Author Produced

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

* These authors contributed equally
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Tse, G. H., Hesketh, E. E., Clay, M., Borthwick, G., Hughes, J., Marson, L. P. Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection. J. Vis. Exp. (92), e52163, doi:10.3791/52163 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Uzunluk ve yaşam 2 kalitesinde iki gelişme sunan, dünya çapında son dönem böbrek yetmezliği olan hastalar için devrimci bir tedavi haline gelmiştir o zamandan bu yana böbrek yetmezliği tedavisi için başarılı böbrek nakli ilk, tek yumurta ikizleri 1 arasında 1955 yılında tarif edilmiştir. Ancak uzun dönem greft sağkalım kronik allogreft hasar 3 sonuçlanan patolojik süreçlerin bir çok engel olmuştur.

İnsanlarda nakledilen böbreğin reddedilmesi immunosupporessive rejimlerinde önemli gelişmelere rağmen, önemli bir morbidite nedenidir. Böbrek nakli, bir fare modeli geliştirilmesi amacı yakından insan renal transplantasyon 4 bulundu süreci ve patolojiyi çoğaltmak. Skoskiewicz ve ark., 1973 5 böbrek nakli fare modelini tarif. Gelişmiş mikrocerrahi becerileri gerekli olmasına rağmen, değerli bir tçeşitli nedenlerden dolayı ool: fare genomu iyi karakterize ve deneysel yöntemler ve fare çalışmaları için mevcut tekniklerin büyük bir çeşitlilik söz konusudur olmuştur.

Böbrek nakli fare modeli kullanılarak çok grup, ancak deney 4 süresince yerinde bırakılır diğer çalışmalarda ve alıcı farelerin saf böbreklerin bizim tarif edilen metodoloji, bir de, hayatı destekleyen organ olarak böbrek nakli kullandık. Yararı, fare ve böylece fare morbidite ve ikinci bir prosedür ölüm riskini azaltan, tek ve anestezi sergilemesidir. Ayrıca fare kademeli böbrek yetmezliği olumsuz etkilerinden muzdarip değil.

Allojenik ret modelleri, kalp ve deri gibi diğer organlarda mevcut olmasına rağmen, bu her zaman böbrek nakli ile doğrudan ilgili değildir. Bu modeller farklı modları ve dy ortaya kanıtlar vardırreddinin iç- sel, örneğin kalp alograft ve böbrek nakli reddi, zaman süreci, belirli gerilme kombinasyonları 6 önemli ölçüde farklıdır. Bu transjenik olmayan FVB / NJ farelerine, BALB / c donörlerinde akut renal alograft reddi, kalıpları tarif etmişlerdir, bu model T hücreleri ve makrofajlar 7 birikimi ile hücresel kaynaklı yaralanma sergiledi. Bu farenin tek bir MHC sınıf II loci mis ile karakterizedir Alternatif olarak biz de interstisyel fibrozis ve tübüler atrofi sergileyen kronik allogreft hasar modeli tarif var, bu, C57BL / 6 alıcılar içine C57BL / 6 BM12 bağışçıları bir böbrek nakli sonucu -match 8.

Naklinin çok yönlü olarak akut rejeksiyon, hücresel ve hümoral rejeksiyon, iskemi reperfüzyon yaralanması, ve yeni tedavi edici ajanlar da dahil olmak üzere ana hatlarını açıklar böbrek nakli fare modeli kullanarak çalışılmıştır. Biz cerrahi t değiştirdinizechnique çalışma süresini azaltmak ve cerrahi kolaylığını artırmak için. Özellikle simultane donör ve alıcı hazırlık ve sürekli aort yama anastomoz kullanarak basitleştirilmiş bir vasküler anastomoz tekniğini tarif var. Bu video ve el yazması bu tekniğin kurulması yardımcı olmak için kilit noktaları sağlayacaktır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Uygun ulusal ve yerel kurumsal etik hayvan deneyleri gerçekleştirmeden önce bir yerde olmalıdır. Alıcı cerrah 2,1-2,8 gerçekleştirir iken Özellikle Birleşik Krallık'ta şu deneyleri donör cerrah yapmalıdır iki mikrocerrah aynı anda çalıştırmak için kullanılabilir Hayvanlar (Bilimsel Prosedürleri) Yasası 1986 altında yapılmıştır, 1,1-1,16 sonra 3,1-3,5 adımları . Tek bir operatör için adımlar sırayla takip edilebilir.

1. Donör Hazırlığı

Not: Burada sunulan prosedür, verici, C57BL / 6 BM12 ve alıcı 20 g veya daha büyük bir vücut ağırlığı olan 8-16 haftalık yaş arası, C57BL / 6 erkek farelere içindir. Bununla birlikte, bu prosedür, yeniden üretilebilir bir fare suşlarının çeşitli gerçekleştirilebilir. Örnek sonuçlar bölümünde sunulan veriler, C57BL / 6, C57BL / 6 BM12 ve BALB / c farelerinden elde edilmiştir.

  1. Davranış prosedürleri istimaluğraşlarla g steril cerrahi aletler ve malzemeler (otoklav), mümkün olduğunca steril çalışma alanını tutmak. İki cerrah olup olmadığını alıcı hazırlanması ile eşzamanlı olarak donör hazırlık yapın.
  2. Medetomidin (0.5 mg / kg) ve ketamin hidroklorür (/ Kg 200 mg), intraperitoneal enjeksiyon (31G iğne) ile fare anestezisi. Tüm işlemi için yeterli zaman sağlayarak, 4 saat boyunca muhafaza edilen bir anestezik düzlemde Bu sonuç, gerçekleştirilmelidir. Ek anestezi gerekli değildir.
  3. Fare (ayak tutam hiçbir yanıt) anestezi doğrulayın.
  4. Farenizin karın Tıraş ve yapışkan bant ile herhangi bir gevşek saç kaldırmak.
  5. Bir steril drape ısıtılmış mat sırtında fare yerleştirin ve gevşek steril maskeleme bandı ile bacaklarda hareketsiz.
  6. Termal yanıklar için işlem boyunca fare izleyin. Mümkünse olmayan bir elektrikli ısı kaynağı kullanın.
  7. Bir göz yağ ve sa UygulaBir iyot çözeltisi ile seyreltilmiş karın duvarı nitize.
  8. Periton boşluğuna girin ve 3 cm Calibri karın ekartörünü eklemek için karın orta hat kesi olun.
  9. Nemli bağırsakları ve cerrahi alanda tutmak ve organların gereksiz kurumayı önlemek için ısıtılmış serum fizyolojik uygulayın.
  10. Steril örtüler ile fare Kapak ve aorta, vena kava ve sol böbrek maruz operatörün sol (Farenizin sağ) için bağırsakları hareket ettirin.
  11. Mide bir kastanyollanmıştır forcep uygulayın ve tamamen büyük damarları ve sol böbrek maruz superiorda çekin. Uzak gibi karaciğer lobları, seminal kesecikler ve bağırsak gibi cerrahi alanında, dokuların geri çekmek için karın içine steril bezlerden (2 mm x 2 mm) nemli paketleyin.
  12. Çevre adventia, yağ ve açık açık, ince uçlu forseps kullanılarak bağ dokusu diseksiyon ile periton boşluğuna sol adrenal bezden sol böbrek izole eder. Ne sebeple alanlar arasındaki forseps kapalı ipuçları yerleştirined ayrılır ve yavaş yavaş forcep ipuçları alanı incelemek için açmaya imkan vermek için.
  13. Bağlanması ve daha sonra 9 / Ç naylon adrenal ven ve sol gonadal ven sol bölerek sol renal ven izole. Renal ven yakın dikiş yerleştirin.
  14. Ligatı ve dikiş bırakarak mesaneye yakın 7 / Ç ipek sütür ile üreteri bölmek uzun biter. Böbrek toplandı ve üreter anastomoz için gerekli olan zaman, bu uzun ameliyat dikiş ipliği ucu kullanılacaktır.
  15. Harekete ve tam renal arter superiorda ve alt aort ve vena kava incelemek ve açık açık gemilerin ön ve yanlardan lenfatik damarları ve yağ incelemek için ince uçlu forseps kullanabilir ven için.
  16. Aorta ve vena kava ve yavaş yavaş yayıldı forseps arasındaki doku uçağı bulun. Yavaş yavaş minimal travma ile doku yaymak için ince uçlu forseps ipuçları açın.
  17. Açılı cezası geçerek renal arter üstün ve aşağı aorta etrafında gevşek 7 / Ç ipek kravatucu forseps gemilerin arkasına etrafında ve üzerinden bir dikiş çizim. Bu dikişler University of Wisconsin solüsyonu retrograd perfüzyon izin böbrek alma önce sıkılır.

2. Alıcı Hazırlık

Donör hazırlığı takip başına 1,2-1,8 adımları.

  1. Aort, vena kava maruz operatörün sağ (Farenizin sol) için bağırsakları hareket ettirin. Steril tuzlu batırılmış bezle bağırsakları örtün.
  2. Sağ renal arter bağlanarak bir sağ nefrektomi gerçekleştirin ve 7/0 ipek sütür ile birlikte ven ve sonra da bölmek.
  3. 7 / Ç ipek sütür ve bölünmesine doğru üreter Arter.
  4. Harekete geçirmek ve adım 1.14 ve 1.15 açıklandığı gibi tamamen renal arter ve ven aşağı aorta ve vena kava teşrih. Aorta ve vena kava arasında tam diseksiyonu olun. Vena kava ve aort anterior çalışan internal spermatik arteri korumak için özenBir lenfatik paket ile birlikte.
  5. , Omurga vena kava ve damardan retroperitonda çalışan lomber damarlarını tanımlamak süreklilik 9 / Ç ipek ile lige, damarları bölmek için gerek yoktur.
  6. Vasküler anastomozlar için arasındaki boşluk mikrovasküler kelepçeleri yerleştirmek için yeterli alan tanımlayın.
  7. Dorsal penil ven yoluyla intravenöz heparin (5 adet) uygulayın.

3. Donör Böbrek Alma

Arteriyel dolaşımın böbrek izole etmek alt ve üst aort etrafında yerleştirilmiş 7 / Ç ipek bağları sıkın.

  1. Aort içine bir iğne (31 g) ile University of Wisconsin çözeltisi, 0.5 ml - retrograd soğuk 0.2 infüze.
  2. Dikişler içinde aorta bölmek ve böbrek ve aort uzunluğu ile renal arter kaldırmak için vena kava ile kavşakta renal ven bölün. Varsa w, aort kaynaklanan bel damarları Bölildirimde ligasyon.
  3. Bir kültür kabı içinde steril bir pamuk ile soğuk tuzlu su içinde böbrek yerleştirin.
  4. Servikal dislokasyon ile, verici bir fare öldürülür.

4. Böbrek Nakli - Böbrek Hazırlık

  1. Renal arter karşısında uzunlamasına doğrudan aort duvarı bölerek bir aort yama oluşturun. Arteriyel anastomoz yaparken bağlandı veya kaçınılması gereken yama herhangi bir damar lümen tanımlayın.
  2. Inferiorda superiorda renal ven lümen ve ikinci ayrı dikiş dışarıdan içeriye bir 10 / Ç dikiş yerleştirin. Dikişler adrenal damar bölmek için kullanılır ve gonadal damar damar yönlendirmek için kullanılabilir.
  3. Alıcı (Şekil 1.1) sağ kanadını böbrek yerleştirin ve dikişler de vasküler anastomozlar bezlerden veya diğer araçlar dolaşık olma dikişler olmadan tamamlanabilir sağlamak için yerleştirilir emin olun.

5. Böbrek Transplanlama - Vasküler Anastomoz

İlk inferiorda sonra superiorda vena kava ve aorta kapsayan mikrovasküler kelepçeleri uygulayın.

  1. Vena kava ön duvarı delmek suretiyle bir iğne (31G) ile bir ventomy olun. % 0.9 NaCl yaklaşık 50 ul enjekte ederek vena kava yıkayın kan.
  2. Uzunluğu, donor böbrek toplar damarı çapına denk olacak şekilde venotomi içinde açarak, ince uçlu forseps kullanılarak venotomi Widen.
  3. Venotomi (Şekil 1.2) tepesinde birinci (renal ven lümeninde zaten) 10 / Ç üstün dikiş yerleştirin ve alt tepe ulaşana kadar (Şekil çalışan bir dikiş içinde anastomoz arka duvarını katılmak 1.3).
  4. 10 / Ç alt dikiş yerleştirin ve sonra arka duvarından çalışan sütür kravat tek bir düğüm (Şekil 1.4) ilk kravat.
  5. Ön wal oluşturmak alt dikiş kullanılarakanastomoz l çalışan bir dikiş ile (Şekil 1.5) ve üstün apeks (Şekil 1.6) de üstün dikiş sonuna kadar kravat.
  6. Forseps ile aort duvarı çekme ve makas ile elips yama (yaklaşık aortotomy aortun çevresi ve uzunluğu üç kez renal arter lümeninin beşinci olmalı) keserek aortotomy oluşturun.
  7. Içeriden dışarıdan aort yama üstün noktasında (Şekil 1.7) bir 10 / Ç dikiş yerleştirin ve aortotomy üstün tepesinde gemilere dışında kravat aorta geçer.
  8. Çok sıkı sütür (Şekil 1.9) bağlayarak anastomoz daraltmak özen, çalışan bir dikiş superiorda alıcı aorta donör yama anastomoz (Şekil 1.8) başlayan arteriyel anastomoz oluşturun.
  9. (Böbrek reperfüze sonra ilk üstün kelepçesini alt damar kelepçeleri sökünŞekil 1.10 ve 1.11). Üreter yeterli kan temini sağlandığı takdirde üreter Görünür peristaltizmin belki görülmektedir.

6. Böbrek Nakli - Üreterden Anastomoz

  1. Karın duvarından mesane ekleri bölün.
  2. Her iki duvar aracılığıyla mesane sağa soldan iğne (21G) geçirin.
  3. Iğne lümeninde düz forcep ipuçları yerleştirin ve geçmek hem de geri forseps artık mesanenin sol tarafında dışarı sağdan sola geçiyoruz şekilde mesane yoluyla.
  4. Üreter sağ tarafında dışarı sonra sol mesane defekt geçecek şekilde mesane yoluyla donör üreter üzerinde dikiş çizin.
  5. Yuvarlak gövdeli iğne 9 / Ç naylon sütür ile giriş noktası etrafında üç tek sütürler ile mesane adventisiyal üreter adventisya dikin.
  6. Düğümlendikten için üreter proksimalinde kesti, böylece açılış inciE üreter idrar akışı ve üreter uç mesane vücuda geri çekilmesi için elde edilmesine olanak tanıyacak. Idrar Görünür üretim peri-üreter damarlardan kanama ile birlikte görülebilir.
  7. Tek bir kesintiye 9 / Ç ipek sütür ile sağ yan mesane defekti kapatmak.

7. Kurtarma ve Post-operatif Bakım

Orijinal yönde karın içine gastrointestinal organlara değiştirin ve 6 / Ç emilebilir sütür ile rektus kasları yaklaştırmayı karın duvarı kapatmak.

  1. Metal deri klipler ile cildi yaklaşır.
  2. Kısmen atipamazole hidroklorür (10 g / ml) bir deri altından enjeksiyon ile anestezi ters.
  3. Deri altından% 0.9 NaCl, 1 ml deri altından buprenorfin hidroklorür (0.05 mg / kg) ile ve akışkan destek enjeksiyon için analjezi uygulayın.
  4. 24-48 saat boyunca 28 ° C'de ısıtıldıktan kabininde fare kurtarmak. Için hastalık up fareyi gözlemleyinDeneyin tamamlanması.
  5. 10 gün postoperativ - metal deri kliplerini 7 çıkartın.
  6. Deney tamamlandıktan sonra, servikal dislokasyon ile fare euthanize.
  7. Çıkarın ve histolojik analiz için, karşı böbrek allograftı ve toplar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Renal alograft reddi, nakledilen böbreğin (Şekil 2) metakarn sabitlenmiş parafine gömülü doku bölümleri histolojik analiz ile değerlendirilebilir. Renal iskemi reperfüzyon hasarı sinjeneiktir farenin sonuçları arasında böbreklerin Isograft nakli, ancak 4 hafta tübüller kurtarıldı ve yerli böbrekler için histolojik karşılaştırılabilir var. Akut rejeksiyon böbrek parankimi genelinde yaygın mononükleer hücre infiltrasyonu İnterstisyum, glomerüller ve tübüllerini içeren, orada 1 hafta içinde, BALB / c alıcıya içine C57BL / 6 böbrek nakli ile modellenebilir. Kronik allogreft hasar C57BL / 6 alıcıya naklediliyor C57BL / 6 BM12 böbrekler tarafından örnek alınabilir, bu interstisyel fibrozis ve kademeli tübül kaybı oluşan insan patoloji bulunan tipik özellikleri sonuçlanır. Yüksek-enerjili alanında (x200 büyütme) başına brüt tübül sayısı (Fi fonksiyonel nefron kütlesinin kantifizasyonunuGüre 3), tübüller kaybı reddi nedeniyle tübüler hasarı yansıtır. İnterstisyel fibrozis pan-kollajen leke picrosirius kırmızı (Şekil 4) kullanılarak tespit edilebilir. Normal endojen kolajen ancak ilerleyici fibrozis sonuçlanan yatırılır kronik hasar yeni kolajen sırasında görülmektedir. Kronik nakli sonrası belirgin bir hasar 8 ve 12 hafta (Şekil 5) olur.

Önemli bir öğrenme eğrisi modeli (Şekil 6) oluşturulması için üstesinden gelinmesi gereken. Tahminen 40 prosedürler tekrarlanabilir vasküler anastomoz zamanı komplikasyonların ücretsiz kabul sağkalım ulaşıldı önce kurtarılan farelerde yapılmıştır. Fareyi euthanizing için en yaygın nedeni bizim deneyim sistemik heparization bu insidansını azaltır ancak içinde ve arter trombozu bağlı spinal kord iskemi-uzvu düşürmek için ikincil arka bacak felç nedeniyle oldu. Fareler rutin mo vardıdeneyleri sona erdirmek için yerel kabul edilen kriterlere uygun nitored. Öğrenme eğrisinin plato fazda gerçekleştirilir Survival deneyler 28.9 ± 0.47 dakika ortalama vasküler anastomoz sürede sonuçlandı.

Şekil 1
Vasküler anastomoz tekniği Şekil 1. şematik gösterimi. Donör böbrek alıcı fare sağ kanadında yerleştirilir. Donör renal ven uç-yan şekilde anastomoz edilir ve aortun bir yama üzerinde donör renal arter alıcı aorta anastomoz edilir.

Şekil 2
Nakledilen böbreğin Şekil 2. Temsilcisi histolojik boru şeklinde yaralanma. Metil Carnoyl çözümü dokularında tespit edildikten sonra parafın gömüldü4μm yüzgeçleri ve doku bölümleri hemotoksilin ve Eosin ile boyandı. Böbrekler boru şeklinde yaralanma sergilemek ve görünüm yerli böbrekler karşılaştırılabilir yok isograft nakli sonrası 4 hafta. BALB / c alıcılara transplante, C57BL / 6 BM12 böbrekler yaygın tek çekirdekli hücre süzüntülerinin (x) ve nekrotik tübüller (**) ile tubulitis akut alograft reddini tabi tutulur. Perivasküler lenfositik infiltrasyonlar (blok ok ⬆) ile karakterize kronik allogreft hasar ve interstisyel fibrozis ve tübüler atrofi (içi boş oklar ⇧) C57BL / 6 sonuçlarından nakledilen C57BL / 6 BM12 böbrekler. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,
Tr tübüler yaralanma Şekil 3. Kantitasyonu ansplanted böbrek. Sağlıklı ine (sağlam bir temel zarın, sağlam tübül lümen, sağlıklı sitoplazmik hacmi ve bir muhafaza apikal mikrovilluslar fırça bordürü varlığı ile tanımlanan) saptanmıştır nefron kütle yansıtma alanı başına borucuklar ortalama sayısının sayılmasıyla tayin edilebilir (x200 büyütme ) (n = 6, 10 ardışık alanlar arasında ortalama, ** p <0.01).

Şekil 4
Şekil 4. Kronik allogreft hasar nakledilen böbrek kollajen picrosirius kırmızı boyama tespiti ile belirgindir içinde interstisyel fibrozis (temsilcisi görüntüler). Kollajen birikmesi ile tespit edilebilir. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Güre 5 "src =" / files / ftp_upload / 52163 / 52163fig5highres.jpg "/>
Interstisyel fibrozis Şekil 5. Kantitasyonu. Kırmızı pozitifliği C57BL / 6BM12 olarak yetişmesini picrosirius ile ölçülen İnterstisyel fibrozis (n = nakli sonrası C57BL / 6 alıcıları oniki hafta ⇒ 6, 10 ardışık alanların ortalama, ** p <0.01, * p < 0.05).

Şekil 6,
Şekil 6. Öğrenme eğrisi. Ölümcül narkoz verilen farelerde İlk non-kurtarma deneyler cerrahi tekniği geliştirmek için yapılmıştır. Bu komplikasyon olmadan hayatta kalan fare ile başarılı bir şekilde re-perfüze böbrek nakli elde etmek için geri deneyleri ile takip edildi.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Arteriyel anastomoz gerçekleştirmek için en iyi tarif şekilde alıcı aorta uç-yan bir şekilde, devamında renal arter ile, donörün uzak aorta kullanmaktır. Daha uygun olması için inanıyoruz insan böbrek nakli yapılan 'Carrell ve yama "ikizleme benzer bir aort yama, kullanımını tarif etmektedir. Donör ve alıcı operasyon süresi literatürde raporlar seyrek olsa biz alıcı aorta için uç-yan donör aort yerine alıcı aort, aort yama kullanan tercih olduğuna inanıyorum. Bir yama kullanarak tüm lomber donör aort dallarını incelemek için gereksinimini ortadan kaldırır ve aynı zamanda zaman doğal olarak bu dışlayan bir yama örgülü olarak, bunları tek tek Arter götürüldü.

Bu modeli elde etmek için kritik adımlar olarak arteriyel yama anastomoz içinde renal arter dışında başka arteriyel lümen olmasını sağlamak için özen içerir onlarmikro-vasküler kelepçeler çıkarılınca sızdırıyor. Anastamoses inşa dikişler eliptik aortotomy sağlanan biz gözlemledik pratiklik, anastomoz ve nedeni iskemi daraltmak ya da herhangi bir kan akışını önleyebilir çanta-string etkisinin farkında sıkı ancak bağlı olabilir yeterli büyüklükte çanta-string olduğunu etkisi görülmemektedir. Venotomi forseps ile germe tarafından genişletilmiş bir iğne ile yapılır, biz bu forseps ile germe gibi kesim tercih istikrarlı bir anastomoz oluşturmak için venöz kolayca görülebilir doku ve yardım dikildikten bir halka oluşturur inanıyorum. Mesaneye üreter anastomoz biz idrar sızıntısı ve üreter darlık nedeniyle muhtemelen iskemi ile ilişkili olmuştur mesane yeniden inşası için bir mesane kubbe yerine burada açıklanan tekniği savunmak, dikkate almak çok önemli bir bileşenidir. Bizim açıklanan teknik doğrudan bladd anastomoz gibi daha kısa bir uzunluğu verici üreter kullanılmasına izin verirer 5. Bu teknik gelişmeleri kullanarak önemli ölçüde bu deneysel modeli tamamlamak için gereken süreyi azaltmak mümkün olmuştur. Nitekim, aynı anda beş transplant alıcılarını çalışan iki operatörleri ile farelerin kurtarma ve izlenmesini sağlamak için yeterli zaman günde yapılabilir.

Bu yazıda tarif edilen modeli ve teknikte önemli bir sınırlama, fare, fare hayatta kalmak için böbrek bağımlı değildir, öyle ki, yerinde yerli böbrek biri sol olmasıdır. Bazı yazarlar, böylece nakledilen böbreğin güvenen fare bırakarak, hemen nakli sırasında ya da transplantasyon sonrası beş ile on gün de ikinci yerli böbreğin çıkarılmasını bildirmiştir. Bu hayatta kalma, serum kreatinin ya da kan üre gibi böbrek işlevi gösteren işaretçilerin ölçmek için deneysel bir sonucu olarak, örnekleme kan olarak kullanılmak üzere izin verir. Ancak histolojik sonuçlarda hiçbir fark yokturAllografta bağımlı ve tek bir yerel böbrek 9 olan fareler karşılaştırırken. Bu ikinci dışlamaz tarif protokolü ve aslında ikinci yerel böbrek, belirli bir zaman aralığında çıkarılabilir. Ek bir kısıtlama gelişmiş mikro-cerrahi uzmanlık olsa eğitim ve bu aşılabilir eğitimi için teknik rakam kullanarak, bir arteriyel ve venöz anastomoz gerçekleştirmek için gerekli olmasıdır. Vasküler komplikasyonlar, bu varlık renal arter veya ven trombozu oluşabilir, bu kaçınılmaz sıkıntı belirtileri, hasta-sağlık veya özel hind-ekstremite felci gösteren fare sonuçlanır. Bu modeli kullanan nedenle sıkı yönetim ve farelerin izlenmesi zorunludur.

Böbrek nakli akut ret ölçüde ancak hücre-aracılı ret bölüm yine böbrek greft boyunca oluşabilir, immünosüpresyonun ve indüksiyon tedavisi tüketicidir dolaşımdaki lenfositlerin tarafından tedavi edilmişhayat. Bu nedenle, bu altta yatan mekanizmaların çalışmaları halen önemini ve tedavi için yeni yollar tespit edebilir. Böyle C57BL / BALB / c içine 6 olarak tam MHC uyumsuzluğu, içinde, böbrek nakli bağlı sağkalım 7.4 gün 10 gibi düşük olduğu bildirilmiştir demek. Histolojik akut hücresel ve vasküler ret glomerüler ve tübüler nekroz ile lenfositik infiltrasyon, kanama ve ödem interstisyumda, tubulitis, vaskülit, tarafından tespit edilebilir. Kronik allogreft hasarına katkıda kombine işlemler incelemek için bu alanda zor yaptık. Histolojik özellikleri interstisyel fibrozis, tübüler atrofi, glomerüloskleroza ve intimal çoğalması bulunmaktadır. Ilerici yaralanma, ancak giderek diğer birçok faktörler etkili olabilir takdir, kalıcı T hücre infiltrasyonu ile ilişkilidir. Kalıcı yaralanma potansiyeli nedeniyle verici aracılık eden özel antikorlar, B hücreleri, doğal katil hücreler kompleman birikmesini içerirBu endotel 3 olarak, makrofajlar ve greft iç hücreleri. Bu nedenle, bu model, reddinin bu çeşitli yönleriyle bir çalışma sağlar.

Erken açıklaması 4 rağmen bu modeli kullanan yaklaşık 70 yayınlanmış çalışmalar olmuştur, bu birkaç yüz haberler olmuştur böbrek iskemi-reperfüzyon hasarı fare modelleri ile karşılaştırıldığında olduğunu. Karın içi böbrek nakli bu fare modeline önemi ayrıca rejeksiyonun farklı etki mekanizmalarına modellemek için kullanılabilir, iyi tanımlanmış bir fare soylannda kullanımından yarar, doğrudan insan böbrek nakli işlemini yaratır olmasıdır. Dolayısıyla bu model kullanılarak çalışmalar son derece çevrilebilir. Bu modelin diğer gelecekteki uygulamalar belirli vahşi tip farelere nakavt modelleri fenotipleri veya genetik olarak tersine vahşi tip böbrekler ile böbrekleri nakli ile renal içsel anormallikleri okuyor dahildeğişmiş alıcılar.

Bu model başarılı insan böbrek nakli sürecini çoğaltabilirsiniz. Fare soylannda kullanılması MHC farklılıklar değişik donor-alıcı kombinasyonları seçimine izin verir. Bundan başka, farelerin kullanılması reddi farklı yönlerini incelemek için eleme ve uyarılabilir sistemler dahil olmak üzere çeşitli tekniklerin kullanılmasına izin verir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Acknowledgments

Böbrek Araştırma İngiltere'den finansman, Edinburgh ve Organ Nakli European Society of Surgeons Royal College of bu çalışmayı destekledi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical Instruments
Blunt Dissecting Scissors Fine Science Tools  14072-10 For skin cutting
Curved Castoviejo scissors Fine Science Tools 15017-10 For tissue cutting
Spring Scissors – straight Fine Science Tools 15000-08 For suture cutting
Toothed forceps 1x2 teeth Fine Science Tools 11021-12
2 x Fine Tip forceps (Dumont No.5) Fine Science Tools 11251-20
Angled Fine Tip forceps (Dumont No. 5/45) Fine Science Tools 11253-25 For blunt dissecting
Curved Fine Tip forcep (Dumont No.7) Fine Science Tools 11273-22 Useful to pass around vessels
Curved Crile Haemostat Fine Science Tools 1300-04
Micro clip applicator with lock Fine Science Tools 18056-14
2 x Micro serrefines spring width 2mm, jaw length 4mm Fine Science Tools 18055-04 Microvascular clamps
2 x Colibri 3cm wire retractor Fine Science Tools 17000-03
Castroviejo needle holder with lock Fine Science Tools 120660-01
Wound clip applicator Fine Science Tools 12031-07
7mm wound clips Fine Science Tools 12032-07 Remove 7 to 10 days after surgery
Equipment
OPMI pico microscope Carl Zeiss S100
Thermal cautery unit with fine tip Geiger 150A
Heat electronic pad Cozee Cumfort n/a
Euroklav 23-S Melag n/a Autoclave
Disposable equipment
7/O Silk braided suture Pearsall 30514
10/O Dafilon (polyamide) suture B-Braun  G1118099
6/O Vicryl (plygalectin) Ethicon W9537
Regular bevel needle, 1 inch, 21G Bection, Dickinson and Company 305175 For ureteric anastamosis
Regular bevel needle, 5/8 inch, 25G Bection, Dickinson and Company 305122
Regular bevel needle, 1/2 inch, 30G Bection, Dickinson and Company 304000
Insulin needle 1ml, 29G Bection, Dickinson and Company 324827
Insulin needle 0.3ml, 30G Bection, Dickinson and Company 324826
1 ml syringe slip tip Bection, Dickinson and Company 300184
5 ml syringe slip tip Bection, Dickinson and Company 302187
Wypall paper swabs Kimberley-Clark L40 sterilised by autoclave
Cotton wool buds Johnson and Johnson n/a sterilised by autoclave
Plain drapes Guardian CB03 sterilised by autoclave
Cell culture dish 60mm x 15mm Corning Incorporated 430166
Dispensing Pin B-Braun DP3500L / 413501 Used with NaCl 0.9%
Re-agents and Drugs
(Lacri-Lube) White soft paraffin 57.3%, mineral oil 42.5% and lanolin alcohols 0.2% Allergan Ltd 21956GB10X
(Videne) Povidone-iodine 10% Ecolab Ltd PL 04509/0041
(Vetalar V) Ketamine hydrochloride Pfizer Animal Health Vm 42058/4165 100mg/ml solution (dose 200mg/kg)
(Domitor) Medetomidine hydrochloride  Orion Pharma Vm 06043/4003 1mg/ml (dose 0.5mg/kg)
(Vetergesic) Bupernorphine hydrochloride  Alsto Animal Health Vm 00063/4002 0.3mg/ml (dose 0.05mg/kg)
(Antisedan) Atipamezole hydrochoride Orion Pharma Vm 06043/4004 5mg/ml (dose 2mg/kg)
University of Wisconsin Solution Belzer Bridge to Life n/a dose approximately 500 microlitres/mouse
NaCl 0.9% Baxter FKE1323
Heparin Sulphate non-proprietary n/a 5000units/ml (dose 5units/mouse)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Guild, W. R., Harrison, J. H., Merrill, J. P., Murray, J. Successful homotransplantation of the kidney in an identical twin. Trans. Am. Clin. Climatol Assoc. 67, 167-173 (1955).
  2. Wolfe, R. A., et al. Comparison of mortality in all patients on dialysis, patients on dialysis awaiting transplantation, and recipients of a first cadaveric transplant. N. Engl. J. Med. 341, 1725-1730 (1999).
  3. Nankivell, B. J., Alexander, S. I. Rejection of the Kidney Allograft. N. Engl. J. Med. 363, 1451-1462 (2010).
  4. Tse, G. H., Hughes, J., Marson, L. P. Systematic review of mouse kidney transplantation. Transplant International. 26, 1149-1160 (2013).
  5. Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant. Proc. 5, 721-725 (1973).
  6. Zhang, Z., et al. Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations. Transplantation. 62, 1267-1272 (1996).
  7. Qi, F., et al. Depletion of cells of monocyte lineage prevents loss of renal microvasculature in murine kidney transplantation. Transplantation. 86, 1267-1274 (2008).
  8. Dang, Z., Mackinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3. Transplantation. 93, 477-484 (2012).
  9. Jabs, W. J., et al. Heterogeneity in the Evolution and Mechanisms of the Lesions of Kidney Allograft Rejection in Mice. Am. J. Transplant. 3, 1501-1509 (2003).
  10. Lin, T., et al. Deficiency of C4 from Donor or Recipient Mouse Fails to Prevent Renal Allograft Rejection. Am. J. Pathol. 168, 1241-1248 (2006).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics