Procedure for Menneskerettigheder saphenous Veins * These authors contributed equally

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

De mekanismer, der fører til udviklingen af ​​intimahyperplasi (IH) og venegraft svigt stadig dårligt forstået. Denne undersøgelse beskriver en ex vivo-system til at perfundere menneskelige vener under styret strømning og tryk. Desuden effektiviteten af ​​ekstern netforstærkning at begrænse udviklingen af ​​IH blev evalueret.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Longchamp, A., Allagnat, F., Berard, X., Alonso, F., Haefliger, J. A., Deglise, S., Corpataux, J. M. Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement. J. Vis. Exp. (92), e52079, doi:10.3791/52079 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Grundpillen i moderne behandlinger for omfattende okklusiv arteriel sygdom er venøs bypass. Imidlertid er dens holdbarhed truet af intimahyperplasi (IH), der til sidst fører til tillukning af blodkar og organsvigt. Mekaniske kræfter, særlig lav forskydningsspænding og høj mur spænding, menes at indlede og opretholde disse cellulære og molekylære forandringer, men deres nøjagtige bidrag stadig at blive opklaret. For selektivt at vurdere betydningen af tryk og shear stress på biologi IH blev en ex vivo perfusionssystem (EVPs) oprettet for at perfundere segmenter af humane saphenous vener under arteriel regime (high shear stress og højt tryk). Yderligere tekniske nyskabelser tillod samtidig perfusion af to segmenter fra samme vene, en forstærket med en ekstern mesh. Vener blev høstet ved hjælp af en no-touch teknik og straks overført til laboratoriet til montage i EVPs. Et segment af frisk isolATED vene ikke blev perfuseret (kontrol, dag 0). De to andre segmenter blev perfunderet i op til 7 dage, idet én helt i læ med en 4 mm (diameter) ekstern mesh. Det tryk, flow hastighed og puls blev løbende overvåget og justeret for at efterligne de hæmodynamiske forhold i den femorale arterie. Ved afslutningen af ​​perfusionen blev vener afmonteres og bruges til histologiske og molekylære analyser. Under ex vivo-betingelser, højtryk perfusion (arterielt, middelværdi = 100 mm Hg) er tilstrækkelig til at generere IH og ombygning af menneskelige årer. Disse ændringer er reduceret i nærværelse af en ekstern mesh polyester.

Introduction

Kardiovaskulære sygdomme er den førende årsag til sygelighed og dødelighed i de vestlige lande 1. Trods fremskridt i endovaskulære behandlinger, bypass operation stadig grundpillen i moderne behandlingsformer, således over en halv million vene grafts udføres årligt i USA. Men på trods af årtiers forskning, 30-60% af lavere ekstremitet vene podninger mislykkes inden for de første år på grund af intimahyperplasi (IH) 2. Mekaniske kræfter, især lav forskydningsspænding (SS) og høj mur spænding, er omdrejningspunktet i indledningen og udviklingen af denne hyperplastisk respons 3,4. For at løse dette problem, blev en ex vivo vener perfusionssystem (EVPs), der genereres for at studere under strengt kontrollerede hæmodynamiske forhold (tryk og shear stress), adfærd menneskelige saphenous vener. I denne undersøgelse efter indsætning i det arterielle-lignende omsætning, højt tryk (middelværdi = 100 mm Hg) var tilstrækkeligt til at stimulere spredningsrelateredebejde og migrering af glatte muskelceller i det intimale lag (IH) 5.

Mammale undersøgelser har foreslået brug af ekstern forstærkning som en effektiv metode til at støtte "arterialized vene", og modvirke den akutte hæmodynamiske ændrer vene ansigter engang implanteret i en arteriel miljø. Redskabets forhindret over-udspiling, forøget forskydningsspænding og reduceret vægspænding og dermed IH 6-10. Men de underliggende mekanismer og dens anvendelse på de menneskelige vener at forbedre bypass åbenhed er ikke fuldt karakteriseret. Vores EVPs blev brugt til at sammenligne, i stand efterligne ændringer en vene ansigter engang indsat i en arteriel regime (høj forskydning stress og pres), adfærd menneskelige saphenous vener i fravær og nærvær af en ekstern makroporoes polyester rørformet mesh. Ved at forhindre patologisk remodeling og landbrugsredskaber masken fremlagde dokumentation for sin potentielle kliniske effektivitet 11

Denne undersøgelse 1) indfører en model af ex vivo humane saphenous vener perfusion under kontrolleret tryk og shear stress 2) viser, at ekstern makroporøs mesh polyester reducerer IH og indeholder afgørende information til dens potentielle kliniske anvendelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Den Etiske Komité Lausanne Universitet godkendte forsøg, som er i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen fra 1975, som revideret i 1983 for brugen af ​​humane væv.

1. Menneskelige Store saphenavene Harvest

  1. Opnå overskydende segmenter af ikke-åreknuder humane saphenous vener fra patienter, der gennemgår underekstremitet bypass operation for iskæmi. I operationsstuen, desinficere hele benet med en jodopløsning og drapere patienten at eksponere benet fra lysken til foden.
  2. Lav en median snit fra lysken til knæet (forlader afbrudt hud portion).
  3. Harvest stor saphenusvene med stilken af ​​det omgivende væv (berøringsfri teknik). Sikker sidegrene af venerne med 4-0 silkeslips. Umiddelbart lagre mindst 9 cm lang overskud segment af den større saphenusvene, med en ydre diameter på 2,5-4 mm ved 4 ° C i et RPMI-1640-Glutamax medium suppleret med 12,5% føtalt kalveserum og bringe den til laboratoriet.

2. EVPs Design

  1. Samle de generelle, som er vist i figur 1. Autoklavér alt udstyr og holde alle komponenter under sterile forhold. Derudover sikre, at systemet er vandtæt og ikke lække kemikalier i mediet. Brug polymethacrylat methyl (PMMA-GS) til omslaget. Stål (X5 Cr Ni 18 10) og polyoxymethylen plast (POM) som venen støtte.
  2. Design perfusionskammeret til den ønskede geometri til at tillade placering af venen og dens tilslutning. Sørg for, at dybden (eller radius, hvis du bruger cylindrisk konstruktion) er mindst 2,5 cm, så det giver mulighed for minimal bøjning og udvidelse af skibet sammen med konstant dækning af den kultur medier (Figur 1). Sealing er et stort problem, og det er grunden rektangulære PMMA-GS konstruktion er brugt.
  3. Design venen støtte til den ønskede geometry. For at undgå vene knæk eller over udspiling, tillade længdejustering ved at skubbe eller trække (skrue kan ikke bruges til dette formål, da venen ville blive snoet sammen med skrue).
    BEMÆRK: En fuld stålstang forbundet med to glidende L-formede stykker, der understøtter to vene cylindre (5 mm i diameter til at passe til beholderen) og vene (Figur 1B og Figur 2) anvendes her.
  4. Design trykket kolonnen, således at "hvile pres" til systemet er: p = 0-10 = hx ρ xg hvor p = tryk (N / m 2, Pa) h = højde af væske kolonne (m) ρ = densitet af væske (kg / m 3) og g = gravitationskonstanten (9,81 m / sek 2). Design fire tilslutningskanalerne, fra top til bund: at udøve pres for udstrømning (fra venen), tilgangen (til venen), og til at tillade medium forandring.
  5. Forbered mediet. Baseret på tidligere undersøgelser 5,11-14 vælge RPMI-1640, suppleret med Glutamax, 12,5% Føtalt kalveserum og 1% antibiotisk-antimykotisk opløsning (10.000 U / ml penicillin G plus 10 mg / ml streptomycinsulfat, plus 25 mg / ml amphotericin B, plus 0.5 ug / ml: gentamycin). Forskydningsspænding (SS) er givet ved SS = 4 μQ / π * r 3 Q er strømningshastigheden (ml / sek), r radius (cm), i venesegmentet og μ er viskositeten af perfusionsmediet.
    1. Modulere SS ved at justere viskositeten ved tilsætning af 70 kDa dextran. Mål viskositeten med et viskosimeter. Her tilsættes 8% 70 kDa dextran at indstille SS til 9-15 dyn / cm 2.
  6. Indstil gearing pumpe til at inducere et pulserende kardioid signal 60 pulser / min og konstant amplitude at generere en ensrettet strømning på 150 ± 15 ml / min, uafhængigt af tryk, der påføres i systemet og styres af en computer. Sørg for, at den drivende software integrerer konstant erhvervelse og overvågning af tryk, strømningshastighed, puls, og signal. Hvis det ønskes, kan du bruge en anden pumpe (ikke synchronized) for at fremstille en ikke-laminar, turbulent strømning.

3. EVPs Assembly (figur 1)

  1. Før du starter, skal du sørge for alt udstyr er sterilt. Foretage alle skridt i henhold til aseptik i en laminar flow hætte.
  2. Placer vene i en petriskål fyldt med medium. Brug en kirurgisk kniv og opdele vene i 3 lige store segmenter.
  3. Skyl straks et segment i PBS. Opdel segmentet i 3 dele, fastsætte en i formalin morfometri. Frys de to andre til kvantitativ transkript (RT-PCR) og protein (Western blot) analyse. Overvej disse segmenter som en kontrol, ikke-perfunderet vene.
  4. Brug de 2 resterende segmenter til perfusion.
    1. Meget forsigtigt injicere medium ind i venen og bestemme den normale strøm retning; i nærvær af ventiler venen er vendt.
    2. Forsegling venerne er af allerstørste betydning for eksperimentel succes. Kontroller for lækager gennem sikkerhedsstillelse. Fastgør eventuelle lækager med 6-0 silkesuturer.
    3. </ Ol>
    4. Tilslut venesegmentet mellem de to metalliske cylindre, den ene ende på et tidspunkt (2,3, figur 1). Skaf cylindrene med Ethibon 3-0 omkring fordybningerne (figur 1A og B).
      1. Placere hele venøse segment i perfusionskammeret tidligere fyldt med medium. Gentag samme procedure for det andet segment.
        BEMÆRK: Hvis ordentligt forsegle vene til cylinderen vil være en kilde til lækage, kræver reintervention, og øge risikoen for infektion og eksperimentel fiasko.
    5. For at styrke (mesh) det andet segment, frigiver de to cylindre (med venen vedlagt) fra de L-formede stykker (2.3 og figur 1).
      1. Vær blid og ikke røre venen med eventuelle instrumenter. Skub masken først på cylinderen derefter på venen. En push / pull skubbet får maske på venen.
      2. Når masken dækker hele overfladen af ​​venen sikre jacketed vene til cylindrene med Ethibon 3-0.
      3. Saml venen / cylinder forbindelse til det L-formede støtte og overføre det til perfusionskammeret tidligere fyldt med medium.
    6. Forbind hver metallisk cylinder (in-og afgang) til en Y-splitter hjælp peroxid-behandlet silikone slanger med en indre diameter på 3,2 mm.
    7. Tilslut udstrømningen splitter til en anden Y-splitter med samme type slange. Fra denne Y-splitter, skal du bruge et rør til at måle perfusionstrykket gennem begge fartøjer. Slut den anden tilbage til søjlen for at danne et lukket kredsløb (figur 2).
    8. Inde i kuvøse, skal du bruge en lang (en meter længde) rør til at forbinde trykket kolonne til pumpehovedet.
    9. Gennemfør oprettet ved at forbinde pumpehovedet til indstrømningen Y-splitter med en anden lang længde rør (figur 1).

    4. Veins Perfusion

    1. Efter EVPs samling har været completed, fylde kolonnen med medium (ophold under venen udstrømning kanalen for at tillade genopfyldning). Tilføj flere medie ind i kolonnen, indtil systemet er fuld. Flyt hele systemet i inkubator holdt ved 37 ± 0,1 ° C med en pH-værdi holdes konstant på 7,40 ± 0,01 (ved hjælp af en CO 2 / pH-algoritme baseret på Henderson-Hasselbach ligningen).
    2. Bring tandhjulspumpe hovedet udenfor kuvøsen og tilslut det til gearpumpen drevet. Skru stængerne for at fastgøre samlingen.
    3. Tænd for pumpeeffekt, sørg for at det er aktiveret på den drivende software og tillader 5 min for mediet til at være ligeligt fordelt i hvert rum.
    4. At overvåge trykket, skal du bruge en arteriel line overvågning. Tilslut EVPs trykydelse (det svarer til det arterielle kateter) til tryktransducer forbundet til computeren.
      1. Sørg for, at røret er helt fyldt med medie og ikke indeholder nogen bobler. De-boble dyrkningssystemet gennem "arteriel line "rør (figur 2). Vær opmærksom på skærmen, og se efter en pulserende cardioid signal på 60 impulser / min for konstant amplitude. På dette tidspunkt var den gennemsnitlige trykket er mellem 0-10 mm Hg. Hvis trykket er <0 og kolonnen gradvis tømmes kigge efter en læk (vene sikkerhed eller utilstrækkelig tætning mellem vene og rør).
    5. Indstil minimalt tryk til 6 mm Hg i en venøs prøve eller ved 90 mm Hg i en arteriel test. Under disse betingelser en luftinjektoren anvender det nødvendige tryk til søjlen og system.
    6. Skift medium hver 2 dage ved hjælp af rør forbundet til lavtrykssøjlen. For at undgå forandring trykskader, skal du åbne kolonnen stikket først.

    5. Afslutning af Perfusion

    1. Efter 3 eller 7 dages perfusion: tage EVPs ud af kuvøsen og afmontere venerne. Kassér 5 mm proksimal og distal vene ender fastgjort til udstyret. Skær et centralt, 5 mm tyk rings fra det resterende segment samt fastsætte i formalin (morfometri). Frys de resterende fragmenter og reducere til pulver for yderligere molekylære analyser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Den EVPs giver et værdifuldt redskab til selvstændigt at vurdere de hæmodynamiske kræfter på menneskers saphenusvene podekviste remodeling og IH.

Figur 1 viser perfusionskammeret og venen støtte. I figur 1A og B, venen støtte før (figur 1A) og efter (figur 1B) samling, henholdsvis, er afbildet. Det er sammensat af (fra top til bund) af en glat rør af rustfrit stål måler 9 cm, som tjener som en understøtning for to L-formede stykker, som let kan glide (fra venstre til højre) og giver en pålidelig teknik til justere støtten størrelse venen. Hver af disse stykker holder POM disk til at passe en stålcylinder (vene-stik) fikseres på plads ved integreret skrue (pilespids). Figur 1C-D viser perfusionskammeret alene (C), og efter indføring af venen støtte (D). På perfusionskammeret er fordybninger designet til athold venen støtte på plads (øverst) og for at undgå kinkning af studsen kommer ind og ud fra venen (nederst).

Figur 2 viser tidstro billeder (figur 2A) og en skematisk repræsentation (figur 2B) i EVPs. Perfusionskammeret, vener og dets støtter, samt presset kolonnen holdes i et kontrolleret miljø (temperatur, CO 2 og O 2), mens pumpen, tryk injektor og styreenheder alle forbliver uden inkubatoren. Figuren illustrerer gearingen pumpen (1), der genererer en pulserende signal styres af en computer (2), der overvåger strømningshastigheden (3), tryk (4), og styrer den minimale diastoliske tryk (5); to segmenter af den samme saphenousvenen er forbundet i parallel med perfusion inde separate perfusion kamre (6a og 6b) anbragt i en cellekultur inkubator.

I figur 3, Histomorfometrisk analyse viser, at ekstern forstærkning forhindrer intimahyperplasi og patologiske medier remodeling ellers observeret efter 7 dage under højt tryk (arteriel regime, gennemsnit = 100 mm Hg) perfusion. I figur 3A, repræsentative histologiske snit farvet for hematoxylin-eosin (HE) afslører foring af hulrummet af kerner af endotelceller og kerner af SMC'er i medierne lag i alle forhold. Figurerne 3B-C viser repræsentative Van Gieson Elastisk Lamina ( VGEL) farvede sektioner. I figur 3B er intima fortykket (IH) i vener perfunderes ved højt tryk (middelværdi = 100 mm Hg) i 7 dage i forhold til at styre ikke-perfunderede vener, et fænomen reduceret grad i nærvær af et eksternt net. Figur 3C illustrerer patologiske udad remodeling og medier udtynding i venerne udsat for 7 dage arterietryk. Dette er i høj grad forhindres af den udvendige forstærkning. Furthermore, i figur 3D, Masson trichrom farvning (blå = bindevæv, rød = muskel) forbinder denne patologisk ombygningen med den vedvarende kun én af de tre muskel lag og akkumulering af glatte muskelceller i det indre lag (intima). Den udvendige forstærkning bevarer fordelingen af ​​SMC'er og medier struktur.

Figur 4 illustrerer en nuværende klinisk anvendelse af det eksterne net. Et illustrativt eksempel er udvendig forstærkning af en aneurismal fistlen (hæmodialyse adgang). 4A viser en tids-kursus repræsentation af venen forstærkning (fra top til bund). Først blev masken placeret omkring et stift rør, medens venen største ende er fastgjort til en dorn (øverste panel). Derefter blev vene trukket gennem røret takket være dornen. Når vene var på plads, blev røret langsomt tilbagetrukket, forlader masken omkring venen (upper og midterste panel). I dette særlige tilfælde blev proceduren gentaget på begge sider af venerne, og vener segmenter og mesh forstærkninger blev samlet af en ende-til-ende anastomose (nederste panel). 4B giver en større visning af arteriovenøse ende til-side anastomose, viser, at masken er viklet rundt om anastomosen ved at binde det langs den bageste væg af arterien.

Figur 1
Figur 1. vene støtte og perfusionskammer. A. vene støtte består af 1 glat rør, 2 L-formede stykker, skiver og cylindre (danner toppen til bunden). B. vene støtte engang samles. C. Udsigt perfusionskammeret. D. perfusion kammer er designet til at holde på plads venen støtte og giver sin tilslutningion til venen og Tilslutningsroerene.

Figur 2
Figur 2. Den ex vivo perfusionssystem. A. helt samle EVPs i cellekultur inkubator. B. Skematisk repræsentation. 1) pumpen generere en pulserende kardioid bølge; 2) computeren styre tryk, flow (type, hastighed og amplitude); 3) flowmåleren; 4) tryktransduceren - arteriel linje; 5) trykket injektor; 6) to segmenter af en meget samme saphenousvenen perfunderes uden (6a) eller med ekstern netforstærkning (6b).

Figur 3
Figur 3. Den eksterne forstærkning forhindrer intimahyperplasi. En. Repræsentative histologiske snit farvet med hematoxylin-eosin (HE). Søjle repræsenterer 50 um. BC. Repræsentative histologiske snit farvet for elastin (VGEL). l = lumen m = medier, IH = intimahyperplasi. Søjle repræsenterer 50 um. D. Repræsentative histologiske snit farvet med Masson trichrom. Søjle repræsenterer 50 um.

Figur 4
Figur 4. Ekstern styrkelse af en aneurismal fistel. A. tidsforløbet fotografier af vene forstærkning (fra top til bund). B. Større visning af den arteriovenøse ende-til-side anastomose.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denne undersøgelse afdækker en ex vivo vene perfusionssystem (EVPs) for at udføre omfattende hæmodynamiske studier i menneskelige årer. Dette system giver saphenous vener perfusion under definerede hæmodynamiske parametre i fravær af skærpende inflammatoriske og vækstfaktorer frigivet af cirkulerende celler in vivo. Således er det giver en bedre forståelse af de underliggende veje er involveret i kontrollen af IH i menneskelige vener podninger 5,11,12,15.

Reproducerbare og kvantificerbare hæmodynamiske forstyrrelser er begrænset in vivo. Er blevet beskrevet en række komplekse murine mikrokirurgiske procedurer. Ved hjælp af en bypass isotransplantat model via indskydning af en vena cava fra en donor mus i den højre carotis arterie og den yderligere skabelse af en udstrømning gren ligatur, midt transplantat eller carotis stenose, flow og SS akut faldt og forbedret IH 3. Passiv versus aktiv remodeling kan endvidere være interrogated hjælp af en mid-focal versus distale carotis stenose 16. I store dyr (får, svin og bavian), bypass grafts teknisk lettere og udgør en attraktiv fremgangsmåde til at teste prækliniske mellemstore enheder humane såsom masker, der anvendes i den foreliggende undersøgelse 8-10. Men dens omkostninger og knapheden på validerede molekylære værktøjer begrænse brugen af ​​disse strategier. Endelig disse flow manipulationer konstant ændre væg spænding og undlader at afhøre en enkelt bestanddel. Desuden er de indviklede relationer mellem hæmodynamikken og immun-og endokrine systemer yderligere at begrænse analysen af ​​en enkelt aktør.

Adskillige spørgsmål opstår med brugen af ​​EVPs. 1) Lav kvalitet bakteriel forurening ofte ledsaget menneskelig vene høst og ex-vivo fravær af cirkulerende celler stå som en vigtig årsag til infektion. Dette er hovedsageligt forhindres ved at vaske hænder stykkerne separat derefter autoklavering af alt materiale forud forbrug. Endvidere samlingen udføres i mindre end 90 minutter og under streng aseptik. 2) Tætning der tåler gentagen sterilisation. Af denne grund blev en rektangulær PMMA-GS konstruktion anvendes, at undgå brugen af ​​leddene og begrænse deformation. 3) SS og væg spænding beregnes ved fastlagte tidspunkter, der er baseret på fartøjet lumen radius (histologi), strømmen og viskositeten er konstant. Integrationen af ​​en langsgående billeddannelse (high definition kamera, laser eller Doppler), der løbende overvåger vene diameter og / eller flow vil give mere detaljerede oplysninger om lokale flowvariationer og tillade cykliske stamme beregninger. 4) De to parallelle vene segmenter kan have ukontrollerede forskelle i deres væg overholdelse og radius. Således har vi kun sammenligne segmenter fra en samme vene, og antage, at under det samme pres, strømningshastigheden mønster er ens i begge segmenter.

I denne undersøgelse blev vener forelagt pulserende laminar strømning; imidlertid 50% of intimale hyperplastiske læsioner forekomme i end-to-side perianastomotic områder af venegraft, hvor laminar strømning forstyrres. Turbulente forhold kan modelleres med tilføjelse af en anden pumpe, der ikke er synkroniseret med den første pumpe. Fremtidige studier vil blive udført til specifikt at vurdere virkningen af ​​laminar strømning forstyrrelser på IH og den potentielt gavnlige effekt af netforstærkning. Interessant, den fleksible struktur af nettet tillader periferisk emballage ved anastomosen steder, som der allerede er foretaget for at reparere aneurismale fistler 17 (Figur 4). Således kunne masken vise sig nyttigt at begrænse perianastomotic dilatation, laminar strømning forstyrrelser og dermed reducere IH på anastomosen steder. Dette kan især være en fordel i distal bypass, ofte påvirket af diameter misforhold mellem vene og tibial eller peroneal arterie.

Sammenfattende opsætningen vist her tillader parallel perfusion af menneskelig veins, under identiske hæmodynamiske forhold. Disse data viser, at anvendelsen af en ekstern makroporøs rørformet polyesternet er en effektiv metode til at begrænse udviklingen af IH i vene-transplantater indsat i en arteriel miljø 11. Dette system kan drage flere forskningsområder. Især fremgår det som et effektivt redskab til at udføre prækliniske undersøgelser afprøve og effektiviteten af forskellige metoder til at begrænse IH i humant materiale, og er en værdifuld tilføjelse til in vivo dyremodeller. Andre protetiske understøtninger eller masker overtrukket med farmaceutiske midler vil blive evalueret ved hjælp af denne metode 6-10. Desuden kunne man forestille sig at teste lokalt anvendte farmakologiske molekyler for at forhindre IH i humant væv under nær fysiologisk tilstand. Interventioner genterapi, er også opnåeligt, at transducere en blodåre segment at overudtrykke eller stilhed målgener af interesse.

Afslutningsvis vil vores system øge vores unståelse af hæmodynamiske bidrag til humane vene graft sygdomme. Det giver en innovativ platform til at teste nye terapeutiske strategier og kan opstå som en "bænk til siden oversættelsesværktøj."

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at afsløre.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra SNF [31003A-138528] har Octav og Marcella Botnar Fonden, Novartis Foundation og Emma Muschamp Foundation. Vi takker Martine Lambelet, og Jean-Christophe Stehle for deres fremragende teknisk bistand.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RPMI 1640 - Glutamax Life Technologies 61870-010
Penicilline/Streptomycine/Fungizone Bioconcept 4-02F00-H
Dextran from Leuconostoc spp. 500 g Sigma-Aldrich 31390
Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 L Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG 100 0 324 00
Cryosectionning embedding medium - Tissue-Tek OCT Compound Fisher Scientific 14-373-65
Silicon Tubing (Peroxide) L/S 16 (96400-16 ) - 7.5 m Idex Health & Science GMBH MF0037ST
Y-splitter  Idex Health & Science GMBH Y-connector
35 mm Culture dish Sigma-Aldrich CLS430165-100EA
15 ml Falcon tube BD Bioscence 352096
50 ml Falcon tube BD Bioscence 352098
Gearing pump - Reglo-Z Idex Health & Science GMBH SM 895   App-Nr 03736-00194
Pump Head Idex Health & Science GMBH MI0008 
Monitoring Kit TRANSPAC IV icumedical 011-0J736-01
20 ml Syringes B. Braun Medical SA 4612041-02
Etibon 3-0 FS-2 Ethicon- Johnson&Johnson EH7346H
Mesh ProVena 6-8mm B. Braun Medical SA 1105012-14
NaCl: Sodium chloride solution perfusion 0.9% (100 ml) B. Braun Medical SA 534534
Masterflex L/S Standard Drive Cole-Parmer Instrument Co 7521-10
Acquisition card National Instruments PCI-6024 E
Flowmeter module Transonic Systems Inc. TS410 and T402
Stopcock with 3-ways BD Connexta Luerlock 394600
Millex Filter Milian SE2M229I04

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sal Go, A., et al. Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association. Circulation. 129, 399-410 (2014).
  2. Sal Conte, M., et al. Results of PREVENT III: a multicenter, randomized trial of edifoligide for the prevention of vein graft failure in lower extremity bypass surgery. Journal of Vascular Surgery. 43, 742-751 (2006).
  3. Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Bai, Y., Ozaki, C. K. Mouse vein graft hemodynamic manipulations to enhance experimental utility. The American Journal of Pathology. 178, 2910-2919 (2011).
  4. Davies, M. G., Hagen, P. O. Reprinted article "Pathophysiology of vein graft failure: a review". European journal of vascular and endovascular surgery : the official journal of the European Society for Vascular Surgery. 42, Suppl 1. S19-S29 (2011).
  5. Berard, X., et al. Role of hemodynamic forces in the ex vivo arterialization of human saphenous veins. Journal of Vascular Surgery. 57, 1371-1382 (2013).
  6. Vijayan, V., et al. Long-term reduction of medial and intimal thickening in porcine saphenous vein grafts with a polyglactin biodegradable external sheath. Journal of Vascular Surgery. 40, 1011-1019 (2004).
  7. Jeremy, J. Y., et al. On the biology of saphenous vein grafts fitted with external synthetic sheaths and stents. Biomaterials. 28, 895-908 (2007).
  8. Zilla, P., et al. Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimal hyperplasia in nonhuman primates. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136, 717-725 (2008).
  9. Zilla, P., et al. Utilization of shape memory in external vein-graft meshes allows extreme diameter constriction for suppressing intimal hyperplasia: a non-human primate study. Journal of Vascular Surgery. 49, 1532-1542 (2009).
  10. Yeoman, M. S., et al. A constitutive model for the warp-weft coupled non-linear behavior of knitted biomedical textiles. Biomaterials. 31, 8484-8493 (2010).
  11. Longchamp, A., et al. The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins. Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).
  12. Saucy, F., et al. Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1. European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).
  13. Dubuis, C., et al. Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins. The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).
  14. Deglise, S., et al. Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia. Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).
  15. Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies. Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).
  16. Tao, M., et al. A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis. The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).
  17. Berard, X., et al. Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics