Environment
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
שיטה לשימור שורשי ביצות וריזוספרות להדמיה יסודית
Chapters
Summary February 15th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
אנו מתארים פרוטוקול לדוגמה, שימור וקטע שורשים שלמים ואת אדמת הריזוספירה שמסביב מסביבות ביצות באמצעות אורז(Oryza sativa L.) כמין לדוגמה. לאחר שהשתמרה, ניתן לנתח את הדגימה באמצעות טכניקות הדמיה אלמנטריות, כגון הדמיית פלואורסצנטיות כימית של קרני רנטגן סינכרוטרון (XRF).
Transcript
שיטה זו מספקת לחוקרים דרך חדשה להכין שורשי צמחים ימיים, את הריזוספירה שמסביב ואת הקרקע בתפזורת לטכניקות הדמיה בסיסיות. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא מהירה יחסית ובמחיר סביר תוך שמירה מדויקת על ההפצה וההפצה של אלמנטים בעלי עניין. טכניקה זו יכולה לשמש כדי לענות על שאלות לגבי אלמנטים רבים ומערכות צמחים מחומרים מזינים במערכות חקלאיות לגורל והובלה של מזהמים במערכות fettermiation.
הקפד לעבוד במהירות תוך כדי שים לב גם לאזור הרצוי או לאזורים של מערכת השורש לדגימה. ולקחת דגימות מרובות לכל מערכת שורש. כדי להכין את ציוד ההקפאה טריקה לניסוי, למקם שתיים, חמש על 5 על 15 ס"מ בלוקים נחושת אופקית לתוך צידנית נקייה המסוגלת להחזיק חנקן נוזלי.
ולובש PPE המתאים, לשפוך מספיק חנקן נוזלי לתוך הצידנית כדי להטביע את הבלוקים. ברגע שהמבעבע שוכך, מניחים מרווח אחד בכל קצה של גוש נחושת אחד. לאחר מכן, באמצעות מלקחיים וכפפות קריוגניות, לעמוד בלוג נחושת האחר על הקצה שלה כדי להקל על אחזור כאשר המדגם הוא במקום.
כדי לאסוף את המדגם, או להשתמש בעציץ או להשתמש באת כדי להתחיל לחלץ את הצמח הרצוי rhizosphere מן האדמה הרטובה, לטפל כי הבור חפר הוא הרבה יותר גדול מאשר נפח השורש הרצוי. השתמש בלהב פלדה כדי לחתוך כל אדמה עודפת, תוך כדי קפיד לא להפריע לאדמה בתוך האזור הרצוי. כאשר האזורים הרצויים מגיעים, חותכים קוביית שורש של כשלושה על שלושה על שני ס"מ, ומיד מניחים את הקוביה בין שני המרווחים על בלוק הנחושת האופקי.
להקפאת טריקה של המדגם, השתמש בכפפות קריוגניות כדי למקם את בלוק הנחושת האנכי על המרווחים במשך כחמש דקות. כאשר המבעבע שוכך להעביר את דגימת קוביית rhizosphere קפוא טריקה לתוך חתיכת ריבוע רדיד אלומיניום שכותרתו מראש. כדי להקפיא את קוביות הקרקע, כאשר מייבש ההקפאה הגיע ללחץ ולטמפרטורה הנכונים של ואקום, מניחים דגימת קוביית ריזוספירה קפואה אחת לניקוי וחומצה שטופה צינור 50 מיליליטר או ישירות לתוך מייבש ההקפאה ומשתמשים במחיקה חד פעמית נקייה כדי למנוע כניסת אבק למשאבת הוואקום.
מניחים את הדגימות לתוך כלי מייבש ההקפאה לפחות כמה ימים עד יבש. כאשר הרקמות התייבשו בהקפאה, השתמש בלהב פלדה לקוביות אדמה מיובשות לגודל מתאים לניתוח לפני הצבת הקוביות בצורות מסומנות בתוך מייבש ואקום. לאחר הכנת אפוקסי על פי הוראות היצרן, השתמש טפטפת כדי להוסיף אפוקסי לאט לצורה בצד אחד של הקרקע, עד אפוקסי מכסה לחלוטין את המדגם.
האדמה תתכהה בצבע כשהאפוקסי מקריר את האדמה. לאחר שהטפסים מתמלאים באפוקסי, סוגרים את התבשר ומדליקים את הוואקום. בדוק את הרמה של אפוקסי כל 30 עד 90 דקות עבור הראשון עד ארבע שעות, הוספת אפוקסי נוסף במידת הצורך.
לאחר האפוקסי התקשה, להסיר את המדגם. לאחר ההטבעה, השתמש במסור רטוב מדויק של להב היהלום כדי לחתוך את הדגימה. חותכים את המדגם לכיוון אחר אם לא מתקבלים שורשים בחתך הקודם.
לאחר החיתוך, חול ידני את הצד החתוך של כל מדגם עם נייר זכוכית דק יותר בהדרגה במשך 30 שניות לכל גודל חצץ. באיור זה, ניתן לראות מספר קטרי שורש בתוך מטריצת הקרקע כמקטעים רוחביים. השורשים עשויים להפגין רמות שונות של איכות.
לדוגמה, בתמונה זו, ניתן לראות שורש שמור היטב, שורש המעוות על-ידי תהליך הייבוש של ההקפאה ושורש שהוצא במהלך תהליך החתך הדק. ניתוח של מקטע רוחבי שורש זה עם שורש לרוחב בקטע אורך על ידי הדמיית פלואורסצנטיות רנטגן סינכרוטרון כפי שהודגם מאפשר זיהוי של ברזל, מנגן, וארסן. נוכחות הברזל בתוך האדמה וסביב השורש בלוח הברזל ניכרת גם בתמונות המיקרוגרף הקלות.
מנגן נמצא באופן ייחודי בתוך קליפת המוח של השורש לרוחב, אבל גם שיתוף לוקליזציה עם ברזל באזורים מסוימים בתוך לוח הברזל כמו גוון ירוק-כחול. ארסן נמצא בעיקר בתוך vasculature של השורש לרוחב מיזוג לתוך vasculature של השורש העיקרי. הדמיית דגימה כימית מגלה שונות לוקליזציה של מינים ארסן.
כפי שנצפו בעלילה תלת-צבעית זו, ארסניט וגלוטתיון ארסניט קשורים קשר הדוק לערימת כלי הים, בעוד שהסנאט בעיקר לוקליזציה בתוך החלק החיצוני של השורש, הקשורים ללוח הברזל. לפני איסוף הדגימה, קבע את החלק הרצוי של מערכת השורש להדמיה אלמנטית. פעולה זו תכתיב את כיוון המיקום של מפתח הבסיס שהוסר.
בעקבות פרוטוקול זה, ניתן לדמיין דוגמאות בקנה מידה מיקרון או גס באמצעות מגוון טכניקות, בהתאם לשאלות המחקר הספציפיות, אלמנטים של עניין, או מכשור זמין.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
