A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Introduction
- 00:59Assembly of the Microscopy Chamber
- 02:33Imaging Microtubule Bundles with 3‐Color TIRF
- 03:41Performing Optical Trap Experiments on Microtubule Bundles
- 06:02Results: Measuring Force Production by Kinesin‐5 and Frictional Force by PRC1
- 07:06Conclusion
Her præsenterer vi en protokol til rekonstituering af mikrotubulusbundter in vitro og direkte kvantificering af de kræfter, der udøves i dem ved hjælp af samtidig optisk fangst og total intern refleksionsfluorescensmikroskopi. Dette assay muliggør måling på nanoskala-niveau af de kræfter og forskydninger, der genereres af proteinensembler inden for aktive mikrotubulinetværk.
Tags
Microtubule BundlesCytoskeletal NetworksForce MeasurementOptical TrapTIRF MicroscopySingle-molecule ExperimentsProtein ConcentrationProtein DensityMitosisNeural DevelopmentMuscle ContractionCell MigrationStreptavidinNeutrAvidinCaseinBiotinylated MicrotubulesRhodamine MicrotubulesRigor Kinesin-coated BeadsReaction Buffer
