Synergisk Bruk av Neural forløperceller og Selv montering Peptider i Experimental Cervical ryggmargsskade

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Zweckberger, K., Liu, Y., Wang, J., Forgione, N., Fehlings, M. G. Synergetic Use of Neural Precursor Cells and Self-assembling Peptides in Experimental Cervical Spinal Cord Injury. J. Vis. Exp. (96), e52105, doi:10.3791/52105 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Ryggmargsskader ledningen (SCI) forårsake alvorlig nevrologisk svekkelse og psykologiske, økonomiske og sosiale konsekvenser for pasienter og deres familier. Klinisk, mer enn 50% av SCI påvirke cervicalcolumna en. Som en konsekvens av den primære skade, oppstår en kaskade av sekundære mekanismer, inkludert inflammasjon, apoptose, og til slutt fører til demyelinisering tissue scarring og utvikling av intramedullære hulrom 2,3. Begge representerer fysiske og kjemiske barrierer for celletransplantasjon, integrasjon, og regenerering. Derfor forme hemmende miljø og bygge bro hulrom for å skape et støttende miljø for celletransplantasjon og gjenfødelse er et lovende terapeutisk mål 4. Her er en kontusjon / komprimering modell av cervical SCI ved hjelp av en aneurisme klipp beskrevet. Denne modellen er mer klinisk relevant enn andre eksperimentelle modeller, siden komplett tran eller brudd i ledningen er sjeldne. Også i denne sammenlikningenn som særlig skade dorsum kolonner, rundtgående kompresjon av ryggmargen synes fordelaktig vekten dråpe modellen. Klipp lukkekraft og varighet kan justeres for å oppnå forskjellige skadegrads. En ring våren muliggjør nøyaktig kalibrering og standhaftighet av klipp kraft. Under fysiologiske forhold, syntetiske selv-montering peptider (SAP) selv montere inn nanofibers og dermed er tiltalende for anvendelse i SCI 5. De kan injiseres direkte inn i lesjonen minimere skade på ledningen. SAP-er er biokompatible strukturer bygge stillaser for å bygge bro intramedulære hulrom og dermed utstyre den skadede ledningen for regenerative behandlinger. K2 (QL) 6K2 (QL6) er en roman SAP introdusert av Dong et en l. 6 I forhold til andre peptider, QL6 selv samler inn β-ark ved nøytral pH 6 .14 dager etter SCI, etter den akutte fasen, strukturtilpasnings injiseres inn i sentrum av lesjonen og neurale forløperceller (NPC) er injected i tilstøtende ryggsøyler. For å støtte celleoverlevelse, er transplantasjon i kombinasjon med kontinuerlig subdural administrasjon av vekstfaktorer ved osmotisk mikro pumper i 7 dager.

Introduction

Mer enn 50% av ryggmargsskader er relatert til nakkesøylen. I den kliniske sette to store patofysiologiske mekanismer er beskrevet: den innledende kontusjon av ryggmargen og senere, den pågående kompresjon forårsaket av benbrudd, blødninger eller vev hevelse.

De aneurisme klipp kontusjon / komprimering modell etterligner både patofysiologiske mekanismer: snapping klippet produserer en kontusjon og varigheten av klipping representerer komprimering komponent, innrømme at kompresjonen i kliniske settinger forårsaket av benbrudd, blødninger eller vev hevelse seneste større lenger. Den brukte aneurisme klipp er modifisert av en ring våren garanterer presis og reproduserbar klipping kraft. Spesielt i forhold til den hemi-tran eller kontusjon modell, denne aneurisme klipp modell ligner beste kliniske settinger. Mens pasienter med thorax skader lider av paraplegi, de fleste pasienter med cervical injuries er tetraplegic og helt avhengig av. Den anatomisk struktur av cervical ledningen viser imidlertid signifikante forskjeller sammenlignet med thorax eller lumbale ryggraden og således er adressert spesielt i denne protokollen.

Utviklingen av intramedulære hulrom og vev arrdannelse er hindringer for gjenvinning og regenerering. For å overvinne disse barrierene bruk av stillasmaterialet er en lovende tilnærming. Selv-montering peptider kan injiseres direkte inn i episenteret av lesjonen. Det de montere inn nano-fiber stillaser bridging hulrommet og forbedre hemmende miljøet ved å redusere betennelse og vev skremmer. Mens stive materialer forårsake betydelig skade i ryggmargen i løpet av implantering, kan fluid peptider injiseres på en sikker måte, og uten alvorlig ytterligere skade.

Forbedring av hemmende miljø med selv-montering peptider før stamcelletransplantasjon, dermed støtte celle integration, differensiering og til slutt, funksjonell bedring etter cervical ryggmargsskade.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

MERK: Følgende eksperimentelle protokollen ble godkjent av dyr omsorg komiteen av University Health Network (Toronto, Canada) og er i samsvar med de retningslinjer som er etablert i guiden til omsorg og bruk av forsøksdyr utarbeidet av den kanadiske rådet av dyr omsorg .

1. Cervical Aneurysm Clip Contusion / Kompresjons Model

  1. Før kirurgi autoklav instrumenter og holde sterile forhold under hele surgcial prosedyren ved å sette instrumentene i en 70% alkohol bad.
  2. Bedøver Wistar-rotter (250-270 g) med en blanding av oksygen (O 2), lystgass (N 2 O) (1: 1), og 1,8 til 2,2% isofluran og støtte spontan pusting via en gassmaske anestesi. For induksjon av anestesi starte med 5% isofluran i 1 minutt og reduseres etterpå. Før kirurgi, kontroll anestesidybden ved å gi en smertefull stimulus (f.eks. På potene). Påfør fet salveri øynene for å unngå tørrhet, og for å forhindre påfølgende infeksjoner.
  3. Sette rotter på en varmepute (37 ° C), og fest hodet til en stereotaktisk ramme.
  4. Barbere kirurgisk regionen rundt nakkesøylen og desinfisere med povidonjodid og 70% alkohol.
  5. Gjør et midtlinjesnitt over ryggraden fra halsvirvelen (K2) rekker til fremtredende processus av thorax ryggvirvel kroppen 2 (T2).
  6. Skjær gjennom det ytterste laget av ryggvirvel muskler direkte på midtlinjen (for å unngå blødning) i en cranio-caudal retning og videre dissekere de dypere muskellagene rett ut til du kommer til processus spinosus og lamellene. Sett haker.
  7. Orientere fremtredende processus spinosus av vertebra kroppen T2 å observere de målrettede nivåer for laminektomi. Etter identifikasjon og mikro-kirurgiske forberedelse av den valgte lamellene, skjære gjennom ligamenti flavae å løsne lamellene og processus spinosus. Endelig cút gjennom lamellene med et bein Clipper lateral til ryggmargen og fjerne de forsiktig, unngår enhver kompresjon av selve ryggmargen.
    MERK: Vanligste nivåene er C5 / 6, C6 / 7, eller C7 / T1. Den perioperative dødelighet øker mer rostrale nivået for skade. Blødning fra paravertebral venøse sinus er vanlig og kan løses ved forsiktig kompresjon med svamp.
  8. Før du setter klippet til traumatize ledningen, identifisere nye nerverøtter for å spare dem fra klipping (spesielt på nivå C5 / 6).
  9. For å sikre jevn klipp induksjon, løsne ventral dura fra framsiden av ryggvirvel organer med en krok og forberede en korridor for klippet.
  10. Til slutt setter du åpne klippet og la det snap stengt (rask nedleggelse) for å oppnå en kontusjon skade. Klippet lukkekraft og varighet av lukkeklips bestemme intensiteten av traumer og omfanget av komprimering. Vanligvis brukes er klippet krefter mellom 15-35 g og en clipping varighet av f.eks 1 min. (Figur 1).
  11. Etter fjerning av klippet, tilpasse musklene i to lag og lukke såret.
  12. Stopp anestesi og la dyret våkne opp under kontinuerlig observasjon inntil det gjenvinner tilstrekkelig bevissthet for sternum recumbency. Til slutt satte rotte i en enkelt merd og følge postoperative behandlingsretningslinjer.
  13. Siden dyrene sliter med alvorlighetsgraden av denne type skader, må du være spesielt oppmerksom på postoperativ behandling:
    1. Administrere smertestillende (Buprenorfin og Meloxicam for 3 dager og 5 dager, henholdsvis, og i henhold til de kliniske symptomer).
    2. Gi ytterligere saltoppløsning subkutant i 3 dager (to ganger per dag, 5 til 10 milliliter (ml)).
    3. Gi antibiotika i drikkevannet 2 dager før og inntil 7 dager etter kirurgi (f.eks Moxifloxacine)
    4. Klem urinblæren 2-3 ganger om dagen til bedring av blærefunksjonen er konstantly tydelig.
    5. Observere nevrologiske utfall og fysiologiske tilstand av de opererte dyr minst en gang om dagen.

2. Injisering safter og NPCer (14 dager etter skade)

  1. Indusere anestesi som beskrevet i 1.1. til 1,3, fikse leder av rotte i en stereotaktisk ramme, fjerne sting eller sår klipp, og desinfisere såret og den kirurgiske området med povidon jod og 70% alkohol.
  2. Nøye dissekere de paravertebral muskler, setter Saker, fjerne arrvev mikroskopisk fra dura, og re-eksponere lesjon området.
  3. Forbered SAP-er i en konsentrasjon på 1% (w / v) til å utføre en ekstracellulær matriks gel. QL6 SAP-er har en fysiologisk kompatibel pH og trenger ikke å bli bufret før injeksjon. For visualisering av strukturtilpasnings i ryggmargen, bruker en fluorescerende derivat av QL6 (QL6-FITC).
  4. Injisere SAP-er (5 mikroliter (ul) i sentrum av lesjonen, fordelt i to porsjoner, hver2,5 ul bilateral av midtlinjen. Bruk en Hamilton-sprøyte som er koblet til den stereotaktisk ramme med en mikro glasskapillar (100 mikrometer (um) ytre diameter (OD)). Åpne dura forsiktig med tuppen av en skarp nål, og sette inn glass kapillær stereotaktisk to millimeter (mm) inn i traumatisert ryggmargen.
  5. Etter injeksjon 1/3 av volumet, fjernes kanylen til 1,5 mm dybde, og etter ytterligere 1/3 til 1 mm. Etter injeksjon av hele volumet, og før fjerning av sprøyten, vent 5 minutter for å stabilisere geldannelse.
  6. Å generere NPCer, bruker voksen DsRed mus (eller YFP positive mus, grønn) og isolere og dyrke dem fra paraventrical sone 4,18,21.
  7. Vurdere levedyktigheten til NPC ved trypan blå farging indikerer nærvær av ~ 90% levende celler i cellesuspensjonen. Vanne ut celler i vekst medium (50 x 103 levende celler / mikroliter) og deretter bruke dem for celletransplantasjon.
  8. Gjør fire 2 ul (8 fil total volume, inneholder 4 x 10 5 NPC) intraspinale injeksjoner bilateralt på 2 mm rostral og caudal av skade området. Etter åpning av dura, setter Hamilton micro glasskapillar 1,5 mm under dorsalflaten av ryggmargen og injisere 2 mL av cellesuspensjonen. Velge en injeksjonshastighet på 0,5 mL / min (min).
  9. På slutten av hver injeksjon og før fjerning av kapillær ut av ledningen, vent i minst 1 min slik at vevet strekker seg for å imøtekomme den nye cellevolum. (Figur 2)

3. Implantasjon av subdurale Pumper for Growth Factor Application

  1. For å anrike den cerebrale spinalvæsken (CSF) med vekstfaktorer som støtter celleoverlevelse, bruke mikro-osmotiske pumper fortynning vekstfaktorer sub-durally gjennom 7-14 dager, med en fortynningshastighet på 0,5 ul / hr, et kateter diameter på 0,04 cm ytre diameter, og et reservoarvolum på 100 ul.
  2. Velge foretrukne vekstfaktorer(For eksempel, hjerne-avledet vekstfaktor (BDGF), epidermal vekstfaktor (EGF), fibroblast vekstfaktor (FGF)), fyller pumpene 6-10 timer før implantering, og i likevekt pumper i et vannbad ved 37 ° C.
  3. Umiddelbart etter NPC injeksjoner, utarbeide en subkutan utsparing for å plassere pumpen. Foretrukne steder er de laterale flankene av thoraco- mageregionen unngå store lokale ubehag forårsaket av selve pumpen.
  4. For å få den høyeste konsentrasjonen av vekstfaktorer, sørge for at den åpne enden av kateteret slutter tett til lesjonen området. Derfor utføre en hoppe-laminektomi av øvre eller nedre tilstøtende nivå. For eksempel, hvis SCI er på C7 / T1, utføre en liten laminektomi av C5.
  5. Sett pumpen i underhudsfettet fordypningen, forkorte kateteret til nødvendig lengde, og fest den med flere sting (6,0) på paravertebral muskler unngå enhver bevegelse-assosiert forvridning.
  6. Etter å ha åpnet dura (f.eks ved C5) med skarp spissav en nål, innføre kateteret inn i det subdural plass og la den gli i en caudal retning uten motstand og uten å skade kabelen. Den hoppet lamina av f.eks C6 fungerer som ekstra poeng for fiksering og stabilisering av kateteret.
  7. Pass på at kateteret går jevnt og ikke kaste.
  8. Nære musklene ved lag, og huden, med sting eller klips. (Figur 3)
  9. Stopp anestesi og la dyret våkne opp under kontinuerlig observasjon inntil det gjenvinner tilstrekkelig bevissthet for sternum recumbency. Til slutt, sette dem tilbake i en enkelt merd og følge postoperative behandlingsretningslinjer.
  10. Gi spesiell postoperativ behandling, selv om, kan dyr ha kommet delvis på dette tidspunktet-punkt:
    1. Administrere smertestillende (Buprenorthine og Meloxicam for 3 dager og 5 dager, henholdsvis, og i henhold til de kliniske symptomer).
    2. Gi antibiotika i vannflasker 2 dager før inntil7 dager etter operasjonen (f.eks Moxifloxacine).
    3. Fortsett å klemme på urinblæren, hvis det fortsatt er nødvendig.
    4. Gi ytterligere subkutane væsker, hvis rottene vises dehydrert.
    5. Hold observere nevrologisk funksjon og fysiologisk tilstand av de opererte dyr minst en gang om dagen.
    6. Administrere immunsuppresjon behandling to dager før NPC injeksjon og inntil 7 dager etter transplanation (minocycline) og til offer (Sandimmun), henholdsvis.

4. Tissue Assessment

  1. Ofre dyr ved slutten av observasjonstiden (f.eks. 4 uker etter SCI) i dyp anestesi (5% isofluran i 2-3 min) og perfuse dem tran med 50 ml kald (4 ° C) saltoppløsning, fulgt av 150 ml kald 4 % paraformaldehyd i 0,1 M fosfat-bufret saltvann (PBS).
  2. Fjern ryggmargen og sette den i 4% paraformaldehyde i 0,1 M fosfat-bufret saltvann (PBS) i 24 timer.
  3. Tilveiebringe langsgående frysesnitt med en tykkelse på <30 um.
  4. For immunhistokjemisk farging av alle celle-kjerner gir en bakgrunn bruk DAPI (1: 1000). DsRed positive NPCer vises røde, vises QL-6 FITC grønn, og begge trenger derfor ikke å være farget spesielt. (Figur 4).
  5. For scanning elektronmikroskopi (SEM) la prøvene suge i glutaraldehyd ved 4 ° C i 2 timer, tørke dem sakte i 10% tilvekst trinn på etanol i 5 min og plassere dem i en trykksatt væske CO 2 hevert for 1 time. Frakk stillasene med gull ved hjelp av en frese coater. Ta bilder med en Hitachi S-3400N scanning elektronmikroskop. (Figur 5)

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Ved å utføre den ovenfor beskrevne fremgangsmåte, vil man få en SAP stillaset bygge bro over hulrommet, og som tilbyr en forbedring av de hemmende miljø, mindre vev arr og en økning i overlevelse NPC. Figur 4 viser et lengdesnitt av en rotteryggmarg erholdt ved skade området seks uker etter SCI og 4 uker etter QL6 SAP injeksjon og NPC transplantasjon. QL6 peptider ble vellykket sprøytes inn i ledningen, aggregert i episenteret og diffust rostro-caudally i penumbra. Elektronmikroskop avbildning viser videre, i figur 5, sammenstillingen av 1% (w / v) QL6 peptider til en nanofiber stillaset i 2 timer fortynnet i PBS-løsninger.

Denne matrisen gir en forbedring av den hemmende miljø som bidrar til økt celleoverlevelse og celledifferensiering, mindre vev arrdannelse og til slutt fører til en bedre mulighet for funksjonell helbredelse.

ure en "src =" / files / ftp_upload / 52105 / 52105fig1highres.jpg "/>
Figur 1: Clip kontusjon / komprimerings aneurisme modell (A) Fotografi gjennom kirurgisk mikroskop etter laminektomi av C7 / T1 og klipp kontusjon / kompresjon av ryggmargen av en rotte (B) Bilde av klippet med ringen våren garanterer presis.. lukkekraft.

Figur 2
Figur 2: Injeksjonspunkter for strukturtilpasning og stamceller Grafisk illustrasjon av injeksjons punkter:. 2 stereotaktisk utført SAP injeksjoner i episenteret av lesjonen, etterfulgt av fire injeksjoner av NPCer i de tilstøtende ryggsøyler med en avstand på 2 mm caudal og rostralt fra episenteret.

Figur 3
(A) Implantert subdural kateter for å administrere vekstfaktorer. kateteret er festet ved flere 6,0 suturer på de paraspinal muskler; liten åpning av dura i C5; subdural plassering av kateteret med den åpne ende kateteret nær den lesjon området på C7 / T1. (B) Kateter som er koblet til en mikropumpe plassert i et subdural utsparing på den laterale flanke.

Figur 4
Figur 4: vellykket levering av safter og NPC inn i den cervikale ryggmargs Fluorescerende farging (DAPI bakgrunn, blå) av et lengdesnitt av en traumatisert ryggmarg av en rotte.. Merkede SAP-er (QL6-FITC, grønn) har samlet i episenteret av lesjonen. Injisert NPCer (DsRed positiv, rød) har diffust irostral og caudal retninger. Skala bar refererer til 5 mm.

Figur 5
Figur 5:. Nanofiber stillaset dannelse Scanning elektronmikroskop (SEM) bilde som viser nanofiber stillaset dannelsen av sammensatte strukturtilpasningsprogrammer. Skala bar refererer til 1 um).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denne protokollen er utviklet for å gjøre det mulig for leseren å utføre en cervical skader modell hos rotter og å bruke en kombinert behandling tilnærming med safter og NPCer fremme bedre restitusjon etter cervical SCI.

Spesielt i forhold til andre livmorhalstraume modeller, for eksempel (hemi) -transection modell eller vekt slipp og hjernerystelse modeller, klippet kontusjon / komprimering modellen representerer både store patofysiologiske traume mekanismer - kontusjon og plant og dermed etterligner beste kliniske tilstander. Mens det er velkjent for bruk i rotte og mus torakalkolumna 7-11, har det nylig blitt tilpasset for bruk i nakkesøylen. Dette var et viktig skritt siden cervical ryggmargsskader er det oftest sett i klinikken og livmorhals anatomi varierer betydelig fra thorax ryggraden. Videre cervical SCI pasienter som lider av tetraparesis er opptatt av å gjenvinne minst delvis motor fsalvelse av deres øvre ekstremiteter.

Utfordrende aspekter av en eksperimentell cervical SCI, derimot, er en høy dødelighet som øker i en rostralt retning fra C7 til C5 og kan nå opp til 20-30% i den midtre og øvre cervicalcolumna. Videre nye nerverøtter (spesielt ved C5 / 6) er følsomme for manipulering, og i tilfelle de ikke er bevart, skade og irritasjon kan føre til tygging av de frontale poter resulterer i nødvendigheten av en tidlig ofring av dyrene. Generelt, dyr med cervical ryggmargsskade trenger mye av postoperativ oppmerksomhet og omsorg og vise en lengre løpet av utvinning. På den annen side, i tillegg til forsiktig kirurgiske preparatet, disse problemene kan delvis løses ved å tilpasse graden av skade ved å velge en passende klips lukkekraft (for eksempel 15 til 35 g) og en tilstrekkelig klipping tid (for eksempel 1 min). Endringer i disse parametrene fører til forskjellige alvorlighetsgrader av skade (mild, deLuxete, eller alvorlig SCI). Videre kan det være en risiko for kirurg avhengighet eller en skjev fordeling av skaden. For å løse disse problemene ved bruk av et klipp applikator er et alternativ der klippet alltid frigjøres og derfor stengt med samme hastighet og dermed hastighet. Før du knipser klippet er det obligatorisk å sikre at klippet har riktig posisjon, og omslutter hele ryggmargen likt. Spesiell kirurgisk utfordring ligger i å re-eksponering av lesjonen nettstedet fjerne arrvev fra dura. Det anbefales at denne prosedyren utføres mikro-kirurgisk, ved hjelp av skarpe forberedelse, og unngå noe press eller trekke fra den faste ledningen.

Selv-sammen peptider er identifisert å ha potensiale til å bygge bro over hulrommet og dessuten til å forbedre den hemmende miljøet ved lesjon området endelig selv fører til aksonal regenerering og spirende 5, 12,13,14. QL-6 nanofibers montere til stillaser bridgingden intramedullære hulrommet, og således kan gi en matrise for spiring og aksonal regenerering og forbedre den inhiberende miljø før celletransplantasjon. Fordelene med disse peptidene lå i deres lave viskositet (væske) og den nøytrale pH-verdi. Spesielt i forhold til høy-viskøs hydrogeler eller vev stillas, kan SAP-er enkelt injiseres i den skadede ryggmargen og andre skader som stammer fra injeksjons seg selv er begrenset.

Selv QL6 nanofibers selv kan forbedre celle overlevelse 4,15, likevel synes bruk av vekstfaktorer for å være fordelaktig 16,17,18,19,20,21. De kan administreres enten ved hydrogeler frigjørende vekstfaktorer 22 eller ved påføring via osmotiske pumper (som beskrevet ovenfor). Osmotiske pumper som er koblet til subdural katetre har den fordel at en kontinuerlig og kontrollert frigjøring og således anrikning av cervical spinalvæske (CSF). Plassere subdural kateter, er imidlertid challenging spesielt med hensyn til store arr som kan ha oppstått etter noen uker etter skade.

For å gi gode vev forhold for NPC overlevelse og integrering, har flere studier valgt injeksjon poeng i den tilstøtende hvit substans, 2 mm rostralt eller hale til lesjonen området og ikke direkte i episenteret av lesjonen 4,15,18. Der NPCer har en bedre sjanse for å overleve, integrasjon og differensiering i astrocytter, oligodendrocytter eller nevroner, og kan migrere til eller inn i lesjonen resulterer i aksonal spiring og forbedret aksonal tilkobling.

Etter å mestre disse teknikkene denne foreslåtte protokollen makt som skal vedtas av de enkelte brukere i henhold sine nødvendigheter og interesser omfatter modifikasjoner av nivå og alvorlighetsgraden av skaden, bruk av ulike celletyper eller vekstfaktorer, eller tillegg av andre nevro-beskyttende stoffer .

Isammendraget, kanskje kombinert behandling med safter og NPCer tilbyr en roman og lovende tilnærming vinne de mest utfordrende hindringer i behandling av SCI: hulrom og vev arrdannelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Vi ønsker å takke finansieringen støtte for dette arbeidet fra den kanadiske Institutes of Health Research (CIHR), til Krembil Family Foundation, halbert Chair i Neural Repair and Regeneration, Phillip og Peggy DeZwirek, og Gordon Yao for bidraget Figur 2 . Klaus Zweckberger ble finansiert av et stipend fra "Deutsche Forschungsgesellschaft" (DFG).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Aneurysmal clip SharpTech
Surgical microscope Leica
Micro injection system World Precision Instruments, Inc.
Small animal stereotaxic instrument David Kopf Instruments
Hamilton syringe Hamilton company
Subdural pumps Alzet osmotic micro pump 1007D
Surgical instrument Fine Science tools
Isoflurane USP Pharmaceutical Partners of Canada Inc.
0.9% Sodium Chloride injection USP Baxter
7.5% Povidone iodine Purdue Pharma
70% Isopropyl alcohol USP GreenField Ethanol Inc.
QL6 SAP Covidien
0.4% Trypan blue Gibco
Platelet-Derived Growth Factor (PDGF) Sigma
Epidermal Growth Factor (EGF) Sigma
Fibroblast Growth Factor (FGF) Sigma

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sekhon, L. H., Fehlings, M. G. Epidemiology, demographics, and pathophysiology of acute spinal cord injury. Spine (Phila Pa 1976). 26, S2-S12 (2001).
  2. Fehlings, M. G., Tator, C. H., Linden, R. D. The relationships among the severity of spinal cord injury, motor and somatosensory evoked potentials and spinal cord blood flow). Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 74, 241-259 (1989).
  3. Thuret, S., Moon, L. D., Gage, F. H. Therapeutic interventions after spinal cord injury. Nat Rev Neurosci. 7, 628-643 (2006).
  4. Iwasaki, M., Wilcox, J. T., Nishimura, Y., Zweckberger, K., Suzuki, H., Wang, J., Liu, Y., Karadimas, S. K., Fehlings, M. G. Synergistic effects of self-assembling peptide and neural stem/progenitor cells to promote tissue repair and forelimb functional recovery in cervical spinal cord injury. Biomaterials. 35, 2617-2629 (2014).
  5. Holmes, T. C., de Lacalle, S., Su, X., Liu, G., Rich, A., Zhang, S. Extensive neurite outgrowth and active synapse formation on self-assembling peptide scaffolds. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 6728-6733 (2000).
  6. Dong, H., Paramonov, S. E., Aulisa, L., Bakota, E. L., Hartgerink, J. D. Self-assembly of multidomain peptides: balancing molecular frustration controls conformation and nanostructure. J Am Chem Soc. 129, 12468-12472 (2007).
  7. Rivlin, A. S., Tator, C. H. Effect of duration of acute spinal cord compression in a new acute cord injury model in the rat. Surg Neurol. 10, 38-43 (1978).
  8. Poon, P. C., Gupta, D., Shoichet, M. S., Tator, C. H. Clip compression model is useful for thoracic spinal cord injuries: histologic and functional correlates. Spine (Phila Pa 1976). 32, 2853-2859 (2007).
  9. Fehlings, M. G., Tator, C. H. The relationships among the severity of spinal cord injury, residual neurological function, axon counts, and counts of retrogradely labeled neurons after experimental spinal cord injury. Exp Neurol. 132, 220-228 (1995).
  10. Joshi, M., Fehlings, M. G. Development and characterization of a novel, graded model of clip compressive spinal cord injury in the mouse: Part 2. Quantitative neuroanatomical assessment and analysis of the relationships between axonal tracts, residual tissue, and locomotor recovery. J Neurotrauma. 19, 191-203 (2002).
  11. Joshi, M., Fehlings, M. G. Development and characterization of a novel, graded model of clip compressive spinal cord injury in the mouse: Part 1. Clip design, behavioral outcomes, and histopathology. J Neurotrauma. 19, 175-190 (2002).
  12. Cigognini, D., Satta, A., Colleoni, B., Silva, D., Donegà, M., Antonini, S., Gelain, F. Evaluation of early and late effects into the acute spinal cord injury of an injectable functionalized self-assembling scaffolds. PLoS One. 6, (5), e19782 (2011).
  13. Hou, T., Wu, T., Wang, L., Liu, Y., Li, M., Long, Z., Chen, H., Li, Y., Wang, Z. Cellular prostheses fabricated with motor neurons seeded in self-assembling peptides promotes partial functional recovery afters spinal cord injury in rats. Tissue eng Part A. 18, (9-10), (2012).
  14. Gelain, F., Cigognini, D., Caprini, A., Silva, D., Colleoni, B., Donegà, M., Antonini, S., Cohen, B. E., Vescovi, A. New bioactive motifs and their use in functionalized self-assembling peptides for NPC differentiation and neural tissue engineering. Nanoscale. 4, (9), 2946-2957 (2012).
  15. Liu, Y., Ye, H., Satkunendrarajah, K., Yao, G. S., Bayon, Y., Fehlings, M. G. A self-assembling peptide reduces glial scarring, attenuates post-traumatic inflammation and promotes neurological recovery following spinal cord injury. Acta Biomater. 9, 8075-8088 (2013).
  16. Rosner, J., Avalos, P., Axosta, F., Liu, J., Drazin, D. The potential for cell therapy combined with growth factors in spinal cord injury. Stem Cell Int. 826754 (2012).
  17. Lu, P., Wang, Y., Graham, L., McHale, K., Gao, M., Wu, D., Brock, J., Blesch, A., Rosenzweig, E. S., Havton, L. A., Zheng, B., Conner, J. M., Marsala, M., Tuszynsky, M. H. Long distance growth and connectivity of neural stem cells after severe spinal cord injury. Cell. 150, 1265-1273 (2012).
  18. Karimi-Abdolrezaee, S., Schut, D., Wang, J., Fehlings, M. G. Chondrioitinase and grwoth factors enhance activation and oligodendrocyte differentiation of endogenous neural precursor cells after spinal cord injury. PLoS One. 7, (5), e37589 (2012).
  19. Awad, B. I., Carmody, M. A., Steinmetz, M. P. Potential role of growth factors in the management of spinal cord injury. World Neurosurg. (13), 1875-8750 (2013).
  20. Kojima, A., Tator, C. H. Intrathecal administration of epidermal growth factor and fibroblast growth factor 2 promotes ependymal proliferation and functional recovery after spinal cord injury in adult rats. J Neurotrauma. 19, (2), 223-238 (2002).
  21. Karimi-Abdolrezaee, S., Eftekharpour, E., Wang, J., Cindi, M. M., Fehlings, M. G. Delayed trasplantation of adult neural presursor cells promotes remyelination and functional neurological recovery after spinal cord injury. J Neurosci. 26, (13), 3377-3389 (2006).
  22. Burdick, J. A., Ward, M., Liang, E., Young, M. J., Langer, R. Stimulation of neurite outgrowth by neurotrophins delivered from degradable hydrogels. Biomaterials. 27, 452-459 (2006).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics