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Aqui, apresentamos um protocolo para realizar uma avaliação hemodinâmica invasiva do ventrículo direito e artéria pulmonar em camundongos usando uma abordagem de cirurgia de caixa aberta.
Este protocolo é uma avaliação hemodinâmica baseada em cirurgia torácica aberta e é útil para a avaliação de pressão ventricular e pulmonar direita em pequenos animais, como camundongos. A vantagem deste procedimento é que ele pode gerar parâmetros VP e PAP ao mesmo tempo. Por isso, é preferível para avaliações de modelos PAH.
Comece montando o equipamento para a cirurgia. Mergulhe o cateter transdutor de pressão em 0,9% salino à temperatura ambiente por pelo menos 30 minutos antes do experimento hemodinâmico. Em seguida, conecte o cateter a um sistema de volume de pressão.
Calibrar o transdutor de pressão girando o botão de calibração para zero e 25 milímetros de mercúrio para enviar um sinal de pressão de verificação para o software de aquisição de dados e, em seguida, configurar a configuração de calibração. Gire o botão para o transdutor e ajuste a válvula de equilíbrio para zero de linha de base. Configure um microscópio estéreo padrão, mesa cirúrgica de pequeno animal controlada pela temperatura e um sistema de iluminação leve para microcirurgia.
Uma vez que o rato esteja devidamente anestesiado, remova a pele do peito e do pescoço usando uma máquina de barbear e loção de depilação. Fixar o mouse na posição supina na mesa cirúrgica controlada pela temperatura. Depois de garantir que a anestesia esteja em vigor, faça uma incisão midline na pele do pescoço.
Disseque o músculo esquelético usando fórceps curvos e exponha a traqueia. Realizar intubação pela boca com um cateter de bainha intravenosa de 22 bitolas, confirmando que o tubo está na traqueia com fórceps. Conecte a tubulação a um pequeno ventilador animal e fixe-o para ventilação usando fita adesiva.
Em seguida, faça uma incisão midline na pele do peito e disseca cuidadosamente o músculo torácico usando uma ferramenta de cauteria. Corte o esterno usando uma tesoura no meio, e exponha a cavidade torácica. Certifique-se de evitar qualquer sangramento usando a ferramenta cautery.
Exponha o ventrículo direito com retráteis e, em seguida, insira o cateter transdutor de pressão embebido salino através de um pequeno túnel criado com uma agulha de calibre 25 no ventrículo direito para medir a pressão ventricular direita, ou RVP. Segure o cabo do cateter e cruze a válvula pulmonar de forma coaxial com a artéria pulmonar. Observe a forma de onda de pressão e obtenha uma pressão arterial pulmonar estável ou sinal PAP.
Em seguida, registo os dados hemodinâmicos usando o software de aquisição de dados. Remova cuidadosamente o cateter do sistema cardíaco direito e coloque-o em uma seringa de um mililitro contendo solução de enzima digestiva de 1%. Este protocolo foi usado com sucesso para obter formas de onda RVP e PAP em camundongos, inserindo um cateter transdutor de pressão no ventrículo direito e na artéria pulmonar.
Para evitar a geração de dados artificiais, segmentos com ruído foram excluídos da análise de dados e correções foram feitas se o nível zero do cateter tivesse derivado. RVP e PAP foram medidos em camundongos com hipóxia crônica induzida, e os resultados foram comparados aos obtidos de um grupo controle. PAP sistólica, PAP diastólica, PAP médio e pressão sistólica ventricular direita foram significativamente aumentadas no grupo de hipóxia crônica.
A coisa mais importante a se lembrar é inserir o cateter transdutor de pressão no ventrículo direito cuidadosamente, certificando-se de evitar danos ao cateter e confirmar que a forma de onda RVP lisa aparece na tela.
