Author Produced

Regelmessig vedlikehold av en Sebrafisk ( * These authors contributed equally

Biology
 

Summary

Denne protokollen skisserer regelmessig vedlikehold og omsorg for å opprettholde optimale forhold for sebrafisk reindrift. Videoen viser protokollen for systemvedlikehold, vanlig bolig, fôring, avl, og heving av sebrafisk larver.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Avdesh, A., Chen, M., Martin-Iverson, M. T., Mondal, A., Ong, D., Rainey-Smith, S., Taddei, K., Lardelli, M., Groth, D. M., Verdile, G., Martins, R. N. Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction. J. Vis. Exp. (69), e4196, doi:10.3791/4196 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Denne protokollen beskriver regelmessig stell og vedlikehold av en sebrafisk laboratorium. Sebrafisk er nå stadig mer populært i genetikk, farmakologiske og atferdsmessige forskning. Som et virveldyr blir sebrafisk aksje betydelig genetisk sekvenslikhet med mennesker og blir brukt som en dyremodell for forskjellige humane sykdomstilstander. Fordelene med sebrafisk i forhold til andre vanlige virveldyr modellene inkluderer høy fruktbarhet, lave vedlikeholdskostnader, gjennomsiktige embryoer, og rask utvikling. På grunn av sporen av interesse i sebrafisk forskning, behovet for å etablere og opprettholde en produktiv sebrafisk boliger anlegget er også økende. Selv litteraturen er tilgjengelig for vedlikehold av en sebrafisk laboratorium, er en kortfattet Videoprotokollen mangler. Denne videoen viser protokollen for vanlige boliger, fôring, avl og heving av sebrafisk larver. Denne prosessen vil hjelpe forskerne å forstå den naturlige atferd og optimale forhold for zebrafish dyrehold og dermed feilsøke eksperimentelle problemer som stammer fra fisk bruksforholdene. Denne protokollen vil være av enorm hjelp for forskere som planlegger å etablere en sebrafisk laboratorium, og også til hovedfagsstudenter som har tenkt å bruke sebrafisk som en dyremodell.

Protocol

1. Systemvedlikehold

  1. Sebrafisk er holdt i en sirkulerende system som kontinuerlig filtre og aerates systemet vann for å opprettholde vannkvaliteten nødvendig for en sunn vannmiljøet. Sirkulerende system hjelper også til å filtrere overflødig mat og fisk ekskreter. Ulike selskaper tilbyr sebrafisk systemer, men vi bruker systemer fra akvatiske habitater, USA i vårt laboratorium. Romtemperaturen eller temperaturen i tanken er vanligvis holdt mellom 26 til 28,5 ° C og lysforholdene er 14:10 hr (lys: mørk). En sebrafisk system fra akvatiske habitater (f.eks Benkeplate system) koster ~ 9000 USD. Dette Borstemmaskin system med to hyller kan holde seks 10-liters, tolv 3-liters, eller tjue 1,5-liters tanker på hver hylle. Flere linjer med fisk (f.eks, transgent, mutant, villtype) kan også bli plassert på det samme systemet.
  2. Et sett av ulike typer filtre brukes i systemet. I vårt system, vann fra alle tankene paSSES gjennom en 120-mikron filtermatten, 50-mikron filterpatron, biologisk filter, aktiv karbon absorpsjon filter og UV-desinfisering filter før blir sirkulert tilbake inn i tanken. De-chlorinated/aged vann brukes i sebrafisk systemet. Vann kan være de-klorert av aldring i minst 48 timer. Under ideelle forhold, bør vannet holdes i et reservoar med en pumpe sirkulerer vannet for å holde den varm og fremskynde de-klorering.
  3. PH-verdien i systemet vann bør kontrolleres daglig og vedlikeholdes mellom 6,8 og 7,5. Når det er nødvendig, bør natriumbikarbonat brukes til å øke pH-verdien.
  4. Fiskekar bør rengjøres regelmessig. Å rengjøre et akvarium, lukk vannstrømmen til denne tanken, drenere overflødig vann ved å vippe tanken bakover og fjerne tanken forsiktig fra systemet. Skitt og algevekst vil fremgå på bunnen og sidene av tanken.
  5. Plasser baffel i en ren tank, og fyll med de-klorvann (aka System water). Nøye overføre fisken inn i denne tank med en fisk netto. Lukk lokket og overføre navnet tag av tanken. Plasser den rene tanken inn i systemet og slå på vannforsyningen.
  6. Å rense fisken nettet, spray med 70% etanol, skyll i vann, og la det tørke før gjenbruk. Fjern ledeplaten fra skitne tanken og spray begge deler med 70% etanol. Skyll grundig med vann fra springen og la tanken og forvirre tørke helt før gjenbruk.
  7. Sirkulerende system Filtrene må kontrolleres og endres jevnlig for å sikre at de fungerer riktig. Disse filtrene bør byttes regelmessig for å sikre god og ren vannforsyning til alle karene.
  8. Den 120-mikron filter pad er vanligvis plasseres eller erstattet daglig, omplassere mot vannstrømmen å bruke den helt før du setter inn en ny.
  9. Den Canister filter bør skiftes ukentlig. Hvis du vil endre canister filter, fjerne filteret enhet ved å vri mauriclockwise med en skiftenøkkel eller hender. Plasser en plastduk eller håndkle under for å forhindre eller absorbere vannsøl. Erstatt filterpatron med en ny og monter filterenheten tilbake i systemet, nøye stram med hender og en nøkkel hvis nødvendig.
  10. Kullfilter bør skiftes hver fjortende dag (annenhver uke). Hvis du vil endre kullfilter, fjern kullfilter enhet forsiktig med en skiftenøkkel. Kast den brukte aktivert karbon og erstatte den med ny aktivert karbon. Sett på plass karbon holderen og plasser den tilbake i filterenheten. Monter filterenheten tilbake i systemet. Slå på systemet og sjekke at vannet strømmer til filteret. Om nødvendig, skylle litt vann gjennom rørene for å rense skitt i rørene før filteret monteres inn i systemet.
  11. Den biologiske filteret bør rengjøres hver sjette måned. En biologisk filter er vanligvis plassert mellom beholderen og kullfilter i sirkulerende system. Å endre biologisk filter, remove filterenheten fra systemet. Avlaster trykket fra filteret ved å trykke på trykk utløserknappen. Skru filteret med en skiftenøkkel. Vanligvis to personer er nødvendig for dette trinnet. Fjerner lokket av filterenheten. Tømme innholdet i filteret i en siktet beholder å skille siporax fra vannet. Merk: Siporax er en fin pore bio-filter media som har evnen til å utføre både nitrifikasjon og de-nitrifikasjon.
  12. Hvis siporax er veldig skittent erstatte den med ny. Fyll filteret enhet med systemet vann (de-klorvann), lukk lokket, returnere filterenheten til systemet og slå på vannforsyningen. Merk: I en acclimated akvarium, vil siporax være hjemme til flere nitrifiserende bakterier. Disse mikroorganismer er avgjørende for å opprettholde nitrogen syklusen i akvariet, og fjerne det primære hus for biologisk filter (den skitne siporax) kan resultere i en alvorlig ammoniakk pigg, etterfulgt av en nitritt pigg mens new biologisk filter (med ny siporax) er re-etablere. Begge disse mellomliggende stater i nitrogenkretsløpet kan være giftig for vannlevende organismer, og kan drepe sebrafisk hvis ikke svart på riktig måte. Derfor er det viktig å ha en sekundær biologisk filter ellers i sebrafisk boliger systemet (f.eks, i oppsamlingstanken i akvatiske habitater system) for å tillate rask repopulation av disse viktige mikroorganismer på den nye siporax.
  13. UV-filtre brukes til å kontrollere systemet biologiske forurensninger (for eksempel bakterier), og bør byttes ut hver 9-10 måneder. Det bør bemerkes at UV-filter desinfeksjon dosehastighet er ~ 110 mJ / cm 2 ved begynnelsen av lampens levetid og doserate avtar i løpet av tiden, og derfor er det nødvendig å erstatte hele kloden selv når det ser ut til å være i funksjonell.

2. Fôring

  1. Sebrafisk kan mates med tørr mat (mat størrelse fra 100 mikrometer for larver to 300/400 um for voksen fisk) eller levende mat (artemia). Saltlake reker (Artemia sp.) Egg er tilgjengelig fra lokale dyrebutikker og kan bli klekket i laboratoriet ved å følge de enkle trinnene beskrevet nedenfor.
    1. Oppløs rød havsalt i alderen vann ved å plassere et begerglass med salt på en magnetrører for bedre oppløselighet. Alternativt kan saltet oppløses i vann ved å lufte den med lufting røret. Instant ocean salt kan også brukes som en klekking løsning hvis rødt havsalt er ikke tilgjengelig. Artemia kan tolerere et bredt spekter av salinitet, men klekkes vår artemia (10-15 g) i 30-35 g / L red sea saltvann. Merk: Hvis saltlake reker egg er ikke lett tilgjengelig i de lokale dyrebutikker så innkapslet artemia kan også brukes etter "Decapping" dem i grupper før du legger dem til reker klekkeriet. Dette kan også unngå hyppige turer til dyrebutikk.
    2. Fylle saltlake reker klekkeren med salt vann og tilsett reker egg på en konsentrasjon på 1,2 spiseskjeer / liter. Aerate klekkeren kraftig med en luftpumpe og la saltlake reker egg å klekke for ~ 48 hr.
      Merk: Det bør bemerkes at un-beriket saltlake reker miste ernæringsmessig verdi hver time etter klekking. Derfor, kan det være hensiktsmessig å enten lemmen over 24 timer eller berike over 48 hr i for å oppnå den maksimale næringsverdi fra kuldebæreren reker.
    3. Avløpsvann fra klekking systemet er lagt i karantene avfall skal desinfiseres med klor og kastes senere.
  2. Å samle artemia, fjerner luften røret og la kulturen å betale for 4-5 min, men ikke for mer enn 10 min. Den skraverte artemia samles på bunnen av Hatcher.
    1. Utlevering artemia hjelp springen nederst av klekkeren. Kast den første strømmen som består av un-klekket artemia egg.
    2. Skille artemia fra det salte vannet, ved hjelp av en saltlake reker samling netto (~ 350 mikron nylon mesh). Skyll artemia fra nettet i en beholder ved hjelp av system vann.
  3. De oppsamlede artemia er generelt til stede i høy konsentrasjon ved bunnen av beholderen som gir det en heller oransje farge.
  4. Fôrer artemia til sebrafisk ved hjelp av en pipette eller en dropper / squeezy flaske. Mengden av mat dispensert avhenger bestandsstørrelse individuelle tanker. Den vanlige aksepterte ratio zebrafisk skal motta 4% av kroppsvekten i mat per dag. Sebrafisk skal aldri overfed, da dette kan øke nitrat i vannet, muligens påvirker deres avl, eller levedyktighet, som noen fisk kan dø på grunn av overspising.
    1. Ved å injisere mat ivann, sulten fisk svømme til fange artemia.
  5. Tørr fôring kan utføres ved hjelp av en Aquatic Eco-Systems / akvatiske habitater enkel våren-baserte fisk mat dispenser. Alternativt, kan tørr fôring også utføres ved hjelp av en enkel skje eller ved å skjære en plast dropper diagonalt med saks for å gi den et utseende av en liten skje.

3. Avl

  1. Sebrafisk starte oppdrett ved utbruddet av lys. Befruktede egg kan oppnås enten gjennom i tank avl eller parvis avl. Mens i-tank avl er mer arbeidskrevende effektiv og gjennomføres for vanlig embryo samling i vårt laboratorium, er parvise avl foretrukket når gener eller mutasjoner er til å bli vist fra hver enkelt fisk.
  2. For i-tank avl, montere in-tank oppdretter og slippe sakte inn i fisken tank etter utbruddet av lys. Alternativt, kan i-tank avl oppsett stå over natten i akvariet.
  3. Ltakfot i-tank oppdretter for rundt 15 minutter for å tillate fisken å pare før fjerner oppdretter fra tanken og samle egg.
  4. Parvise avl er vanligvis satt opp sent på ettermiddagen etter fôring.
  5. Monter avl tanken og fyll den med alderen system vann.
  6. Overfør en kvinnelig og en mannlig til motsatte sider av avl tanken. Hunner kan skilles fra menn på grunn av deres større buk. Hannene kan også skilles fra kvinner fordi de er slankere og mørkere i fargen enn hunnene. Videre menn har mer gul farge i gattfinnen forhold til kvinner (se figur 1). Når du er i tvil se etter ovipositor i kvinnelig sebrafisk (se figur 4).
  7. Fjern skillelinjen neste morgen kort etter utbruddet av lys. Tillat parring oppstår uforstyrret i 20 minutter eller inntil et tilstrekkelig antall embryos lagt på bunnen av tanken.
  8. Etter avl,fisken tilbake til sine tanker. Samle egg ved hjelp av en sil.
  9. Vask embryoene grundig med systemet vann.
  10. Overfør embryo til en petriskål ved å skylle silen med embryo medium, aka EM3 (NaCl, 13,7 mm; KCl, 0,54 mm, 4 MgSO, 1,0 mm, 2 CaCl, 1,3 mm, Na 2 4 HPO, 0,025 mm; KH 2 4 PO, 0,044 mm; 3 NaHCO, 4,2 mm).
  11. Embryo kan observeres under et mikroskop. Befruktede egg blir deretter skilt fra de unfertilized egg ved hjelp av en nål og en pipette (se Figur 3).

4. Heving av larver

  1. Befruktede egg er holdt i en inkubator (~ 28,5 ° C) i 72 timer inntil larvene blir klekket.
  2. Nå larvene er ute av chorion og svømming fritt de er klare til å overføre til en viktigste fisk tank. Larver må mates fra 5 dager etter befruktning (DPF) og blir holdt i embryo medium (sammensetning beskrevet iDel 3, 10) eller et system vann. Larver kan holdes i runde retter med ~ 50% eller mer med vann deri forandret på en daglig basis. Vannet endring bør omfatte fjerning døde eller syke larver og andre rusk.
  3. Overfør larvene forsiktig inn i en tank som inneholder en liten størrelse klaff (av rundt 300-400 mikron). Døde og syke larver bør fjernes og noen få milliliter vann bør tilsettes langsomt på en daglig basis.
  4. Etter 14 dager kan Larvekar henlegges inn i systemet, og leveres med en liten strøm av sykling vann (1-2 dråper per sekund). Ettersom larvene vokser, kan vannstrømmen økes. Forskjellige størrelser av ledeplater kan brukes avhengig av størrelsen av larvene (f.eks baffel størrelse 300-400, 500, 700-750, og 1000 mikron) og en normal plast baffel bør brukes for voksen fisk.
  5. Det tar vanligvis tre måneder for embryoene å utvikle seg til kjønnsmoden voksen.

Representative Results

Sebrafisk bolig og vedlikehold er enklere og billigere enn tradisjonelle gnager modeller. Flere tusen sebrafisk kan bli plassert i et lite laboratorium. Som et resultat av denne protokollen, vil forskerne kunne håndtere en sebrafisk anlegg som vil gi sunne forhold til sebrafisk. I tillegg vil følgende illustrasjoner bidra til å identifisere befruktede egg, voksen sebrafisk, og deres mat. En illustrasjon av en mannlig sebrafisk (figur 1A) og kvinnelige sebrafisk (figur 1B & 1C) er vist å hjelpe forskere å skille mellom en mannlig og en kvinnelig sebrafisk for avl formål Figur 2 viser en mikroskopisk syn på;. Artemia på 12X (Figur 2A), en enkelt saltlake reker på 90X (figur 2B), og en unfertilized artemia egg på 90X (figur 2C). Dette vil bidra til å forstå forskjellen mellom ubefruktet og gjødslet artemia for propeh fôring formål. Befruktede og unfertilized egg er vist i figur 3.. Figur 3A illustrerer en mikroskopisk syn på befruktede og unfertilized embryoer. Ubefruktet embryoer er generelt ugjennomsiktig og / eller med sprukket celle (r) inne chorion (svart pil) mens befruktede embryoer vises intakt og vokser til den neste cellen divisjon tilstand (for detaljert lesing av ulike stadier av sebrafisk embryo se 1). Høyere forstørrelse visning av et befruktet og en unfertilized egg er vist i Figur 3B og 3C hhv. Figur 4 viser en kvinnelig sebrafisk er ovipositor å hjelpe forskere å skille mellom en mannlig og en kvinnelig sebrafisk.

Flere kritiske problemer som kan oppstå i en sebrafisk laboratorium inkluderer blokkering av vannforsyning til individuell / alle tanker i bolig-systemet, dårlig vannkvalitet, og lekkasje i rør eller reservoar av sirkulerende system. I tillegg,problemer med å skaffe embryoer fra avl kan være en annen bekymring. Feilsøking av disse spørsmålene er omtalt nedenfor.

Figur 1
Figur 1. En illustrasjon på en mannlig sebrafisk (A) og kvinnelige sebrafisk (B, C).

Figur 2
Figur 2. En mikroskopisk syn artemia ved 12X (A), en enkelt saltlake reker på 90X (B), og en unfertilized artemia egg på 90X (C).

Figur 3
Figur 3. Mikroskopisk visning (16X) av befruktede og unfertilized egg, der bare to egg er ubefruktet, er ubefruktet egg markeres med sorte piler (A). Høyere forstørrelsevisning (90X) av et befruktet (B) og en unfertilized egg (C).

Figur 4
Figur 4. En kvinnelig sebrafisk er ovipositor (angitt med svart pil) illustrasjon.

Parameter Optimal rekkevidde
Alkalitet 50-150 mg / L CaCO 3
pH 6,8-7,5 (6,0 til 8,5 tolerert)
Temperatur 26 til 28,5 ° C
Hardhet 50-100 mg / L CaCO 3
Un-ionisert Ammoniakk <0,02 mg / l
Nitrat (NO 3 -) <50 mg / L
Nitritt (NO 2 -) <0,1 mg / L
Oppløst oksygen > 6,0 mg / l
Saltholdighet 0,5-1 g / L
Konduktivitet 300 -1500 mS

Tabell 2. Vannkvalitetsparametre. Vannkvalitetsparametre. Optimal utvalg av miljøparametre i sebrafisk akvariet 11.

Discussion

Sebrafisk stammer fra elven Ganges i Nord-India, og er blitt populært i forskning i både deres voksne og larvestadier 2, anmeldt av Spence et al. 3. Sebrafisk har flere fordeler fremfor andre dyremodeller som høy fruktbarhet, enkelt vedlikehold, optisk clearance av embryoer, rask embryoutvikling, og lave vedlikeholdskostnader. De er mottagelig for genetisk manipulasjon 6 og egnet for high-throughput narkotika screening 4,5. Deres befruktning er ekstern som er fordelaktig for deres bruk ved utviklingsmessige biologer. På grunn av disse gunstige egenskaper, er sebrafisk stadig mer populært i 7 genetikk, farmakologisk 8, og atferdsforskning 9,10. Det er en rekke utfordringer til å opprettholde en sebrafisk anlegget og sebrafisk dyrehold å få embryoene. Heri, beskriver vi våre erfaringer og anbefalinger for å møte disse utfordringene og outline en protokoll for systemvedlikehold, fôring, avl og heving av larvene.

Systemvedlikehold

For å opprettholde sebrafisk i en sunn tilstand, er det viktig å gi dem med et rent miljø i et fungerende akvarium system. En viktig del av dette er i endring systemet filtrerer regelmessig slik at alle tankene får riktig vannmengde og rent vann. Det er viktig å unngå svikt i sykling vannforsyningen til hver tank på grunn av blokkerte systemet rør. Rørene kan rengjøres med en høyere enn normalt trykk og vannmengde hvis blokkering oppstår. Ideelt, bør 10% av systemets vannet byttes daglig for å opprettholde god vannkvalitet. Alternativt kan vann erstattes mens endre Canister eller kullfilter. Dette sikrer at smuss avsatt i rørene som forbinder disse filtrene er fjernet. Kvaliteten på vannet bør kontrolleres med jevne mellomrom. Parametre som alkalitet, pH, Temperature, hardhet, ammoniakk, oppløst oksygen, salinitet og ledningsevne bør betraktes som viktige faktorer representerer kvaliteten på systemet vann (se tabell 2 for detaljer). I det minste nitrat, pH og temperatur overvåkes jevnlig for å sikre god vannkvalitet for boliger sebrafisk. Ideell nitrat (NO 3 -) nivåene er <50 mg / L 11, hvis høy disse nivåene kan reduseres ved å erstatte vannet i sirkulerende system med fersk systemvannet. Noen ganger trenger filtrene ikke passer godt og lekke så det anbefales å sjekke for eventuelle lekkasjer etter et filter endring. Hvis vannstrømmen fra de viktigste reservoaret er blokkert enten etter endring av vannpumpe eller endre et filter, kan vannstrømmen gjenopprettes ved enten å løsne eller fjerne filteret i noen sekunder for å slippe noen vakuum blir generert i rørene. Den nødvendige tid for å endre filtre kan variere avhengig av forskjellige faktorer som for eksempel total biologisk belastning on systemet, renslighet av andre filtre, og skitt avsatt i rørene. Derfor bør filtre umiddelbart endres hvis de dukker opp skitne, eller hvis alle tankene ikke får riktig vannforsyning. Det anbefales også at fisken netto rengjøres med 70% etanol, og skylles i vann for å rense det, og lov til å tørke før de blir gjenbrukt. Tørking sikrer fordampning av etanol som ellers er giftig for fisk.

De fleste av de sebrafisk systemer bruker de-klorerte vann, men noen systemer bruker deionisert vann. Det er viktig å holde ledningsevnen av systemet vann mellom 300 og ~ 1500 mS som dette reduserer energien fisken trenger for å opprettholde kroppens salter. Derfor kan sebrafisk ikke holdes i avionisert vann med mindre salter tilsettes for å opprettholde de optimale ledningsevne nivåer. Det er en risiko for mulige høye kobberkonsentrasjoner i systemet vann hvis vann er brukt fordi kullfilteret ikke fjerner kobber. Derfor, uSers bør se etter kobberkonsentrasjoner og unngå kobberrør der det er mulig.

Fôring

Sebrafisk skal aldri overfed, da dette kan øke nitrat i vannet, muligens påvirker deres avl 11, eller levedyktighet, som noen fisk kan dø på grunn av overspising. Vi anbefaler å gi noe mer mat i løpet av et fôring enn en tank av fisk kan fullføre innen 10 min. Det er svært viktig å fjerne salt fra artemia før du mater dem til sebrafisk som overflødig salt konsentrasjon forårsaker død. Hvis flere sebrafisk egg er nødvendig, kan fisken fôres tre ganger om dagen. Rengjøring av oppdretter akvarier daglig forbedrer også nivåer av eggproduksjon.

Når fôring på akvatiske habitater systemene vi vanligvis slå av vannpumpen og luftpumpe slik at fisken til å spise maten i 10 min. Dette reduserer mengden av mat som er vasket i filtrene. Men må brukerne være forsiktig med å remEmber å slå på disse pumpene igjen etterpå.

Avl

Sebrafisk er vanligvis på optimal avl tilstand mellom ~ 3 og 18 måneders alder. Parvise avl bør ikke utføres i to påfølgende dager 11, men kan i-tank avl utføres daglig som en tank kan holde mange fisk som reduserer sjansen for samme par fisk blir avlet for to dager på rad. Avl bør foretas med jevne mellomrom, selv om eggene ikke kreves. Denne prosessen vil sikre avl syklus av fisken opprettholdes. Det anbefales at det er flere kvinner enn menn i en avl oppsett. Mann sebrafisk endre sine kvinnelige partnere på en daglig basis 12 som ytterligere støtter denne anbefalingen. Dessuten kan du innenfor vårt laboratorium i utgangspunktet opplevde vi problemer med avl, men ved hjelp av flere kvinner enn menn i avl set-up bidro til å løse problemet. Dessuten, fôring med høy protein content kosthold og artemia 2-3 ganger om dagen, blanding fisk fra forskjellige tanker (fra forskjellige foreldre), opprettholde temperaturen i avl oppsett mellom 27 og 28 ° C, og klemme magen til hunner med blokkerte ovarieceller rør bruker mild massasje ytterligere forbedret eggproduksjon. Vi anbefaler å holde en oversikt over fisk linjer / opprinnelse å unngå i-avl mellom søsken. Dette ytterligere forbedrer embryo produksjon. Holde en oversikt over antall embryoer lagt av fisk fra hver tank er også anbefalt. Dette hjelper med å holde orden på de beste avl akvarier og tar tiltak for å bedre avl i fisken ikke legge egg.

Heving av larver

Fôring av larver bør starte fra 5 DPF (dager etter befruktning). Young larver kan mates med tørr mat av ~ 100 mikron i størrelse (f.eks ZM100) eller levende mat som paramecium og rotatorier (som stimulerer vekst). Maten størrelse kan sakte økestil 200 mikrometer (f.eks ZM200) eller 300/400 mikron (f.eks ZM300). En populasjon av voksen fisk bør være rundt 6-7 fisk per liter vann. Denne praksisen er anbefalt for bedre vedlikehold av BOD (biologisk oksygenforbruk) til tankene.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Forfatterne ønsker å takke Tammy Esmaili for hennes assistanse i forvaltningen av laboratoriet forbruksvarer. AA er mottaker av en PhD stipend fra Centre of Excellence for Alzheimers Disease Research og omsorgsdepartementet, School of Medical Sciences, Edith Cowan University. MC får PhD finansiering støtte fra Rotary Club, Perth. AM, er GV, KT, og RNM finansiert av McCusker Alzheimers Research Foundation.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Zebrafish circulating system Aquatic Habitats, USA AHAB stand-alone, bench-top systems
Sodium Bicarbonate Sigma Aldrich S6297
Fish food dispenser/Dry food feeder Aquatic Habitats, USA AH19
Microscope Olympus SZX12
Dry Food ZM Fish food, UK ZM100, ZM200, ZM300
Brine shrimp eggs Salt Creek, Inc., USA Premium Grade
In-tank breeders Aquatic Habitats, USA ITSTS-A
Activated carbon Penn-Plax Pro-crab, USA PBC3MF
Breeding tanks Aquatic Habitats, USA SBTANK (1L)
Breeder Tank-2 (2L)
Red sea salt Red sea salt, USA Local pet store/
www.redseafish.com
Filters (Canister, filter pads, and UV) Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Siporax Media Aquatic Habitats, USA BF 820
Brine shrimp net Aquatic Habitats, USA BSN 1
Brine shrimp hatcher Aquatic Habitats, USA BS252
Baffles Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
  2. Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
  3. Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
  4. Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
  5. Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
  6. Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
  7. Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
  8. Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
  9. Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
  10. Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
  11. Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. 5th, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
  12. Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).

Comments

7 Comments

  1. zebra fish laboratory play an important role in the world.Zebra fish laboratory help us from the various method like cleaning water etc.It is very nice and informative sharing.For more detail.visit water tank Sydney

    Reply
    Posted by: micheal c.
    March 14, 2013 - 1:55 AM
  2. I would like further information about your feeding protocols for larval rearing. I am currently using rotifers then brine shrimp but know there are lots of ways to do it. Thanks.

    Reply
    Posted by: Edward F.
    April 24, 2013 - 12:33 PM
  3. Dear Edward,
    Please accept my apologies for the late reply. Yes, you are right, there are several other ways to feed zebrafish larvae. You can feed them with dry food of

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    May 28, 2013 - 7:02 AM
  4. Aquatic Habitats seems to have discontinued production of the manual fish feeder, AH19. Has anyone found an alternative vendor for a product that is similar?

    Reply
    Posted by: Anne W.
    October 19, 2015 - 1:21 PM
  5. With normal tanks and aeration systems (without sophisticated filters, flow through water supply and so..), how to main maintain zebra fish. Any suggestions for a small scale set up? how to improve the egg quality? (some articles say that it is mandatory, to only breed fish once in a week. Even after following that, eggs tend to die after budding stage)

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 12, 2016 - 6:13 AM
  6. Dear Niranjana, Please accept my apologies for the late reply. Are you still facing the same problem of eggs being dying after budding stage? If yes, can you please describe how they appears before they die? For example, is there any fungus growth in the petridish. How many eggs do you keep in a petridish?
    Thanks
    Kind Regards
    Avdesh

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    January 31, 2017 - 10:30 AM
  7. we regularly wash eggs, and maintain it in E3 medium (to prevent fungal contamination), though 80% of them die before hatching. Remaining 20 % survives for a month (till the yolk sac disappears).But, only 2 or 3 survives after that.

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 2, 2017 - 12:49 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics