7,920 Views
•
06:51 min
•
May 06, 2020
DOI:
פרוטוקול זה מספק פגיעה מדויקת, מבוקרת בניתוח, כדי לגרום לתרגום מלא של חוט השדרה בעכברים עם יכולת שכפול גבוהה ו שיעורי הישרדות גבוהים מאוד. השימוש בתרגיל עדין לפגיעה בעצמות ממזער את הנזק לרקמה הסובבת, ומאפשר לדגמן את תגובות הפציעה והטיפול בדיוק רב יותר. כדי לבצע כריתת למין, לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס הדוושה ב 8 עד 10 שבועות נקבה C57 שחור 6 עכבר, לגלח את הפרווה האחורית כדי לחשוף את האזור הכירורגי על עמוד השדרה הגבי לעקר את האזור מגולח עם ספוג כותנה סטרילי ספוג נוזל חיטוי יוד povidone ורוח כירורגית.
באמצעות אזמל, לעשות חתך אנכי קו האמצע ברמת החוליות T10 ולהשתמש מטלפים ישרים כדי להרים את העור מן fascia הבסיסית כדי להקל על מיקום מפשק. כדי לחשוף את הקוצים של חוליות T9 עד T11, השתמש בקצה הקהה של האזמל כדי לבצע חתך קו אמצע קטן ברקמה התת עורית ואת fascia הבסיסית ולהשתמש מדפים לא חדים קצה דק כדי לנתח בוטה לשקף את fascia. כדי לחשוף את הלמינה, השתמש בקצה הקהה של האזמל כדי לפצל את תא המטען הגבי והשרירים הפרספיניים לאורך הקוצים של חוליות T9 עד T11 ולהשתמש במלקחי הקצה העדינים והקהים כדי לנתח את השרירים בשכבות כדי לחשוף את הלמינה של החוליות.
השתמש באותם מלקחיים כדי להפוך כיסים קטנים סביב התהליכים הרוחביים של חוליית T10 ולחבר את שיניים של מלקחיים מעוגלים תחת התהליכים רוחביים בתוך הכיסים שנוצרו כדי לייצב את גוף החוליות T10. שטפו ביסודיות את ה-T10 laminae עם מלוחים חמים ולהשתמש במטליות כותנה כדי לנגב בעדינות את המשטח הגרמי נקי, תוך טיפול שום קשרים שריר או רצועה להישאר לאורך פני השטח הדו-צדדיים. כדי לשבור את laminae דו-צדדית, להשתמש בקוטר 0.55 מילימטר, שבעה מילימטר אורך לקדוח קצה קצת כדי לעקוב אחר נתיב אנכי מן החלל הבין חולייתי T9/T10 לחלל הבין חולייתי T10/T11 לאורך שני T10 laminae עם התרגיל כבוי.
כאשר הנתיב כבר נעוצים, להפעיל את המקדחה לאט ובזהירות לעשות תעלה אנכית על lamina הימנית של חוליית T10, באמצעות מדחיסי מעוקל כדי לשמור על החוליה יציבה. לאחר חזרה על התהליך בצד שמאל של lamina, להשקות את הרקמה עם מלוחים חמים לשטוף את כל שברי העצם הנותרים. שמירה על אחיזה טובה בעמוד השדרה ביד אחת חיונית לשלב זה.
חשוב גם להיות נוח ובטוח עם השימוש בתרגיל. לאחר מכן, השתמש במטסות קצה דק זוויתי כדי לאחוז בתהליך ספיני ולהסיר את כל קטע הגב של laminae מופרדים על ידי קידוח דו צדדי. לאחר מכן, להשקות ספוגית לפי הצורך כדי לאפשר הדמיה ברורה של חוט השדרה בתוך חלון laminectomy.
כדי לגרום לפגיעה בחוט השדרה בתוך החוט החשוף, השתמש בלהב צר ועיגולי עם קצוות חיתוך כדי לחתוך את החוט במרכז חלון כריתת המעי הגס, תוך כדי טיפול בסריקת ההפסקות הצידיות של עמוד השדרה כדי לגרום לפגיעה מוחלטת בחיתוך. כדי לאשר את השלמות של הפציעה transection, להשתמש במדפים קצה דק קהה כדי להסיר את כל החיבורים הנותרים באתר transection. לאחר hemostasis הושג באתר transection, לשחרר את האחיזה של מאלץ מעוקל על חוליה T10 ולהביא את הקצוות של השרירים נותח יחד לאורך קו האמצע כדי להשיג apposition טוב.
באמצעות 5/0 polyglactin 910 תפרים נספגים, לתפור את השרירים בשכבות, לוודא כי העקמומיות הטבעית של עמוד השדרה אינו גורם כל מתח בקו התפר או לפתוח את התפרים. לאחר מכן, השתמש 5/0 תפרים משי שאינם נספגים כדי לסגור את הרקמה התת עורית ואת העור, דואג כי אין דימום, קרישי דם, או פסולת שנותרו מתחת לעור לפני הסגירה. כדי להעריך אם שיטה זו לפגיעה בחוט השדרה מסוג טרנסקט בעכברים ניתנת לשחזור ועקבית, ניתן לנתח את חוט השדרה הפגוע על ידי אימונוהיסטוכימיה ובדיקות התנהגותיות יכולות להתבצע על העכברים.
תיוג חיסוני נגד סמן האסטרוציטים, חלבון חומצי פיברילית גליה, מקל על תיחום הגבול של חוט השדרה שלם. בחלק אורך זה, אתר הפציעה הממוקם ניתן לדמיין בין גדמי הכבל כצפוי. פגם בגודל עקבי יכול להיות המושרה באתר transection עם מרחק מינימלי ממוצע של 550.4, בתוספת או מינוס 17.3 מיקרומטר.
נתונים התנהגותיים הפורסים את סולם עכבר באסו של מבחן שדה פתוח מראים כי העכברים הפצועים אינם מפגינים תנועת גפיים אחורית לאחר הפציעה. לכן, הפרוטוקול מייצר פגיעה מלאה ואמינה מסוג Transection שתוביל לאובדן תפקוד מוחלט מתחת לרמת הפציעה שאינה מובילה להיפוך ספונטני של השיתוק. יש לדאוג לקדוח בקו ישר עם יד יציבה, כי זה יכול להיות מאוד מסובך לתקן את החלון laminectomy פעם זה נקדח בצורה לא נכונה.
לאחר אינדוקציה של פגיעה בחוט השדרה, ניתן ליישם אפשרויות טיפול שונות, כולל אספקת תרופות והשתלת תאים כדי לזהות טיפולים פוטנציאליים המשפרים את התאוששות הפגיעה בחוט השדרה.
פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור כריתת למינקטוע מדויקת עבור אינדוקציה של פגיעה יציבה בחוט השדרה מסוג transection במודל העכבר, עם נזק משני מינימלי למחקר פגיעה בחוט השדרה.
12:23
Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord
Related Videos
16693 Views
11:04
Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice
Related Videos
40263 Views
08:11
Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey
Related Videos
9809 Views
11:18
An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time
Related Videos
10785 Views
07:49
Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice
Related Videos
18863 Views
07:04
Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice
Related Videos
10788 Views
09:25
An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury
Related Videos
9298 Views
06:40
Activity-based Training on a Treadmill with Spinal Cord Injured Wistar Rats
Related Videos
7914 Views
14:53
Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia
Related Videos
10156 Views
09:07
Electromagnetic Controlled Closed-Head Model of Mild Traumatic Brain Injury in Mice
Related Videos
1957 Views
Read Article
Cite this Article
Reshamwala, R., Eindorf, T., Shah, M., Smyth, G., Shelper, T., St. John, J., Ekberg, J. Induction of Complete Transection-Type Spinal Cord Injury in Mice. J. Vis. Exp. (159), e61131, doi:10.3791/61131 (2020).
Copy