측정 Caenorhabditis 엘레간스 수명

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

이 문서에서 우리는 UV - 살해 박테리아 음식 고체 미디어에 유지 nematodes의 수명을 측정하는 일반적인 프로토콜을 제시한다.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media. J. Vis. Exp. (27), e1152, doi:10.3791/1152 (2009).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

노화는 세포의 구성 요소와 사망률의 결과 organelles의 점진적 저하 특징 퇴행성 과정이다. 선충류

Protocol

1 부 : 준비 선충류의 성장 미디어 (NGM) 접시

이 섹션은 수명 실험에 사용하기 위해 고체 NGM 플레이트의 준비에 대해 설명합니다. 암피실린 (앰프)와 NGM에 추가 fluorodeoxyuridine (FUDR)를 모두 가지고 아무런 첨가제 및 앰프 / FUDR 접시를 포함하지 표준 NGM 번호판, : 기본 수명 실험은 접시 두 가지 유형이 필요합니다. 암피실린 외국 세균 오염을 방지하는 데 사용됩니다. FUDR은 세포 분열을 억제 계란 생산을 감소하고, 부화에서 계란을 방지할 수 있습니다. 장수 분석을위한 FUDR의 사용은 성인 수명에 영향을 성장 유충에서 분리하기 위해 모든 며칠 벌레를 전송하는 필요를 제거하지 않습니다. 접시의 두 종류 E. 함께 씨앗 아르 이후 UV에 노출에 의해 살해 대장균 박테리아 OP50.

  1. NGM (조리법 및 스토리지 노트 섹션 5 참조)와 레이블 배양 접시를 준비합니다. 당신은 NGM 10 ML 당 1 60mm 페트리 접시가 필요합니다. 당신이 이전에 준비 고체 NGM 시작하는 경우, 1.2 단계로 진행합니다. 당신은 갓 autoclaved NGM 시작하는 경우, 1.4 단계로 건너 뜁니다.
  2. 완전히 30초 펄스의 높이 microwaving하여 고체 NGM을 용융. 최대 건물에서 가압 가스 거품을 방지하기 위해 펄스 사이의 소용돌이 미디어.
  3. 55 ° C 물 목욕이나 냉각 벤치에 자리 액체 NGM.
  4. 일단 NGM 55에 도달 ° C 150 MM의 FUDR 33 μL과 100 MG / ML 100 ML NGM 당 암피실린 (앰프 / FUDR 접시)와 섞어 소용돌이 100 μL를 추가합니다. 추가 약물없이 NGM 접시에 대한 1.5 단계로 바로 진행합니다.
  5. 각 60mm 배양 플레이트에 살균 기법, 피펫 10 ML NGM을 사용합니다. 가능하면 거품을 형성하지 마십시오. 거품이 양식을 할 경우, 그들은 피펫 팁을 사용하여 쐈고 수 있습니다.
  6. NGM은 응고 및 건조 수 있도록 뚜껑에있는 벤치에 접시를 남겨주세요. 가능하면, 박테리아를 추가하기 전에 2 일간 벤치에 번호판을 떠나지만, 접시가 빨리 필요하면 일일 작동합니다.
  7. 당일 번호판 E.의 신선한 행진에서 하나의 식민지로 건조, 종자 액체 LB 문화를 완료하기 전에 LB 한천에서 대장균 박테리아를 OP50. 당신은 60mm 판 당 하룻밤 OP50 문화의 최소한 1 ML 준비를해야합니다.
  8. 37 장소 OP50 문화 박테리아 (문화 포화에 도달한다) 하룻밤 성장 ° C 뿌리와이 가능하다는 특징을 가지고있다.
  9. 펠렛 OP50 10 분 3,500그램에서 회전에 의해 박테리아.
  10. 문화 10X 집중 뜨는 및 resuspend 박테리아의 90 %를 제거합니다.
  11. 확정 NGM 플레이트의 중심에 10X 집중 OP50 문화의 피펫 100 μL. (이상적으로 박테리아가 판 벽 근처에 오는없이 NGM의 중심 영역을 커버한다) 필요할 경우 소용돌이의 번호판은 부드럽게 박테리아 문화를 확산합니다. 미디어의 표면에 결함이 NGM로 버로우로 벌레를 허용 등 NGM의 표면에 피펫 팁을 만지는 피하기 위해보십시오.
  12. 박테리아 문화가 고체 NGM (일반적으로 약 24 시간 소요)에 건조 수 있도록 밤새 벤치에 접시를 남겨주세요.
  13. 일단 건조하고 박테리아의 성장을 체포하는 데 충분한 UV 복용으로 접시의 표면을 쉽게받을 수 있습니다. 당신은 Stratagene의 자외선 Stratalinker 2400을 사용하는 경우 :
    • 플레이스 Stratalinker에 접시와 뚜껑을 제거
    • 문을 닫고 Stratalinker 켜십시오
    • 보도 자료 '에너지'
    • '9999 '은 키패드를 사용하여 입력
    • 누르면 '시작'
    • 플레이트는 약 5 분 동안 자외선에 노출됩니다
  14. UV - 살해 박테리아와 플레이트는 ° C 최대 1 개월 4에서 거꾸로 저장할 수 있습니다.

2 부 : 동물의 연령 동기 인구를 얻기 누워있는 시간이 초과되었습니다 달걀을 수행

이 섹션에서 우리는 공통의 해치 - 날짜와 웜의 인구를 생성합니다. 이것은 reproductively 활성 성인 시간 정의된 기간 동안 접시에 알을 낳을 수 있도록 이들 계란 개발함으로써 수행됩니다.

  1. (선택 사항) FUDR없이 신선한 NGM 접시에 약 20 젊은 성인 웜을 전송합니다. ° C 웜은 세균성 음식의 모든을 통해 전파하고 먹을 수 있도록 25 접시를 남겨주세요. 세균성 음식 섭취 후에는 새로 부화 벌레는 dauer 단계를 체포 성장을 입력합니다. 당신은 처음 접시로 전송 얼마나 많은 벌레에 따라 일주일 이내 주변 dauer의 유충을 볼 시작합니다. Dauer의 유충은 최대 1 개월 다음 단계에 사용할 수 있습니다.
  2. FUDR없이 신선한 NGM 접시에 (옵션) 전송 20-30 dauer의 유충. 식품 dauer의 유충의 존재 2 일 이내에 reproductively 활성 성인이 될 것이며, 25 이후 며칠 동안 reproductively 활성 상태로 유지 ° C.가
  3. FUDR없이 신선한 NGM 접시에 10-15 reproductively 적극적인 성인을 전송합니다. 이 번호판은 시간 초과 에그 누워 (전화) 번호판이라고합니다.
  4. ° C 6 시간 t를 허용하기 위해 25 TEL 접시를 남겨주세요그는 벌레 시간은 알을 낳기 위해.
  5. TEL 플레이트에서 어른 벌레를 제거합니다. 플레이트는 시각 성인 제거하기 전에 달걀에 대한 검사를하실 수 있습니다. 벌레가 알을 충분한 숫자를 마련하지 않은 경우 TEL 판은 어른 벌레를 제거하기 전에 24 시간 총 최대 25 ° C에서 남아있을 수 있습니다.
  6. 20 장소 TEL 판 ° C 계란이 부화하고 벌레가 L4 애벌레 단계 (이것은 일반적으로 야생 유형 C. 엘레간스 2 일이 소요하지만, 속도가 느린 개발 phenotypes와 종자에 대한 더 오래 걸릴 수 있습니다)을 개발하기 전까지.

파트 3 : 수명에 대한 점수 동물

그들은 죽을 때까지이 섹션에서 우리는 2 부에서 벌레의 시대 - 동기 인구를 수행합니다. 웜가 계란 생산 및 박테리아 오염을 방지하기 위해 앰프 / FUDR 접시에 유지되며 외부 자극에 반응하지 않는 경우 죽은 것으로 간주됩니다.

  1. 씨앗 앰프 / FUDR 접시에 L4 유충을 전송합니다. 각각의 변형이나 조건이 테스트되는 경우, 그것은 접시마다 25-30 벌레와 2-3 접시를 설정하는 것이 일반적입니다. C. 이미지 엘레간스 생활 단계는 참조 (그림 1)를 제공합니다 1.
  2. 20 플레이스 앰프 / FUDR 접시 ° 24 시간 동안 C.
  3. 24 시간 후에, 시각 웜, 미디어, 그리고 박테리아를 평가. 다음 중 하나를 관찰하는 경우 신선한 앰프 / FUDR 접시에 웜을 전송 :
    • 웜는 세균 음식의 대부분을 먹었. 조기 수명의 실험 웜을 1로 2 배에게 고갈되는 세균을 방지하기 위해 일주일을 전송해야합니다.
    • 애벌레의 상당수가 존재하고 있습니다. 이것은 일반적으로 벌레가 젊은 성인 대신 L4s로 앰프 / FUDR 접시에 전송하고 FUDR이 효과를 데려가기 전에 몇 알을 낳을 수 있었던 것을 나타냅니다. FUDR은 일반적으로 전체 성인으로 성장의 애벌레를 방지할 수 있지만, 가끔 몇 어른으로 성장하고 실험 동물과 혼동이 될 것입니다.
    • 라이브 / 성장 세균이 관찰됩니다. 일반적으로 앰프와 UV - 살인의 조합은 사는 박테리아가 실험을 오염하지 않도록되지만 종종 발생합니다.
    • 곰팡이 성장은 미디어에 관찰됩니다. 초기 충분히 잡는다면, 곰팡이 성장은 일반적으로 피펫 팁 또는 주걱을 사용하여 잘라하실 수 있습니다. 일단 그것은 직경이 새 접시에 벌레를 전송하는 일반적으로 쉽게 몇 mm보다 큰 수 자랍니다.
    • 절개 범위를 사용하여, 각각의 벌레가 살아 있거나 죽어 있는지 확인합니다.
    • 부드럽게 접시를 누릅니다. 그것은 감​​청에 대한 응답으로 이동하면 웜이가 살아있다는 의미이다.
    • 웜은 머리 지역에있는 판, 줌 감청에 응답하지 않는 경우.
    • 부드럽게 플래티넘 전송 선택으로 벌레의 머리를 누릅니다. 그것의 머리를 이동하여 응답하지 않으면 죽은 벌레를 점수.
    • 죽은 벌레는 접시에서 제거할 수 있습니다.
  4. 살아 죽은 날짜와 벌레의 수를 기록합니다.
  5. 20 ° C.에 접시로 돌아가기
  6. 모든 벌레가 죽었을 때까지 반복 3.3 3.6를 통해 모든 2~3일 단계를 반복합니다.

4 부 : 대표 결과.

선충류의 수명 실험에 의해 만들어진 원시 데이터 테스트 각 변형에 대한 살아있는 죽은 벌레의 해당 숫자와 날짜의 목록입니다. 매일 죽는 벌레의 수는 일반적으로 생존 곡선 (그림 2B로 그래픽 꾸몄다는 매일 살아있는 벌레의 비율 (그림 2A), 계산하기 위해 거꾸로되며 시간 초과 에그 누워 당일 것은 일 0로 간주됩니다 ). 연구의 각 웜에 대한 수명은 매일 죽는 벌레의 개수의 계산과 변종 사이의 비교에 대한 의미와 중간 수명을 계산하는 데 사용할 수 있습니다. 매일 살아있는 벌레의 수를 셀 수명 분석에 직접 사용되지 않습니다. 고체 미디어에 유지 벌레는 때로는 '도망'또는 언론 아래 접시 또는 아래의 벽까지 중 크롤 링합니다. 매일 살아있는 벌레의 수는 얼마나 많은 벌레들이 실험 과정을 통해 도망 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 도망 웜은 일반적으로 분석에서 제거됩니다. N2, C.위한 벤치 마크로서, 전형적인 중간 수명 20 UV - 살해 박테리아에서 유지 엘레간스 야생 형 변형, ° C는 난자에서 측정한 약 25 일입니다.

제 5 부 : 솔루션

선충류 성장 미디어 (NGM), 100 ML :
컴바인 :
0.3 g NaCl
0.25 g 펩톤
2g 한천
40 분 압력솥과 55 식지는 ° C, 다음 추가 :
100 μL 1 M MgSO 4
100 μL 5 MG / ML 콜레스테롤
100 μL 1 M CaCl2
1.625 ML 1.5 M KPI의 산도 6.0
액체 NGM는 실온에서 번호판을 부어 즉시 사용되거나 응고 허용 및 장기 저장할 수 있습니다
Luria 맛을 (LB), 1L :
10g BactoTryptone
5g 효모 추출
10g NaCl
10 ML 1 M 트리스 산도 8.0
1 L 탈이온수
압력솥과 실온에서 저장합니다.
1 M MgSO 4, 300 ML :
73.95 g MgSO 4
300 ML 탈이온수
압력솥과 실온에서 저장합니다.
5 MG / ML 콜레스테롤, 200 ML :
1g 콜레스테롤
200 ML 100 % 에탄올
소독 필터 및 실내 온도에 저장합니다.
1 M CaCl 2, 500 ML :
27.75 g CaCl 2
500 ML 탈이온수
소독 필터 및 실내 온도에 저장합니다.
1.5 M KPI 산도 6.0 1L :
컴바인 :
31.4 g KPI 이염
179.6 g KPI 일염기의
850 ML 탈이온수
히트 KPI는 솔루션으로 분해하도록 혼합하는 동안. 10 N NaOH와 6.0 산도를 조정합니다.
1 L.에 탈이온수 추가
압력솥과 실온에서 저장합니다.
1 M 트리스, 산도 8.0 :
60.57 g 트리스
400 ML 탈이온수
HCL과 8.0 산도를 조정합니다.
500 ML에 탈이온수를 추가합니다.
소독 필터 및 실내 온도에 저장합니다.
150 MM Fluorodeoxyuridine (FUDR), 10 ML :
0.3693 g FUDR
10 ML 무균 탈이온수
-20 ° C.에 저장
100 MG / ML 암피실린 (앰프), 10 ML :
1g 암피실린
10 ML 무균 탈이온수
-20 ° C.에 저장
50 MG / ML Carbenicillin (수화물), 10 ML :
500 MG Carbenicillin
10 ML 무균 탈이온수
-20 ° C.에 저장
1 M 이소 프로필 β - D - Thiogalactopyranoside (IPTG), 10 ML :
2.38 g IPTG
10 ML 무균 탈이온수
-20 ° C.에 저장

그림 1
C. 그림 1. 명시야 이미지 달걀을 포함 엘레간스 생활 단계, 네 개의 애벌레 단계 (L1 - L4) 및 성인. 모든 패널은 성인 남성 (우드 (1988)에서 이미지) 보여주는, 오른쪽 아래를 제외하고 나온것을 보여줍니다.

그림 2
C.에서 그림 2. 대표 결과 엘레간스 수명 실험은 DAF - 2 유전자에 돌연변이 포함된 변형으로 야생 유형 변형 N2를 비교. (A) 수집 벌레가 알을 이후 일수를 포함하여 데이터, 매일 관찰 죽은 벌레의 수를, 그리고 매일에 살아 남아있는 원래의 샘플의 비율 (죽은 벌레의 일상 건의부터 계산) 보여주는 표 . (B) 생존 (A)에서 제공하는 수명 데이터에 해당하는 곡선.

그림 3. 젊은이와 노인 성인 C. 사이 lipofuscin 대표 비교 엘레간스. 명시야 이미지는 오른쪽 왼쪽 채널 DAPI 형광 이미지에 표시됩니다. 상단 패널은 사일 오래된 웜 및 바닥 패널 (같은 난자에서 측정) 11일 오래된 벌레를 보여 보여줍니다.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

장수 유전자 제어 C. 광범위하게 연구되어 수명을 확인할 수있는 쉽고 인텔리로 주로 인해 엘레간스. 본 문서에서 언급한 다른 프로토콜은 C로 재현성 수명 데이터를 얻기위한 기본 프레임 워크를 설명 엘레간스하며 relatednematode 수종에도 적용할 수 있습니다. 2 이러한 절차는 다양한 조건 하에서 수명을 측정하기 위해 적응 수있는 몇 가지 간단한 변경을함으로써. 여기 우리는 RNA 간섭 (RNAi), 세균의 박탈에 의해식이 제한, 그리고 약물없는 NGM, 라이브 박테리아를 포함한 몇 가지 일반적인 변형을 설명합니다.

아마이 프로토콜의 가장 일반적인 변형 라이브 박테리아에 벌레의 유지이다. 이것은 몇 가지 사소한 변경하여 수행할 수 있습니다. 첫째, 세균 (1.13 단계 1.7)와 접시 시딩위한 절차를 변경합니다. 대신 포화에 OP50 문화를 성장, 200 μL의 액체 문화에서 직접 접시에 중간 로그 위상 및 피펫으로 성장. 박테리아가 밤 동안 접시에 성장하고 자외선에 노출을 생략하도록 허용합니다. 암피실린도 FUDR와 접시에서 제외해야합니다. 라이브 박테리아를 사용하는 장점은 박테리아 음식이 살아 있고 성장 해 가고 있기 때문에 벌레가 새로운 번호판을 자주 전송하지 않아도됩니다. 사는 박테리아 음식의 단점은 OP50은 C.하는 병원성 때문입니다 엘레간스 3. 웜 사는 박테리아의 성장 가능성이 노화와 관련된 수명의 phenotypes를 마스크 수 UV - 살해 박테리아, 3 성장 벌레보다 짧은 라이브 걸쳐 있습니다. 사는 세균의 중간 수명은 약 20 일입니다.

진 RNAi에 의해 허물고 쉽게 C로 수행됩니다 그것이 무너뜨렸다로 유전자에 해당하는 이중 좌초 RNA를 생산 있도록 자신의 박테리아 음식을 수정하여 엘레간스. 두 RNAi 박테리아 라이브러리를 사용할 수있다는 C로 열린 독서 프레임 커버 90 % 이상 엘레간스의 게놈. 4-9 수명의 컨텍스트에서 RNAi를 활용하려면, 관심의 RNAi의 복제와 OP50 박테리아를 교체하고 사는 세균의 수명을 측정하는 이전 단락에서 논의된 수정을 따르십시오. RNAi 라이브러리 플라스미드 기반의 표현 시스템을 사용합니다. 플라스미드는 이소 프로필 β - D - thiogalactopyranoside (IPTG)에 의해 유도되는 carbenicillin 저항 카세트 및 이중 좌초 RNA의 표현을 사용하는 선택됩니다. carbenicillin과 IPTG 모두 NGM 플레이트에 포함해야합니다. 접시 두 가지 유형의 100 ML의 NGM 당 100 μL 1 M IPTG 50 μL 50 MG / ML carbenicillin를 추가하여 1.4 단계로 수정합니다. 암피실린는 carbenicillin 같은 역할을 충족 때문에, 플레이트 중 유형에 추가할 필요가 없습니다.

식이 제한은 evolutionarily 분기하는 수종에 걸쳐 노화 둔화에 대한 가장 널리 연구 개입니다. C로 세균성 음식 소스가 완전히 성인 중에 제거하면 고체 매체에 엘레간스, 최대 수명 연장이 관찰이며,식이 제한의 형태는 박테리아 빈곤 (BD)를 칭했다. BD의 맥락에서 수명을 측정 9, 10 두 개조를 위의 프로토콜. 첫째, 접시의 세 번째 유형을 준비합니다. 이 번호판은 박테리아 음식 소스를 부족 제외 앰프 / FUDR 접시와 동일해야합니다. 둘째, 단계 3.2 단계 3.3 사이의 추가 단계를 포함하는 제 3을 수정합니다. 성인의 4 일 (4 일간 앰프 / FUDR에 L4 유충을 전송 후)에 앰프 / FUDR 접시로 전송 BD의 벌레는 박테리아를 부족. 식이 제한이 양식과 관련된 합병증 중 하나가 도망하는 웜 '경향이다. 음식의 부재에서 벌레는 접시의 중앙 근처에 있으면 안되지만, 먹이를 찾아 탐험 자신의 영역을 증가합니다. 그 결과, 벌레의 큰 분수는 접시와 마르다의 성벽을 크롤 링합니다. 우리는 종종 동물의 50 % ~ 70 %가 BD 판에 전송 후 도망을 참조하십시오. 이 문제를 해결하려면 접시 이후 항공편에 남아있는 많은 수의를하기 위해 많은 벌레로 세 번로 시작합니다. BD는 또한 하나의 추가 수정과 함께 별도의 수정, 또는 RNAi와 함께 살 세균 음식과 함께하실 수 있습니다. RNAi와 BD의 경우, 추가적인 항생제가 성​​장하고 원치 않는 음식 소스를 제공 벌레와 양도 세균을 방지하기 위해 박테리아없는 접시에 추가되어야합니다. 두 예제는 1.4 단계 동안 세균 음식없이 FUDR 플레이트에 추가할 수도있는 테트라 사이클린과 kanamycin입니다. BD도 수명에 큰 영향없이 함께 2 어른의 일 어른 14 일처럼 늦게 빠르면 시작하실 수 있습니다. 10

우리가 논의됩니다 최종 수정 추가 약물 (예 : 암피실린 또는 FUDR)없이 NGM 접시에 수명을 측정합니다. 이것은 수행할 수 있습니다단순히 4 단계 동안 NGM에 약물을 추가하고 제 3 한 추가 단계를 추가하지 않음으로써. FUDR없이 벌레가 알을 누워 및 유충을 생산하는 것입니다. 그들의 생식 단계 (성인의 약 첫 주) 동안 모든 실험 벌레들은 자손에서 분리하기 위해 최선 이일 신선한 접시로 전송해야합니다.

C. 엘레간스은 남성의 드문 주로 자웅 동체입니다. 수명은 일반적으로 나온것에 대해서만 측정뿐만 아니라, 남성에 대해 측정할 수 있습니다. 남성 C. 작업과 관련된이 문제가 있습니다 엘레간스. 남녀 추니 자체 수정이 남성 자식의 아주 작은 분수 (0.1 %)를 생산하는 등 첫 번째는 남성 벌레의 대량 취득합니다. 11 남성 벌레가 들어있는 인구가 달성되면, 남녀 추니 / 남성 짝짓기가 남성의 약 동일한 숫자를 생산하고 웜만큼 나온것이 음식의 면전에서 유지됩니다. 12 남 주식은 Caenorhabditis 유전학 센터에서 주문 또는 시각 남녀 추니 자기 수정의 생산 창립 남성에 대한 심사에 의해 생성하실 수 있습니다. 두 번째 과제는 남자 청소 동작입니다. 음식이나 잠재적인 메이트 (나온것) 중 하나의 부재에서, 남성 벌레는 운동의 광범위한 포함 검색 행동 모드를 입력합니다. 13 판 벽을 한순간 벌레의 큰 분수에 접시에서이 동작 결과를 유지하고 건조한 경우 . 이러한 어려움에 대응하는 일반적인 방법은 대부분의가 도망가도 후에 상당한 숫자가 유지 정도로 남성과 함께 시작하는 간단합니다.

외에도 수명에서 일반적인 나이에 관련된 표현형은 lipofuscin 축적이다. Lipofuscin 나이와 세포에서 빌드와 C로 노화의 biomarker로 사용되는 저하될 수없는 복잡한 세포의 낭비입니다 엘레간스. 14, 15 Lipofuscin의 fluoresces 및 C로 쉽게 시각 수 있습니다 형광 현미경의 DAPI 채널 (그림 3)를 사용 엘레간스. Lipofuscin 축적은 수명과 병행하여 유용한 보조 표현형 수집을 허용, 직접 NGM 플레이트의 수명에 대한 채점되는 웜에 시각하실 수 있습니다.

수명 이외에,이 문서에서 설명하는 프로토콜은 또한 C로 연령 관련 마비의 phenotypic 진행을 점수하는 데 사용할 수 있습니다 proteotoxicity 질병의 엘레간스 모델. 16 웜이 그것은 접시를 통해 크롤 링하지 못할되고 있지만, 여전히 머리를 이동할 수 있습니다 마비되는 경우. 웜은 그것은 감​​청이나 플래티넘 전송 선택과 괴롭히는 판에 대한 응답으로 NGM에 상대적으로 이동하지 않을 경우로 마비 채점하지만, 머리를 움직이지 않습니다. 일반적으로 죽는 벌레들은 가장 최근의 라이브 관찰 중에주는 것을 마비 점수를 (마비 또는 마비되지 않음) 보유합니다. 중요한 것은, 심지어 야생 유형 C. 엘레간스은 고급 나이가 마비됩니다. 이러한 이유로 마비는 일반적으로이 시점 이후 약 20 일이 지나면 벌레에 대한 채점하지 않습니다에 대한 그것은 proteotoxicity 질환의 진행으로 인한 정상적인 노화와 마비로 인한 마비를 구분하기 어려운됩니다.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

이 작품은 노인학 수상 및 NIH 그랜트 MKGS에 1R01AG031108 - 01 NIH 연수 부여 P30AG013280에서 지원하는에있는 글렌 / 멀리 획기적인 지원했다. MK는 노화에 엘리슨 의료 재단 신규 장학생입니다.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Agar Reagent Fisher Scientific DF0145-17-0 (214530)
Ampicillin Reagent MidSci 0339
BactoTryptone Reagent Fisher Scientific DF0123-17-3 (211705)
BactoPeptone Reagent Fisher Scientific DF0118-17-0 (211677)
CaCl2 Reagent Fisher Scientific NC9699248 (1332-01)
Carbenicillin Reagent Gold Biotechnology C0109
Cholesterol Reagent Sigma-Aldrich C75209
Fluorodeoxyuridine (FUDR) Reagent Sigma-Aldrich F0503
Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) Reagent Gold Biotechnology I2481C5
KPi Dibasic Reagent Fisher Scientific 5087862 (3252-01)
KPi Monobasic Reagent Fisher Scientific 5087861 (3246-01)
MgSO4 Reagent Fisher Scientific NC9561800 (2500-01)
NaCl Reagent Fisher Scientific S251
Tris Reagent Sigma-Aldrich T1503
Yeast Extract Reagent Fisher Scientific DF0886-17-0 (288620)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wood, W. B. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).
  2. Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).
  3. Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genetics. 161, 1101-1112 (2002).
  4. Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 6, 525-523 (2007).
  5. Curran, S. P., Ruvkun, G. Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability. PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).
  6. Dillin, A. Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development. Science. 298, 2398-2401 (2002).
  7. Hamilton, B. A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans. Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).
  8. Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen. PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).
  9. Lee, S. S. A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity. Nat Genet. 33, 40-48 (2003).
  10. Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).
  11. Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS. Genetics. 91, 67-94 (1979).
  12. Emmons, S. W., Sternberg, P. W. C. ELEGANS II. Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Springs Harbor, NY. (1997).
  13. Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate. J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).
  14. Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans. Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).
  15. Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
  16. Steinkraus, K. A. Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 7, 394-404 (2008).

Comments

4 Comments

  1. do dead c.elegans represent lipofuscin measurement?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 23, 2010 - 11:46 AM
  2. Please tell how to do life span experiments on Nano particle in respect of C.elegans.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 3, 2010 - 7:26 AM
  3. DŒs egg laying completely stop after adding FUdR in medium? Which worms (L1 or L² or L3 or L4) should be transfered to FUdR plate so the Egg laying not take place?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 3, 2010 - 8:12 AM
  4. The primary role of FUdR is to prevent egg hatching, not egg laying, though we typically see some reduction in egg production. FUdR will also interfere with cell division in the developing animal, so you have to wait until all of the somatic cell division is finished. Transfer the animals to FUdR at the L4 stage to prevent egg hatching without interfering with development.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 25, 2010 - 12:07 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics