En Alkali-burn Injury Model hornhindeneovaskularisering i mus

* These authors contributed equally
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Neovaskularisering (NV) af hornhinden kan komplicere flere visuelle patologier. Ved hjælp af en kontrolleret, alkali-brænde skade model, kan en kvantificerbar niveau af hornhinde NV produceres for mekanistisk undersøgelse af hornhinden NV og evaluering af potentielle terapier for neovaskulære lidelser.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Anderson, C., Zhou, Q., Wang, S. An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse. J. Vis. Exp. (86), e51159, doi:10.3791/51159 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Under normale forhold, hornhinden er avascular, og denne gennemsigtighed er afgørende for at opretholde god synsstyrke. Neovaskularisering (NV) af hornhinden, som kan være forårsaget af traumer, keratoplasty eller smitsom sygdom, nedbryder den såkaldte angiogene privilegium "af hornhinden og danner grundlag for flere visuelle patologier, der kan endda føre til blindhed. Selvom der er flere behandlingsmuligheder til rådighed, den grundlæggende medicinske behov præsenteret af hornhinde neovaskulære sygdomme forbliver udækket. For at udvikle sikre, effektive og målrettede behandlinger, er en pålidelig model af hornhinde NV og farmakologisk intervention kræves. Her beskriver vi en alkali-forbrændinger hornhindeneovaskularisering model i mus. Denne protokol tilvejebringer en fremgangsmåde til anvendelse af en kontrolleret alkali-forbrændinger på hornhinden, indgivelse af en farmakologisk forbindelse af interesse, og visualisering af resultatet. Denne metode kan vise sig Instrumental for at studere de mekanismer og muligheder for intervention i hornhinden NV og andre neovaskulære lidelser.

Introduction

Cornea blindhed er den fjerde mest almindelige årsag til blindhed, der er ansvarlig for omkring 4% af alle tilfælde 1. Hornhindeneovaskularisering (NV) spiller en væsentlig rolle i mange af disse patologier, herunder herpetisk keratitis (den førende infektiøse årsag til blindhed i vest) og trachom (den hyppigste årsag til infektiøs blindhed på verdensplan) 2. Aktuelle terapier omfatter steroider, non-steroide anti-inflammatoriske lægemidler (NSAID), anti-VEGF behandlingsformer, og cyclosporin A samt konventionelle eller laser kirurgiske teknikker 3. Men den stærkt invaliderende karakter af hornhinde NV baserede patologier, manglen på kirurgiske faciliteter, der kan behandle hornhinde NV, og manglen på et stærkt udføre farmakologisk option førte en nylig ekspert rundbordsdiskussion at konkludere, at trods de bevarede behandlingsformer, den grundlæggende medicinske behov præsenteret af disse patologier forbliver udækket 4.

Den menneskelige hornhindebestår af 5 lag, 3 cellulære lag (epitel, stromal og endotel) og 2 interface (Bowman membran og Descemet membran). Den fungerer som en mekanisk barriere og refraktiv overflade for øjet. Dets åbne karakter er konsekvensen af en hårfin balance af dens bestanddele og er integreret til sin rette funktion 5.. Normalt avaskulære hornhinden modtager blod fra mikrokar løber langs den ydre kant, der tilføres fra det ciliære og ophthalmiske arterier. Corneal NV opstår, når en stimulus fremmer angiogenese af disse fartøjer tillader dem at vokse mod midten af hornhinden og således begrænse vision 6. Hornhindeangiogenese omfatter hemangiogenesis og lymphangiogenesis, som resulterer i indvækst af blodkar og lymfekar fra limbal vaskulære arkade mod midten af ​​hornhinden. Dette fører til en opdeling af hornhinde "angiogen privilegium", en stigning i kornea og fibrose, forstyrrelse af hornhindens layers og ødem 7. De præcise udløsere af hornhinde NV er mange, lige fra en reaktion på smittefarlige sygdomme såsom trachom til en kemisk induceret tilstand forårsaget traditionel medicin, industrikemikalier, eller endda kemiske kampstoffer.

De molekylære mekanismer i denne proces er ikke, som endnu, fuldt karakteriseret; har dog et par vigtige spillere blevet identificeret. Under normale forhold hornhinden har en unik "angiogen privilege vedligeholdes af en overflødig vifte af antiangiogene faktorer (såsom opløselige VEGF-R1) 8. Men som reaktion på en ydre stimulus (såsom en skade) vil der være en lokal opregulering af pro-angiogene faktorer (f.eks VEGF-A). Dette tip balancen af pro-og anti-angiogenese faktorer, der ligger til grund for hornhindens angiogene privilegium, og fører til hemangiogenesis, lymphangeogenesis og inflammation, derfor corneabeskadigelse patologi og endda blindhed 9.

<p class = "jove_content"> I betragtning af udækket medicinsk behov for denne yderst invaliderende patologi, er det af interesse for feltet for at have en pålidelig dyremodel af hornhinde NV. Her præsenterer vi en sådan model: kontrolleret alkali-burn skade. Forskellige eye-skade modeller baseret på brug af filter papir ringe har været brugt siden 1970'erne 10. I 1989 en gruppe af Harvard Medical School øjenlæger karakteriseret en standardmodel for en central hornhinde alkali-forbrændinger i kanin baseret på iblødsætning et stykke cirkulært filter papir med natriumhydroxid (NaOH) og anvende det til hornhinden på en bestemt afstand af koncentrationer 11. Siden da er denne teknik blevet tilpasset til anvendelse i mus 12-14. For nylig, Wang lab studeret de terapeutiske virkninger af histon deacetylase (HDAC)-hæmmer SAHA i patogenesen af hornhinde NV bruge en mus hornhinde alkali-forbrændinger model 15.. Metoden i muse hornhinde alkali-forbrændinger model præsenteres her blev byggetprimært på tidligere arbejdet i to andre papirer 14,16.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Bemærk: Følgende protokol og repræsentative resultater bruger HDAC-hæmmer SAHA som et eksempel sammensatte. Men denne protokol er på ingen måde begrænset til anvendelsen af ​​Saha og anbefales som en generel metode til at teste effekten af ​​opløselige forbindelser på hornhindeneovaskularisering. Mindre ændringer skal være mulighed for fortyndingsgrad samt hyppighed og varighed af anvendelse. Derudover vil forbindelser, der er let opløselig i vand, kunne administreres i fravær af DMSO.

Etisk Statement: Alle dyreforsøg kun bør udføres i overensstemmelse med national lovgivning og institutionelle regler. Denne protokol blev godkendt til brug af Tulane University Institutional Animal Care og brug Udvalg.

1.. Udarbejdelse af materiale (i rækkefølge efter brug)

  1. Skær et stykke cellulosefilterpapir (11 um) i 2 mm cirkler.
  2. Forbered en 1 M opløsning af NaOH vedopløse 20 g NaOH i 500 ml destilleret H2O Opbevares ved stuetemperatur. ADVARSEL: NaOH-opløsninger er ætsende og kan forårsage alkali-forbrændinger.
  3. Forbered et bedøvelsesmiddel cocktail ved at fortynde 10 ml 100 mg / ml ketamin og 2,5 ml 20 mg / ml xylazin i 37,5 ml 1x PBS til en slutkoncentration på 20 mg / ml ketamin og 4 mg / ml xylazin.
  4. Forbered en 0,5% opløsning af proparacain hydrochlorid (til lokal analgesi) ved at opløse 500 mg proparacain hydrochlorid i 100 ml filtreret PBS.
  5. Forbered 1x PBS ved at opløse 8 g NaCl, 0,2 g KCI, 1,44 g Na 2 HPO 4, og 0,23 g NaH 2PO 4 i 900 ml destilleret H2O Juster til 7,4 pH. Bring opløsningen til et slutvolumen på 1.000 ml med destilleret H2O og filter for at sikre sterilitet.
  6. Forbered 1.000 x stamopløsninger af SAHA på ~ 100 mM i dimethylsulfoxid (DMSO) ved at opløse 26,4 mg SAHA i 1 ml DMSO. Fortyndes til en 1x (~ 10 uM)opløsning i filtreret PBS for hver anvendelse. Opbevar stamopløsning ved -20 ° C i op til en måned. ADVARSEL: DMSO er et kendt toksin og mutagen.
  7. Forbered en 4% opløsning af paraformaldehyd (PFA) til fiksering. Under en kemisk hætte opløses 4 g PFA i 90 ml PBS. Blandingen bringes til 65 ° C, og der titreres til en pH på 7,4. Når PFA er opløst, bringes opløsningen til et slutvolumen på 100 ml. Opbevares ved 4 ° C i op til en måned. ADVARSEL: PFA er en kendt for at være allergifremkaldende, kræftfremkaldende og giftige.
  8. Forbered 1x blokeringspuffer ved at fortynde 5 ml gedeserum og 500 ul Triton X-100 i 94,5 ml PBS.
  9. Forbered 1x vaskebuffer ved at fortynde 500 ul Triton X-100 i 99,5 ml PBS.

2. Alkali-Burn Injury & Compound Behandling

  1. Suge en runde stykke filtrerpapir, ~ 2 mm i diameter, i en opløsning af 1 M NaOH.
  2. Bedøver musen med en indsprøjtning på 100 mg / kg ketamin og 5 mg / kg xylazin, WHICH er ~ 100 pi af den bedøvende cocktail fra trin 1,3 per 25 g mus. Anæstesi bør tage ~ 1-2 min at indstille i. Anæstesidybde kan bestemmes ved forsigtigt at klemme tå eller hale af dyret, hvis anæstesien er tilstrækkelig bør der ikke være nogen reaktion. Bemærk: Der bør udvises omhu for at sikre, musen ikke bukke under for anæstesi induceret hypotermi.
  3. Ved hjælp af en pipette, topisk anvende et fald på 0,5% proparacain hydrochlorid til hornhindens overflade til lokal analgesi.
  4. Ved hjælp af steril pincet, afhente et stykke af NaOH gennemblødt filterpapir. Hvis du bemærker overskydende NaOH klamrer sig til eller dryp fra filtrerpapir kortvarigt trykke på gennemblødt filter papir på et tørt stykke filtrerpapir til at absorbere den overskydende. Placer stykke NaOH gennemblødt filter papir på den centrale hornhinde. Lad det i 30 sek til at generere en akut alkali-burn på ~ 2 x 2 mm 2 i området. Et kirurgisk mikroskop er nyttige i korrekt placere filtrerpapir. Bemærk: Kun det ene øje af musen should blive skadet med den anden tjener som en kontrol.
  5. Fjern filtrerpapir. Ved hjælp af en 10 ml sprøjte, skylle forsigtigt øjet med 10 ml 1x PBS to gange for at vaske væk resterende 1 M NaOH.
  6. Påføres straks en dråbe 1x SAHA coboltarbejdsopløsning (eller et køretøj kontrol bestående af PBS fortyndet DMSO uden indhold SAHA) topisk på hornhinden. Gentag ansøgning 3x/day i 14 dage. Bemærk: i denne periode et aktuelt antibiotisk salve ikke anbefales, da det kan forstyrre udviklingen af ​​skaden og leveringen af ​​forbindelsen. Brug en flydende antibiotisk opløsning, såsom 3% Gentamicin opløsning, i stedet.
  7. Fortsæt direkte til Clinical Assessment (protokol 3 nedenfor), eller ofre musen og enucleate øjnene for hornhinde flad mount (protokol 4 nedenfor) eller konventionel paraffin / frosne histologi.

3. Klinisk vurdering

  1. Udfør en daglig gennemgang af musene i en blindet måde under et kirurgisk mikroskop og score corneal NV baseret på kornea, NV og en beholder størrelse. Brug mindst to observatører og optage en endelig score, der er gennemsnittet af de to.
    1. Score corneauklarhed på en skala fra 0-4. 0 = helt klar; 1 = let diset, iris og elev let synlige; 2 = svagt uigennemsigtig, iris og elev stadig kan måles; 3 = uigennemsigtige, elever næppe påviselige; og 4 = helt uigennemsigtige med ingen visning af eleven.
    2. Score NV på en skala fra 0-3. 0 = ingen neovessels; 1 = neovessels på hornhindelimbus; 2 = neovessels spænder over hornhindelimbus og nærmer hornhindens centrum; 3 = neovessels spænder hornhindens centrum.
    3. Score fartøj størrelse på en skala fra 0-3. 0 = ingen neovessels; 1 = neovessels påviselige under kirurgisk mikroskop; 2 = neovessels nemt ses under kirurgisk mikroskop; 3 = neovessels let ses uden mikroskop.
  2. Ved hjælp af et digitalt kamera, udtage repræsentative billeder af øjet ved 7 dage og 14 dage.

4..Farvning af hornhinden og Flat Mounts

  1. Lave enukleeret øje i 4% PFA i mindst 1 time ved 4 ° C.
  2. Overfør øjet til 1x PBS og bruge pincet til forsigtigt at fjerne overskydende væv.
  3. Ved hjælp af et kirurgisk mikroskop, skal du bruge en nål (18 gauge) eller mikro-kniv til at perforere pericorneale region i øjet (bemærk: dette bør frigive væske fra øjet).
    1. Fra perforeringen foretages i afsnit 4.3.1 bruge et par kirurgiske saks til at klippe den forreste del af øjet (hornhinden) fra den bageste del.
  4. Overfør hornhinden tilbage i 4% PFA til fiksering natten over ved 4 ° C.
  5. Kassér 4% PFA (ADVARSEL: PFA er farligt og skal bortskaffes i overensstemmelse med de institutionelle bestemmelser) og skyl hornhinden tre gange med 1x PBS for at fjerne enhver rest af PFA.
  6. Inkuber i 1 x blokeringspuffer i mindst 2 timer ved stuetemperatur for at permeabilisere væv og forhindre ikke-specifik binding af det primære antistof.
    1. Anvend primært antistof i 1 x blokeringspuffer ved en 100-500 ganges fortynding. (Fx rotte-anti-muse-PECAM-1 til at detektere blodkar ved 1:100, kanin-anti-muse-Lyve-1 til påvisning af lymfekar på 1:500 og / eller rotte anti-mouse-F4/80 til påvisning af makrofager til 1:100). Inkuber ved 4 ° C natten over.
    2. Vask seks gange med 1x vaskepuffer i 1 time, hver gang ved stuetemperatur til fuldt ud at fjerne ubundet primært antistof.
    3. Påfør et sekundært antistof i 1 x blokeringspuffer ved en 500-1.000 ganges fortynding. (Fx en 488 nm fluorescerende mærkede gede-anti-rotte-IgG ved 1:800 eller en 594 nm fluorescerende mærkede gede-anti-kanin-IgG ved 1:800). Inkuber ved 4 ° C natten over.
    4. Der vaskes tre gange med 1x PBS i 1 time hver ved stuetemperatur til fuldt ud at fjerne ubundet sekundært antistof.
  7. Overfør hornhinden i frisk 1x PBS, og med hjælp af et kirurgisk mikroskop, omhyggeligt gøre fire snit fra periferien mod centis. Dette skulle opdele hornhinden i fire kvadranter af omtrent samme størrelse (den deraf formen skal se lidt ligesom en sommerfugl), og lad den ligge fladt på et dias.
  8. Monter med et monterings medium egnet til fluorescerende billeddannelse. For de bedste resultater, skal prøver afbildes straks og digitale fotografier taget, men kan opbevares i flere uger beskyttet mod lys ved 4 ° C.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Efter alkali-brænde skade opstår hornhinde NV i en forudsigelig, tidsafhængig måde. Figur 1 viser den store forskel både i neovaskularisering og corneauklarhed mellem et ubehandlet dyr (figur 1A) og et dyr behandlet med HDAC-hæmmer SAHA (figur 1B ) ved 7 dages tidspunktet.

2A og 2B demonstrere en hornhinde flad mount af en ubehandlet kontrol øje med primær PECAM-1 og Lyve-1-farvning og sekundære Alexa Fluor 488 og 594 farvning (henholdsvis). Figurerne 2C og 2D viser den samme farvning på et øje behandlet dagligt med HDAC-hæmmeren SAHA Bemærk den dramatiske nedgang i både hemangiogenesis og lymphangiogenesis.

3A og 3B giver et detaljeret kig på de to pletter. PECAM-1 serverer en markør for blood skibe (figur 3A), mens Lyve-1 binder sig specifikt til lymfekar (figur 3B). En overlejring af de to områder er vist i figur 3C, tillader sammenligning af hemangiogenesis vs lymphangiogenesis samt en sammenligning af forskellige cellemorfologi.

Efter PFA fiksering (trin 4.1), kan du bruge konventionelle Sektionering protokoller (ikke beskrevet i ovennævnte protokol) til at generere enten frosne eller paraffinindstøbte dele af øjet. Mens dette ikke giver det samme niveau af kvantificering af invasion, en flad montering gør, kan sagittale sektioner af hornhinden vise dig hornhindetykkelse og relativ dybde af rørene i øjet. Figur 3D-F viser sagittale, frosne snit i hornhinden og enten F4/80 (makrofag farvning), DAPI (nuklear farvning), eller et fusioneret billede.

Figur 1 Figur 1. Progression af hornhindeneovaskularisering syv dage efter alkali-forbrændinger. (A) Repræsentant billede af en ubehandlet øje. (B) Repræsentant billede af et øje behandlet tre gange om dagen med vores forbindelse af interesse (HDAC-hæmmeren SAHA). Bemærk forskellen i uklarhed af hornhinden og neovaskularisering. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2. Repræsentative billeder af en ubehandlet kontrol (A og B) og en SAHA behandlet (C og & #160; D) hornhinde syv dage efter alkali-forbrændinger (A og C) Bredt felt billede af vaskulær endotelcelle farvning med PECAM-1.. (B og D) Bredt felt billede af lymfatisk endothelcelle farvning med Lyve-1. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Fig. 3. (A) vaskulær endotelcelle farvning med PECAM-1. (B) lymfatisk endotelcelle farvning med Lyve-1. (C) fusioneret PECAM-1/LYVE-1 farvning. (D) F4/80 farvning af makrofager i en sagittal frosne sektion. (E) DAPI staining af cellekernen i en sagittal snit frosne sektion. (F) Fusioneret F4/80 og DAPI farvning. Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Protokollen præsenteres her resulterer i reproducerbare niveauer af hemangiogenesis, lymphangiogenesis og inflammation, hvilket gør det til et ideelt system til at studere disse tre (indbyrdes) processer. Selv om denne metode giver centraliseret hornhinde NV, flere metoder, der er blevet udviklet til at forårsage mere rettet NV, nemlig sutur af hornhinden 17 og implanteret vækst-faktor udtrykker pellets 18, kunne også være af interesse. Vores protokol er designet til brug i den voksne mus, der giver en nem at bruge dyremodel samtidig give et laboratorium for at drage fuld fordel af et væld af molekylære og transgene teknikker endnu ikke til rådighed for større pattedyr. Ovennævnte protokol og repræsentative resultater detalje anvendelsen af ​​mus på en C57BL/6J-baggrund. Albino mus ville også være egnet og kan give lettere billeddannelse; Men en nylig undersøgelse viser, at det neovaskulær respons albino mus ikke kan være så dramatisk 19.. Yderligere, i modsætning til flereandre neovascularization modeller kan hornhinde NV blive scoret med eksamen gennem et kirurgisk mikroskop eller endda med det blotte øje. Hvis en mere stringent kvantificering af omfanget af neovaskularisering er nødvendig, kan digitale billeder af de farvede flade mount analyseres via en række software-pakker, kan et eksempel på, hvordan man gør det med Photoshop CS4 ses i Conner et al. seneste Nature Protocols papir "Kvantificering af ilt-induceret retinopati i mus" 20.

Proparacain hydrochlorid er en amino ester smertestillende anvendes som et aktuelt løsning (det er muligt, at andre medlemmer af denne familie ville være lige så acceptabel). Selvom dyret er placeret under generel anæstesi for proceduren, vi anser ekstra aktuelt analgesi en etisk nødvendighed at forhindre undo smerte til hornhinden. Det er bydende nødvendigt, at PBS bruges til at fortynde din sammensatte og skylle øjet filtreres og holdes rene i hele the procedure (tjek for synlige tegn på kontaminering før hver brug). PBS kaldes for baseret på individuel lab tradition; en tilsvarende balanceret saltopløsning skal opnå det ønskede resultat. Ligeledes kan revisioner af immunhistokemisk protokol, der præsenteres her kaldes for hvis antistoffer fra andre kilder er brugt (dvs. graden af fortynding påkrævet).

De mest teknisk udfordrende dele af denne procedure, er den oprindelige placering af NaOH gennemvædet filtrerpapir og dissektion af hornhinden. Vi anbefaler, at begge teknikker praktiseres inden den egentlige procedure. Filtrerpapir skal placeres i midten af ​​hornhinden med henblik på at fremme en ensartet neovaskularisering fra alle sider. Nogen grad af forskydning vil skabe en høj grad af variabilitet fra mus til mus. Cornea dissektion kræver en god portion af håndelag. Øjet er tilbøjelige til at deformeres som reaktion på et forsøg på at perforere pericorneale region.Vi anbefaler at bruge en skarp, lille gauge kanyle til at gøre den oprindelige snit og frigive trykket inde. Efter en indledende punktering er foretaget, kan et par af kirurgiske sakse indsættes i hullet og anvendes til at skære langs en imaginær linie, der adskiller det forreste af øjet fra den bageste øjenbægeret. Arbejde langsomt og forsigtigt bør give en intakt hornhinde.

Det skal bemærkes, at mens det primære formål med denne protokol er at analysere effekten af ​​forskellige forbindelser i behandling af hornhinde alkali-forbrændinger det har også potentiale til at blive brugt til at studere hornhinde sår fornyet epitheliaztion, hornhinde fibrose, og limbal epithelial stilk cellefornyelsen. Desuden fungerer det som en generel model til at undersøge mekanismerne i patologisk hemangiogenesis, lymphangiogenesis, og inflammation. Den relative lethed, hvormed protokollen kan udføres, såvel som dens noninvasive karakter, præsenterer en tiltalende mulighed for in vivo-forbindelse screening, effektivitetstests og karakterisering af transgene musemodeller med hensyn til patologisk angiogenese.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at afsløre.

Acknowledgments

Vi er taknemmelige for Dr. Xinyu Li hjælp til at forberede manuskriptet. SW blev understøttet af en Startup fond fra Tulane University, præsidentens Forskningsråd New Investigator Award fra UT Southwestern Medical Center, NIH Grant EY021862, en karriere pris udvikling fra forskning til forebygge blindhed fundament, og en Bright Focus Award i alder maculadegeneration Research .

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1 ml Syringe BD 309659
18 G Needle BD 305918
10 ml Syringe BD 306575
25 G Needle BD 305916
Anti-F4/80 (rat anti-mouse) AbD Serotech MCA497RT
Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse) Abcam ab14917
Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse) BD 553370
Anti-IgG Alexa 488 (goat anti-rat) Invitrogen A11006
Anti-IgG Alexa 594 (goat anti-rabbit) Invitrogen A11012
Camera Tucsen TCC 5.0 ICE
Coverslips Fisher 12-548-B
DMSO Sigma D4540-1L Caution: Mutagenic, Toxic
Forceps (Blunt), Iris WPI 15915
Forceps (Sharp), Dumont #4 WPI 500340
KCl Fisher P217-500
Ketamine Solution MedVet RXKETAMINE Controlled substance, proper license required for use.
Light Source for Microscope AmScope LED-14M-YA
Microscope (Stereo 7X-45X) AmScope SM-1B
Mounting Medium, VECTASHIELD Vector H-1000
NaCl Fisher S271-10
NaH2PO4 Fisher S397-500
NaOH Fisher S318-1 Caution: Corrosive
Paraformaldehyde P6148-500G Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic
Proparacaine Hydrochloride Sigma P4554-1G
Scissors (5 mm blade), Vanas WPI 14003
Goat Serum MPBio 92939249
Microscope Slides Fisher 12-550-15
Triton X-100 Sigma T8787-100ML
Whatman Grade 1 Filter Paper Whatman 1001-6508
Xylazine Solution MedVet RXANASED-20

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pascolini, D., Mariotti, S. Global estimates of visual impairment. Br. J. Ophthalmol. 96, (5), 614-618 (2010).
  2. Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. Corneal Blindness: A Global Perspective. Bull. World Health Org. 79, (3), 214-221 (2003).
  3. Gupta, D., Illingworth, C. Treatments for corneal neovascularization: a review. Cornea. 30, (8), 927-938 (2011).
  4. Cursiefen, C., et al. Consensus statement on indications for anti-angiogenic therapy in the management of corneal diseases associated with neovascularisation: outcome of an expert roundtable. Br. J. Ophthalmol. 96, (1), 3-9 (2012).
  5. Delmonte, D., Kim, T. Anatomy and Physiology of the Cornea. J. Cataract Refract. Surg. 37, (3), 588-598 (2011).
  6. Cursiefen, C., Seitz, B., Dana, M. R., Streilein, J. W. Angiogenesis and lymphangiogenesis in the cornea. Pathogenesis, clinical implications and treatment options. Der Ophthalmologe. 100, (4), 292-229 (2003).
  7. Chang, J., Gabison, E., Kato, T., Azar, D. Corneal Neovascularization. Curr. Opin Ophthalmol. 12, (4), 242-249 (2001).
  8. Ambati, B., et al. Corneal Avascularity is due to Soluble VEGF Receptor-1. Nature. 443, (7114), 993-997 (2006).
  9. Cursiefen, C., et al. VEGF-A Stimulates Lymphangiogenesis and Hemangiogenesis in Inflammatory Neovascularization via Macrophage Recruitment. J. Clin. Invest. 113, (7), 1040-1050 (2004).
  10. Jiri, O. Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries. Ophthal. Res. 1975, (7), 363-367 (2009).
  11. Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 30, (10), 2148-2153 (1989).
  12. Saika, S., et al. Therapeutic effects of adenoviral gene transfer of bone morphogenic protein-7 on a corneal alkali injury model in mice. Lab. Invest. 85, (4), 474-486 (2005).
  13. Ferrari, G., Bignami, F., Giacomini, C., Franchini, S., Rama, P. Safety and efficacy of topical infliximab in a mouse model of ocular surface scarring. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54, (3), 1680-1688 (2013).
  14. Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 46, (7), 2388-2395 (2005).
  15. Li, X., et al. Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model. Mol. Pharm. 10, (1), 307-318 (2013).
  16. Yoeruek, E., et al. Safety, penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn. Acta Ophthalmol. 86, (3), 322-328 (2008).
  17. Bucher, F., Parthasarathy, A., Bergua, A., Onderka, J., Regenfuß, B., Cursiefen, C., Bock, F. Topical Ranibizumab inhibits inflammatory corneal hem- and lymphangiogenesis. Acta Ophthalmol. (2012).
  18. Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern. Cornea. 31, (7), 804-809 (2012).
  19. Rogers, M., et al. The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness. Angiogenesis. 16, (3), 639-646 (2013).
  20. Connor, K., et al. Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological. Nat. Protoc. 4, (11), 1565-1573 (2009).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics