 09:44Results: Liposome Identification and pH Change
  • 11:35Conclusion

Summary

Automatic Translation

Aqui, apresentamos um protocolo para estudar o mecanismo molecular de translocação de prótons através das membranas lipídicas de lipossomas único, usando citocromo bo3 como exemplo. Combinando a eletroquímica e microscopia de fluorescência, mudanças de pH no lúmen do única vesículas, contendo uma única ou várias enzimas, podem ser detectados e analisados individualmente.

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