Author Produced

العناية والصيانة العادية من اسماك الزرد ( * These authors contributed equally

Biology
 

Summary

هذا البروتوكول يحدد الصيانة الدورية والرعاية للحفاظ على الظروف المثلى لتربية اسماك الزرد. شريط الفيديو يوضح البروتوكول لصيانة النظام والإسكان العادية، والتغذية، والتربية، وتربية اليرقات الزرد.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Avdesh, A., Chen, M., Martin-Iverson, M. T., Mondal, A., Ong, D., Rainey-Smith, S., Taddei, K., Lardelli, M., Groth, D. M., Verdile, G., Martins, R. N. Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction. J. Vis. Exp. (69), e4196, doi:10.3791/4196 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

يصف هذا البروتوكول الرعاية العادية وصيانة مختبر الزرد. الزرد تكتسب شعبية الآن في مجال علم الوراثة والبحوث الدوائية والسلوكية. كما من الفقاريات، تستخدم الزرد حصة كبيرة التشابه الجيني مع البشر تسلسل وكنموذج للحيوانات لمختلف الحالات المرضية البشرية. مزايا الزرد بالمقارنة مع غيرها من نماذج الفقارية شيوعا تشمل الخصوبة العالية، وانخفاض تكاليف الصيانة والأجنة شفافة، والتطور السريع. نظرا لحفز الاهتمام في البحوث الزرد، والحاجة إلى إنشاء والحفاظ على الإنتاجية مرفق الإسكان الزرد في تزايد أيضا. على الرغم من أن الأدب هو متاح لصيانة مختبر الزرد، وبروتوكول الفيديو موجزة غير متوفرة. هذا الفيديو يوضح البروتوكول العادية للسكن، تغذية، تربية اليرقات وتربية الزرد. هذه العملية سوف تساعد الباحثين على فهم السلوك الطبيعية والظروف المثلى لzebrafisح تربية، وبالتالي استكشاف الأخطاء وإصلاحها التجريبية التي تنشأ من ظروف تربية الأسماك. وهذا البروتوكول تكون عونا للباحثين تخطط لإنشاء مختبر الزرد، وكذلك لطلبة الدراسات العليا الذين يعتزمون استخدام الزرد ونموذج حيواني.

Protocol

1. نظام الصيانة

  1. يتم الاحتفاظ الزرد في نظام تداول أن المرشحات باستمرار وaerates الماء نظام للحفاظ على نوعية المياه المطلوبة للبيئة المائية صحية. تعميم النظام يساعد أيضا على تصفية الطعام الزائد والفضلات الأسماك. شركات مختلفة الزرد توفير أنظمة لكننا استخدام نظم من الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية في مختبرنا. وبشكل عام المحافظة على درجة حرارة الغرفة أو درجة حرارة الخزان بين 26-28،5 ° C وظروف الإضاءة هي 14:10 ساعة (النور: الظلام). نظام الزرد من الموائل المائية (على سبيل المثال، نظام الفوق) تكاليف ~ 9000 دولار أمريكي. يمكن هذا النظام مع اثنين من الرفوف الفوق عقد ستة لتر 10-، واثني عشر 3-لتر، أو عشرين دبابة 1.5 لتر في كل رف. ويمكن أيضا خطوط متعددة من الأسماك (مثل، متحولة المعدلة وراثيا، النوع البري) أن يكون مقر على نفس النظام.
  2. وتستخدم مجموعة من أنواع مختلفة من المرشحات في النظام. في نظامنا، المياه من خزانات جميع السلطة الفلسطينيةالمؤسسات الصغيرة الحجم من خلال 120 ميكرون لوحة التصفية، 50-ميكرون اسطوانة التصفية، تصفية بيولوجية، فلتر الكربون النشط امتصاص الأشعة فوق البنفسجية تطهير تصفية وقبل أن يتم تعميم مرة أخرى إلى الخزان. يتم استخدام المياه De-chlorinated/aged في النظام الزرد. يمكن شطب المياه المكلورة من الشيخوخة للا يقل عن 48 ساعة. في ظل ظروف مثالية، يجب أن تبقى في خزان المياه مع مضخة الماء تعميم لإبقائه دافئا، والإسراع في إزالة الكلورة.
  3. يجب فحص الرقم الهيدروجيني للمياه والمحافظة عليها النظام يوميا بين 6.8 و 7.5. عند الضرورة، يجب استخدام بيكربونات الصوديوم لزيادة درجة الحموضة.
  4. يجب تنظيف خزانات الأسماك بانتظام. لتنظيف خزان الأسماك، أغلق تدفق المياه إلى هذا الخزان، واستنزاف المياه الزائدة من خزان يميل الى الوراء وإزالة الخزان بعناية من النظام. والأوساخ والطحالب النمو يكون واضحا في أسفل وجوانب الخزان.
  5. وضع يربك إلى خزان نظيفة، وملء مع الماء دي المكلورة (ويعرف أيضا باسم نظام واثالثا). نقل الأسماك بعناية في هذا الخزان مع شبكة السمك. إغلاق الغطاء ونقل العلامة اسم الخزان. وضع بعناية خزان نظيفة في النظام والتبديل على إمدادات المياه.
  6. لتطهير الشبكة الأسماك، رذاذ مع الايثانول 70٪، وشطف في الماء، والسماح لها الجافة قبل استخدام من جديد. إزالة الحاجز من خزان القذرة ورذاذ كل أجزاء مع الايثانول 70٪. شطف جيدا بالماء الصنبور والسماح للدبابات ويربك حتى يجف تماما قبل إعادة استخدامها.
  7. تعميم نظام الفلاتر يجب أن يتم التحقق وتغير بانتظام لضمان وظيفتها المناسبة. يجب تغيير هذه الفلاتر بانتظام لضمان حسن وإمدادات المياه النظيفة لجميع الدبابات الأسماك.
  8. وأعادت عادة لوحة تصفية 120 ميكرون أو استبدالها يوميا؛ إعادة تدفق المياه نحو استخدامها تماما قبل إعادة تركيب مع واحدة جديدة.
  9. يجب تغيير فلتر علبة أسبوعيا. لتغيير تصفية علبة، وإزالة وحدة الفلترة من التواء النملiclockwise مع وجع أو اليدين. ضع ورقة من البلاستيك أو منشفة أدناه لمنع تسرب المياه أو استيعاب. استبدال فلتر العلبة بأخرى جديدة وتناسب عودة وحدة التصفية في النظام، وتشديد بعناية مع الأيدي، ووجع إذا لزم الأمر.
  10. يجب تغيير فلتر الكربون كل أسبوعين (كل أسبوعين). لتغيير فلتر الكربون، إزالة وحدة فلتر الكربون بعناية مع وجع. تجاهل الكربون المنشط المستخدمة واستبدالها جديدة الكربون المنشط. إعادة تناسب حامل الكربون ووضعه مرة أخرى إلى وحدة التصفية. تناسب وحدة التصفية مرة أخرى في النظام. التبديل على النظام والتأكد من أن المياه تتدفق إلى التصفية. إذا لزم الأمر، طرد بعض الماء من خلال الأنابيب لتنظيف الأوساخ في الأنابيب قبل تركيب فلتر في النظام.
  11. يجب تنظيف الفلتر البيولوجي كل ستة أشهر. يقع عموما هناك مرشح البيولوجية بين علبة وفلتر الكربون في نظام تداول. لتغيير فلتر البيولوجي، REMاوفه وحدة التصفية من النظام. الافراج عن ضغوط من مرشح عن طريق الضغط على زر تحرير الضغط. فك فلتر مع وجع. عموما هناك حاجة شخصين لهذه الخطوة. إزالة الغطاء من وحدة التصفية. إفراغ محتويات تصفية في وعاء منخول لفصل siporax من الماء. ملاحظة: Siporax هي الغرامة المسام الحيوي تصفية وسائل الإعلام أن لديه القدرة على تنفيذ كل النترجة النترجة ودي.
  12. إذا كانت قذرة جدا siporax استبداله جديدة. ملء وحدة تصفية المياه مع نظام (دي المكلورة المياه)، إغلاق الغطاء، والعودة إلى وحدة التصفية النظام والتبديل على إمدادات المياه. ملاحظة: في حوض للماء تأقلم، وsiporax ستكون موطنا لعدة منترت البكتيريا. هذه الكائنات الدقيقة هي الحاسمة للحفاظ على دورة النيتروجين داخل الحوض، وازالة والإسكان الأولية لعامل التصفية البيولوجية (siporax قذرة) يمكن أن يؤدي إلى ارتفاع الأمونيا خطيرة، تليها ارتفاع النتريت في حين أن نEW البيولوجية فلتر (مع siporax الجديدة) هو إعادة إنشاء. قد كل من هذه الدول المتوسطة من دورة النيتروجين تكون سامة للأحياء المائية، وربما قتل الزرد إذا لم ترد على النحو المناسب. ولذلك، فمن المهم أن يكون هناك مرشح الثانوية البيولوجية في أماكن أخرى من نظام الإسكان الزرد (على سبيل المثال، في خزان التجميع في النظام الموائل المائية) للسماح إعادة تعمير السريع لهذه الكائنات الدقيقة مهمة على siporax جديدة.
  13. وتستخدم مرشحات الأشعة فوق البنفسجية للسيطرة على الملوثات البيولوجية نظام (مثل البكتيريا) ويجب أن يتم استبدال كل 9-10 شهرا. تجدر الإشارة إلى أن الأشعة فوق البنفسجية جرعة تطهير تصفية بسعر ~ 110 ميغا جول / سم 2 في بداية الحياة مصباح ويقلل معدل الجرعة على مدار الساعة، وبالتالي لا بد من استبدال في العالم حتى عندما يبدو أن تزال وظيفية.

2. تغذية

  1. ويمكن تغذية الزرد مع الأغذية الجافة (حجم المواد الغذائية من 100 ميكرون لر يرقاتس 300/400 ميكرون للأسماك الكبار) أو غذاء حي (الجمبري محلول ملحي). محلول ملحي الروبيان (الأرتيميا س.) البيض المتوفرة من محلات بيع الحيوانات الأليفة المحلية، ويمكن أن تحاك في المختبر عن طريق اتباع الخطوات البسيطة الموضحة أدناه.
    1. حل ملح البحر الأحمر في المياه العمر عن طريق وضع كوب من الملح على النمام المغناطيسي لتحسين القابلية للذوبان. وبدلا من ذلك، يمكن حل الملح في الماء تهوية مع أنبوب التهوية. ويمكن أيضا الفورية الملح المحيط استخدامها كحل الفقس إذا البحر الاحمر الملح غير متوفر. يمكن ردي محلول ملحي تحمل مجموعة واسعة من الملوحة، ولكننا لدينا يفقس الروبيان محلول ملحي (10-15 ز) في 30-35 المياه الحمراء ز / L ملح البحر. ملاحظة: في حالة البيض الأرتيميا ليست متاحة بسهولة في متاجر الحيوانات الاليفة المحلية ثم يمكن أيضا ردي محلول ملحي مغلفة أن تستخدم بعد "decapping" لهم على دفعات قبل إضافتها إلى مفرخ الجمبري. وهذا قد تجنب أيضا رحلات متكررة إلى متجر للحيوانات الاليفة.
    2. ملء هاتشر الأرتيميا مع ساLT الماء وإضافة البيض الجمبري بتركيز قدره 1.2 ملاعق / لتر. تهوية هاتشر بقوة مع مضخة الهواء وترك البيض ليفقس الأرتيميا ل48 ساعة ~.
      ملاحظة: تجدر الإشارة إلى أن برنامج الأمم المتحدة للالمخصب محلول ملحي الروبيان تفقد قيمتها الغذائية بعد كل ساعة الفقس. لذلك، قد يكون من المناسب إما فتحة أكثر من 24 ساعة أو 48 ساعة على تخصيب من أجل الحصول على القيمة القصوى الغذائية من الأرتيميا.
    3. يضاف مياه الصرف الصحي من النفايات إلى نظام الفقس الحجر الصحي ليمكن تطهيرها مع التبييض والتخلص وقت لاحق.
  2. لجمع الماء المالح الروبيان، وإزالة الأنابيب الهواء والسماح للثقافة لتسوية ل4-5 دقيقة ولكن ليس لأكثر من 10 دقيقة. وردي محلول ملحي تحاك التجمع في الجزء السفلي من هاتشر.
    1. جمع الماء المالح الروبيان باستخدام برنامج المشورة التقنية في الجزء السفلي من هاتشر. تجاهل تدفق الأولي الذي يتكون من الامم المتحدة والبيض الأرتيميا فقست.
    2. فصل الماء المالح الروبيان من المياه المالحة، وذلك باستخدام مجموعة الروبيان صافي محلول ملحي (~ 350 ميكرون النايلون شبكة). شطف الماء المالح الروبيان من صافي في وعاء باستخدام المياه النظام.
  3. وردي محلول ملحي جمعها عادة ما تكون موجودة في تركيز عال في الجزء السفلي من الحاوية ويعطيها اللون البرتقالي إلى حد ما.
  4. تغذية الروبيان الماء المالح إلى الزرد باستخدام ماصة أو زجاجة بالقطارة / مشروب. كمية الطعام الاستغناء يعتمد على حجم السكان من الدبابات الفردية. نسبة مقبولة عموما لالزرد هو الحصول على 4٪ من وزن الجسم في الغذاء في اليوم الواحد. لا ينبغي أبدا أن نفرط الزرد لأن هذا قد يزيد من مستوى النترات في المياه، مما يؤثر على تكاثرها ربما، أو جدوى، حيث أن بعض الأسماك قد يموتون بسبب الإفراط في تناول الطعام.
    1. على حقن المواد الغذائية فيالمياه والأسماك تسبح جائع للقبض على ردي محلول ملحي.
  5. لا يمكن أن يؤديها التغذية الجافة باستخدام المائية البيئية في نظام / الموائل المائية بسيطة الأسماك الغذاء الربيع القائم على موزع. وبدلا من ذلك، يمكن أيضا أن يتم تنفيذ التغذية الجافة باستخدام ملعقة أو بسيطة عن طريق قطع البلاستيك بالقطارة قطريا مع مقص لإعطائها مظهر من ملعقة صغيرة.

3. تربية

  1. بدء الزرد تربية في بداية الخفيفة. ويمكن الحصول على البويضات المخصبة إما عن طريق تربية للدبابات في تربية أو البشرى. بينما في تربية للدبابات أكثر كفاءة العمالة ويتم تطبيق لجمع الأجنة العادية في مختبرنا، ويفضل تربية البشرى عندما الجينات أو الطفرات ليتم عرضه من الأسماك الفردية.
  2. لفي تربية للدبابات، تجميع المربي للدبابات في وإسقاط ببطء في حوض للأسماك بعد ظهور الضوء. وبدلا من ذلك، يمكن ترك للدبابات في تربية انشاء ليلة وضحاها في حوض للأسماك.
  3. Lفقس المربي للدبابات في حوالي 15 دقيقة للسماح للأسماك لزميله قبل إزالة المربي من الدبابة وجمع البيض.
  4. عادة يتم تعيين البشرى تربية حتى وقت متأخر من بعد الظهر بعد الرضاعة.
  5. تجميع خزان التربية وملئه بالماء نظام المسنين.
  6. نقل وأنثى واحدة وذكر واحد لطرفي نقيض في خزان التربية. ويمكن تمييز الإناث من الذكور بسبب بطن أكبر بهم. ويمكن أيضا الذكور يمكن تمييزها عن الإناث لأنها أكثر رشاقة وأكثر قتامة في اللون من الإناث. وعلاوة على ذلك، يكون الذكور أكثر تلون أصفر في الزعنفة الشرجية مقارنة بالإناث (انظر الشكل 1). عندما تكون في شك نظرة لحامل البيض في الإناث الزرد (انظر الشكل 4).
  7. إزالة المفرق في صباح اليوم التالي بعد وقت قصير من بداية الخفيفة. تسمح أن يحدث التزاوج دون عائق لمدة 20 دقيقة أو إلى أن يتم الاستغناء عن أعداد كافية من الأجنة في الجزء السفلي من الخزان.
  8. بعد تربية،العودة الأسماك لدباباتهم. جمع البيض باستخدام مصفاة.
  9. غسل الأجنة جيدا بالماء النظام.
  10. نقل الأجنة إلى طبق بتري وذلك بدهن مصفاة متوسطة مع الجنين؛ الملقب EM3 (كلوريد الصوديوم، و 13.7 مم؛ بوكل، 0.54 مم؛ MgSO 1.0 ملم، CaCl 1،3 مم؛ نا 2 HPO 0،025 مم؛ KH 2 PO 0،044 مم؛ NaHCO 4.2 ملم).
  11. ويمكن ملاحظة الأجنة تحت المجهر. ثم يتم فصل البيض المخصب من بويضة غير مخصبة باستخدام إبرة وماصة (انظر الشكل 3).

4. تربية اليرقات

  1. يتم الاحتفاظ البيض المخصب في حاضنة (28.5 ° C ~) لمدة 72 ساعة حتى يتم الفقس واليرقات.
  2. الآن اليرقات هي من المشيمه والسباحة بحرية انهم على استعداد لنقلها إلى خزان الأسماك الرئيسية. اليرقات تحتاج إلى تغذية من 5 أيام بعد الإخصاب (DPF) ويتم الاحتفاظ في وسط جنين (موضح في تكوينالجزء 3، 10) أو المياه النظام. يمكن أن تظل اليرقات في جولة مع أطباق ~ 50٪ أو أكثر من الماء يتغير فيها على أساس يومي. ينبغي أن تشمل تغيير المياه إزالة اليرقات الميتة أو المريضة وأي غيرها من الحطام.
  3. نقل اليرقات بلطف في خزان يحتوي على يربك صغيرة الحجم (300-400 ميكرون من حول). يجب إزالة اليرقات الميتة والمريضة وينبغي إضافة ملليلتر قليلة من الماء ببطء على أساس يومي.
  4. بعد 14 يوما، ويمكن أن تكون الدبابات اليرقات على الرف في النظام، والمتوفرة مع تيار صغيرة من الماء ركوب الدراجات (1-2 قطرات في الثانية الواحدة). كما تنمو اليرقات، ويمكن زيادة تدفق المياه. ويمكن استخدام أحجام مختلفة من يحير اعتمادا على حجم اليرقات (على سبيل المثال حجم يربك 300-400، 500، 700-750، وميكرون 1000) ويربك البلاستيك العادي وينبغي أن تستخدم للأسماك الكبار.
  5. وعادة ما يستغرق 3 أشهر للأجنة لتتطور الى الكبار ناضجة جنسيا.

Representative Results

الزرد الإسكان وصيانة أسهل وأرخص من النماذج التقليدية القوارض. يمكن أن يضم عدة آلاف من الزرد في مختبر صغير. نتيجة لهذا البروتوكول، فإن الباحثين تكون قادرة على إدارة منشأة الزرد التي ستوفر ظروف صحية إلى الزرد. وبالإضافة إلى ذلك، سوف الرسوم التوضيحية التالية تساعد في تحديد البويضات المخصبة، الزرد الكبار، وطعامهم. ويرد مثال لالزرد الذكور (الشكل 1A) والزرد الإناث (1B الشكل و1C) للمساعدة الباحثين التمييز بين الذكور والإناث لتربية اسماك الزرد الغرض صورة 2 توضح وجهة نظر المجهرية؛ ردي محلول ملحي في 12X (الشكل 2A)، والأرتيميا واحد في 90X (الشكل 2B)، والبيض الأرتيميا غير مخصبة في 90X (الشكل 2C). وهذا سوف يساعد في فهم الفرق بين الماء المالح الروبيان غير مخصبة والمخصبة للسندإيه أغراض التغذية. وتظهر البويضات المخصبة وغير المخصبة في الشكل 3. الشكل 3A يوضح وجهة نظر المجهرية للأجنة مخصبة وغير مخصبة. أجنة غير مخصبة غير شفافة بشكل عام و / أو مع خلية تمزق (ق) داخل المشيماء (السهم الأسود)، في حين الأجنة المخصبة يبدو سليما والمتزايد للدولة انقسام الخلية التالية (للقراءة مفصلة لمراحل مختلفة من الأجنة الزرد انظر 1). أعلى عرض التكبير من الشكل المخصبة ويظهر البويضة غير الملقحة في الشكل 3B 3C وعلى التوالي. 4 يبين حامل البيض والزرد الأنثى لمساعدة الباحثين التمييز بين الذكور والإناث في الزرد.

العديد من المشاكل الخطيرة التي قد تحدث في المختبر الزرد تشمل انسداد تدفق المياه إلى الفرد / جميع الدبابات في نظام الإسكان، وسوء نوعية المياه، وتسرب في أنابيب أو خزان للنظام تداول. وبالإضافة إلى ذلك،يمكن أن مشاكل في الحصول على أجنة من تربية يكون آخر قلق. وتناقش هذه القضايا من استكشاف الأخطاء وإصلاحها أدناه.

الشكل 1
الشكل 1. مثال على الزرد وذكر (A) والإناث الزرد (B، C).

الشكل 2
الشكل 2. رأي مجهرية من محلول ملحي في ردي 12X (A)، وهو الأرتيميا واحد في 90X (B)، والبيض الأرتيميا غير مخصبة في 90X (C).

الشكل 3
الشكل 3. مشاهدة مجهرية (16X) من البيض المخصب وغير مخصبة، حيث يتم فقط اثنين من البيض غير ملقح، وأشار بويضة غير مخصبة مع السهام السوداء (A). التكبير العاليعرض (90X) ل. المخصبة (B) والبويضة غير الملقحة (C)

الشكل 4
الشكل 4. A الزرد الأنثى حامل البيض (المشار إليها مع السهم الأسود) التوضيح.

المعلمة مجموعة الأمثل
القلوية 50-150 ملغم / لتر كربونات الكالسيوم 3
درجة الحموضة 6،8-7،5 (6،0-8،5 التسامح)
درجة الحرارة 26-28،5 ° C
صلابة 50-100 ملغ / L 3 كربونات الكالسيوم
غير المؤينة الأمونيا <0.02 ملغ / L
النترات (NO 3 -) <50 ملغ / L
النتريت (NO 2 -) <0.1 ملغ / L
الأكسجين المذاب > 6.0 ملغ / L
التملح 0،5-1 ز / L
الموصلية 300 ميكرو ثانية -1500

الجدول 2. معلمات نوعية المياه. المعلمات نوعية المياه. الأمثل مجموعة من البارامترات البيئية في الحوض الزرد 11.

Discussion

الزرد تنبع من نهر الجانج في شمال الهند وأصبحت شعبية في البحث في البالغين على حد سواء ومراحل اليرقات التي استعرضها سبنس وآخرون. 3. الزرد تمتلك العديد من المزايا نماذج حيوانية أخرى مثل الخصوبة العالية، سهولة الصيانة، وإزالة البصرية الأجنة، التطور الجنيني السريع، وانخفاض تكاليف الصيانة. فهي قابلة للتلاعب الجيني 6 و مناسبة لفحص المخدرات عالية الإنتاجية 4،5. الإخصاب الخارجي الذي هو من هو مفيد للاستخدام من قبل علماء البيولوجيا التطورية. بسبب هذه الخصائص مواتية، الزرد تكتسب شعبية في مجال علم الوراثة الدوائية والبحوث السلوكية 9،10. هناك عدد من التحديات في الحفاظ على منشأة الزرد وتربية الزرد للحصول على الأجنة. هنا، نحن تصف تجاربنا والتوصيات في التصدي لهذه التحديات وسutline بروتوكول لصيانة النظام، والتغذية، وتربية وتربية اليرقات.

نظام الصيانة

للحفاظ على الزرد في حالة صحية جيدة، من المهم أن توفر لهم بيئة نظيفة في نظام الحوض يعمل بشكل صحيح. جزء مهم من هذا هو تغيير النظام بحيث الفلاتر بانتظام أن جميع الدبابات تلقي السليم تدفق المياه والمياه النظيفة. فمن الأهمية بمكان لتجنب فشل الدراجات إمدادات المياه إلى خزان كل ذلك بسبب أنابيب نظام المحظورة. يمكن تنظيفها باستخدام أنابيب تدفق أعلى من ضغط المياه العادية، وإذا لم يحدث انسداد. من الناحية المثالية، ينبغي الاستعاضة حوالي 10٪ من المياه يوميا للنظام جيد للحفاظ على نوعية المياه. وبدلا من ذلك، يمكن استبدال الماء أثناء تغيير علبة أو فلتر الكربون. وهذا يضمن أن تتم إزالة الأوساخ المودعة في الأنابيب التي تربط هذه الفلاتر. يجب فحص نوعية المياه على أساس منتظم. المعلمات مثل درجة الحموضة، القلوية، temperatوينبغي النظر لدى عودتهم، والصلابة، والأمونيا، والأكسجين الذائب، الملوحة، والتوصيل من العوامل الهامة في تمثيل نوعية المياه النظام (انظر الجدول 2 لمزيد من التفاصيل). في أقل تقدير النترات، ينبغي رصد درجة الحموضة، ودرجة الحرارة على أساس منتظم لضمان نوعية جيدة للمياه الزرد الإسكان. نترات المثالي (NO 3 -) مستويات <50 ملغ / L 11، وإذا كان يمكن تقليل ارتفاع هذه المستويات من خلال استبدال الماء في نظام تداول مع المياه العذبة نظام. في بعض الأحيان، فلاتر لا يتناسب تماما وتسرب ذلك فمن المستحسن للتحقق من أي تسرب بعد تغيير الفلتر. إذا تم حظر تدفق المياه من الخزان الرئيسي إما بعد تغيير مضخة المياه أو تغيير عامل تصفية، يمكن استعادة تدفق المياه من قبل أي من تخفيف أو إزالة عامل التصفية لبضع ثوان لإطلاق سراح أي فراغ يتم إنشاء في الأنابيب. يمكن الوقت المطلوب لتغيير الفلاتر تختلف تبعا لعوامل مختلفة مثل مجموع س تحميل البيولوجيةن تودع النظام والنظافة من الفلاتر الأخرى، والأوساخ في الأنابيب. وبالتالي، ينبغي على الفور المرشحات يمكن تغييره إذا تظهر قذرة أو إذا كانت كافة الدبابات لا يحصلون على إمدادات المياه الصحيح. ويوصى أيضا أن يتم تنظيف السمك الصافي مع الايثانول 70٪، وتشطف في ماء لتطهير لها، ويترك ليجف قبل إعادة استخدامها. التجفيف يضمن تبخر الإيثانول الذي هو على خلاف ذلك سامة للأسماك.

معظم النظم استخدام الزرد دي المكلورة ماء الصنبور، ولكن بعض النظم استخدام الماء منزوع الأيونات. من المهم للحفاظ على التوصيل للمياه نظام ما بين 300 و 1500 ميكرو ثانية ~ وهذا يقلل من الطاقة للحفاظ على الأسماك يحتاج أملاح الجسم. لذلك، لا يمكن أن يوضع في الزرد المياه منزوع الأيونات ما لم تتم إضافة الأملاح للحفاظ على مستويات التوصيل الأمثل. هناك خطر من الممكن تركيزات عالية من النحاس في الماء إذا تم استخدام نظام مياه الحنفية لأن فلتر الكربون لا يزيل النحاس. ولذلك، شيجب التحقق من وجود تركيزات السرس النحاس والنحاس الأنابيب تجنب حيثما أمكن ذلك.

تغذية

لا ينبغي أبدا أن نفرط الزرد لأن هذا قد يزيد من مستوى النترات في المياه، مما يؤثر على تكاثرها وربما 11 أو جدوى، حيث أن بعض الأسماك قد يموتون بسبب الإفراط في تناول الطعام. لا نوصي توفير المزيد من الغذاء خلال أي من التغذية 1 دبابة من الأسماك يمكن أن تنتهي في غضون 10 دقيقة. من المهم جدا لإزالة الملح من الماء المالح الروبيان قبل إطعامهم إلى الزرد وزيادة تركيز الملح يسبب الموت. إذا كانت هناك حاجة البيض أكثر الزرد، يمكن تناول السمك ثلاث مرات في اليوم. تنظيف خزانات الأسماك المربي يوميا يحسن أيضا مستويات إنتاج البيض.

عندما يتغذى على أنظمة الموائل المائية ننتقل عادة قبالة مضخة مياه ومضخة الهواء للسماح للأسماك لتناول الطعام لمدة 10 دقيقة. هذا يقلل من كمية الطعام التي يتم غسلها في الفلاتر. ومع ذلك، يجب على المستخدمين توخي الحذر لعينييعيرها لتشغيل هذه المضخات بعد ذلك مرة أخرى.

تربية

وعادة ما تكون في الزرد حالة تربية الأمثل بين ~ 3 و 18 شهرا من العمر. لا ينبغي أن يؤديها تربية البشرى ليومين متتاليين 11؛ ومع ذلك، يمكن لا يمكن أن يؤديها في تربية اليومي للدبابات ودبابة عقد العديد من الأسماك مما يقلل من فرصة للزوج نفسه من الأسماك التي تربى لمدة يومين على التوالي. وينبغي الاضطلاع تربية على فترات منتظمة حتى لو لم يطلب البيض. وسوف تضمن هذه العملية هو الحفاظ على دورة تربية الأسماك. فمن المستحسن أن هناك أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء. ذكر الزرد تغيير شريكاتهم على أساس يومي لمدة 12 الذي يدعم المزيد من هذه التوصية. وعلاوة على ذلك، في غضون مختبرنا عانينا في البداية مشاكل مع تربية، ومع ذلك، باستخدام أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء ساعدت في حل المشكلة. وعلاوة على ذلك، والتغذية مع كونتي نسبة عالية من البروتينNT النظام الغذائي والأرتيميا 2-3 مرات في اليوم، والأسماك من الدبابات خلط مختلفة (من الآباء والأمهات مختلفة)، والحفاظ على درجة حرارة تربية انشاء ما بين 27 و 28 درجة مئوية، والضغط على البطون من الإناث مع أنابيب المبيض منعت استخدام تدليك لطيف زيادة تحسين إنتاج البيض. نوصي الاحتفاظ بسجل للخطوط الأسماك / أصول لتجنب في تربية بين الأشقاء. هذا يحسن من إنتاج الجنين. الاحتفاظ بسجل لعدد الأجنة التي وضعتها من كل خزان الأسماك ويوصى أيضا. هذا يساعد في الحفاظ على المسار من الدبابات تربية الأسماك أفضل واتخاذ تدابير لتحسين تربية الأسماك في وضع البيض لا.

تربية اليرقات

يجب تغذية اليرقات تبدأ في الفترة من 5 DPF (أيام الإخصاب آخر). ويمكن تغذية اليرقات الصغيرة مع الأغذية الجافة من ميكرون في الحجم 100 ~ (على سبيل المثال، ZM100) أو غذاء حي مثل المتناعلة والروتيفر (الذي يحفز النمو). يمكن ببطء حجم الطعام يمكن زيادةإلى 200 ميكرون (مثل ZM200) أو 300/400 ميكرون (مثل ZM300). وينبغي أن يكون من السكان البالغين الأسماك تكون حوالي 6-7 الأسماك لكل لتر من الماء. ويوصى هذه الممارسة لتحسين صيانة BOD (الطلب على الأكسجين البيولوجي) إلى الدبابات.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

فإن الكتاب أود أن أشكر تامي اسماعيلي لمساعدتها في إدارة المواد الاستهلاكية المختبرات. AA هو حاصل على منحة دراسية الدكتوراه من مركز التميز لأبحاث مرض الزهايمر والعناية، كلية العلوم الطبية، جامعة إديث كوان. MC يتلقى دكتوراه التمويل بدعم من نادي روتاري، بيرث. AM، وتمول GV، KT، وRNM من مؤسسة أبحاث الزهايمر في كوسكر.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Zebrafish circulating system Aquatic Habitats, USA AHAB stand-alone, bench-top systems
Sodium Bicarbonate Sigma Aldrich S6297
Fish food dispenser/Dry food feeder Aquatic Habitats, USA AH19
Microscope Olympus SZX12
Dry Food ZM Fish food, UK ZM100, ZM200, ZM300
Brine shrimp eggs Salt Creek, Inc., USA Premium Grade
In-tank breeders Aquatic Habitats, USA ITSTS-A
Activated carbon Penn-Plax Pro-crab, USA PBC3MF
Breeding tanks Aquatic Habitats, USA SBTANK (1L)
Breeder Tank-2 (2L)
Red sea salt Red sea salt, USA Local pet store/
www.redseafish.com
Filters (Canister, filter pads, and UV) Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Siporax Media Aquatic Habitats, USA BF 820
Brine shrimp net Aquatic Habitats, USA BSN 1
Brine shrimp hatcher Aquatic Habitats, USA BS252
Baffles Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
  2. Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
  3. Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
  4. Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
  5. Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
  6. Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
  7. Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
  8. Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
  9. Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
  10. Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
  11. Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. 5th, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
  12. Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).

Comments

7 Comments

  1. zebra fish laboratory play an important role in the world.Zebra fish laboratory help us from the various method like cleaning water etc.It is very nice and informative sharing.For more detail.visit water tank Sydney

    Reply
    Posted by: micheal c.
    March 14, 2013 - 1:55 AM
  2. I would like further information about your feeding protocols for larval rearing. I am currently using rotifers then brine shrimp but know there are lots of ways to do it. Thanks.

    Reply
    Posted by: Edward F.
    April 24, 2013 - 12:33 PM
  3. Dear Edward,
    Please accept my apologies for the late reply. Yes, you are right, there are several other ways to feed zebrafish larvae. You can feed them with dry food of

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    May 28, 2013 - 7:02 AM
  4. Aquatic Habitats seems to have discontinued production of the manual fish feeder, AH19. Has anyone found an alternative vendor for a product that is similar?

    Reply
    Posted by: Anne W.
    October 19, 2015 - 1:21 PM
  5. With normal tanks and aeration systems (without sophisticated filters, flow through water supply and so..), how to main maintain zebra fish. Any suggestions for a small scale set up? how to improve the egg quality? (some articles say that it is mandatory, to only breed fish once in a week. Even after following that, eggs tend to die after budding stage)

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 12, 2016 - 6:13 AM
  6. Dear Niranjana, Please accept my apologies for the late reply. Are you still facing the same problem of eggs being dying after budding stage? If yes, can you please describe how they appears before they die? For example, is there any fungus growth in the petridish. How many eggs do you keep in a petridish?
    Thanks
    Kind Regards
    Avdesh

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    January 31, 2017 - 10:30 AM
  7. we regularly wash eggs, and maintain it in E3 medium (to prevent fungal contamination), though 80% of them die before hatching. Remaining 20 % survives for a month (till the yolk sac disappears).But, only 2 or 3 survives after that.

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 2, 2017 - 12:49 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics