Neuroscience
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Establecimiento del Infarto Pontino Agudo en Ratas por Estimulación Eléctrica
Chapters
Summary August 27th, 2020
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Aquí se presenta un protocolo para establecer infarto agudo de pontina en un modelo de rata a través de la estimulación eléctrica con un solo pulso.
Transcript
Proporcionamos un protocolo para establecer el infarto en un pons de rata. Este modelo de rata de infarto pontino fue fácilmente realizado, fácil de reproducir y modelo de gran éxito. La estimulación eléctrica podría utilizarse para hacer infarto en cualquier otra área cerebral como el tálamo.
Las personas que quieran realizar este modelo deben aprender la autonomía pontina antes del experimento. Antes de la cirugía, sopesar a las ratas y evaluar su rendimiento neurológico de acuerdo con las pruebas de comportamiento como se describe en el texto que lo acompaña. Precaliente la almohadilla de calentamiento a 37 grados Celsius inmediatamente antes de la anestesia y adjunte el taladro del cráneo al soporte en el marco estereotaxico.
Confirme la falta de respuesta al reflejo del pedal en la primera rata anestesiada y monte la rata en el marco estereotaxico en la posición propensa en la almohadilla calefactora. Coloque las barras de las orejas por encima del canal auditivo para asegurar la cabeza, teniendo cuidado de que el cráneo se mantenga horizontal para evitar cualquier sesgo de la inyección. Aplica un ung ón en los ojos del animal y usa una micro afeitadora para eliminar el cabello del cráneo.
Utilice un marcador para dibujar una línea de tres centímetros a lo largo de la línea media del cráneo desde la línea del canthus lateral bilateral a 0,5 centímetros detrás de la fontanela posterior y use un bisturí para hacer una incisión de línea media a lo largo de la línea marcada. Use un hisopo de algodón para extraer la sangre y coloque un pedazo de cinta quirúrgica a cada lado del colgajo de la piel para exponer el cráneo. Utilice un hisopo nuevo empapado con cloruro de sodio al 0,9% para eliminar suavemente cualquier tejido conectivo del cráneo y localizar el bregma.
Utilice un rotulador de punta fina para indicar el punto central del bregma como punto de origen, coloque el taladro en seis milímetros anterior posterior, dos milímetros laterales medios. Utilice el taladro para realizar cuidadosamente una craneotomía de un milímetro de diámetro. A continuación, reemplazó el taladro con una sonda de calibre 22 con una funda aislada con la punta colocada dos milímetros por encima del extremo proximal de la vaina.
Inserte las láminas de siete milímetros en el cerebro y avance la sonda a lo largo de la vaina hasta que la parte superior de la sonda esté nueve milímetros por debajo de la superficie del cerebro. Conecte los electrodos a un estimulador eléctrico y conecte el ánodo a la sonda. A continuación, conéctese al cátodo a la oreja de la rata.
A continuación, encienda el estimulador eléctrico y ajuste el ancho de pulso único a 4, 050 milisegundos, la tensión a 50 voltios y la corriente a cuatro miliamperios. Deje la sonda en posición durante cinco minutos después de la estimulación antes de extraer el dispositivo del cerebro. Cubra la craneotomía con cemento óseo y deje que el cemento se seque antes de usar filamentos de sutura de poliamida 4.0 para cerrar la herida.
Después de tres o cuatro puntos de sutura, ate 2-1-1 nudos quirúrgicos estándar. A continuación, inyectar por vía intraperitoneal a la rata con 250 microlitros de penicilina y controlar la rata cada 15 minutos hasta que esté completamente despierta antes de devolver al animal a su jaula. En este análisis, seis animales fueron sometidos a la cirugía como se demostró y seis animales fueron tratados como controles.
Las rebanadas cerebrales en estas imágenes se derivaron de una rata por grupo. La exploración por resonancia magnética reveló que el infarto se encontraba en la base de los pons imitando infartos anterolaterales en pacientes humanos. Debido a que se utilizó una vaina aislada, el infarto no se observó en la corteza, cerebelo o cerebro medio.
Las imágenes ponderadas por difusión también revelaron el infarto agudo de pontina. La tinción TTC se utilizó para confirmar el infarto las 24 horas después de la cirugía. Como era de esperar, el volumen de infarto fue significativamente mayor en el grupo de cirugía en comparación con el grupo de control.
Las puntuaciones conductuales se midieron antes y después de la cirugía. En comparación con el grupo de control, las ratas con un infarto pontino rodearon a la izquierda. Se observaron diferencias significativas en el Longa, Berderson, la colocación de las extremidades, el equilibrio del haz y las puntuaciones de prueba somatosensoriales de eliminación adhesiva entre los despojos con infarto pontino y ratas del grupo de control.
Cualquier área específica del cerebro va a ser destruida por la estimulación eléctrica.
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