Electrolytic शिरापरक घनास्त्रता के अवर रग Cava मॉडल (EIM)

Medicine
 

Summary

शिरापरक प्रकार thrombus गठन endothelial सक्रियण और आंशिक रक्त ठहराव, Virchow त्रय के दो घटकों के कारण में अवर रग Cava परिणाम की आंतरिक सतह के लिए endothelial सक्रियण के electrolytic प्रेरण.

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Diaz, J. A., Wrobleski, S. K., Hawley, A. E., Lucchesi, B. R., Wakefield, T. W., Myers, Jr., D. D. Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis. J. Vis. Exp. (53), e2737, doi:10.3791/2737 (2011).

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Abstract

पशु मॉडल गहरी शिरापरक घनास्त्रता (DVT) के अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण भूमिका की सेवा के क्रम में करने के लिए thrombus गठन thrombus संकल्प का अध्ययन करने और संभावित चिकित्सात्मक यौगिकों (1) का परीक्षण. नई और DVT के उपचार और रोकथाम में उपयोग किया जा यौगिकों वर्तमान में विकसित कर रहे हैं किया जा रहा है. एक प्रभावित thrombosed शिरा करने के लिए संभावित चिकित्सात्मक विरोधी यौगिकों की डिलीवरी समस्याग्रस्त किया गया है. में चिकित्सीय अनुप्रयोगों के संदर्भ में, एक मॉडल है कि आंशिक ठहराव का उपयोग करता है और लगातार एक प्रमुख नस के भीतर thrombi उत्पन्न हाल ही में स्थापित किया गया है. Electrolytic अवर रग Cava मॉडल (EIM) DVT है कि लगातार रक्त प्रवाह की उपस्थिति में thrombus गठन परमिट के माउस मॉडल है. यह मॉडल एक गतिशील फैशन में thrombus के साथ संपर्क में चिकित्सीय एजेंट की अनुमति देता है, और DVT (1) के अन्य मॉडलों की तुलना में अधिक संवेदनशील है. इसके अलावा, इस घनास्त्रता मॉडल बारीकी से thrombus गठन के नैदानिक ​​स्थितियों simulates और शिरापरक endothelial सेल सक्रियण, ल्युकोसैट प्रवास, शिरापरक thrombogenesis, अध्ययन और चिकित्सीय अनुप्रयोगों (1) का परीक्षण करने के लिए आदर्श है. EIM मॉडल तकनीकी रूप से सरल, आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, अनुरूप thrombi आकार बनाता है और एक बड़े (यानी thrombus और नस दीवार) नमूना है जो विश्लेषणात्मक प्रयोजनों के लिए आवश्यक है के लिए अनुमति देता है.

Protocol

1. माउस संज्ञाहरण प्रक्रियाएं

  1. पशु अपने पिंजरे से हटा रहे हैं और एक चतनाशून्य करनेवाली औषधि गैस शामिल होने के लिए पूर्व ऑपरेटिव 2% isoflurane और प्रति मिनट 0.5 लीटर (vaporizer नियंत्रित) के एक प्रवाह दर पर 100% ऑक्सीजन में शामिल चैम्बर में रखा जाता है.
  2. चूहे संवेदनाहारी प्रेरण कक्ष में बेहोश कर रहे हैं, चैम्बर से हटा दिया और उदर पेट बिजली कतरनी के साथ मुंडा है, या कक्ष के भीतर बनाए रखा अगर एक बाल लोमनाशक (1 मिनट) का प्रयोग किया जाता है.
  3. जबकि अभी भी बेहोश करने की क्रिया के तहत, वे तौल रहे हैं, आँखें बाँझ नेत्र मरहम, और फिर एक गर्म पानी परिसंचारी हीटिंग डिवाइस पर पृष्ठीय recumbancy में एक नाक शंकु isoflurane और ऑक्सीजन का उपयोग के साथ सामान्य संज्ञाहरण के अंतर्गत रखा के साथ lubricated हैं. इस बिंदु पर ऑक्सीजन की दर प्रति मिनट 0.2 लीटर कम है.
  4. पेट chlorhexidine समाधान के साथ छिड़काव किया जाता है (chlorhexidine diacetate तेजी bacterialcidal और लगातार) और बाँझ धुंध के साथ तीन बार नष्ट या जब तक शल्य साइट साफ है.

2. माइक्रो सर्जिकल माउस और वसूली प्रक्रिया

  1. त्वचा और पेट की दीवार पेट उजागर के माध्यम से एक उदर midline चीरा (2 सेमी) परितारिका कैंची के साथ किया जाता है. एक बाँझ धुंध में खारा लथपथ 2x2 जानवर की बाईं ओर करने के लिए आंतों को प्रतिबिंबित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. एक माउस restrainer जगह अवर रग Cava (IVC) की अनुमति दृश्य में डाल दिया है.
  2. इस बिंदु पर, isoflurane 2% की एक रखरखाव स्तर कम है और ऑक्सीजन दर शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के शेष के लिए 0.2 लीटर प्रति मिनट पर रहता है.
  3. ब्लंट विच्छेदन एक बाँझ applicator झाड़ू और अतिरिक्त नाजुक परितारिका आधा घुमावदार ऊतक संदंश का उपयोग करने के लिए मदद की है. केयर माउस ऊतकों से निपटने के लिए वे बेहद नाजुक रहे हैं में लिया जाना चाहिए.
  4. सभी IVC गुर्दे नसों से श्रोणिफलक विभाजन की ओर शाखाओं, 7-0 गैर प्रतिक्रियाशील prolene sutures के साथ ligated हैं. वापस शाखाओं पेटेंट बने रहे.
  5. Electrolytic IVC मॉडल (EIM), 25g सुई स्टेनलेस स्टील, एक रजत लेपित तांबे के तार (KY-30-1-GRN, Electrospec, डोवर, न्यू जर्सी) से जुड़ी उजागर दुम IVC, (चित्रा 1) में डाला जाता है और पूर्वकाल दीवार (anode) के खिलाफ तैनात है.
  6. एक और तार subcutaneously सर्किट (कैथोड) को पूरा करने के लिए प्रत्यारोपित किया जाता है.
  7. 15 मिनट पर 250 μAmps के एक मौजूदा एक घास S48 वर्ग तरंग उत्तेजक और एक निरंतर वर्तमान इकाई (घास टेक्नोलॉजीज, एक खगोल - मेड, Inc, पश्चिम वारविक, आरआई) का उपयोग लागू किया गया था. इलेक्ट्रोलीज़ के जहरीले उत्पादों है कि IVC एक thrombogenic पर्यावरण और बाद thrombus गठन को बढ़ावा देने के endothelial सतह इरोड के गठन में प्रत्यक्ष वर्तमान परिणाम है.
  8. 15 मिनट के बाद, सुई निकाल दिया है और एक कपास झाड़ू धीरे रक्तस्राव को रोकने के क्षेत्र के साथ संपर्क में आयोजित किया जाता है
  9. नकली पशुओं में, सुई IVC में रखा जाता है और फिर हटा वर्तमान के आवेदन के बिना.
  10. laparotomy साइट एक फैशन दो परत में बंद कर दिया है. हमारी प्रयोगशाला का उपयोग करता है एक सतत पैटर्न में 5-0 vicryl, एक सिंथेटिक सीवन, पेट की दीवार को बंद. चिपकने वाला त्वचा गोंद करने के लिए त्वचा को बंद करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हटाने के लिए कोई बाहरी sutures हैं.
  11. चूहे तो एक व्यक्ति माउस पिंजरे में बरामद कर रहे हैं, निकटता के बाद operatively (2 घंटे के लिए 45 मिनट) के एक हीटिंग दीपक (मिनट पिंजरे से 24 इंच दूरी) के तहत मनाया, तो उनके मूल आवासीय इकाइयों के लिए लौट आए. दर्द दवा और विरोधी भड़काऊ एजेंट अगर यह अध्ययन का उद्देश्य के साथ हस्तक्षेप नहीं करता है है के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. वैज्ञानिक औचित्य दर्द दवा रोक, पशु चिकित्सा, और ICUCA अनुमोदन की जरूरत है. हमारी प्रयोगशाला में पाया गया है कि buprenorphine ,0.05-0 0.1 मिलीग्राम / किग्रा वर्ग चूहों के लिए एक उत्कृष्ट पूर्व और पोस्ट ऑपरेटिव एनाल्जेसिक है. इसके अलावा, lidocaine 4mg/kg (0.4 मिलीग्राम / एक 1% समाधान के kg) में चीरा साइट में संचार हो सकता है जब प्रणालीगत दर्दनाशक दवाओं प्रयोगात्मक परिणाम उलझाना सकता है.
  12. हम आम तौर पर पोस्ट ऑपरेटिव प्रतिकूल DVT कारण प्रभाव अनुभव नहीं है. हालांकि, प्रतिकूल पोस्ट ऑपरेटिव प्रभाव सहज संवेदनाहारी मौत, शल्य खून की कमी, और आंशिक केवल पेशियों का पक्षाघात तंत्रिका आघात के कारण शामिल कर सकते हैं. पशु कि ठीक करने के लिए धीमी गति से कर रहे हैं खिलाया न्यूट्रिया जेल हो या नम चाउ जानवर की वसूली की सुविधा पिंजरे के फर्श पर रखा जा सकता. तोड़ पोस्ट ऑपरेटिव जटिलताओं के साथ पशु humanely euthanized किया जाना चाहिए.
  13. सौंपा समय बिंदु पर, इच्छामृत्यु humanely अमेरिकी पशु चिकित्सा कृन्तकों के लिए इच्छामृत्यु पर मेडिकल एसोसिएशन दिशानिर्देश द्वारा उल्लिखित सिफारिशों के अनुसार में किया जाता है.

3. प्रतिनिधि परिणाम

EIM एक मॉडल है कि लगातार रक्त प्रवाह की उपस्थिति में thrombus रूपों है. निम्नलिखित आंकड़े इस उपन्यास मॉडल में जांच मापदंडों दिखा.

चित्रा 1
चित्रा 1 में जहां एक 25g स्टेनलेस स्टील definesthe संरचनात्मक क्षेत्रसुई, एक रजत लेपित तांबे के तार (KY-30-1-GRN, Electrospec, डोवर, न्यू जर्सी) से जुड़ी डाला जाता है. ध्यान दें कि एक लसीका नोड लगभग मौजूद है और एक मील का पत्थर के रूप में दुम IVC मिल में मदद करता है.

चित्रा 2
चित्रा 2: अलग अलग उपभेदों में EIM के बाद 2 दिनों thrombus वजन . जैसी कि उम्मीद थी, thrombus वजन पै-1 को चूहों में कम और hypercoagulable डेल्टा सीटी चूहों (सीटी ^) में बड़ा था.

चित्रा 3
चित्रा 3: घुलनशील पी - selectin, गहरी शिरा घनास्त्रता के लिए एक निर्माता, अलग अलग उपभेदों में मापा गया था . निम्नतम स्तर पै-1 को चूहों में पाए गए जबकि उच्चतम स्तर hypercoagulable डेल्टा सीटी चूहों में पाए गए.

चित्रा 4
4 thrombus वजन और घुलनशील पी - selectin अलग अलग उपभेदों में पाया गया था के बीच सहसंबंध चित्रा . ध्यान से, समूह है कि कम thrombus आकार उत्पन्न में घुलनशील पी selectin पता चला सबसे कम (पै-1 को चूहों) था. समूह है कि सबसे बड़ा thrombus आकार उत्पन्न में घुलनशील पी selectin पता चला उच्चतम (hypercoagulable डेल्टा सीटी) था.

चित्रा 5
चित्रा 5: आदेश में रक्त के प्रवाह की उपस्थिति को प्रदर्शित करने के लिए, अल्ट्रासाउंड EIM के दौर से गुजर चूहों में प्रदर्शन किया गया था. 5 चित्रा 2 दिन EIM के बाद एक चूहे में प्रदर्शन अल्ट्रासाउंड से पता चलता है. तब नमूना फसल था. ध्यान दें कि thrombus आकार प्रवाह की उपस्थिति में thrombus गठन का सुझाव

Discussion

माउस vivo प्रयोगों में के लिए एक उत्कृष्ट अनुसंधान उपकरण है . इस प्रकार, माउस मॉडल है कि निकट बीमारियों या रोग की स्थिति की नकल के विकास के लिए आवश्यक हैं. Photochemical (2), (3-4) ठहराव और यांत्रिक आघात (5-6): कई शिरापरक घनास्त्रता माउस मॉडल सहित DVT अध्ययन इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, इन मॉडलों में से कोई भी एक आंतरिक endothelial उत्तेजना का उपयोग करने के लिए निरंतर रक्त के प्रवाह की उपस्थिति में thrombus उत्पन्न. EIM, IVC के भीतर electrolytic उत्तेजना का उपयोग, रक्त के प्रवाह की उपस्थिति में endothelial सक्रियण (1) द्वारा शिरापरक thrombogenesis को बढ़ावा देता है. यह तकनीकी रूप से सरल, आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और एक उच्च जीवित रहने की दर (99%) है. तथ्य यह है कि एक बिजली के वर्तमान के लिए इलेक्ट्रोलीज़ बनाने के लिए प्रयोग किया जाता है के बावजूद, गर्मी (1) उत्पन्न नहीं है. EIM मॉडल निकट नैदानिक ​​DVT simulates है, और इसलिए thrombus गठन और संकल्प के आंतरिक तंत्र के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में कार्य करता है. EIM मॉडल घनास्त्रता रोग के खिलाफ नया चिकित्सकीय दृष्टिकोण की उन्नति के लिए भी उपयोगी है.

Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

1P01HL089407 01A1 एनआईएच (लॉरेंस, PI), पशु कोर ए, एनआईएच 1 K01 HL080962 01A2 (मायर्स, PI) द्वारा समर्थित है .

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM Invitrogen ABCD1234

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References

  1. Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).
  2. Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice. Blood. 95, 577-580 (2000).
  3. Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
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  5. Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice. Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).
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Comments

2 Comments

  1. "After 15 minutes, the needle is removed and a cotton swab is held gently in contact with the area to prevent bleeding. "
    How about bleeding in the PAI mice group?

    In sham animals, the needle is placed into the IVC and then removed, without application of the current.
    How many minutes keep the needle in IVC?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:19 PM
  2. No bleeding was observed in PAI-1 KO mice.
    In order to mimic the experimental group, a needle was placed within the IVC for 15 minutes, without current administration in shams.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:48 PM

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