Двухфотонное Кальций изображений на мышах навигации среда виртуальной реальности

* These authors contributed equally
Behavior

Your institution must subscribe to JoVE's Behavior section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Здесь мы опишем экспериментальные процедуры, связанные с двухфотонного визуализации мыши коры во время поведения в виртуальной среде реальность.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Leinweber, M., Zmarz, P., Buchmann, P., Argast, P., Hübener, M., Bonhoeffer, T., Keller, G. B. Two-photon Calcium Imaging in Mice Navigating a Virtual Reality Environment. J. Vis. Exp. (84), e50885, doi:10.3791/50885 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

В последние годы изображений двухфотонного стал бесценным инструментом в области неврологии, так как он позволяет хронической измерения активности генетически определенных клеток в процессе поведения 1-6. Здесь мы опишем методы для выполнения визуализации двухфотонного в мыши коры, пока животное переходит виртуальную среду реальность. Мы ориентируемся на аспектах экспериментальных процедур, которые являются ключевыми для визуализации в ведет себя животное в ярко освещенном виртуальной среде. Ключевые проблемы, которые возникают в этой экспериментальной установки, что мы здесь адрес являются: минимизация движения, связанные артефакты мозга, минимизируя проникновение света от системы виртуальной реальности проекции, и сведение к минимуму лазерный индуцированного повреждения тканей. Мы также предоставляем образец программного обеспечения для управления виртуальной средой реальность и сделать отслеживание зрачка. С помощью этих процедур и ресурсов должно быть возможно преобразовать обычный двухфотонного микроскопа для использования в себя мышей.

Introduction

Двухфотонное визуализации показателей кальция (генетически закодированных как GCaMP5 7 или R-GECO 8 или синтетических красителей, как НГБ или Fluo4) стала мощным методом измерения нейронной активности в себя мышам 1-6. Это позволяет одновременное измерение активности сотен клеток в почти один потенциала действия разрешения, до примерно 800 мкм ниже поверхности мозга 9,10. Кроме того, использование генетически кодируемых показателей кальция (GECIs) нейронную активность может быть измерена хронически 5,11,12, и в генетически определенных типов клеток 13. Вместе эти методы обеспечивают степень временным и пространственным разрешением, что открыть множество новых возможностей в изучении нейронов вычислений в естественных условиях.

Хирургическое вмешательство необходимо разоблачить и маркировать мозг мыши для работы с изображениями. Клетки трансфицировали, как правило, с использованием рекомбинантного адено-ассоциированный Vir нам (AAV) система для Geci доставки и черепной окна имплантируется в течение месте инъекции, чтобы получить оптический доступ к мозгу. Глава бар затем прикрепляется к черепу для головы фиксации под двухфотонного микроскопа. На разработку и внедрение этих шагов имеет решающее значение, поскольку большинство проблем с активного воображения возникают из нестабильности в подготовке. В идеале процедура, описанная здесь должна позволять хронической визуализации до нескольких месяцев после операции.

Чтобы включить визуально руководствуясь поведение во время съемки двухфотонного, глава фиксированной мышь сидит на воздушной поддержке сферической беговой дорожке, которая может использоваться для перемещения виртуальной среды реальность. Передвижение мыши на беговой дорожке соединен с движением в виртуальной среде, которая отображается на тороидальной экране, окружающем 14,15 мыши. Поведенческие переменные, такие как передвижения, визуальный стимул, и положение зрачка могут быть записаны 6.

т "> Описаны процедуры, связанные с хронической двухфотонного изображений на мышах, исследуя виртуальную среду реалити Ключевые моменты рассмотрены следующие:. сокращение артефактов движения, сокращение светового утечки, максимизация количества одновременно записанных клеток, и минимизация повреждение фото. Мы также представить подробную информацию о настройке воздуха поддержке беговую дорожку, отслеживание зрачка, и виртуальную среду реальность. Процедуры, описанные здесь, могут использоваться для работы с изображениями флуоресцентно меченных клеточных популяций в голове фиксированных мышей в потенциально широкого спектра поведенческих парадигм .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все животные процедуры были утверждены и осуществляются в соответствии с руководящими принципами Департамента ветеринарии Кантона Базель-Штадт.

1. Аппаратное и программное обеспечение установки

  1. Двухфотонное установки сканирующий микроскоп:
    1. Используйте импульсный инфракрасный лазер в качестве источника освещения (широтно-импульсной <120 фс).
    2. Используйте сканирование головы, состоящую из 8 или 12 кГц резонансного сканера и стандартным гальванометра. Примечание: Это позволяет частотой кадров 40 или 60 Гц в 750 х 400 пикселей. Высокой частотой кадров имеет решающее значение для минимизации движения мозга индуцированных искажений изображения. Кроме того, быстро резонансные результаты сканирования с более высоким выходом сигнала и уменьшает фотообесцвечивания 16 и фототоксичность.
    3. Используйте пьезоэлектрическим высокоскоростной Z-степпер, чтобы последовательно времени приобретают чередующиеся изображения на нескольких глубинах Примечание:. Это необязательно и используется для повышения урожайности данных за счет частоты смены кадров.
    4. Используйте утраМеханические характеристики подавитель сократить лазерного воздействия на ткани. Регулировка ширины в зависимости от гашения амплитуды резонансного сканера. Примечание: В связи с синусоидальным характером пути сканирования резонансного сканера, лазерный луч движется сравнительно медленно сканирования точек оборотных. Для предотвращения повреждения ткани в этих оборотных точках, где лазерное облучение является величайшим, механический подавитель вводится в фокальной плоскости между сканирования и трубных линз, который останавливается лазерный луч.
    5. Для получения данных использовать высокоскоростную дигитайзер (800 МГц) в сочетании с массивом поля-программируемой вентильной (FPGA). Примечание: FPGA высокочастотные фильтры и баки сигнал ФЭУ в пикселях. Сочетание фильтр высоких частот на FPGA и эффективного фильтра нижних частот на результат усилителя ФЭУ в полосовой фильтр по центру примерно вокруг частотой повторения лазера (80 МГц). Образец FPGA код предоставляется в качестве дополнения.
  2. Воздушный поддержке установки беговой дорожке на основе дизайна Dombeck и коллег 2
    1. Подключите держатель мяч к линии подачи воздуха с помощью подачи воздуха трубу не менее 10 мм с внутренним диаметром. Максимально сечение держателя мяч входе подачи воздуха и поместите достаточное количество труб между основной подачи воздуха и держателя шарика. Примечание: Увеличение сечения и увеличение длины трубопроводов подачи воздуха снижает образование шума.
    2. Поставьте пенополистирола мяч (20 см в диаметре) в специально разработанная и 3D-печатных держателя шара.
    3. Если поведенческая парадигма требует только вперед (или назад) передвижения, ограничить движение мяча в горизонтальное (шаг) оси, вставив палец (например, 19 G иглы для подкожных инъекций) на стороне шара. Примечание: Обычно животные приспосабливаются к установка гораздо быстрее в этом пониженном парадигмы вращения.
    4. Движение трек шара, используя один или два оптических компьютерных мышейдля обнаружения движения вокруг двух или всех трех осей, соответственно. Примечание: В компьютерных мышей в идеале должны работать с инфракрасным диодом для наименьшего вмешательства в визуализации.
  3. Настройка виртуальной среды реальность
    1. Подготовьте виртуальную среду реальность Примечание:. A образец среды на основе Panda3D, свободно распространяемой игрового движка, предоставляется в качестве дополнения. Объектами виртуальной среде генерируются с использованием wings3d, с открытым исходным кодом 3D-моделирование. Типовая программа читает информацию о местоположении на карте сбора данных и переводит это в движение в виртуальной среде. Код также выполняет нелинейное преобразование, необходимое для окружающей среды, которые будут проецируется на тороидальной экране. Подробная конструкция тороидального экрана было описано в другом месте 14,17.
    2. Используйте светодиодные проекторы или светодиодной подсветкой компьютерные экраны для отображения виртуальной среды. Интегрировать стробирования CIRЗПИФ для быстрого мерцания светодиодов во время съемки. Примечание: врожденная проблема в двухфотонного визуализации во время визуальной стимуляции является свет утечка, происходящих из зрительной системы стимуляции, который может быть уменьшен путем экранирования цели. Тем не менее, свет утечка от зрительной системы стимуляции может быть полностью отменена путем синхронизации светоотдачи проектора к оборотных точек резонансной сканера (когда данные не собираются), как это делается со светодиодными аренах, используемых для визуальной стимуляции во время съемки в Drosophila 18. Это приводит к эффективной высокоскоростной чередованием визуальной стимуляции и сбора данных (см. Рисунок 2). Частота мерцания (24 кГц) на несколько порядков выше порога мерцания слияния, выше которой мерцание больше не воспринимается животного. Электрическая схема этой модификации с коммерческой светодиодный проектор показан на рисунке 3.
  4. ЩенокОтслеживание Ир
    1. Используйте видеокамеру на основе CMOS (30 кадров в секунду) для отслеживания положения ученик. Убедитесь в том, что камера не содержит инфракрасный фильтр блокировки Примечание:. Ученик виден высокой контрастностью во время записи из-за постороннего света от лазера возбуждения двухфотонного выходящего через глаз. Положение зрачка и диаметр добывается в реальном времени, используя пользовательский запрограммированные программного обеспечения на основе конструкции Sakatani и Иса 19.

2. Инъекция Индикатор Генетическая кальция и Window Implant

Инъекция индикатора кальция 20 и имплантации черепной окна 21 выполнены, как описано выше со следующими добавками:

  1. Введите вирус в интересующей области с использованием впрыска стеклянной пипетки, засыпанной вирусом решения и подключенный к системе впрыска давление. Отрегулируйте давление в зависимости от пипетки внутрипартийнойдиаметр, как правило, ок. 70-140 мбар, чтобы придать около 100 нл раствора вируса в течение 1-2 мин. Импульсы низкого объема впрыска, поставляемые на низкой частоте (0,05 сек импульсов с частотой 2 Гц) должны быть использованы в целях предотвращения переполнения вируса на пипетки во время инъекции. Примечание: В целях контроля за объемом впрыска, пипетка может быть отмечено в небольшой , равномерно распределенных длины (например, 0,5 мм) под стереомикроскопом. Смещение мениска между отметками могут быть использованы для оценки Вводимый объем.
  2. Несколько недель после инъекции это должно привести к болюса плотно меченых клеток с диаметром приблизительно 500 мкм. Эффективность Geci экспрессии в области, представляющей интерес, зависит от выбора Geci и комбинации промотора, а также инфекционного титра и серотипа рекомбинантного AAV используемого Примечание:. В качестве представительного примера, инъекция AAV2/1-EF1α-GCaMP5 с вирусная синицаэ из 8 х 10 12 GC / мл в первичной зрительной коры головного результатов мыши в удовлетворительном выражения в приблизительно две недели после инъекции (рис. 1).
  3. Бар голова не должна препятствовать поле зрения мыши, но должны быть достаточно жесткими, чтобы обеспечить стабильное изображение во время поведения. Обычно для этого требуется две точки присоединения по обе стороны от главного меню (см. Рисунок 1). Чтобы прочно прикрепить голову бар к черепу, убедитесь, чтобы максимизировать и высушите область подвергается черепа, где глава бар будет прикреплен. Кроме того, использование скальпель или шприц, поцарапать череп, чтобы создать поверхностные канавки таким образом, увеличивая площадь поверхности для приклеивания. Накройте кости клеем цианакрилат ткани перед установкой головки бар с зубным цементом.

3. Методика эксперимента

  1. От двух до трех недель после вирусной инъекции, проверить черепной окна имплантат для ясности и выражения под эпифлуоресценции освещение. Хорошо видны и резко определенные границы поверхностных кровеносных сосудов являются хорошим показателем, что окно имплантат подходит для работы с изображениями (см. рисунок 1).
  2. Измерение и регулировать мощность лазера до величины ниже 50 мВт на образце.
  3. Включите воздушного потока к сферической беговой дорожке.
  4. Для головы фиксации под микроскопом, кратко обезболить животное изофлураном, чтобы уменьшить напряжение. Место животное в изофлурана анестезии контейнер и не ждать, пока остановки животных перемещения (около 10 сек). Снимите животное и сразу голова исправить под микроскопом.
  5. Расположите систему визуального отображения как можно ближе к животному, чтобы по-прежнему позволяют для доступа к животному. Чем меньше визуальный контакт животное имеет с экспериментатором, меньше подвержены стрессу, животное будет на начальном этапе эксперимента.
  6. Убедитесь, что черепная окно имплантат от пыли и грязи. Чистый водойесли это необходимо.
  7. Применить четкое ультразвуковое гель как иммерсионной среды между черепной окна и водно-иммерсионного объектива. Это решает проблемы медленного ухудшения качества изображения за счет испарения воды или утечки и избавляет от необходимости монтировать конус на голове бар, чтобы удерживать воду. Примечание: Центрифуга гель перед использованием, чтобы удалить все пузырьки воздуха, и заботиться, чтобы не создавать никаких воздух пузыри во время нанесения геля. Воздушные пузырьки могут серьезно ухудшить качество изображения.
  8. Оберните часть черной лентой вокруг объективной и головной бар для защиты от света.
  9. Перемещение на арену виртуальной среде в конечное положение и настроить видео камеру для отслеживания зрачка.
  10. Установите лазерный подавитель, чтобы соответствовать амплитуду сканирования используется во время эксперимента.
  11. Начало записи данных.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Качество изображения в двухфотонного визуализации кальция клеточных популяций меченых с Geci во многом зависит от качества черепной окна имплантата. Две недели следующие Вирус инъекцию черепной окно должно проверяться для ясности. Там не должно быть грануляционной ткани или костного отрастание видно (рис. 1А). Кроме того, картина поверхностных кровеносных сосудов должны оставаться неизменными и границы сосудистой следует четкий. В то же время, выражение Geci также могут быть проверены. Боли меченых клеток должны быть четко видны в эпифлуоресцентной микроскопом (рис. 1В).

В идеале подготовка таких достаточно, что искажения двухфотонных изображений, вызванных передвижения мыши не видны на изображении после регистрации кадра (рис. 2) стабильная. Путь сканирования резонансного сканера синусоидальной в результате нелинейных искажений изображения. Во время ТуДанные rnaround очков не усваиваются из-за образа растяжения в этой части пути сканирования. Если источник света зрительной системы стимуляции, здесь светодиодов от проектора, правильно приурочен к точкам оборотных, свет утечка должна быть только кажущимся в это время (рис. 2). Частота мерцание источника света должен быть в два раза больше частоты развертки. Ключ к созданию этой работы являются быстрое нарастание и спада светодиодов и контролирующей электронной (рис. 3).

Рисунок 1
Рисунок 1. Вид сверху черепа окна в головном фиксированной мыши две недели после операции. (A) бар головка оптимизированы по весу и форме, чтобы увеличить стабильность поведения во время экспериментов с изображениями, при одновременном снижении нагрузки на животное. Тон голову бар изготовлен из алюминия и имеет толщину 1 мм. Шкала бар составляет 5 мм. (В) Epifluorescence образ выражения GCaMP5 после четырех инъекций (AAV2/1-EF1α-GCaMP5) приблизительно 80 нл. Глубина инъекции составляет приблизительно 400 мкм. Шкала бар составляет 1 мм. (C) Схемы головной бар. Все размеры в мм. Кликните здесь, чтобы посмотреть увеличенное изображение.

Рисунок 2
Рисунок 2. Улучшение сигнала к шуму за счет уменьшения света утечки. Светодиодный источник света в проекторе в виртуальной среде реалити синхронизируется с резонансной сканера, чтобы включить только во время сканирования периодов оборота, когда данные не записываются (оранжевый боРЭС). Лазерный подавитель был удален из микроскопа для этого примера, чтобы проиллюстрировать эффект света утечки в результате визуальной стимуляции. Изображение (в среднем 8 сек данных) было принято в мыши зрительной коры трансфицированной AAV2/1-EF1α-GCaMP5. Кликните здесь, чтобы посмотреть увеличенное изображение.

Рисунок 3
Рисунок 3. Принципиальная схема электроники используется мерцать обычный светодиодный проектор. Стробирования цепи приводится в действие входа TTL для синхронизации быстрый мерцание с резонансной сканера. С1: конденсатор 1nF; D1, D2: диоды 1N4148; INV1: Инвертор HEF40106 (1 из 6 используется); светодиод 1 - светодиод проектором; R1: резистор 47 Ω; R2: резистор 2,2 кОм, R3: повторноеSistor 100 Ω; Т1, Т5, Т6, Т7: транзисторы IF9321; T2: транзистор BC846; T3: транзисторных BC170; T4: транзистор BC856. Обратите внимание, что эта схема должна быть повторена для всех трех цветовых каналов (красный, зеленый, синий) от проектора. Нажмите сюда, чтобы посмотреть увеличенное изображение.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Ключ к успеху поведенческой изображений двухфотонного является стабильность препарата в двух направлениях:

  1. В течение суток после окна имплантации, воспалительные реакции из ткани может привести к усилению формирования грануляционной ткани и хряща, которые будут затруднять или даже предотвратить изображений.
  2. В ходе эксперимента мозг должен быть достаточно стабильным, чтобы предотвратить артефакты движения от развращает нейронной активности связано сигнала флуоресценции.

Чтобы сохранить воспалительный иммунный ответ к минимуму черепной окно имплантации операция должна быть проведена как можно быстрее и прямого повреждения мозга, следует избегать любой ценой. Первостепенное значение имеет для того, чтобы черепной окно имплантат остается герметичной на весь срок эксперимента, чтобы предотвратить воспаление.

Чтобы свести к минимуму движение мозга, связанные артефакты визуализации заботиться, чтобы не повредить илиудалить твердую мозговую оболочку во время операции. Оставшееся передвижение индуцированного движения мозг может быть исправлена, когда движение ограничено в плоскости, параллельной плоскости формирования изображений (х / у) плоскости. Максимально допустимое стандартное отклонение движения в х / у примерно 5 мкм. Для движения по оси это значение примерно 1 мкм, например, что степень движения меньше, чем предел разрешения микроскопа.

Низкая скорость резонансного сканера на сканирования точек путь оборотных может привести к лазерной индуцированной повреждения тканей. Чтобы предотвратить это, лазер может быть заблокирован на ремонты с использованием подавитель в телескопе сканирования. Если это подавитель установлен правильно и средний мощность лазера под цели поддерживают ниже 50 мВт, можно изображения в течение длительного периода времени, в течение нескольких дней, не вызывая никаких видимый лазерный ущерб. Альтернативный метод механического гашения лазера является использование быстро ячейка Поккельса, чтобы уменьшить мощность лазера на turnarouNDS. Этот метод, однако, имеет тот недостаток, что Поккельса клетки обычно ввести нежелательные искажения луча.

Способность головных фиксированной грызунов ориентироваться виртуальных сред позволило хронически населения изображения клеток в коре головного мозга мышей, выполняющих широкий спектр поведенческих задач 3,4,6,22. Однако, стоит отметить, что голова фиксация своей сути ограничивает поведение и передвижение на сферической беговой дорожке во многом не эквивалентных безудержного передвижения или нормального поведения.

В будущем, прочность подхода виртуальной визуализации реальность описанного здесь, вероятно, будет сочетание изображений кальция с целевой optogenetic стимуляции во время поведения. С этим можно было бы, чтобы оптически манипулировать пресинаптические клетки и изображения их пост-синаптические цели, контролируя результирующие изменения в поведении. Кроме того, как индикаторы кальция свободно диффундировать в CELл, это также можно измерить активность избирательно в субклеточных компартментах во время поведения. Из-за движения индуцированных движения мозга, такие записи были ограничены трудности получения стабильных записи.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.

Acknowledgments

Эта работа была поддержана Фондом Фридриха Miescher Института медико-биологических исследований, Общества Макса Планка, и науки программы по правам границ.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cover slips (diameter = 3-5 mm) Menzel window implant
InSight DeepSee laser Spectra-Physics microscope
12 kHz Resonance scanner Cambridge Technology G1-003-30026 microscope
Galvometer Cambridge Technology G6215H microscope
Digitizer National Instruments NI 5772 microscope
FPGA National Instruments PXIe 7965R microscope
Acquisition card National Instruments PCIe 6363 microscope
Emission filter 525/50 Semrock FF03-525/50-25 microscope
Piezo-electric z-drive Physikinstrumente P-726.1CD microscope
Controller for Piezo-electric drive Physikinstrumente E665 LVPZT microscope
Objective 16X, 0.8NA Nikon CFI75 microscope
Current amplifier Femto DHPCA-100 microscope
Photomultiplier tube Hamamatsu microscope
USB Camera without IR filter ImagingSource DMK22BUC03 pupil tracking
Objective 50 mm ImagingSource M5018-MP pupil tracking
Macro adapter rings ImagingSource LAexSet pupil tracking
Optical computer mouse Logitech G500 motion tracking
Styrofoam ball 20 cm e.g. idee-shop.de 08797.00.15 virtual environment
LED projector Samsung SP-F10M virtual environment
Acquisition card National Instruments NI 6009 virtual environment
Panda3D game engine www.panda3d.org virtual environment
Numpy library for Python www.scipy.org virtual environment
Scipy library for Python www.scipy.org virtual environment
NI-DAQmx driver National Instruments www.ni.com virtual environment
Ultrasound gel Dahlhausen 5701.0342.10 imaging

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Helmchen, F., Fee, M. S., Tank, D. W., Denk, W. A Miniature Head-Mounted Two-Photon MicroscopeHigh-Resolution Brain Imaging in Freely Moving Animals. Neuron. 31, (6), 903-912 (2001).
  2. Dombeck, D. A., Khabbaz, A. N., Collman, F., Adelman, T. L., Tank, D. W. Imaging large-scale neural activity with cellular resolution in awake, mobile mice. Neuron. 56, 43-57 (2007).
  3. Dombeck, D. A., Harvey, C. D., Tian, L., Looger, L. L., Tank, D. W. Functional imaging of hippocampal place cells at cellular resolution during virtual navigation. Nat. Neurosci. 13, (11), 1433-1440 (2010).
  4. Harvey, C. D., Coen, P., Tank, D. W. Choice-specific sequences in parietal cortex during a virtual-navigation decision task. Nature. 484, (7395), 62-68 (2012).
  5. Huber, D., Gutnisky, D. A. Multiple dynamic representations in the motor cortex during sensorimotor learning. Nature. 484, (7395), 473-478 (2012).
  6. Keller, G. B., Bonhoeffer, T., Hübener, M. Sensorimotor mismatch signals in primary visual cortex of the behaving mouse. Neuron. 74, (5), 809-815 (2012).
  7. Akerboom, J., Chen, T. -W. Optimization of a GCaMP Calcium Indicator for Neural Activity Imaging. J. Neurosci. 32, (40), 13819-13840 (2012).
  8. Zhao, Y., Araki, S. An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators. Science. 333, (6051), 1888-1891 (2011).
  9. Mittmann, W., Wallace, D. J. Two-photon calcium imaging of evoked activity from L5 somatosensory neurons in vivo. Nat. Neurosci. 14, (8), 1089-1893 (2011).
  10. Katona, G., Szalay, G. Fast two-photon in vivo imaging with three-dimensional random-access scanning in large tissue volumes. Nat. Methods. 9, (2), 201-208 (2012).
  11. Mank, M., Santos, A. F. A genetically encoded calcium indicator for chronic in vivo two-photon imaging. Nat. Methods. 5, (9), 805-811 (2008).
  12. Margolis, D. J., Lütcke, H. Reorganization of cortical population activity imaged throughout long-term sensory deprivation. Nat. Neurosci. 15, (11), 1539-1546 (2012).
  13. Zariwala, H. A., Borghuis, B. G. A Cre-dependent GCaMP3 reporter mouse for neuronal imaging in vivo. J. Neurosci. 32, (9), 3131-3141 (2012).
  14. Harvey, C. D., Collman, F., Dombeck, D. A., Tank, D. W. Intracellular dynamics of hippocampal place cells during virtual navigation. Nature. 461, (7266), 941-946 (2009).
  15. Hölscher, C., Schnee, A., Dahmen, H., Setia, L., Mallot, H. A. Rats are able to navigate in virtual environments. J. Exp. Biol. 208, 561-5519 (2005).
  16. Borlinghaus, R. T. MRT letter: high speed scanning has the potential to increase fluorescence yield and to reduce photobleaching). Microsc. Res. Tech. 69, (9), 689-692 (2006).
  17. Reiff, D. F., Plett, J., Mank, M., Griesbeck, O., Borst, A. Virtual Reality for Mice, mousevr.blogspot.com. Nat. Neurosci. 13, 973-978 (2010).
  18. Sakatani, T., Isa, T. Quantitative analysis of spontaneous saccade-like rapid eye movements in C57BL/6 mice. Neurosci. Res. 58, 324-331 (2007).
  19. Golshani, P., Portera-Cailliau, C. In vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice. J. Vis. Exp. (13), (2008).
  20. Holtmaat, A., Bonhoeffer, T. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat. Protoc. 4, (8), 1128-1144 (2009).
  21. Schmidt-Hieber, C., Häusser, M. Cellular mechanisms of spatial navigation in the medial entorhinal cortex. Nat. Neurosci. 16, (3), 325-331 (2013).

Comments

1 Comment

  1. Is there anything special about the specific brand of ultrasound gel? Just wondering if a brand like Ultrasonic would suffice? (e.g., https://www.amazon.com/SPECIAL-PACK-3-Aquasonic-8-5oz-Each/dp/B00H4GDK6Y)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 3, 2016 - 5:55 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics