Измерительный Caenorhabditis Элеганс Продолжительность жизни на твердых средах

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

В этой статье мы представляем общий протокол для измерения продолжительности жизни нематод поддерживается на твердых средах с УФ-убил бактериальной пищи.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media. J. Vis. Exp. (27), e1152, doi:10.3791/1152 (2009).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Старение является дегенеративный процесс характеризуется прогрессирующей деградации клеточных компонентов и органелл в результате чего смертность. Нематоды

Protocol

Часть 1: Подготовка нематоды питательной среды (НГО) плит

В этом разделе описывается подготовка твердые пластины NGM для использования в эксперименте продолжительность жизни. Основной эксперимент продолжительностью жизни требуется два типа плит: стандартные пластины NGM, не содержащие добавок и усилителей / ФУДР плиты, которые имеют как ампициллин (Amp) и fluorodeoxyuridine (ФУДР) добавлен в НГО. Ампициллин используется для предотвращения иностранного бактериального загрязнения. ФУДР подавляет деление клеток, уменьшает производство яиц, а также предотвращает яйца инкубационные. Использование ФУДР долголетия анализа не влияет на продолжительность жизни взрослых и устраняет необходимость передачи червей каждые несколько дней для того, чтобы отделить их от растущей личинки. Оба вида плит высевают с Е. OP50 кишечной бактерии, который впоследствии убит в результате воздействия УФ-излучения.

  1. Подготовка НГО (см. раздел 5 по рецепту и хранения заметок) и пластины этикетке Петри. Вам понадобится 1 60 мм Петри пластины на 10 мл NGM. Если вы начинаете с заранее подготовленным твердых NGM, переходите к шагу 1.2. Если вы начинаете с только что автоклавного NGM, перейдите к шагу 1.4.
  2. Полностью расплава твердых NGM в микроволновую печь на высоко в 30-секундных импульсов. Swirl СМИ между импульсами для предотвращения давления пузырьки газа из застройки.
  3. Место жидкости NGM в 55 ° С водяной бане или на скамейке, чтобы охладиться.
  4. После NGM достигает 55 ° С добавить 33 мкл 150 мМ ФУДР и 100 мкл 100 мг / мл ампициллина на 100 мл NGM (для Amp / ФУДР пластин) и вихрем перемешать. Для NGM пластины без дополнительных препаратов приступить непосредственно к шагу 1.5.
  5. Использование стерильных, пипетка 10 мл NGM в каждую 60 мм пластины Петри. Избегайте образования пузырьков если это возможно. Если пузырьки делают вид, они могут быть очищен помощью кончика пипетки.
  6. Оставьте пластин на скамье с крышками, чтобы NGM укрепить и сухой. Если возможно, оставьте тарелки на скамейке в течение 2 дней, прежде чем добавлять бактерии, но один день будет работать, если пластины необходимы раньше.
  7. За день до пластин закончить сушку, семенной жидкости LB культуры с одной колонии из свежих полоса Е. OP50 кишечной бактерии на LB агар. Вы должны подготовить по крайней мере 1 мл ночь OP50 культуры на 60 мм пластины.
  8. Место OP50 культуры в 37 ° C шейкере и позволяют бактериям расти в течение ночи (культура должна достигать насыщения).
  9. Гранул OP50 бактерий вращается со скоростью 3500 г в течение 10 минут.
  10. Удалить 90% супернатант и ресуспендируйте бактерий сосредоточиться культуры 10x.
  11. Внесите 100 мкл 10x концентрированный OP50 культуры в центре затвердевшего пластин NGM. Swirl пластины аккуратно разложить культуру бактерий, если это необходимо (в идеале должна охватывать бактерий центральной площади NGM не приходя вблизи пластинки стен). Старайтесь не прикасаться кончиком пипетки к поверхности НГО, а недостатки в поверхность СМИ позволяют черви зарываются в НГО.
  12. Оставьте пластин на скамейке ночь, чтобы позволить бактериям культуры сушить на твердом НГО (как правило, занимает около 24 часов).
  13. После высыхания подвергайте поверхность пластины УФ дозы достаточно для ареста рост бактерий. Если вы используете Stratalinker Stratagene УФ-2400:
    • Место пластин в Stratalinker и снять крышки
    • Закройте дверь и включите Stratalinker
    • Пресса "Энергия"
    • Введите '9999 'с помощью клавиатуры
    • Нажмите кнопку 'Пуск'
    • Пластины будет подвергаться УФ в течение примерно 5 минут
  14. Плиты с УФ-убитых бактерий могут быть сохранены с ног на голову при 4 ° С в течение 1 месяца.

Часть 2: Выполнение приурочен откладки яиц приобрести возрастных синхронизированы популяции животных

В этом разделе мы генерируем населения червей с общим люк в актуальном состоянии. Это достигается путем предоставления репродуктивно активных взрослых, чтобы отложить яйца на тарелке в течение определенного периода времени и позволяет эти яйца развиваться.

  1. (Дополнительно) Перевод примерно 20 молодых червей взрослого свежие пластины NGM без ФУДР. Оставьте пластин при 25 ° С для того, чтобы черви для распространения и съесть через все бактериальной пищи. После бактериальных пищевых было потреблено только что вылупившихся червей войдет роста арестован Dauer стадии. Вы начнете видеть Dauer личинки вокруг в течение недели, в зависимости от того, сколько червей вы передаете к пластине на начальном этапе. Dauer личинки могут быть использованы для дальнейших шагов на срок до 1 месяца.
  2. (Дополнительно) Перевод от 20 до 30 Dauer личинки к свежим пластины NGM без ФУДР. В присутствии пищи личинки Dauer станет репродуктивно активных взрослых в течение 2 дней и остаются репродуктивно активным в течение нескольких дней после этого при 25 ° C.
  3. Передача от 10 до 15 репродуктивно активных взрослых на свежем пластины NGM без ФУДР. Эта пластинка называется прокладка приурочен яйцо (TEL) пластины.
  4. Оставьте TEL пластины при 25 ° С в течение 6 часов, чтобы позволить тон червей время, чтобы отложить яйца.
  5. Удалить взрослых червей из пластины TEL. Пластина может быть визуально проверены на яйца, прежде чем снимать взрослых. Если черви не заложили достаточное количество яиц, тарелка TEL можно оставить при температуре 25 ° С в течение в общей сложности до 24 часов, прежде чем снимать взрослых червей.
  6. Место TEL пластины при температуре 20 ° С до яиц вылупились и червей разработали для L4 личиночной стадии (обычно это занимает от 2 дней для дикого типа C. Элеганс, но может занять больше времени для штаммов с медленным развитием фенотипы).

Часть 3: Оценка животных для жизни

В этом разделе мы следуем возрастных синхронизированы населения червей из ч. 2 до самой смерти. Черви ведутся на Amp / ФУДР пластины, чтобы предотвратить производство яиц и бактериального загрязнения и считаются мертвыми, когда они не реагируют на внешние раздражители.

  1. Передача L4 личинке посеяны Amp / ФУДР пластин. Для каждого штамма или состояние проходит испытания, это характерно создать 2-3 пластин с 25-30 червей на чашку. Изображения C. Элеганс этапах жизни предоставляются при условии ссылки (рис. 1) 1.
  2. Место Amp / ФУДР пластин при 20 ° С в течение 24 часов.
  3. После 24 часов, визуально оценить червей, средств массовой информации, и бактерии. Передача червей на свежий Amp / ФУДР пластинами, если любой из следующих наблюдается:
    • Черви съели большую часть бактериальной пищи. В начале жизни червей промежуток эксперимента должны быть переданы с 1 по 2 раза в неделю, чтобы предотвратить бактерии из истощаются.
    • Значительное количество личинок присутствуют. Как правило, это признак того, что черви были переданы Amp / ФУДР пластин, как молодые люди вместо того, чтобы L4S и смогли заложить несколько яиц до ФУДР вступил в силу. ФУДР обычно предотвратить личинок из растущих в полной взрослые, но иногда несколько вырастет на взрослых и стали путать с подопытными животными.
    • Live / растущих бактерий не наблюдается. Как правило, сочетание усилителя и УФ-убийство будет гарантировать, что не живые бактерии загрязняют эксперимент, но иногда это происходит.
    • Грибковые рост наблюдается на средства массовой информации. Если поймано достаточно рано, грибков обычно можно сократить с помощью кончика пипетки или шпателем. Как только оно растет, чтобы быть больше чем на несколько миллиметров в диаметре, как правило, легче перенести червей новой пластинкой.
    • Использование рассечение области, проверки соответствия каждой из червь живым или мертвым.
    • Аккуратно нажмите на пластину. Червь живым, если он движется в ответ на нажатия.
    • Если червь не реагирует на нажатия пластины, увеличить на области головы.
    • Аккуратно крана головы червя с платиной выбрать передачу. Оценка червь, как мертвые, если он не отвечает, перемещая голову.
    • Мертвые черви могут быть удалены из пластины.
  4. Запись даты и количества червей, которые являются живыми и мертвыми.
  5. Вернуться пластин до 20 ° C.
  6. Повторите шаги с 3,3 по 3,6 каждые 2 до 3 дней, пока все черви умерли.

Часть 4: Представитель результаты.

Сырых данных, полученных в эксперименте промежуток жизни нематод список дат с соответствующим количеством червей, которые являются живыми и мертвыми для каждого штамма испытания. Количество червей, которые умирают каждый день, как правило, перевернутый рассчитать долю червей живое на каждый день (рис. 2А), которая построена графически в виде кривой выживаемости (рис. 2Б; день яйценоскость приурочен считается день 0 ). Продолжительность жизни для каждого отдельного червя в исследовании может быть рассчитана количество червей, которые умирают каждый день, и используется для расчета средней и средней продолжительности жизни для сравнения между штаммами. Подсчет количества живых червей на каждый день не используется непосредственно в жизни Анализ диапазона. Черви поддерживается на твердых средах будет время от времени 'бежать', или ползать либо на стену пластины или вниз под средствами массовой информации. Количество червей живое на каждый день может быть использована для определения количества червей бежали на протяжении всего эксперимента. Черви, которые бегут, как правило, удалены от анализа. В качестве ориентира, типичная средняя продолжительность жизни для N2, C. Элеганс штамма дикого типа, поддерживается на УФ-убитых бактерий при 20 ° С составляет около 25 дней, считая от яйца.

Часть 5: Решения

Нематоды Рост Медиа (НГО), 100 мл:
Комбинат:
0,3 г NaCl
0,25 г Пептон
2 г Агар
Автоклав в течение 40 минут и дайте остыть до 55 ° С, затем добавить:
100 мкл 1 М MgSO 4
100 мкл 5 мг / мл Холестерин
100 мкл 1 М CaCl2
1,625 мл 1,5 М КПИ рН 6,0
Жидкие NGM могут быть использованы немедленно влить пластин или позволили укрепить и хранить долгосрочные при комнатной температуре
Отвар Лурия (LB), 1л:
10 г BactoTryptone
5 г Дрожжевой экстракт
10 г NaCl
10 мл 1 М Трис рН 8,0
1 л деионизированной воды
Автоклавы и хранить при комнатной температуре.
1 М MgSO 4, 300 мл:
73,95 г MgSO 4
300 мл деионизированной воды
Автоклавы и хранить при комнатной температуре.
5 мг / мл, холестерина, 200 мл:
1 г холестерин
200 мл 100% этаноле
Фильтр стерилизуют и хранят при комнатной температуре.
1 М CaCl 2, 500 мл:
27,75 г CaCl 2
500 мл деионизированной воды
Фильтр стерилизуют и хранят при комнатной температуре.
1,5 М КПИ рН 6,0, 1 л:
Комбинат:
31,4 г КПИ двухосновный
179,6 г КПИ одноосновных
850 мл деионизированной воды
Тепло, помешивая, чтобы KPI для растворения в раствор. Отрегулируйте рН до 6,0 с 10 н.
Добавить деионизированной водой до 1 л
Автоклавы и хранить при комнатной температуре.
1 М Трис, рН 8,0:
60,57 г Трис
400 мл деионизированной воды
Отрегулируйте рН до 8,0 с HCl.
Добавить деионизированной водой до 500 мл.
Фильтр стерилизуют и хранят при комнатной температуре.
150 мМ Fluorodeoxyuridine (ФУДР), 10 мл:
0,3693 г ФУДР
10 мл стерильной деионизованной воде
Хранить при -20 ° C.
100 мг / мл ампициллина (Amp), 10 мл:
1 г Ампициллин
10 мл стерильной деионизованной воде
Хранить при -20 ° C.
50 мг / мл Карбенициллин (карбонат), 10 мл:
500 мг Карбенициллин
10 мл стерильной деионизованной воде
Хранить при -20 ° C.
1 М Изопропиловый β-D-Thiogalactopyranoside (IPTG), 10 мл:
2,38 г IPTG
10 мл стерильной деионизованной воде
Хранить при -20 ° C.

Рисунок 1
Рисунок 1. Яркие образы области С. Элеганс этапах жизни, включая яйца, четыре личиночные стадии (L1 - L4), и взрослым. Все панели показывают, гермафродиты, кроме правого нижнего, который показывает, взрослый самец (изображение из древесины (1988)).

Рисунок 2
Рисунок 2. Представителю результаты C. Элеганс жизни эксперимент сравнения дикий штамм N2 тип штамма содержащих мутации DAF-2 гена. (А) таблица, показывающая собранные данные, включая количество дней, прошедших с червями были яйца, число погибших червей наблюдается на каждый день, и процент от исходного образца оставшихся в живых на каждый день (как рассчитывается ежедневно рассчитывает мертвых червей) . (B) Выживание кривые, соответствующие жизни данных, представленных в (А).

Рисунок 3. Представителем сравнение липофусцина между молодыми и старыми взрослого C. Элеганс. Яркие образы поля, представлены на левой и DAPI канал флуоресцентные изображения справа. Топ панелей показать 4 день старого червя и нижней панелях шоу 11 день старого червя (на основании оценки яйцо).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Генетического контроля долголетия хорошо изучена в C. Элеганс, во многом благодаря простоте и быстроте, с которой продолжительность жизни может быть определена. Протокол обсуждается в этой статье описываются основные рамки для получения воспроизводимых жизни данных на языке C. Элеганс, а также может быть применен к relatednematode видов. 2 Делая несколько простых изменений этих процедур может быть адаптирован для измерения продолжительности жизни в различных условиях. Здесь мы обсудим несколько общих изменений, в том числе живые бактерии, РНК-интерференция (RNAi), диетические ограничения бактериальной лишения, и без наркотиков NGM.

Пожалуй, наиболее распространенный вариант из этого протокола является поддержание червей на живые бактерии. Это может быть достигнуто, сделав несколько незначительных изменений. Во-первых, изменение процедуры для посева пластин с бактериями (шаги 1,7 через 1,13). Вместо того, чтобы растущие OP50 культур к насыщению, расти до середины логарифмической фазы и пипетки 200 мкл на пластины непосредственно из жидкой культуры. Разрешить бактерий расти на пластинах в течение ночи и опустить воздействия УФ. Ампициллин также должны быть исключены из пластин с ФУДР. Преимущество использования живых бактерий в том, что черви не должны быть переданы как часто новые пластины, так как бактериальных пищевых жив и продолжает расти. Недостаток живых бактериальных пищевых является то, что OP50 является патогенным для C. Элеганс. 3 червей, выращенных на живые бактерии имеют более короткий промежуток жить, чем у червей, выращенных на УФ-убитых бактерий, 3, которые потенциально могли бы маску жизни фенотипы, связанные со старением. Средняя продолжительность жизни на живых бактерий составляет около 20 дней.

Гена сбить по RNAi легко осуществляется на языке C. Элеганс, изменяя их бактериальной пищи так, чтобы она производит двухцепочечной РНК соответствующих генов будет сбит с ног. Два бактериальных РНК-интерференции библиотеки доступны, которые охватывают более 90% открытых рамок считывания в C. Элеганс генома. 4-9 Для использования РНК-интерференции в контексте жизни, заменить OP50 бактерии клон RNAi интересов и следовать изменений, рассмотренных в предыдущем пункте для измерения продолжительности жизни на живых бактерий. RNAi библиотеки используют плазмиды система выражения. Плазмиды выбран для использования кассеты карбенициллин сопротивление и выражение двухцепочечной РНК индуцирована изопропиловый β-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Оба карбенициллин и IPTG должны быть включены в NGM пластин. Изменить шагом 1,4 добавлением 100 мкл 1 М IPTG и 50 мкл 50 мг / мл карбенициллин на 100 мл NGM к обоим типам пластин. Ампициллин не должен быть добавлен к любой тип пластины, так как карбенициллин выполняет ту же роль.

Диетические ограничения является наиболее широко изучается вмешательства для замедления старения во эволюционно расходящихся видов. В С. Элеганс, максимальное продление срока службы на твердой среде наблюдается при бактериальных источников пищи полностью удаляется во взрослом возрасте, форма диетические ограничения называются бактериальным лишения (BD). 9, 10 Для измерения продолжительности жизни в контексте BD, сделать две модификации к вышеуказанным протоколом. Во-первых, подготовить третий тип пластины. Эти таблички должны быть идентичны Amp / ФУДР пластин, кроме отсутствия бактериального источника питания. Во-вторых, изменить часть 3 включить дополнительный шаг между шагом 3,2 и шагом 3,3. На 4-й день совершеннолетия (4 дня после переноса L4 личинок Amp / ФУДР) передача BD червей Amp / ФУДР пластины отсутствуют бактерии. Одна из сложностей, связанных с этой формой диетические ограничения червей тенденцию к бегству. В отсутствие пищи черви не будет оставаться недалеко от центра пластины, но увеличит их области разведки в поисках пищи. В результате, большая доля червей будут ползти вверх стены пластины и пересушивает. Мы часто видим 50% до 70% животных бежать после того, как передается BD пластин. Для решения этой проблемы, начните с в три раза больше червей, чтобы иметь значительное число остающихся на пластинах после полета. BD можно комбинировать с живыми бактериальными пищу без дополнительной модификации, или RNAi с одной дополнительной модификации. Для BD с RNAi, дополнительные антибиотика должен быть добавлен в пластины без бактерий, чтобы предотвратить бактерии передаются с червями от выращивания и предоставление нежелательного источника питания. Два примера тетрациклина и канамицин, любой из которых может быть добавлен к ФУДР пластины без бактериальной пищи во время шага 1.4. BD также может быть начато уже в 2-х дней взрослой жизни или, как в конце 14 дней с момента совершеннолетия, без каких-либо существенного влияния на продолжительность жизни. 10

Окончательные изменения, которые мы будем обсуждать измеряет продолжительность жизни на NGM пластин без дополнительных препаратов (например, ампициллин или ФУДР). Это может быть достигнуто, просто не добавить препараты для NGM на шаге 4 и добавив к нему один дополнительный шаг в части 3. Без ФУДР черви продолжают откладывать яйца и производить личинки. Во время их репродуктивной фазы (примерно первую неделю взрослой жизни) все экспериментальные черви должны быть переданы на свежий пластин каждые 2 дня, чтобы отделить их от их потомства.

C. Элеганс прежде всего гермафродиты с редким появлением самцов. Продолжительность жизни обычно измеряется для гермафродитов только, но также может быть измерена для мужчин. Есть две проблемы, связанные с работой с мужчинами C. Элеганс. Первое приобретение большого количества мужчин червей, а гермафродит самоопыление производит очень малая доля мужского потомства (0,1%). 11 Как только население содержащие мужской червей достигается, мужского / гермафродит спаривания производит приблизительно равное количество мужчин и гермафродиты тех пор, пока черви ведутся в присутствии пищи. 12 Мужской акции можно заказать у Caenorhabditis генетический центр или сгенерирован путем визуального обследования на основании мужчин производится из гермафродита самоопыление. Вторая проблема состоит в мужской очистки поведения. При отсутствии либо пищу или потенциальным партнерам (гермафродиты), мужчина червей ввести поиска поведенческих режим, который включает в себя широкий диапазон движения. 13 Когда поддерживается на пластинах такое поведение приводит к значительной доли червей бежать до пластины стены и осушающий . Общий метод для решения этой трудности просто начать с достаточно мужчин, что значительное число оставшихся после большинство из них бежали.

Помимо продолжительности жизни, общие возрастные связанные фенотип липофусцина накопления. Липофусцин сложна сотовой отходов, которые не могут деградировать, который накапливается в клетках с возрастом, и используется в качестве биомаркеров старения в C. Элеганс. 14, 15 Липофусцин флуоресцирует и могут быть легко визуализированы в C. Элеганс использованием канала DAPI из флуоресцентного микроскопа (рис. 3). Липофусцин накопления могут быть визуализированы в червей, набранных за время жизни непосредственно на NGM пластин, что позволяет коллекция полезных вторичных фенотип параллельно с жизни.

В дополнение к продолжительности жизни, протокол, описанный в этой статье, могут также быть использованы для оценки фенотипического прогрессирование возрастной связанные паралич C. Элеганс моделей proteotoxicity заболевания. 16 Когда червь становится парализованным он становится не в состоянии ползать по пластине, но все еще ​​может двигать головой. Червь оценивается как парализованный, если он не движутся относительно NGM в ответ на пластине отбором или подталкивания киркой передачи платину, но не двигать головой. Черви, которые умирают обычно сохраняют паралич балл (парализован и не парализован), что они были даны во время последнего живого наблюдения. Важно отметить, что даже дикого типа C. Элеганс стать парализованный пожилой возраст. По этой причине паралича, как правило, не набрал для червей старше примерно 20 дней, а за этой точкой становится трудно провести различие между паралича, вызванного нормальным старением и паралича, вызванного прогрессирование proteotoxicity болезни.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Эта работа была поддержана Гленн / АФАР Открытия в премии геронтологии и NIH Грант 1R01AG031108-01 к MKGS поддерживается NIH обучение грант P30AG013280. МК Эллисон Медицинский фонд Новый ученый в процессе старения.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Agar Reagent Fisher Scientific DF0145-17-0 (214530)
Ampicillin Reagent MidSci 0339
BactoTryptone Reagent Fisher Scientific DF0123-17-3 (211705)
BactoPeptone Reagent Fisher Scientific DF0118-17-0 (211677)
CaCl2 Reagent Fisher Scientific NC9699248 (1332-01)
Carbenicillin Reagent Gold Biotechnology C0109
Cholesterol Reagent Sigma-Aldrich C75209
Fluorodeoxyuridine (FUDR) Reagent Sigma-Aldrich F0503
Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) Reagent Gold Biotechnology I2481C5
KPi Dibasic Reagent Fisher Scientific 5087862 (3252-01)
KPi Monobasic Reagent Fisher Scientific 5087861 (3246-01)
MgSO4 Reagent Fisher Scientific NC9561800 (2500-01)
NaCl Reagent Fisher Scientific S251
Tris Reagent Sigma-Aldrich T1503
Yeast Extract Reagent Fisher Scientific DF0886-17-0 (288620)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wood, W. B. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).
  2. Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).
  3. Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genetics. 161, 1101-1112 (2002).
  4. Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 6, 525-523 (2007).
  5. Curran, S. P., Ruvkun, G. Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability. PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).
  6. Dillin, A. Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development. Science. 298, 2398-2401 (2002).
  7. Hamilton, B. A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans. Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).
  8. Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen. PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).
  9. Lee, S. S. A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity. Nat Genet. 33, 40-48 (2003).
  10. Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).
  11. Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS. Genetics. 91, 67-94 (1979).
  12. Emmons, S. W., Sternberg, P. W. C. ELEGANS II. Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Springs Harbor, NY. (1997).
  13. Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate. J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).
  14. Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans. Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).
  15. Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
  16. Steinkraus, K. A. Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 7, 394-404 (2008).

Comments

4 Comments

  1. do dead c.elegans represent lipofuscin measurement?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 23, 2010 - 11:46 AM
  2. Please tell how to do life span experiments on Nano particle in respect of C.elegans.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 3, 2010 - 7:26 AM
  3. DŒs egg laying completely stop after adding FUdR in medium? Which worms (L1 or L² or L3 or L4) should be transfered to FUdR plate so the Egg laying not take place?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 3, 2010 - 8:12 AM
  4. The primary role of FUdR is to prevent egg hatching, not egg laying, though we typically see some reduction in egg production. FUdR will also interfere with cell division in the developing animal, so you have to wait until all of the somatic cell division is finished. Transfer the animals to FUdR at the L4 stage to prevent egg hatching without interfering with development.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 25, 2010 - 12:07 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics