Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Modellering van hersenmetastasen door middel van intracraniale injectie en magnetische resonantie beeldvorming
Chapters
Summary June 7th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Intracraniale hersenen metastase modellering wordt gecompliceerd door een onvermogen om tumorgrootte en reactie op de behandeling met nauwkeurige en tijdige methoden te controleren. De gepresenteerde methodologie paren intracraniale tumor injectie met magnetische resonantie imaging analyse, die wanneer gecombineerd, cultiveert nauwkeurige en consistente injecties, verbeterde dier monitoring, en nauwkeurige tumor volume metingen.
Transcript
Dit intracraniale injectieprotocol is significant omdat het nauwkeurige injecties, dagelijkse controle en nauwkeurige tumorvolumemeting voor efficiëntere studie van mechanismen van hersenenmetastase toestaat. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het mogelijk maakt voor seriële monitoring van intercraniële tumorgroei. Het aantonen van de procedure zal Jonathan Spehar, een afgestudeerde onderzoeker van het Sizemore Laboratory, en Anna Bratasz, een imaging onderzoeker van de Ohio State University Small Animal Imaging Shared Resource.
Draai voor het begin van de procedure het podiumslot op de boor zodat een boorbitadapter en een steriele boorbit in de boor kunnen worden geplaatst en draai de bitsloten handmatig aan om de boor te vergrendelen. Bevestig de boor aan het stereotactische frame en stel de digitale injectorleveringssnelheid in op 0,4 microliter per minuut, met een doel van twee microliters. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op pedaalreflex, plaats de verdoofde muis op het frame en gebruik het stompe uiteinde van een katoenen tip applicator om de tanden in de trog van de mondbalk te plaatsen.
Druk op de linkeroorbalk tegen de mediale canthus van het linkeroor om de schedel te stabiliseren en gebruik de schroef op het stereotactische frame om de schedel op zijn plaats te vergrendelen. Zet vervolgens de andere kant van de schedel met de rechteroorbalk op dezelfde manier vast. Om een calvarial venster te maken, reinig de hoofdhuid met drie opeenvolgende afwisselende Betadine-oplossing en 70% ethanol scrubs en gebruik een steriele scalpel om een drie millimeter incisie door de huid te maken langs het centrale mediane aspect van de schedel na de sagittale hechtingslijn.
Identificeer en oriënteer de steriele boorbit loodrecht op de bregma, zorg ervoor dat de digitale vernier schaal resetten naar nul en verplaats de boor beetje twee millimeter laterale naar de sagittale hechting en een millimeter voorste naar de coronale hechting. Verplaats de huid uit de buurt van de boor en met behulp van de hoogste snelheid en aandacht te besteden aan de oriëntatiepunten, voorzichtig boren een gat, ongeveer 0,5 millimeter diep, door de calvaria, het koelen van de boorplaats met druppels steriele zoutoplossing als dat nodig is. Zodra het calvarial venster is gemaakt, voorzichtig verhogen van de boor en verwijder de boor uit het stereotactische frame.
Voor kankercelinjectie bevestigt u de automatische injector-eenheid aan het stereotactische apparaat en laadt u de zes tot acht microliter van cellen die grondig in DPBS worden geresususpend in een steriele Hamilton-spuit. Laad de spuit op de injector en doe een klein volume oplossing af op een wegwerpsteriele gordijn om de naald te laten inspuiten voor injectie. Gebruik een katoenen tip applicator om de spuit af te vegen met 70%ethanol en lijn de naald tip naar het midden van de calvarial venster totdat het bijna raakt de blootgestelde cerebrum.
Reset digitale vernier schaal naar nul en langzaam steek de naald in een drie millimeter diepte in de hersenen. Laat de naald in de hersenen voor ten minste 60 seconden voor het selecteren van run op de injector scherm om de cel levering te beginnen met de injectieplaats. Wanneer alle cellen zijn geleverd, laat de naald om te rusten in de hersenen voor ten minste drie minuten om de hersenen parenchyma te acclimatiseren aan de injectie voordat u de naald uit de hersenen met een snelheid van 0,75 millimeter per minuut.
Voor magnetische resonantie beeldvorming van de tumorlast, 10 tot 20 minuten voor beeldvorming op het juiste experimentele tijdpunt, 100 microliters per 20 gram lichaamsgewicht gadolinium-gebaseerde contrastmiddelen toe te dienen aan de muis door standaard intraperitoneale injectie. Verdoven de muis na injectie en plaats de verdoofde muis op een verwarmde houder. Plaats de houder in een 9.4 T magneet uitgerust met een muis hersenoppervlak spoel en het verkrijgen van een localizer beeld.
Vervolgens beeld de muis hersenen met behulp van een T2 gewogen zeldzame sequentie en post gadolinium-gebaseerde contrast T1 gewogen zeldzame sequentie. Om het totale tumorvolume te meten, opent u het MRI-gegevensbestand van belang in ImageJ en gebruikt u het gereedschap vrije handselecties om een overzicht rond de tumor te tekenen. Open vervolgens het tabblad Analyseren en selecteer meting om het gebied van het geselecteerde gebied te verkrijgen.
Wanneer alle tumoren met plakjes voor een individuele muis op dat specifieke tijdstip zijn beoordeeld, exporteert u de waarden naar een geschikt data-analyseprogramma. Hier kan een representatief overzicht van de tumorvolumekwantificering voor een enkele muis op dag 7 en dag 10 na murine borsttumorcelinjectie worden waargenomen. De evaluatie van 30 plakjes per scan bleek dat voor deze analyse, op dag zeven na injectie, vijf plakjes een tumorlast vertoonden.
Terwijl op dag 10, negen plakjes vertoonden een tumor last. Het tumorgebied in elk beeld werd vervolgens gemeten zoals aangetoond, waardoor de verandering in het tumorvolume in de loop van de tijd kon worden gevolgd. Elke cellijn en elk ontvangermuismodel is uniek en vereist daarom optimalisatie van het aantal geïnjecteerde cellen en het MRI-schema om de nauwkeurigheid van de beeldvorming te garanderen.
Na deze procedure, de hersenen kunnen worden geoogst voor in wezen elke downstream test, met inbegrip van eencellige isolatie of histopathologische analyse.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
