具有新序列特异性的限制内联酶可以从识别部分退化序列的酶中开发。在这里,我们提供了一个详细的协议,我们成功地用于改变NlaIV酶的序列特异性。该协议的关键成分是转录/翻译反应的体外分块和具有新序列特性的变体的选择。