Author Produced

Фототромботического ишемии: малоинвазивной и воспроизводимые фотохимические Кортикальная Модель Поражение исследований Мышь ход

JoVE Journal
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Фототромбоза является быстрым, минимально-инвазивной техники для стимулирования малого и четко обозначенной миокарда в областях, представляющих интерес в сильно воспроизводимым образом. Он особенно подходит для изучения клеточных и молекулярных ответов, лежащие в основе пластичности мозга у трансгенных мышей.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Labat-gest, V., Tomasi, S. Photothrombotic Ischemia: A Minimally Invasive and Reproducible Photochemical Cortical Lesion Model for Mouse Stroke Studies. J. Vis. Exp. (76), e50370, doi:10.3791/50370 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Фототромботического модель удара направлена ​​вызывать ишемическое повреждение в данной области коры посредством фото-активации ранее вводили светочувствительным красителем. После освещения, краситель активизируется и вырабатывает синглетного кислорода, который повреждает компоненты эндотелиальные клеточные мембраны с последующей агрегации тромбоцитов и образование тромбов, которые в конечном итоге определяет прерывание местного кровотока. Этот подход, первоначально предложенный Розенблюм и El-Саббан в 1977 году, был позже улучшена Уотсона в 1985 году в головном мозге крыс и установить основе текущей модели. Кроме того, повышение доступности линий трансгенных мышей также способствовало повышению интереса со фототромбоза модели. Вкратце, фоточувствительный краситель (Бенгальский Розовый) вводят внутрибрюшинно и поступает в кровь. При освещении источник холодного света, краска активируется и вызывает повреждение эндотелия с активацией тромбоцитов и тромбоз, в результате чего местныепрерывание кровотока. Источником света может быть применен на неповрежденную черепа без необходимости трепанации черепа, что позволяет таргетинга любой области коры интереса к воспроизводимым и неинвазивным способом. Затем мышь зашивается и позволил, чтобы проснуться. Оценки ишемического повреждения могут быть быстро достигнуто путем трифенил-тетразолия хлорида или крезиловый окрашивание фиолетовым. Этот метод вызывает инфаркт небольшого размера и строго определенной границы, которая является весьма выгодным для точной характеристики клеток или функциональных исследований. Кроме того, оно особенно подходит для изучения клеточных и молекулярных ответов, лежащие в основе пластичности мозга у трансгенных мышей.

Introduction

В начале 21 века, ишемического инсульта является разрушительным расстройство, которое представляет собой вторую причину долгосрочной инвалидности 1 и второй причиной смертности во всем мире, в котором инсульт приходится примерно 5,7 миллиона случаев смерти в 2004 году 2. Несмотря на многие усилия, которые были размещены, до сих пор нет эффективного лечения для улучшения функционального восстановления после инсульта. Животных моделях инсульта широко применяются в области инсульт исследований, поскольку они позволяют моделирование патофизиологии ишемического повреждения и проверки эффективности различных стратегий нейропротекторное в естественных условиях. Большинство из этих моделей целью вызвать обширный инфаркт путем прерывания (временно или постоянно) кровотока в средней мозговой артерии, тогда как другие модели были разработаны для изучения поражений небольшого размера в определенных областях, обычно двигателя и соматосенсорной коры. Однако, некоторые факторы могут способствовать для генерации переменногоertain степень изменчивости экспериментальных исследований инсульта, в том числе мыши штамм, используемый, возраста и пола животных, включенных в исследование, и, прежде всего, методика, принятая, чтобы побудить ишемического повреждения. Что касается последнего пункта, продолжительность и инвазивность хирургического вмешательства (то есть потребность в краниотомия), а также хирургических навыков, необходимых для оператора, чтобы надежно вызывать ишемическое поражение являются критическими детерминантами для успешного и объективной в естественных ход исследования .

Концепция фототромбоза изначально предложенный Розенблюм и Эль-Саббан в 1977 году 3 и стал известным его применением в головном мозге крыс Уотсон и др. в 1985 году 4, в которой техника была в значительной степени улучшены и заложил основы нынешней модели 3. - 6. Фототромботического подход стремится вызывать корковых миокарда через фото-активации светочувствительного красителя ранее поставленных в кровеносной системе, белыйICH вызывает локальное тромбоз сосудов в местах, подвергающихся воздействию света. Когда циркулирующей краситель освещается в соответствующей длины волны на холодный источник света, он высвобождает энергию молекул кислорода, что в свою очередь большое количество высоко реакционноспособные продукты синглетного кислорода. Эти промежуточные кислорода индуцировать эндотелиальные перекисное окисление клеточных мембран, что приводит к адгезии и агрегации тромбоцитов, и в конечном счете к образованию тромбов, которые определяют локального мозгового прерывание потока 7.

Фототромбоза является неканоническим ишемическая модель, которая не закрывает перерыв или только одной артерии как это обычно бывает в человеческой инсульта, но вызывает поражения в более поверхностные сосуды, что приводит к селективному нарушению кровотока в областях под воздействием света. По этой причине данный подход может быть пригодным для клеточных и молекулярных исследований корковой пластичности. Основным преимуществом этого метода состоит в его простоте исполнения.Кроме того, фототромбоза может быть легко выполнен примерно в сорока минутах на одно животное, в том числе двадцать минут ожидания (3 мин для анестезии; 1 мин брить головы, от 3 до 5 минут, чтобы разместить животных на стереотаксической аппарата; 2 мин, чтобы вычистить скальп с антисептическим раствором, сделать надрез и очистить череп; 2 до 4 мин поместить холодную волоконных световодов; 1 мин придать решению бенгальским розовым, 5 мин ожидания для внутрибрюшинного диффузии; 15 мин освещения и 5 мин до очистить рану и шовный животное). Кроме того, ни хирургического опыта не требуется выполнять эту технику, как поражение индуцируют с помощью простых освещения интактного черепа. В отличие от классических артериальной окклюзии, этот метод определяет селективной окклюзии мягкой мозговой оболочки и интрапаренхимальные микрососудов в зоне облучения и снижает вариабельность поражения как без залога судна не осталось поставлять кислород в целевом регионе.

Несмотря на свой особый характер,фототромботического акции пострадали жизненно важные механизмы, происходящие в мозгу инсульт. Аналогично артерии в человеческом инсульт, агрегацию тромбоцитов и образование сгустка определить прерывание потока крови в облученной области 7. Кроме того, эта модель также разделяет существенный воспалительные реакции, что и в средней мозговой артерии 8. Однако из-за хорошо разграниченная границ, полутени зоне, которая соответствует области частично сохранена обмена веществ, очень пониженной или несуществующим после фототромботического поражения. Это ясно граница может облегчить изучение клеточных ответов в ишемический или интактные области коры. Модель фототромбоза мышь является особенно подходящим для инсульта исследований в различных трансгенных животных. Действительно классических моделей не может поместиться на все штаммы и долгий период исследований в C57BL / 6 линий мышей сообщили о высокой смертности, которые могут вызвать смещение 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Предварительно хирургии

  1. Взвесить Бенгальский Розовый в 1,5 мл пробирку и не растворяется в стерильном солевом растворе до достижения конечной концентрации 15 мг / мл. Фильтр стерилизуют через 0,2 мкм фильтр и хранить его в темном месте при комнатной температуре до двух месяцев.
  2. Стерилизовать всех хирургических инструментов в автоклаве. Хирургической области следует продезинфицировать менее чем за один час до начала операции.
  3. Запишите вес тела мыши, чтобы корректировать дозу бенгальским розовым, который будет введен. Мы вводили 10 мкл / г веса животного в женских мышей CD1 12 недель в настоящем протоколе. Количество Бенгальский Розовый необходимых для получения желаемого корковых размер повреждения могут быть легко определены в отдельный набор предварительных экспериментах путем тестирования различных дозах (обычно 2 мкл / г, 5 мкл / г или 10 мкл / г веса тела). Следует отметить, что количество Бенгальский Розовый который будет введен в большой степени зависит от условий эксперимента, в частности, тип источника светаиспользоваться и продолжительности воздействия света. В настоящем исследовании, 10 мкл / г (150 мкг / г) дозы было обнаружено, что необходимо для индукции фототромбоза при экспонировании свету в течение 15 мин, тогда как другие группы сообщили, что либо 50 мкг / г 6,8 до 100 мкг / г 10 внутрибрюшинной инъекции было достаточно для индукции фототромботического поражения.

2. Анестезия процедуры

  1. Обезболить мышей с изофлуран в прозрачной камере индукции (3,5-4% для индукции, 1,5-2% для поддержания) в 50% (объем / объем) oxygen/50% (об / об), закись азота газовой смеси. Газообразный наркоз позволяет быстро пробуждения из животных, и уровень анестезии газа может быть легко отрегулирована. Кроме того, мыши могут быть также анестезировали кетамин-ксилазином смеси.
  2. При глубокой анестезии достигается, удалите наркозом животного из индукции камеры, поместите его в стереотаксической рамы и поддержание анестезии с использованием маски. Отрегулируйте isofluraNE дозы для достижения адекватного уровня анестезии. Мониторинг частоты дыхания в течение всей процедуры и убедиться, что она постоянна (40 - 60 вдохов в минуту).
  3. Использование палец пинчи для того, чтобы обеспечить животное анестезировали глубоко.
  4. Применение глазной мази, для того, чтобы предотвратить сухость глаз.
  5. Осторожно вставьте ректальный зонд для контроля температуры в течение хирургических операций. Установите соответствующими ответными контролируемой грелку для поддержания температуры тела мыши при 37 ± 0,5 ° С.

3. Хирургия для освещения целевой области

  1. Бритье головы мыши с электрической бритвой.
  2. Надежно закрепите за голову и вставить в ухо баров внешнего слухового прохода. Будьте осторожны, чтобы не повредить барабанные перепонки.
  3. Дезинфекции кожи на поверхности с переменным мазков из 70% этанола и бетадин использованием ватные тампоны.
  4. Используйте скальпель, чтобы сделать надрез по средней линии от глаз LeVEL вниз к шее. Приложите кожу преднатяжителями держать черепа подвергаются.
  5. Осторожно отвести надкостницей к краям черепа скальпелем и пусть поверхности черепа высушить с использованием стерильных ватных тампонов. Определить брегмы и лямбда. Поместите стакан микропипетки на темени, как опорная точка, затем переместить его в координаты вашего региона интереса. Интересующей области выбраны для этой статьи примерно резкой форме, сконцентрированные приблизительно 2 мм сбоку от темени, и площадью около 30 мм 2, которая включает в себя большую часть сенсомоторной коры в соответствии с атлас мозга мыши Франклином и Paxinos 11.
  6. Отметьте положение интерес с ориентирами и положить оптического волокна в тесном контакте с поверхности черепа, чтобы избежать рассеяния света, но обратите внимание, чтобы не оказывать на него давление. Освещенной области может быть ограничено путем применения на череп маска с малой апертурой или колпачок на конце оптического волокна графического интерфейсаде.

4. Бенгальским розовым внедрения и активации

  1. Загрузите решение Бенгальский Розовый в 1 мл шприц и рассчитать количество в виде инъекций в соответствии с дозой 10 мкл / г веса тела.
  2. Перейдите к медленному внутрибрюшинного введения.
  3. Пусть красителя диффузные и попадает в кровь. Через 5 мин включить Иллюминатор холодного света. Избегайте освещения животное любым другим источником света. Мы использовали волоконно-оптического осветителя 150 Вт интенсивности.
  4. Через 15 мин освещения, стоп-экспозиции и сшивать раны. Через пять минут освещения уже производят миокарда и 10 мин, вероятно, достаточных для получения максимального эффекта 12. Для того чтобы минимизировать изменчивость, мы решили осветить в течение 15 мин.

5. Шовный

  1. Снимите кожу преднатяжителями и применять стерильный физиологический раствор, чтобы избежать обезвоживания.
  2. Закрыть рану использованием Режущая NeedlЕ и шелковые или нейлоновые нити шва.
  3. Прерывание обезболивание родов, осторожно удалите мышь от стереотаксический аппарат и положил его на предварительно нагретой грелку, пока она не полностью проснулся, а затем вернуть его в клетку. Температура тела следует тщательно контролировать во всех процедурах ограничить изменчивость в инфаркт расширения. В соответствии с концентрацией и путь введения, бенгальский розовый еще можно обнаружить в крови в течение нескольких часов после инъекции 13. Предпочитаю отопления одеяло, чтобы потепление лампы, чтобы избежать возможных вторичных повреждений (бенгальским розовым длины волны поглощения находится в зеленой части спектра).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Этот протокол будет производить корковое поражение, что уже видно на вскрытие коре невооруженным глазом (фиг.1А-1С). Фототромботического поражение развивается в поверхностных и глубоких слоях коры, в которой ткань является достаточно прозрачной, чтобы фото-активации бенгальский розовый. Измерение степени инфаркта мозга может быть выполнена быстро гистологического окрашивания трифенилсвинца тетразолием хлорид (ТТК) на свежей ткани или крезиловым фиолетовым после фиксации в 4% параформальдегида (PFA). До инкубации ТТК, недавно расчлененного мозга расположена в мозге резки и подразделяются на 1 мм толщины ломтиков (рис. 1в). TTC неповрежденными этикетками ткани в то время как красные инфаркта регионе выглядит бледным, что позволяет точное измерение зоны инфаркта (рис. 1D-1E). Зону неполного ишемии определяется как полутени очень пониженной или несуществующим в зависимости от размера поражения.

Аналогично, крезилового окрашивание фиолетового позволяет идентифицировать неокрашенных инфаркта областях по сравнению с пурпурно-окрашенными окружающие ткани. Реактивной пролиферации и клеточной инфильтрации (что происходит в течение первой недели после поражения) может быть также оценена (фиг. 2A1-2A2), а также появление глиальных шрам (фиг. 2B1, 2B2). Отрицательный контроль осуществляется посредством выполнения этой же операции и краситель инъекции, но без воздействия холодного источника света. Поражение воспроизводимые по размеру и расположению в различные моменты времени после повреждения (Фиг.3А-3В). Зона инфаркта обычно достигает максимального размера на 4 до 6 ч после инъекции бенгальским розовым 14, а затем быстро снижается от 2 дней до 4 дней после фототромбоза. Облучение происходит в более поверхностных слоев, но крупных сосудов в глубоких слоях коры также может быть окклюзии из-заСжатие спровоцированы поражением 7. Важно исследовать воспроизводимость поражения до начала лечения, так как распределение микрососудов мозга мягкой мозговой оболочки может варьироваться от животных разного возраста или деформации.

Рисунок 1
Рисунок 1. Макроскопические появление photothrombotical поражения в мозге мышей CD1 4 дня после фототромбоза. AB. Боковые и фронтальной. Поверхностный миокарда (головки стрелок) показан в виде белой области, видимых невооруженным глазом. С. мозга позиционируется в мозг резки и секционные быстро в 1 мм разделах. DF. Измерение степени церебрального инфаркта может быть достигнуто путем окрашивания ТТС . Некротических тканей в тромботические поражения является характертеризуется отсутствие окрашивания. Корональных ломтики мозга показано на AC представлены в ростральнее хвостового расширение из D в F.

Рисунок 2
Рисунок 2. Представитель временной эволюции фототромботического повреждений. Коронарные срезы взрослой мыши C57BL / 6 мозга окрашивали крезиловым фиолетовым. A1, A2. 7 дней после травмы большое число клеток собираются в инфаркт границы. B1, B2. В 30 лет объем повреждения сильно зауженной и глиальных шрам формирования. A2 и B2 высоким увеличением A1 и B1 соответственно. Масштабные линейки: A1, B1: 1 мм; A2 B2: 0,5 мм.

Рисунок 3
Рисунок 3. Макроскопические вид головного мозга через 2, 4 и 16 дней после фототромбоза. А. Микрофотографии PFA-перфузии мозга, подготовленной для дальнейшего иммуногистохимического анализа. Зоны инфаркта выделен (пунктирная линия). B. Сравнение площадь поверхности на 2, 4 и 16 дней после повреждения. п = 4 в каждой группе. * Р <0,05 (Стьюдента-тест).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Модификации и замены

Из-за своего пика поглощения при 562 нм, зеленый лазерный луч из отфильтрованного ксеноновой дуговой лампы был первоначально выбран для облучения фоточувствительных бенгальским розовым. Хотя лазер-опосредованного возбуждения еще использовался recently5, она может быть заменена лампа холодного света, которые также обеспечивают красителя возбуждения 10,15. Холодный свет оптических волокон легче манипулировать и дешевле, чем лазерные источники. Тем не менее, следует отметить, что лазеры обычно используются для против отдельных артериол поверхности после краниотомия для в естественных условиях сосуд конкретных свертывания 10.

Доставка чувствительной краситель обычно осуществляется путем хвостовой вены инъекций, который требует определенной подготовки для получения однородной и воспроизводимость результатов. В противоположность этому, внутрибрюшинной инъекции легче выполнять и Бенгальский Розовый обнаруживается в крови через несколько минут после 13. Эффективное photothrombosis может быть достигнуто путем возбуждения красителя 5 мин после внутрибрюшинного введения 8, однако высокое внутрибрюшинной дозы Бенгальский Розовый крыс показали, что плазменная концентрация красителя продолжают расти даже 60 мин после приема 13. Заряженные внутривенной инъекции Бенгальский Розовый может повысить воспроизводимость поражение 13, однако этот способ введения могут быть связаны с гипотензией в случае инфузии выполняется слишком быстро (<1,5 мин) или при высокой концентрации красителя 5. Для избежания колебания артериального давления, другие фоточувствительные веществ, таких как эритрозин В, может быть использован для получения окклюзии сосудов, однако эта молекула считается менее эффективным, чем Бенгальский Розовый на тот же диапазон концентраций 5.

Критические шаги

Различные факторы влияют на размер повреждения и глубину, такие как концентрация чувствительный краситель, задержка между краситель Injectiи на освещенность, интенсивность источника света, диаметр просвещенного поверхность, продолжительность воздействия и температуры тела во время и после операции. Угол источник света на черепе также может влиять на форму инфаркта. Серии предварительных экспериментов должны проводиться проверки повторяемости и определить минимальное количество красителя и времени облучения, которые производят поражения избирательно влияющие целевой области и / или получить значимые поведенческие дефицита.

Ограничения техники

Этот метод был разработан для того, чтобы имитировать человека инсульта, вызывая агрегацию тромбоцитов, как это наблюдалось во время церебральной ишемии 4. Однако фототромботического повреждения незначительно отличается от человека инсульт. Прежде всего, тромбоз срабатывает в большое количество сосудов в освещенной области, в то время как инсульт, как правило, вызвано прерывание потока крови в пределах одной артерии терминала. КакСледовательно, некоторые области мозга, чьи метаболизм только частично поддерживается артерии проходит прерывание кровотока первоначально меньшей степени, поскольку они могут получать кровоснабжение обеспечение артерий и не подвергаются некротической гибели клетки. В то наоборот четко определенных границ производства фототромбоза результаты в очень ограниченном полутени, то есть основная цель после ишемии нейропротекторы. Кроме того, в подгруппе пациентов, перенесших инсульт, реперфузии происходит спонтанно и может вызвать вторичные повреждения (в том числе реперфузионных повреждений). Для изучения этого конкретного аспекта ишемии, переходные модели окклюзии являются более подходящими.

Структура миокарда сама показывает некоторые особенности, которые отличаются от человека инсульт. МРТ одновременного развития ишемического миокарда и вазогенного отека в больших фототромботического поражения в то время как развитие ишемического миокарда преобладает над вазогенного отека ХумаN 16 хода. С другой стороны, фототромбоза может быть недостаточно для изучения антитромботического агента исследований в связи с тем, что фототромботического миокарда происходит также после блокирования тромбоцитов или ингибировании внутренний путь коагуляции 17. Действительно было высказано предположение, что в особых условиях тромбоцитов свертывания не было необходимости фототромботического окклюзии, в котором нарушение целостности эндотелиального бы вызвать отек и связанные с ними сжатия окружающего сосудов. Кроме того, в том же исследовании МРТ анализ не выявил модификации размеров инфаркта после блокады функций тромбоцитов или истощение тромбоциты 17.

Значение по отношению к существующим методам

Многочисленные хорошо стандартизированной модели постоянными, временными, локальной и глобальной ишемии, механически или химически индуцированных, были разработаны в грызунах, чтобы точно имитировать человеческие патофизиологии инсульта и развитр нейропротекторные новых стратегий. Фототромбоза как представленные здесь модель непрерывного фокальной ишемии, которая постоянно вызывает инсульт травмы нужного размера в любом корковых или подкорковых сайте в очень воспроизводимым и минимально инвазивной образом. Эта модель показывает высокую выживаемость, что эта достигла 100% в наших экспериментах (25 животных), а более обширные исследования получили 98,4% 18. Фототромботического поражения могут быть настроены для того, чтобы повлиять на точную функцию в соответствии с целевой области и поведенческие рекуперации может быть оценена многократными испытаниями 6,19. Кроме того, этот подход не много времени, несколько дорогих и может быть быстро узнал, как это не технически сложный в отличие от других моделей, в том числе нити модели. Кроме того, окклюзии сосудов достигается путем индуцирования местного образование тромбов, которые структурно подобны тем, которые наблюдаются в человеческом инсульта. Тем не менее, фототромботического подхода была также адаптирована для прoducing окклюзии средней мозговой артерии 20. Модель кольцо поражение позже разработаны для того, чтобы получить больший полутени. Он состоит из освещения под форму круга, в центре которого кортикальной области жизнеспособной ткани окружен круговой поврежденной ткани и делиться биохимические и молекулярные характеристики ишемической полутени 21,22. Варианты техники, также доступны для выполнения хода в развивающемся мозге 23 или в подкорковых ткани 24.

В заключение фототромбоза является простым для выполнения ишемической модели с высокой воспроизводимостью. Кроме того, она подходит для ряда экспериментальных исследований инсульта, в частности, для оценки корковой пластичности в ответ на повреждение головного мозга, как на клеточном и молекулярном уровне.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgments

Мы благодарим Annalisa Buffo для предложений проницательный и комментарии, и Маурицио Grassano, Марина Boido и Эрмира Pajaj для стрельбы. Эта работа финансировалась FP7-MC-214 003-2 (Мария Кюри Начальная подготовка сети AXREGEN) и Compagnia ди Сан-Паулу, gliarep проекта.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Solutions and chemicals
Rose Bengal Sigma, Italy 330000
Isoflurane Vet Merial 103120022
Betadine Asta Medica
Paraformaldehyde Sigma-Aldrich 158127
Surgical material and equipment
Fluosorber Filter Havard apparatus 340415
150W fiber optic illuminator Photonic PL3000
Temperature Controller for Plate TCAT-2DF Havard apparatus 727561
Stereotaxic Instrument Stoelting 51950
Operating microscope Takagi OM8
Heating pad
Oxygen and nitrogen gas
Surgery Tools World precision instrument Optic fiber taps and mask are custom-made

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. Global and regional burden of disease and risk factors. Lancet. 367, 1747-1757 (2001).
  2. Mathers, C. D., Boerma, T., Ma Fat, D. Global and regional causes of death. Br. Med. Bull. 92, 7-32 (2009).
  3. Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents. Circ. Res. 40, 320-328 (1977).
  4. Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Ann. Neurol. 17, 497-504 (1985).
  5. Bergeron, M. Inducing photochemical cortical lesions in rat brain. Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9, Unit 9 16 (2003).
  6. Lee, J. K., et al. Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model. Surg. Neurol. 67, 620-625 (2007).
  7. Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations. Acta Neuropathol. 72, 315-325 (1987).
  8. Schroeter, M., Jander, S., Stoll, G. Non-invasive induction of focal cerebral ischemia in mice by photothrombosis of cortical microvessels: characterization of inflammatory responses. J. Neurosci. Methods. 117, 43-49 (2002).
  9. Kitagawa, K., et al. Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery. J. Cereb. Blood Flow Metab. 18, 570-579 (1998).
  10. Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope. J. Neurosci. Methods. 170, 35-44 (2008).
  11. Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. 1st, Academic Press. New York. (1997).
  12. Piao, M. S., Lee, J. K., Jang, J. W., Kim, S. H., Kim, H. S. A mouse model of photochemically induced spinal cord injury. J. Korean Neurosurg. Soc. 46, 479-483 (2009).
  13. Silva, V. M., Corson, N., Elder, A., Oberdorster, G. The rat ear vein model for investigating in vivo thrombogenicity of ultrafine particles (UFP). Toxicol. Sci. 85, 983-989 (2005).
  14. Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. Photochemically induced spinal cord injury in the rat. Brain Res. 367, 296-300 (1986).
  15. Van Reempts, J., Van Deuren, B., Van de Ven, M., Cornelissen, F., Borgers, M. Flunarizine reduces cerebral infarct size after photochemically induced thrombosis in spontaneously hypertensive rats. Stroke. 18, 1113-1119 (1987).
  16. Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx. 2, 396-409 (2005).
  17. Kleinschnitz, C., et al. Blocking of platelets or intrinsic coagulation pathway-driven thrombosis does not prevent cerebral infarctions induced by photothrombosis. Stroke. 39, 1262-1268 (2008).
  18. Porritt, M. J., et al. Photothrombosis-induced infarction of the mouse cerebral cortex is not affected by the Nrf2-activator sulforaphane. PLoS One. 7, e41090 (2012).
  19. Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice. J. Neurosci Methods. 129, 87-93 (2003).
  20. Markgraf, C. G., et al. Comparative histopathologic consequences of photothrombotic occlusion of the distal middle cerebral artery in Sprague-Dawley and Wistar rats. Stroke. 24, 286-292 (1993).
  21. Wester, P., Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D. A photothrombotic 'ring' model of rat stroke-in-evolution displaying putative penumbral inversion. Stroke. 26, 444-450 (1995).
  22. Hu, X., Wester, P., Brannstrom, T., Watson, B. D., Gu, W. Progressive and reproducible focal cortical ischemia with or without late spontaneous reperfusion generated by a ring-shaped, laser-driven photothrombotic lesion in rats. Brain Res. Brain Res. Protoc. 7, 76-85 (2001).
  23. Maxwell, K. A., Dyck, R. H. Induction of reproducible focal ischemic lesions in neonatal mice by photothrombosis. Dev. Neurosci. 27, 121-126 (2005).
  24. Kuroiwa, T., et al. Development of a rat model of photothrombotic ischemia and infarction within the caudoputamen. Stroke. 40, 248-253 (2009).

Comments

1 Comment

  1. Please can you confirm whether this method involves accidental burning of the skull in mice? When we tested a "cold light source" involving a 150W halogen bulb in rats, we find the skull temperature reaches 100 deg C. Accordingly, we have switched to a method of illumination using a LED light source and saline cooling of the skull. We find this keeps the skull temperature to physiological levels.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 7, 2018 - 4:56 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.

Usage Statistics