मानव Videofluoroscopic निगल अध्ययन तरीकों आदत डाल का पता लगाने और murine रोग मॉडल में निगरणकष्ट विशेषताएँ

Medicine
 

Summary

इस अध्ययन सफलतापूर्वक translational को निगलने में कठिनाई अनुसंधान को सुविधाजनक बनाने के उद्देश्य के लिए murine रोग मॉडल के साथ प्रयोग के लिए मानव videofluoroscopic निगलने अध्ययन (VFSS) तरीकों अनुकूलित।

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Lever, T. E., Braun, S. M., Brooks, R. T., Harris, R. A., Littrell, L. L., Neff, R. M., Hinkel, C. J., Allen, M. J., Ulsas, M. A. Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models. J. Vis. Exp. (97), e52319, doi:10.3791/52319 (2015).

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Abstract

इस अध्ययन translational को निगलने में कठिनाई अनुसंधान को सुविधाजनक बनाने के उद्देश्य के लिए murine रोग मॉडल के साथ प्रयोग के लिए अध्ययन (VFSS) तरीकों निगलने मानव videofluoroscopic रूपांतरित किया। सफल परिणाम तीन महत्वपूर्ण घटकों पर निर्भर कर रहे हैं: एक सीमित स्थान में अनर्गल जबकि खड़े आत्म खिलाने की अनुमति है कि परीक्षा कक्षों, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध मौखिक विपरीत एजेंटों की प्रतिकूल स्वाद / गंध मुखौटा कि व्यंजनों, और एक कदम-दर-कदम परीक्षण प्रोटोकॉल है कि निगल शरीर क्रिया विज्ञान की मात्रा का ठहराव परमिट। इन घटकों में से एक या एक से अधिक के उन्मूलन के अध्ययन के परिणामों पर एक हानिकारक प्रभाव पड़ेगा। इसके अलावा, प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली की ऊर्जा स्तर की क्षमता की जांच की जा सकती है जो निगल मापदंडों का निर्धारण करेगा। अधिकांश अनुसंधान केन्द्रों चूहों और अन्य छोटे कृन्तकों जब परीक्षण असाधारण गरीब छवि गुणवत्ता में जो परिणाम लोगों और बड़े जानवरों के साथ प्रयोग के लिए तैयार उच्च ऊर्जा fluoroscopes है। इस सीमा के बावजूद, हम सात वीएफएस की पहचान की हैनई murine VFSS प्रोटोकॉल के साथ संयोजन में एक उच्च ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शी का उपयोग करते समय चूहों में लगातार मात्रात्मक हैं कि एस मानकों। हमने हाल ही में चूहों और अन्य छोटे कृन्तकों के साथ उपयोग के लिए डिजाइन किया गया था कि असाधारण उच्च इमेजिंग संकल्प और बढ़ाई क्षमताओं के साथ एक कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली प्राप्त की। नई murine VFSS प्रोटोकॉल के साथ संयोजन में इस नई प्रणाली का उपयोग करते हुए प्रारंभिक काम, पारंपरिक (यानी, उच्च ऊर्जा) का उपयोग कर प्राप्त लगभग दोगुनी संख्या है, जो चूहों में लगातार मात्रात्मक हैं कि 13 निगल मापदंडों की पहचान की है fluoroscopes। हम इस नई प्रणाली की क्षमताओं का अनुकूलन के रूप में अतिरिक्त निगल मापदंडों की पहचान की उम्मीद है। परिणाम इस प्रकार अब तक का पता लगाने और murine रोग मॉडलों की जांच के लिए उच्च ऊर्जा fluoroscopes का उपयोग करते समय अन्यथा अनदेखी की जा सकती है कि निगल शरीर क्रिया विज्ञान में सूक्ष्म परिवर्तन यों के लिए एक कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली का उपयोग करने का उपयोगिता प्रदर्शित करता है।

Introduction

Dysphagia (हानि निगलने) सभी उम्र के लोगों को प्रभावित करने वाले कई चिकित्सा शर्तों का एक आम लक्षण है। उदाहरण स्ट्रोक, पार्किंसंस रोग, अल्जाइमर रोग, सेरेब्रल पाल्सी, पेशी dystrophy, amyotrophic पार्श्व काठिन्य (ए एल एस), बैटन रोग, सिर और गर्दन के कैंसर, समय से पहले जन्म, और उन्नत उम्र बढ़ने शामिल हैं। निगरणकष्ट अत्यधिक आमतौर पर बैक्टीरिया से लदी भोजन / तरल / लार फेफड़ों 1-4 में aspirated है कि विकसित जब गंभीर कुपोषण या निमोनिया का एक परिणाम के रूप में, मृत्यु दर के साथ जोड़ा जाता है। इस दुर्बल और जीवन के लिए खतरा चिकित्सा हालत संयुक्त राज्य अमेरिका में 15 लाख से अधिक लोगों को हर साल अकेले 3 प्रभावित करता है। उच्च व्याप्ति और एसोसिएटेड नकारात्मक परिणामों के बावजूद, निगलने में कठिनाई के लिए वर्तमान उपचार के विकल्प मुद्राओं में बदलाव (जैसे, tucki, (बल्कि उपचारात्मक से) (विशिष्ट भोजन / तरल consistencies से परहेज है, उदाहरण के लिए) इस तरह के आहार संशोधन के रूप में, दृष्टिकोण उपशामक तक सीमित हैंनिगलने जब ​​ठोड़ी), मोटर दृष्टिकोण (जैसे, मौखिक गुहा, ग्रसनी में मांसपेशियों को लक्षित अभ्यास, और गला), संवेदी दृष्टिकोण (जैसे, को लागू करने स्वाद, तापमान, और / या यांत्रिक उत्तेजना), और ट्यूब खिला एनजी (जैसे, पोषण और जलयोजन nasogastric (एनजी) ट्यूब या percutaneous इंडोस्कोपिक gastrostomy (खूंटी) ट्यूब) के माध्यम से प्रशासित। इन उपचार केवल बल्कि समस्या के मूल कारणों को लक्षित कर की तुलना में रोगसूचक चिकित्सा सेवा करते हैं। दरअसल, निगलने में कठिनाई के लिए उपन्यास, प्रभावी उपचार की खोज के लिए एक प्रमुख बाधा के हर रोग के लिए होने की संभावना से अलग हैं जो जिम्मेदार रोग तंत्र की सीमित वैज्ञानिक ज्ञान है।

निगरणकष्ट निदान मुख्य रूप से भी एक संशोधित बेरियम निगल अध्ययन के रूप में जाना जाता है एक videofluoroscopic निगलने अध्ययन (VFSS) कहा जाता है, एक रेडियोग्राफिक प्रक्रिया का उपयोग किया जाता है। पिछले 30 से अधिक वर्षों से इस नैदानिक ​​परीक्षण EV के लिए सोने का मानक माना गया हैनिगल समारोह 5-7 aluating। इस परीक्षा में आम तौर पर बेरियम सल्फेट 8,9 या iohexol 10, रोगी बैठने या स्वेच्छा से खाना और एक मौखिक विपरीत एजेंट के साथ मिश्रित तरल consistencies ingesting जबकि एक प्रतिदीप्तिदर्शन मशीन का एक्स-रे किरण के पथ के भीतर खड़े होने जरूरत पर जोर देता। रोगी निगल के रूप में पेट के मुंह से यात्रा करते समय, भोजन और विपरीत एजेंट युक्त तरल एक कंप्यूटर मॉनीटर के माध्यम से वास्तविक समय में देखा जा सकता है। कोमल ऊतक संरचनाओं भी दिखाई दे रहे हैं और संरचना के सापेक्ष और समारोह का आकलन किया जा सकता है। मरीजों को निगलने में कठिनाई की उपस्थिति और डिग्री यों तो बाद में देखे और फ्रेम दर फ्रेम विश्लेषण के लिए रिकॉर्ड वीडियो हैं, जो सभी के प्रत्येक भोजन और तरल स्थिरता के कई निगल करने के लिए कहा जाता है। निगलने से कई शारीरिक घटक आम तौर पर इस तरह के laryn की ग्रसनी और घेघा, विस्तार और अवधि के माध्यम से शारीरिक ग्रसनी निगल के ट्रिगर बिंदु, सांस पारगमन समय के रूप में, विश्लेषण कर रहे हैंGEAL ऊंचाई, स्थान और बाद निगल अवशेषों की राशि है, और की घटना और आकांक्षा 7,11 के लिए मनोवैज्ञानिक कारण।

मानव VFSS प्रोटोकॉल के पहलुओं हाल ही में स्वतंत्र रूप से व्यवहार कर चूहों के अध्ययन के लिए अनुकूलित किया गया; चूहों 12 के परीक्षण के दौरान देखने का videofluoroscopic क्षेत्र में नहीं रहने की वजह से हालांकि, परिणाम सीमित थे। VFSS पहले से चूहों के साथ प्रयास नहीं किया गया। चूहों और चूहों के साथ प्रयोग के लिए मानव VFSS प्रोटोकॉल के सफल अनुकूलन वर्तमान में मौजूदा murine (माउस और चूहा) मनुष्यों में निगरणकष्ट कारण जाना जाता है कि बीमारियों के मॉडल के सैकड़ों की जांच के लिए एक उपन्यास अनुसंधान विधि प्रदान करेगा। इस नई विधि (अब murine VFSS के रूप में करने के लिए कहा गया है) इसलिए रोग हैं कि मांसपेशियों, नसों, और मस्तिष्क के ऊतकों के भीतर अंतर्निहित neurophysiological तंत्र की जांच और निगरणकष्ट में योगदान करने के लिए उपयुक्त हैं कि निगरणकष्ट की murine मॉडल की पहचान और सत्यापन जल्दी करना होगा मैंएन मनुष्य। इसके अलावा, murine VFSS निगल समारोह / सीधे मनुष्यों के साथ तुलना की जा सकती है कि शिथिलता के उद्देश्य के उपायों (बायोमार्कर) की पहचान की अनुमति होगी। ये पार प्रजातियों videofluoroscopic बायोमार्कर तो बेहतर लोगों के साथ क्लिनिकल परीक्षण करने के लिए अनुवाद करेंगे, जो चूहों और चूहों के साथ पूर्व नैदानिक ​​परीक्षणों में उपचार प्रभावकारिता यों के रूप में उपन्यास परिणाम उपायों सेवा कर सके।

यह अंत करने के लिए, murine VFSS प्रोटोकॉल ~ या तो सेक्स के 100 चूहों का उपयोग कर स्थापित किया गया था। सभी चूहों C57 या संकर C57 / SJL उपभेदों या तो थे। C57 / SJL ट्रांसजेनिक SOD1-G93A (या SOD1) चूहों, ए एल एस के सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल पशु मॉडल की एक बस्ती के लिए पृष्ठभूमि तनाव था जबकि C57 चूहों आनुवंशिक रूप से, बदल नहीं थे। SOD1 कॉलोनी ट्रांसजेनिक (यानी, ए एल एस-प्रभावित) चूहों और nontransgenic (यानी, अप्रभावित) littermates की एक अनुमानित 50-50 मिश्रण था।

murine VFSS प्रोटोकॉल तीन घटक होते हैं:

  1. मौखिक विपरीत एजेंटों की प्रतिकूल स्वाद / गंध मुखौटा और निगलने की पर्याप्त दृश्य की अनुमति के लिए पर्याप्त radiodensity कि उत्पादन व्यंजनों,
  2. पशु अनुपालन बढ़ाने वाला कदम-दर-कदम परीक्षण प्रोटोकॉल, कुल परीक्षण समय और विकिरण जोखिम को कम करता है, और (यानी, मौखिक, ग्रसनी, और esophageal) निगलने के प्रत्येक चरण के लिए कई निगल मापदंडों की मात्रा का ठहराव परमिट।

संयुक्त प्रभाव ठेठ खिलाने और चूहों की निगलने व्यवहार का आकलन है कि परमिट एक आरामदायक, कम तनाव, आत्म-खिला परीक्षा वातावरण पैदा करता है।

Protocol

murine VFSS प्रोटोकॉल एक अनुमोदित संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) प्रोटोकॉल और एनआईएच दिशा निर्देशों के बाद।

पाली कार्बोनेट ट्यूबिंग और कनवास से 1. निर्माण अवलोकन मंडलों (चित्रा 1)

  1. एक मैनुअल मिलिंग मशीन का उपयोग कर 16 सेमी लंबाई में 5 सेमी चौड़ा, वर्ग पॉली कार्बोनेट ट्यूबिंग (~ 2 मिमी की दीवार मोटाई) में कटौती। ज्यादातर चूहों पर्याप्त रूप से चलने और वांछित के रूप में चारों ओर मोड़ है कि परमिट एक संकीर्ण परीक्षण के चैम्बर में जो परिणाम इन आयामों के भीतर फिट बैठते हैं। ~ 2 मिमी की एक दीवार मोटाई काफी एक्स-रे बीम attenuating बिना पर्याप्त कठोरता प्रदान करता है।
    1. कक्षों के दो प्रकार इस प्रोटोकॉल के लिए आवश्यक हैं: खूंटी-कटोरा के माध्यम से तरल पदार्थ पहुंचाने के लिए बनाया गया टोंटी के माध्यम से तरल पदार्थ पहुंचाने के लिए बनाया गया "टोंटी ट्यूब", और "वेंटिलेशन ट्यूब"।
      1. "टोंटी ट्यूब" के लिए, एक मैनुअल मिलिंग मच का उपयोग करते हुए एक छोर के पास प्रत्येक ट्यूब के शीर्ष में एक छोटे आयताकार छेद (12 x 8 मिमी) बनानेine। इस छेद व्यवहार कंडीशनिंग और VFSS परीक्षण के दौरान एक sipper ट्यूब टोंटी के माध्यम से पीने के समाधान देने के लिए प्रयोग किया जाता है।
      2. "वेंटिलेशन ट्यूब", ड्रिल एक अंत के पास प्रत्येक ट्यूब के शीर्ष में नौ छोटे वेंटीलेशन छेद के लिए। इस ट्यूब के बजाय sipper ट्यूब की एक खूंटी कटोरा के साथ VFSS परीक्षण के दौरान प्रयोग किया जाता है।
      3. यह खूंटी कटोरा के माध्यम से तरल पहुंचाने जब टोंटी ट्यूब का उपयोग करना संभव है; हालांकि, चैम्बर छत में उद्घाटन चूहों (कदम 6.2.2 देखें) द्वारा ध्यान भंग खोजपूर्ण व्यवहार को रोकने के लिए अवरुद्ध कर दिया जाना चाहिए।
  2. एक कम्प्यूटरीकृत मिलिंग मशीन का उपयोग कर अंत टोपियां में कट पॉली कार्बोनेट कनवास (3/4 "मोटाई) (ट्यूब प्रति 50 x 50 मिमी, 2), भी एक कम्प्यूटरीकृत संख्यात्मक नियंत्रण (सीएनसी) मशीन कहा जाता है।
    1. मिल एक आयताकार नाली प्रत्येक के अंत टोपी के इंटीरियर चेहरे के एक किनारे के पास (19 एक्स 6 मिमी)। चूहों VFSS परीक्षण के दौरान से पीने के लिए के लिए एक खूंटी कटोरा सुरक्षित करने के लिए इस नाली का प्रयोग करें।
    2. चक्की 5 दौर वेंटीलेशन छेद (6 मिमी व्यास) प्रत्येक के अंत टोपी के माध्यम से।
    3. सीधे आयताकार नाली के ऊपर अंत टोपी के माध्यम से मिल एक छोटे गोल छेद (5 मिमी व्यास),। VFSS परीक्षण के दौरान खूंटी-कटोरी में तरल देने के लिए इस छेद का प्रयोग करें।
    4. अंत टोपी के बाहरी चेहरे पर, चक्की एक 9/16 गहरी इस छोटे छेद के आसपास है कि "counterbore व्यास 04/01 है"।
    5. चक्की दूर 7 मिमी की गहराई तक अंत टोपी के इंटीरियर चेहरे की परिधि के साथ 2 मिमी आसानी ट्यूब के अंत में सम्मिलित करता है कि एक कदम बनाने के लिए।
    6. चक्की अंत टोपी के चरण में एक 1 मिमी नाली ट्यूब के अंत से गिरने से अंत टोपी को रोकने के लिए आवश्यक है, जो एक हे अंगूठी, समायोजित करने के लिए।
    7. उजागर किनारों से दूर दौर और चूहों द्वारा चबाने को रोकने के लिए अंत टोपियां के सभी कोनों बेवल।
  3. एक सीएनसी मशीन का उपयोग कर पॉली कार्बोनेट कनवास से खूंटी-कटोरे बनाओ। कुल मिलाकर आयाम एक छोर पर एक 10 x 3 मिमी दो कटोरे के आकार अवसाद के साथ 24 x 19 x 6 मिमी 3, होना चाहिए। एक खूंटी कटोरा neede हैप्रत्येक ट्यूब के लिए डी। खूंटी-कटोरे अंत टोपियां में आयताकार नाली (चित्रा 2) में snugly डालने चाहिए।

चित्र 1
चित्रा 1:। अवलोकन मंडलों अवलोकन कक्षों को देखने के प्रतिदीप्तिदर्शन क्षेत्र में स्वतंत्र रूप से व्यवहार कर पशुओं को बनाए रखने के लिए डिजाइन किए गए थे। इन चित्रों VFSS के संचालन के लिए आवश्यक चैम्बर घटकों दिखा। शीर्ष: टोंटी के माध्यम से तरल पदार्थ पहुंचाने के लिए बनाया गया "टोंटी ट्यूब"। नीचे: "वेंटिलेशन ट्यूब", खूंटी-कटोरा के माध्यम से तरल पदार्थ पहुंचाने के लिए बनाया गया है। दो अंत टोपियां टोंटी और वेंटिलेशन ट्यूबों के बीच परस्पर विनिमय कर रहे हैं।

चित्र 2
चित्रा 2:। खूंटी-कटोरे प्रत्येक खूंटी कटोरा प्रत्येक के अंत टोपी के इंटीरियर चेहरे पर एक नाली में तस्वीरें। बाया:unassembled घटकों। मध्य: घटकों को इकट्ठा। अधिकार:। अंत टोपी के बाहरी चेहरा इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

अपकेंद्रित्र ट्यूब, सिलिकॉन डाट, और धातु spouts से 2. निर्माण sipper ट्यूब बोतलों (चित्रा 3)

  1. प्रत्येक सिलिकॉन डाट के माध्यम से एक केंद्र छेद करने के लिए एक डाट बोरर (5/16 ") का प्रयोग करें।
  2. बोर होल में खनिज तेल की कुछ बूँदें लागू करें और मैन्युअल डाट की व्यापक अंत में एक धातु टोंटी डालें। सीधे खुले अंत spouts अत्यधिक लीक और परीक्षण के दौरान दृश्य के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं जो अवलोकन कक्ष के भीतर विपरीत एजेंट के splattering में परिणाम क्योंकि सीधी गेंद सूत्रीय spouts पसंद कर रहे हैं।
  3. यह सिलिकॉन डाट की पूरी लंबाई तक फैला है और डाट की व्यापक अंत से परे लगभग 3 सेमी फैली तो यह है कि तूफ़ान की लंबाई को समायोजित करें।
  4. एक 30 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में (एक sipper ट्यूब युक्त) प्रत्येक डाट की संकीर्ण अंत डालें।
  5. टोंटी लंबाई अवलोकन कक्ष के शीर्ष में आयताकार छेद के माध्यम से इसे डालने से पर्याप्त है कि जाँच करें। टोंटी टिप स्वस्थ वयस्क चूहों तक पहुँचने के लिए पर्याप्त रूप से लंबा है जो कक्ष की छत से लगभग 1 सेमी आराम करना चाहिए।
    नोट: अब लंबाई / टर्निंग VFSS दौरान निगलने के दृश्य को धुंधला कर जो सिर, जबकि झुकने पीने चूहों में परिणाम।
  6. कारण अंगों की मोटर हानि के लिए टोंटी नहीं पहुँच सकते हैं कि युवा चूहों, छोटे आकार माउस उपभेदों, और माउस रोग मॉडल को समायोजित करने के लिए टोंटी लंबाई बढ़ाने।
  7. से निपटने के दौरान खनिज तेल, सिलिकॉन मलबे, और अन्य contaminants को दूर करने के लिए उपयोग करने से पहले नव बनाया spouts धो लें।

चित्र तीन
चित्रा 3: sipper। ट्यूब बोतलें वाम: unassembled घटकों। मध्य: घटकों को इकट्ठा। अधिकार:। अवलोकन कक्ष में sipper ट्यूब से माउस पीने के इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

3. खूंटी-कटोरे के साथ प्रयोग के लिए एक सिरिंज डिलिवरी प्रणाली के निर्माण (चित्रा 4)

  1. निम्नानुसार अवलोकन कक्ष अंत टोपियां के लिए पॉलीथीन (पीई) ट्यूबिंग को जोड़ने के लिए एडेप्टर बनाने के लिए एक खराद का प्रयोग का वर्णन किया।
    1. इस के साथ साथ ट्यूब एडाप्टर (या एडेप्टर) के रूप में निर्दिष्ट लंबाई वर्गों, "1 1/4 में व्यास Acetal राल रॉड सामग्री" 02/01 काटें।
    2. प्रत्येक एडाप्टर के एक छोर पर, व्यास "16/03 को नोक पर लंबाई खंड" एक 02/01 को कम करने, संकीर्ण अंत के रूप में संदर्भित।
    3. "(व्यास अंत शेष 3/4 प्रत्येक एडाप्टर, यानी 1/2) की लंबाई खंड" के लिए, पुस्तिका उत्साहित के लिए मशीन खांचे हमें दौरानई। इस अनुभाग के साथ साथ व्यापक अंत के रूप में जाना जाता है।
    4. प्रत्येक एडाप्टर के व्यापक अंत में, गहरी 0.098 "व्यास और एक" है कि एक केंद्र छेद ड्रिल।
    5. ड्रिल पीई ट्यूबिंग पर एक सुखद फिट प्रदान करने के लिए "0.096 करने के लिए प्रत्येक एडाप्टर में केंद्र छेद के शेष भाग बीस जिस्ता कागज और।
  2. एक कैंची का उपयोग कर वांछित लंबाई करने के लिए (पीई 240, भीतरी व्यास 1.67 मिमी) पीई ट्यूबिंग काटें। एक 3-4 पैर की लंबाई पर्याप्त विकिरण सुरक्षा में सुधार करने के लिए VFSS परीक्षण के दौरान अन्वेषक और प्रतिदीप्तिदर्शी के बीच की दूरी बढ़ जाती है।
    नोट: अब लंबाई मानक 30 मिलीलीटर नुस्खा से शायद अधिक से अधिक VFSS परीक्षण के दौरान विपरीत एजेंट समाधान की एक बड़ी मात्रा का उपयोग करेगा।
  3. पूरी तरह से पीई ट्यूबिंग के एक छोर में एक कुंद इत्तला दे दी 15 ग्राम सुई डालें। ढाले चुस्त किया जाना चाहिए।
  4. टी पर शुरू, अनुकूलक ट्यूब के केंद्र छेद के माध्यम से पीई ट्यूबिंग के अन्य (मुक्त) अंत डालेंवह व्यापक अंत।
  5. यह ~ 2 मिमी फैली हुई है कि इतने एडाप्टर के संकीर्ण अंत से बाहर पीई ट्यूबिंग खींचो।
  6. एडाप्टर के संकीर्ण अंत डालें एक अवलोकन ट्यूब के अंत-कैप में (~ 2 मिमी पीई ट्यूबिंग यह से देने के साथ); यह सीधे खूंटी-कटोरी के ऊपर स्थित counterbored छेद में फिट फिट होना चाहिए।
  7. यह मुश्किल से खूंटी-कटोरे में कटोरा अवसाद से ऊपर फैली हुई है कि इतने एडाप्टर के संकीर्ण अंत में पीई ट्यूबिंग लंबाई को समायोजित करें।
  8. एक बीकर से पानी के साथ (संलग्न सुई के बिना) एक 10 मिलीलीटर सिरिंज भरें और किसी भी हवाई बुलबुले को हटा दें।
  9. पीई ट्यूबिंग की सुई समाप्त करने के लिए भरा सिरिंज संलग्न।
  10. धीरे धीरे अवलोकन कक्ष में खूंटी-कटोरी में पानी देने के लिए सिरिंज सवार धक्का। खूंटी-कटोरा लगभग पूर्ण है जब बंद करो। पीने के दौरान पिघल कारण होगा जो overfilling, से बचें।
  11. खूंटी-कटोरा ठीक से भर नहीं है, तो खूंटी कटोरा से ऊपर का विस्तार पीई ट्यूबिंग की लंबाई को समायोजित।
  12. पीई के ओवर-विस्तारट्यूबिंग चूहों बल्कि खूंटी कटोरा से पीने से, परीक्षण के दौरान उस पर जुगल करने के लिए लुभाने जाएगा।
  13. पीई ट्यूबिंग काफी दूर तक नहीं बढ़ाया गया है, तो तरल बल्कि खूंटी कटोरा भरने से अवलोकन कक्ष के फर्श पर चलेंगे।
  14. प्रयोग करने के बाद, सिरिंज अलग और साबुन और पानी से पूरे सिरिंज वितरण प्रणाली धो लें। पानी निकालने के लिए पीई ट्यूबिंग के माध्यम से हवा पुश करने के लिए एक 10 मिलीलीटर सिरिंज का प्रयोग करें। जरूरत के रूप में autoclaving द्वारा जीवाणुरहित।

चित्रा 4
चित्रा 4:। सिरिंज वितरण प्रणाली वाम: unassembled घटकों। मध्य: घटकों को इकट्ठा। अधिकार:। अवलोकन कक्ष में खूंटी-कटोरा से माउस पीने के इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

4. एक मोटर चालित sciss का निर्माणया अवलोकन चैंबर के रिमोट पोजिशनिंग के लिए टेबल उठा (चित्रा 5)

  1. बढ़ा सकते हैं और 5 सेमी से कम देखने की प्रतिदीप्तिदर्शन क्षेत्र के भीतर विभिन्न स्थानों में देखने चूहों को समायोजित करने के लिए है, जो एक 12 x 12 सेमी मंच के साथ एक कैंची उठा बनाएँ। लिफ्ट सामग्री disinfectants के साथ सफाई की आसानी के लिए धातु या प्लास्टिक होना चाहिए।
  2. माउंट stepper मोटर्स ऊंचाई और लिफ्ट के अनुदैर्ध्य स्थिति को समायोजित करने के लिए।
  3. युगल कैंची उठा तंत्र के लिए सबसे पहले stepper मोटर एक क्रॉसबार अनुवाद करके ऊंचाई को नियंत्रित करने के लिए। यह युग्मन एक का नेतृत्व पेंच या रैक और पंख काटना कमर कस हो सकता है।
  4. युगल कैंची उठा फ्रेम करने के लिए दूसरा stepper मोटर तालिका करने के लिए पूरे लिफ्ट फ्रेम रिश्तेदार अनुवाद करके अनुदैर्ध्य स्थिति को नियंत्रित करने के लिए। यह युग्मन एक का नेतृत्व पेंच या रैक और पंख काटना कमर कस हो सकता है।
  5. Investiga जबकि कम से कम इमेजिंग के दौरान अवलोकन चैम्बर स्थिति के समायोजन की अनुमति देने के stepper मोटर्स के लिए एक रिमोट कंट्रोल सिस्टम तारविकिरण को टो जोखिम।
  6. प्रत्येक stepper मोटर की सक्रियता और दिशा को नियंत्रित करने के लिए एक microcontroller चिप के साथ हाथ में रिमोट कंट्रोल के बटन इंटरफ़ेस।

चित्रा 5
चित्रा 5:। रिमोट नियंत्रित कैंची उठा टेबल छोड़ दिया: कैंची उठा मेज की ओर देखें। अधिकार: प्रतिदीप्तिदर्शी में तैनात अवलोकन कक्ष के साथ लिफ्ट तालिका। लिफ्ट तालिका देखने के क्षेत्र में चूहों को बनाए रखने के अवलोकन कक्ष की स्थिति समायोजित करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

5. अधिकतम भागीदारी सुनिश्चित करने VFSS परीक्षण से पहले व्यवहार कंडीशनिंग सम्पन्न

  1. प्रेरित करने के लिए एक रातोंरात (12-16 घंटा) पानी विनियमन अवधि के लिए परीक्षण, विषय चूहों VFSS करने के लिए 1-2 सप्ताह पहलेप्यास, जो समय के पानी के दौरान घर पिंजरे से रोका जाता है। जानवरों को प्यास लगी, नहीं निर्जलित होने के लिए पानी विनियमन का लक्ष्य है। पशु सतर्क और संवेदनशील रहना चाहिए। यह अवधि और समय सीमा के एक सप्ताह के भीतर दो पानी विनियमन एपिसोड का एक परिणाम के रूप में हो सकता है जो निर्जलीकरण को रोकने के लिए आवश्यक है (यानी, व्यवहार कंडीशनिंग के लिए एक और VFSS के परीक्षण के लिए एक और)।
  2. ताजा बिस्तर सामग्री से युक्त एक घर पिंजरे के फर्श पर (एक अंत टोपी द्वारा बंद एक छोर) के साथ एक एकल "टोंटी ट्यूब" रखें। बंद अंत चैम्बर छत में टोंटी खोलने निकटतम होना चाहिए। कई चूहों नींद चैम्बर गहराई में रात भर के भीतर huddled, जबकि यह कदम पर्याप्त वेंटिलेशन सुनिश्चित करता है। खुले अंत चूहों आज़ादी / दाखिल कक्ष से बाहर निकलने की अनुमति देता है।
  3. रातोंरात चैम्बर (चित्रा 6) में पता लगाने के लिए चूहों और नींद को प्रोत्साहित करने के लिए अन्य संवर्धन सामग्री (जैसे, nestlet और झोपड़ी) निकालें। यह कदम चूहों कि यह सुनिश्चित करता हैVFSS परीक्षण करने से पहले लंबी अवधि के लिए चैम्बर में किया जा रहा है को आदत कर रहे हैं।
  4. रात भर खाने के लिए पिंजरे के फर्श पर माउस प्रति एक मानक भोजन गोली प्रदान करना; पानी या अन्य जलयोजन स्रोतों प्रदान नहीं करते हैं।
  5. अवलोकन चैम्बर के आयामों के पिंजरे में ढाले से एक मानक तार ढक्कन को रोकने के रूप में, रात भर पिंजरे में चूहों को शामिल करने के लिए एक मानक फिल्टर शीर्ष का प्रयोग करें। ढक्कन के नीचे तौलना और भागने से चूहों को रोकने के लिए फिल्टर शीर्ष के शीर्ष पर हटाया तार ढक्कन (युक्त भोजन और पानी की बोतल) की दुकान।
  6. इस प्रकार के रूप में वर्णित है, के बाद सुबह का परीक्षण स्वादिष्ट प्रदर्शन करते हैं।
    1. इसके विपरीत एजेंट (iohexol के लिए यानी, स्थानापन्न पानी) को जोड़ने के बिना, एक 30 मिलीलीटर sipper ट्यूब बोतल में एक चॉकलेट के स्वाद का परीक्षण समाधान करें। यह नुस्खा तालिका 1 में वर्णित है। पिंजरे प्रति एक बोतल परीक्षण किया जाना सुनिश्चित करें।
    2. अवलोकन कक्ष निकालें और मानक तार ढक्कन की जगह। चॉकलेट के स्वाद का प्रस्तावसमाधान (कमरे के तापमान, ~ 22 डिग्री सेल्सियस) तार ढक्कन के माध्यम से डाला पिंजरे प्रति 2 मिनट के लिए।
    3. 2 मिनट परीक्षण अवधि के दौरान पीने के व्यवहार को देख कर स्वादिष्ट आकलन करें।
    4. निम्नलिखित मानदंडों के अनुसार स्वादिष्ट स्कोर:
      1. बिना किसी रुकावट के कम से कम 5 सेकंड के लिए टोंटी में पहली बार माउस पेय जब तक विलंबता।
      2. समाधान पीने कि पिंजरे प्रति चूहों का प्रतिशत।
      3. एक साथ टोंटी पर पीने कि चूहों की संख्या।
    5. समाधान प्रत्येक पिंजरे में चूहों के बहुमत के पीने के लिए कई लंबी (> 5 सेकंड) मुकाबलों है तो स्वादिष्ट समझा जाता है और कई चूहों को एक साथ टोंटी से पीते हैं (चित्रा 7)।
    6. चॉकलेट के स्वाद का समाधान स्वादिष्ट नहीं है, तो एक भी पसंदीदा समाधान की पहचान करने के लिए विभिन्न सांद्रता में अन्य स्वाद enhancers के साथ स्वादिष्ट परीक्षण दोहराएँ।
    7. एक समय में (विभिन्न सांद्रता में) चार अलग अलग समाधान करने के लिए एक ऊपर की पेशकशएक वार्शआउट अवधि या वार्शआउट समाधान के बिना एक टेस्ट मैच दिन में चूहों के कई पिंजरों, यादृच्छिक क्रम में। चूहों के लिए विचार करने के लिए उपयुक्त जायके enhancers के चीनी, पनीर, मूंगफली का मक्खन, विभिन्न फल और अखरोट जायके, और दूध शामिल हैं।
      नोट: दोहराया पानी विनियमन एपिसोड से निर्जलीकरण को रोकने के लिए एक बार प्रति सप्ताह से अधिक परीक्षण स्वादिष्ट प्रदर्शन नहीं करते।
    8. यह सफलतापूर्वक चूहों के प्रत्येक तनाव के लिए पसंदीदा समाधान की पहचान करने के लिए कई सप्ताह लग सकते हैं। लक्ष्य इन योग्यताओं सफल VFSS परिणामों को प्राप्त करने के लिए आवश्यक माना जाता है, के रूप में प्रदर्शन के बाद (<30 सेकंड) तुरंत चूहों द्वारा उम्मीदवार कई लंबी (> 5 सेकंड) में परिणाम है कि जायके पीने के मुकाबलों की पहचान है।
  7. एक पसंदीदा स्वाद समाधान की पहचान करने के बाद, इस प्रकार के रूप में वर्णित है, व्यवहार कंडीशनिंग जारी रखने के लिए प्रत्येक घर पिंजरे में अवलोकन चैम्बर वापसी।
    1. निकटतम अंत में अवलोकन चैम्बर के लिए एक अंत टोपी संलग्न करेंओवल (टोंटी) छेद।
    2. चैम्बर के शीर्ष में अंडाकार छेद के माध्यम से sipper ट्यूब बोतल डालने से चूहों में 2-3 घंटे के लिए चॉकलेट के स्वाद का समाधान प्रदान करते हैं। यह कदम सभी चूहों अवलोकन कक्ष के भीतर गहरे पीने को वातानुकूलित किया गया है कि यह सुनिश्चित करता है।
    3. अवलोकन कक्ष को समायोजित करने के लिए तार ढक्कन निकालें।
    4. परीक्षण अवधि के दौरान यथेच्छ उपभोग के लिए पिंजरे फर्श पर माउस प्रति एक खाद्य गोली रखें।
    5. व्यवहार कंडीशनिंग की शेष अवधि के लिए भागने से चूहों को रोकने के लिए एक मानक फिल्टर शीर्ष के साथ पिंजरे को कवर किया। ढक्कन के नीचे वजन करने के लिए फिल्टर शीर्ष के शीर्ष पर हटाया तार ढक्कन (युक्त भोजन और पानी की बोतल) की दुकान।
  8. व्यवहार कंडीशनिंग पूरा हो गया है, जब घर के पिंजरे में पानी और भोजन यथेच्छ प्रदान करें।
  9. साबुन और पानी से अवलोकन कक्षों (ट्यूब और अंत टोपियां) और sipper ट्यूब बोतलों (spouts और अपकेंद्रित्र ट्यूब) धो; जरूरत के रूप में autoclaving द्वारा बाँझ। बचेंयह अपारदर्शी बजाय पारदर्शी ट्यूब में आता है कि एक स्थायी झाई युक्त प्रभाव का कारण बनता है के रूप में एसीटोन का उपयोग कर ट्यूब साफ करने के लिए।

चित्रा 6
चित्रा 6:। अवलोकन मंडलों चूहे तलाश चूहे छोटे स्थानों में शरण लेने के लिए स्वाभाविक रूप से इच्छुक हैं। नतीजतन, वे स्वतंत्र रूप से दर्ज करें और यह घर पिंजरे में रखा गया है जब अवलोकन ट्यूब का पता लगाएं। ज्यादातर चूहों सुबह में चैम्बर में सो पाए जाते हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

<टीडी> चॉकलेट सिरप
सामग्री (स्वादिष्ट परीक्षण के लिए) चॉकलेट समाधान चॉकलेट के स्वाद (VFSS परीक्षण के लिए) Iohexol
3 मिलीग्राम 3 मिलीग्राम
Iohexol (350 मिलीग्राम आयोडीन / एमएल) 0 मिलीलीटर 15 मिलीलीटर
जल (डि या फ़िल्टर्ड) 30 मिलीलीटर को समायोजित अंतिम मात्रा (27 मिलीग्राम) 30 मिलीलीटर को समायोजित अंतिम मात्रा (12 मिलीग्राम)
अंतिम मात्रा 30 मिलीलीटर 30 मिलीलीटर

तालिका 1: चॉकलेट के स्वाद C57 और C57 / SJL माउस उपभेदों द्वारा पसंद परीक्षण समाधान।

चित्रा 7
चित्रा 7:। स्वादिष्ट परीक्षण स्वादिष्ट परीक्षण के दौरान स्वाद पसंद का एक सूचक एक साथ घर के पिंजरे में एक भी टोंटी से पीते हैं कि चूहों की संख्या है। इस छवि को एक साथ के रूप में पहचान की थी जो एक चॉकलेट के स्वाद का समाधान है, पीने के चार चूहों से पता चलता हैC57 और C57 / SJL उपभेदों द्वारा पसंद स्वाद बढ़ाने के।

6. VFSS परीक्षण की तैयारी

  1. ऊपर चरण 5 में वर्णित के रूप में एक रात में पानी विनियमन अवधि के अधीन रहते हुए चूहे, (यानी, 12-16 घंटे के लिए पानी रोक)।
    1. ताजा बिस्तर सामग्री से युक्त एक घर पिंजरे के फर्श पर (एक अंत टोपी द्वारा बंद एक छोर) के साथ एक एकल "वेंटिलेशन ट्यूब" रखें। बंद अंत चैम्बर छत में वेंटीलेशन छेद निकटतम होना चाहिए। कई चूहों नींद चैम्बर गहराई में रात भर के भीतर huddled, जबकि यह कदम पर्याप्त वेंटिलेशन सुनिश्चित करता है। खुले अंत चूहों आज़ादी / दाखिल कक्ष से बाहर निकलने की अनुमति देता है।
  2. अगली सुबह, पिंजरों से गंदे अवलोकन कक्षों को हटाने और संक्षेप में नल के पानी से कुल्ला और VFSS परीक्षण के लिए तैयार करने में पूरी तरह से सूखे।
    1. अत्यधिक खोजपूर्ण व्यवहार का कारण बन सकती है, जो पिंजरों के बीच कक्षों मिश्रण को रोकने के लिए एक समय में केवल एक ही कक्ष निकालें और साफ है किकाफी VFSS परीक्षण के साथ हस्तक्षेप।
    2. "टोंटी ट्यूब" के बजाय VFSS परीक्षण के लिए "वेंटिलेशन ट्यूब" का उपयोग किया जाता है, खोजपूर्ण व्यवहार (चित्रा 8) को रोकने के लिए अवलोकन कक्ष की छत की टोंटी खोलने में एक सिलिकॉन प्लग डालें।
    3. मिश्रण को रोकने के लिए (घर पिंजरे संख्या के साथ जैसे,) प्रत्येक कक्ष लेबल।
      नोट: घर पिंजरे में इसे वापस रखने से पहले प्रत्येक साफ ट्यूब लेबल करने के लिए एक सूखी मिटा मार्कर का उपयोग करें। यह ट्यूब सामग्री द्वारा अवशोषित कर लेता है और यहां तक ​​कि शराब या एसीटोन के साथ, बंद धो नहीं करता क्योंकि स्थायी मार्कर से बचा जाना चाहिए।
  3. चॉकलेट के स्वाद iohexol समाधान (या अन्य स्वादिष्ट समाधान) तैयार करें।
    1. कई पिंजरों के लिए परीक्षण समाधान (तालिका 1) के एक एकल नुस्खा (30 मिलीलीटर) बनाते हैं।
    2. IOHEXOL के लिए सावधानियों: कमरे के तापमान पर स्टोर बंद iohexol बोतलें, प्रकाश से रक्षा की। का प्रयोग 24 के भीतर iohexol बोतलें खोलीघंटा, चिपचिपाहट और स्वाद के एक दिन के भीतर या तो हवा के संपर्क के बाद बदल सकता है। वैकल्पिक रूप से, लंबी अवधि के भंडारण के लिए अपकेंद्रित्र ट्यूब में एकल सर्विंग (15 एमएल) की aliquots फ्रीज। तैयार iohexol परीक्षण समाधान ताजगी सुनिश्चित करने और चूहों द्वारा परिहार को रोकने के लिए कुछ ही घंटों के भीतर किया जाना चाहिए। कारण निगल समारोह पर तापमान प्रभावों के अध्ययन confounding से बचने के लिए कमरे के तापमान पर iohexol समाधान प्रशासन। चॉकलेट स्वाद चूहों द्वारा परिहार में ठंड और परिणामों के साथ कड़वा हो जाता है, के रूप में किसी भी शेष तैयार परीक्षण समाधान फ्रीज नहीं है।
  4. प्रतिदीप्तिदर्शन वातावरण तैयार करें।
    1. पार्श्व (क्षैतिज) विमान में पीने के दृश्य है कि परमिट प्रतिदीप्तिदर्शी बीम के भीतर इष्टतम ऊंचाई और स्थिति निर्धारित करने के लिए एक अतिरिक्त (खाली) अवलोकन कक्ष और खूंटी कटोरा (या sipper ट्यूब टोंटी) का प्रयोग करें।
    2. प्रति सेकंड 30 फ्रेम करने के लिए प्रतिदीप्तिदर्शन फ्रेम दर निर्धारित; उच्च (लेकिन कम नहीं) फ्रेम दर यदि उपलब्ध हो तो इस्तेमाल किया जा सकता है।
    3. एयह पूरे परीक्षण के दौरान प्रदर्शन की निगरानी पर दिखाई दे रहा है तो यह है कि एक radiopaque अंशांकन मार्कर उचित प्रतिदीप्तिदर्शी कैमरा / डिटेक्टर पर रखा गया है कि nsure। यह कदम निगल मापदंडों बढ़ाता के लिए इस्तेमाल किया लंबाई माप की जांच की अनुमति के लिए आवश्यक है।

आंकड़ा 8
चित्रा 8:। सिलिकॉन प्लग खूंटी-कटोरे का उपयोग करते समय वाम: सिलिकॉन प्लग। अधिकार: एक सिलिकॉन प्लग अवलोकन कक्ष के शीर्ष में sipper ट्यूब खोलने के माध्यम से खींच लिया है। इस प्लग VFSS परीक्षण के दौरान sipper ट्यूब के बजाय एक खूंटी कटोरा का उपयोग करते समय टोंटी खोलने से विचलित होने से चूहों को रोकता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चूहे की 7. VFSS परीक्षण

  1. (एक sipper ट्यूब उपयोग नहीं किया जाएगा, तो संलग्न खूंटी कटोरा के साथ) 2 एन डी अंत टोपी देते हैं माउस (विशेष रूप से पूंछ) चुटकी करने के लिए नहीं सावधान किया जा रहा धीरे पिंजरे से बाहर चैम्बर लिफ्ट और।
    नोट: इस दृष्टिकोण के लिए पहली बार परीक्षण किया जा रहा है कि चूहों के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, जो की वजह से निपटने के लिए माउस का तनाव प्रतिक्रिया, कम से कम।
  2. यह पिंजरे के अंदर उनके सामने रखा जाता है, या कक्ष खोलने पर पूंछ से निलंबित कर दिया जब दोहराया परीक्षण के साथ, चूहों आसानी कक्ष में प्रवेश करने के लिए राजी कर लिया जा सकता है।
  • पार्श्व विमान (यानी, क्षैतिज एक्स-रे बीम) में VFSS परीक्षण शुरू करने के लिए प्रतिदीप्तिदर्शन मशीन के भीतर अवलोकन कक्ष (माउस युक्त) की स्थिति।
  • खूंटी-कटोरी या sipper ट्यूब बोतल के माध्यम से चॉकलेट के स्वाद iohexol समाधान (तालिका 1) प्रदान करें।
    1. एक खूंटी कटोरा का उपयोग करते हैं, ऊपर चरण 3 में वर्णित सिरिंज वितरण प्रणाली के माध्यम से समाधान देने के लिए। इस प्रणाली के रूप में की जरूरत खूंटी-कटोरी की तेज और आसान refilling के परमिट।
    2. एक sipper ट्यूब बोतल का उपयोग करते हैं, तो अवलोकन कक्ष के शीर्ष में अंडाकार खोलने के माध्यम से sipper ट्यूब डालें। टोंटी चैम्बर के केंद्र की ओर निर्देशित है इतना है कि बोतल झुकाएँ।
  • माउस पीने शुरू होता है जब videofluoroscopy रिकॉर्डिंग शुरू।
    1. निगलने तंत्र देखने के क्षेत्र में दिख रहा है कि इतने (चरण 4 में वर्णित रिमोट नियंत्रित कैंची उठा मेज का प्रयोग करके) अवलोकन कक्ष की स्थिति को समायोजित करें।
    2. माउस दूर खूंटी-कटोरा से बदल जाता है हर बार रिकॉर्डिंग रोकें या विकिरण जोखिम की अवधि कम करने के लिए टोंटी।
    3. रिकॉर्डिंग फिर से शुरू करें जब टोंटी या खूंटी कटोरा करने के लिए माउस रिटर्न।
    4. जरूरत के रूप में खूंटी-कटोरा फिर से भरना।
    5. माउस 5 मिनट के भीतर नहीं पी है अगर परीक्षण कर बंद करो। लक्ष्य के लिए कई लंदन रिकॉर्ड करने के लिए हैजी परीक्षण के पहले दो मिनट के भीतर सबसे चूहों के लिए विशिष्ट है जो (> 5 सेकंड) निरंतर पीने के मुकाबलों।
    6. बाद में एक समय में एक ही दिन में फिर से परीक्षण के लिए (पानी) के बिना घर पिंजरे में noncompliant चूहों लौटें; एक 24 घंटा पानी विनियमन अवधि से अधिक नहीं है। तीन परीक्षणों के लिए noncompliant रहते हैं कि चूहे अध्ययन से हटा रहे हैं।
  • यदि आवश्यक हो, पृष्ठीय उदर विमान (यानी, ऊर्ध्वाधर एक्स-रे बीम) में चूहों का परीक्षण करने के प्रतिदीप्तिदर्शी रखते हैं। इस विमान निगलने के दौरान ग्रसनी और घेघा के माध्यम से सांस प्रवाह में विचलन की पहचान के लिए प्रयोग किया जाता है।
  • एक ही घर पिंजरे से कई चूहों जब परीक्षण:
    1. चूहों के बीच एक सूखे कागज तौलिया के साथ खूंटी कटोरा (और टिप पीई ट्यूबिंग के) या sipper ट्यूब टोंटी साफ करें।
    2. कक्ष की दीवारों पर किसी भी splattered iohexol दूर करने के लिए चूहों के बीच जरूरत के रूप में अवलोकन चैम्बर साफ करें। एक कागज तौलिया के साथ नल का पानी और सूखे के साथ चैम्बर कुल्ला।
  • Fro के चूहों जब परीक्षणमा अलग घर पिंजरे:
    1. एक नए खूंटी कटोरा का उपयोग (या sipper ट्यूब टोंटी बदल)। अन्यथा, चूहों में एक ही खूंटी-कटोरी या sipper ट्यूब से पिया कि अन्य चूहों की गंध से विचलित हो सकता है। खूंटी-कटोरे और sipper ट्यूबों भ्रम की स्थिति से बचने के लिए लेबल किया जाना चाहिए।
  • एक ही पिंजरे में सभी चूहों का परीक्षण पूरा हो गया है, घर के पिंजरे में पानी और भोजन प्रदान करते हैं।
  • साबुन और पानी से (प्रयुक्त यदि spouts और अपकेंद्रित्र ट्यूब,) अवलोकन कक्षों (ट्यूब और अंत टोपियां), खूंटी-कटोरे, सिरिंज वितरण प्रणाली, और sipper ट्यूब बोतल धोने; जरूरत के रूप में autoclaving द्वारा बाँझ।
  • सुरक्षा के दिशा निर्देशों द्वारा निर्देशित के रूप में किसी भी शेष iohexol समाधान के निपटान; नाली निपटान सबसे सुविधाओं पर स्वीकार्य हो सकता है।
  • 8. वीडियो विश्लेषण

    1. ब्याज (तालिका 2) के सेवन मापदंडों यों तो videofluoroscopy रिकॉर्डिंग के फ्रेम-दर-फ्रेम विश्लेषण परमिट कि एक वीडियो संपादन सॉफ्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग। एक प्राथमिक समीक्षक और एक या दो माध्यमिक समीक्षक: एक अंधा फैशन में प्रत्येक वीडियो का विश्लेषण करने के लिए कम से कम दो प्रशिक्षित समीक्षक को पहचानें।
      1. प्राथमिक समीक्षक: 3-5 लंबे समय (लगभग 5 सेकंड) पीने के मुकाबलों की पहचान करने और विश्लेषण करने के लिए प्रत्येक वीडियो देखें। निगल पैरामीटर प्रति 5 उपायों सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए पर्याप्त हैं - यह कसौटी 3 दिखा रहा है कि चूहों 12 के साथ चूहों 13,14 और VFSS के साथ प्रकाशित गैर रेडियोग्राफिक निगल अध्ययन पर आधारित है।
      2. माध्यमिक समीक्षक: स्वतंत्र शुरू में पहचान की है और प्राथमिक समीक्षक द्वारा विश्लेषण किया गया है कि प्रत्येक माउस के लिए निगल पैरामीटर प्रति 3-5 उपायों का विश्लेषण।
    2. प्रत्येक माउस के लिए समीक्षक विसंगतियों को पहचानें। 100% आम सहमति तक पहुँचने के लिए एक समीक्षक समूह के रूप में सभी विसंगतियों को पुनः विश्लेषण।
    3. प्रत्येक के लिए 3-5 आम सहमति (यानी, निर्विवाद) मान सांख्यिकीय विश्लेषण में उपयोग के लिए प्रत्येक माउस के लिए मतलब मूल्य प्राप्त करने के लिए पैरामीटर निगल औसत। जब कम से कम 3 measurतों एक लापता मान दर्ज, एक दिया माउस के लिए एक एकल निगल पैरामीटर के लिए प्राप्त कर रहे हैं (यानी, नहीं शून्य) इसी निगल पैरामीटर के लिए सांख्यिकीय डेटा बेस में।

    निगल पैरामीटर विवरण
    इंटर निगल अंतराल (आईएसआई) वीडियो की संख्या लगातार दो, निर्बाध निगल बीच फ्रेम। आईएसआई की गणना के लिए शुरू फ्रेम तुरंत घेघा को valleculae से सांस की दिखाई स्थानांतरण पछाड़ दिया है कि "बाकी फ्रेम" है। अंत फ्रेम अगले निगल के "बाकी फ्रेम" है। लगातार दो निगल के बीच तख्ते की संख्या तो समय (एसईसी) को परिवर्तित करने के लिए प्रति सेकंड 30 फ्रेम (एफपीएस) से विभाजित है।
    जबड़ा भ्रमण दर (चाटो दर समतुल्य) जीभ स्पष्ट रूप से नहीं हैVFSS के दौरान दिखाई चाटना दर की मात्रा का ठहराव की अनुमति के लिए; हालांकि, जबड़े भ्रमण दर आसानी से quantifiable है। चाट के दौरान, जबड़े मुंह से बहर करने के लिए जीभ की अनुमति के लिए खोलने चाहिए। इसलिए, प्रति सेकंड जबड़ा खुला / बंद (भ्रमण) चक्रों की संख्या (30 फ्रेम) पीने दर चाटना करने के लिए बराबर है। प्रत्येक जबड़े भ्रमण चक्र (जीभ फलाव के साथ मेल खाता है) और जबड़े ज़्यादा से ज़्यादा स्थिति खोला करने के लिए रिटर्न समाप्त होता है जब ज़्यादा से ज़्यादा खोला जबड़े के साथ शुरू होता है। जबड़ा बंद करने और फिर से खोलने के बाद के चक्र व्यक्ति जबड़े भ्रमण एपिसोड के रूप में गिना जाता है।
    जबड़ा भ्रमण दूरी जबड़े भ्रमण चक्र के दौरान जबड़े खोलता दूरी, दाढ़ की हड्डी और जबड़े कृन्तक के बीच मिमी में उपाय।
    चाटो निगल अनुपात (लगातार दो, निर्बाध निगल के बीच, यानी) प्रत्येक आईएसआई के दौरान हो कि जबड़े भ्रमण चक्रों की संख्या।
    निगल दर टोंटी पर निर्बाध पीने के प्रत्येक 2 सेकंड प्रकरण के दौरान होने वाली निगल की संख्या।
    ग्रसनी पारगमन समय (पीटीटी) यह सांस लेता है समय ग्रसनी के माध्यम से निगल लिया हो। शुरू होने से फ्रेम आईएसआई शुरू होने से फ्रेम करने के लिए समान है (यानी, तुरंत valleculae से सांस की दिखाई स्थानांतरण पछाड़ दिया है कि "बाकी फ्रेम")। अंत फ्रेम सांस की पूंछ पूरी तरह से माउस की ग्रीवा रीढ़ में सबसे स्पष्ट संरचनात्मक मील का पत्थर है, जो 2 एन डी ग्रीवा बांस (सी 2), बीत चुका है जब है। आरंभ और अंत फ्रेम के बीच तख्ते की संख्या तो 30 एफपीएस से विभाजित और मिलीसेकंड (मिसे) में बदल जाती है।
    ग्रसनी के माध्यम से सांस स्पीड ग्रसनी सांस की गति पीटीटी (ऊपर वर्णित) के सापेक्ष मापा जाता है। ImageJ सॉफ्टवेयर का उपयोग करना, सी 2 बांस को valleculae से दूरी (मिमी), मापा एक अंशांकन मार्कर का उपयोग बढ़ाया है। इस distancई (मिमी) तो पीटीटी सांस की गति (मिमी / मिसे) निर्धारित करने के लिए (मिसे) से विभाजित है।
    इसोफेजियल पारगमन समय (ETT) ETT शुरू होने से फ्रेम (ऊपर वर्णित) पीटीटी अंत फ्रेम करने के लिए समान है। सांस में पूरी तरह से घेघा से सांस के लापता होने के रूप में परिभाषित किया गया है, जो पेट, प्रवेश कर गया है जब ETT अंत फ्रेम है। ETT शुरू और अंत फ्रेम के बीच तख्ते की संख्या तो 30 एफपीएस से विभाजित और मिसे में बदल जाती है।
    घुटकी के माध्यम से सांस स्पीड इसोफेजियल सांस की गति ETT (ऊपर वर्णित) के सापेक्ष मापा जाता है। ImageJ सॉफ्टवेयर का उपयोग करना, मापा दूरी (मिमी) gastroesophageal जंक्शन सी 2 बांस से है, अंशांकन मार्कर का उपयोग बढ़ाया। इस दूरी (मिमी) तो ETT सांस की गति (मिमी / मिसे) निर्धारित करने के लिए (मिसे) से विभाजित है।
    ग्रसनी और घेघा के माध्यम से सांस स्पीड सी 2 तैयार दृश्य संरचनात्मक मील का पत्थर नहीं है जब इस पैरामीटर का उपयोग किया जाता है; इसलिए,यह ग्रसनी और निगलने की esophageal चरणों के बीच भेद करने के लिए संभव नहीं है। ऐसे मामलों में, ग्रसनी और गला के माध्यम से सांस की गति एक भी निगल पैरामीटर में संयुक्त है। शुरू होने से फ्रेम पीटीटी शुरू होने से फ्रेम करने के लिए समान है (यानी, तुरंत valleculae से सांस की दिखाई स्थानांतरण पछाड़ दिया है कि "बाकी फ्रेम")। अंत फ्रेम ETT अंत फ्रेम करने के लिए समान है (यानी, सांस में पूरी तरह से पेट में प्रवेश कर गया है)। इन दो घटनाओं के बीच तख्ते की संख्या 30 एफपीएस से विभाजित और मिसे में बदल जाती है।
    सांस क्षेत्र ImageJ सॉफ्टवेयर का उपयोग करना, सांस क्षेत्र ग्रसनी निगल की दीक्षा से पहले vallecular "बाकी फ्रेम" पर मापा जाता है, एक अंशांकन मार्कर का उपयोग बढ़ाया।
    ग्रसनी अवशेष क्षेत्र ग्रसनी अवशेषों क्षेत्र ImageJ सॉफ्टवेयर का उपयोग करके मापा जाता है, एक अंशांकन मार्कर का उपयोग बढ़ाया।
    लिक्विड consu की मात्रामेड एक sipper ट्यूब बोतल से भस्म तरल पदार्थ की मात्रा की वजह से टोंटी से रिसाव को अनुमान लगाने के लिए मुश्किल है। इस प्रकार के रूप हालांकि, एक खूंटी कटोरा से भस्म तरल पदार्थ की मात्रा अधिक सही गणना की जा सकती है: 1) घनत्व का निर्धारण (यानी, खूंटी-कटोरी में दिलाई कि तरल के calibrated मात्रा की मात्रा के वजन का अनुपात), 2 ) अवशिष्ट तरल युक्त खूंटी कटोरा के वजन का निर्धारण, 3) मात्रा कनवर्टर (जैसे, के लिए एक वजन में इन मूल्यों में प्रवेश http://www.thecalculatorsite.com/conversions/weighttovolume.php

    तालिका 2: Murine VFSS दौरान पैरामीटर quantifiable निगल।

    Representative Results

    हम सफलतापूर्वक परीक्षण आत्म खिलाने की अनुमति है कि कक्षों, मौखिक विपरीत एजेंटों स्वादिष्ट बनाने का मसाला के लिए व्यंजनों, और निगल शरीर क्रिया विज्ञान की मात्रा का ठहराव है कि परमिट एक कदम-दर-कदम परीक्षण प्रोटोकॉल भी शामिल है कि एक उपन्यास और replicable murine-विशिष्ट VFSS प्रोटोकॉल तैयार की है। प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली की ऊर्जा स्तर की क्षमता मापदंडों चूहों में जांच की जा सकता है निगल जो निर्धारित की। हम शुरू में लोगों को और बड़े जानवरों के साथ प्रयोग के लिए डिजाइन उच्च ऊर्जा fluoroscopes प्रयोग किया जाता है (जैसे, जीई Advantx, 9600 जीई OEC, और ओमेगा कार्डियक कैथ सीएस -25, 30 फ्रेम प्रति सेकंड पर प्रत्येक)। हालांकि, इन प्रणालियों पशु भरने में देखने के क्षेत्र के केवल एक छोटा सा हिस्सा है, जो परिणामस्वरूप, परीक्षण चूहों के लिए अपर्याप्त बढ़ाई क्षमताओं था (9 चित्रा)। नतीजतन, छवि गुणवत्ता यह असंभव निगलने तंत्र के सबसे संरचनाओं कल्पना करने के लिए प्रतिपादन, असाधारण गरीब था। इस सीमा के बावजूद, हम सात उद्देश्य वीएफएस पहचानएस नई murine VFSS प्रोटोकॉल (तालिका 3) के साथ संयोजन में एक परंपरागत (यानी, उच्च ऊर्जा) प्रतिदीप्तिदर्शी का उपयोग करते समय चूहों के लिए लगातार मात्रात्मक थे कि मापदंडों निगल। इसके अलावा, हम उन्नत उम्र (> 18 महीने) और अंत मंच ए एल एस की शर्तों के साथ vallecular स्वस्थ वयस्क चूहों में निगलने के लिए संरचनात्मक ट्रिगर बिंदु के रूप में अंतरिक्ष (उम्र के 3-17 महीने), और साथ ही चूहों की पहचान की।

    9 चित्रा
    चित्रा: 9। उच्च ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन सिस्टम वाम: उच्च ऊर्जा (यानी, पारंपरिक) प्रतिदीप्तिदर्शन सिस्टम का उपयोग कर प्राप्त एक माउस के प्रतिनिधि छवि। माउस जिससे इमेजिंग कृन्तकों के लिए पारंपरिक fluoroscopes की अपर्याप्त बढ़ाई क्षमता का प्रदर्शन देखने के प्रतिदीप्तिदर्शन क्षेत्र का केवल एक छोटा सा हिस्सा भर जाता है कि ध्यान दें। अधिकार: एक ही छवि बढ़ाया के बाद captuएक वीडियो संपादन सॉफ्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग कर रहे हैं। काला तीर: ट्रिगर प्वाइंट (valleculae) निगल। सफेद तीर:। डिस्टल घेघा में सांस, जीई जंक्शन (सफेद तारांकन) के माध्यम से पारित करने के तुरंत पहले यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    निगल पैरामीटर हाई एनर्जी सिस्टम कम ऊर्जा प्रणाली
    इंटर निगल अंतराल (आईएसआई) एक्स एक्स
    जबड़ा भ्रमण दर (चाटो दर समतुल्य) एक्स एक्स
    जबड़ा भ्रमण दूरी एक्स एक्स
    चाटो निगल अनुपात एक्स एक्स
    निगल दर एक्स एक्स
    Pharyngeal पारगमन समय (पीटीटी) एक्स
    ग्रसनी के माध्यम से सांस स्पीड एक्स
    इसोफेजियल पारगमन समय (ETT) एक्स
    घुटकी के माध्यम से सांस स्पीड एक्स
    ग्रसनी और घेघा के माध्यम से सांस स्पीड एक्स एक्स
    सांस क्षेत्र एक्स
    ग्रसनी अवशेष क्षेत्र एक्स
    तरल पदार्थ की मात्रा भस्म एक्स एक्स

    तालिका 3: कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन सिस्टम बनाम का उपयोग उच्च पैरामीटर quantifiable निगल।

    हमने हाल ही में एक कम ऊर्जा बढ़ाई प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली विशेष रूप से साथ प्रयोग के लिए हमारी प्रयोगशाला के लिए डिजाइन किया गया था कि LabScope (Glenbrook टेक्नोलॉजीज, Randolph, न्यू जर्सी) कहा जाता प्राप्तचूहों और अन्य छोटे कृन्तकों (10 चित्रा)। हालांकि, इस प्रणाली का स्पष्ट रूप से अधिक बढ़ाई स्तरों यह असंभव को देखने के एक ही क्षेत्र में एक चूहे के पूरे निगलने तंत्र देखने के लिए गाया। 11 चित्रा। स्थिति 1 परमिट पूरे सिर के दृश्य और समीपस्थ वक्ष क्षेत्र के रूप में दिखाया बजाय, दो परीक्षण की स्थिति, आवश्यक हैं। इस स्थिति को निगलने की मौखिक और ग्रसनी चरणों का आकलन करने के लिए आवश्यक है। Gastroesophageal (जीई) जंक्शन निगल ट्रिगर बिंदु (यानी, valleculae) से स्थिति 2 परमिट दृश्य। इस स्थिति को निगलने की esophageal चरण का आकलन करने के लिए आवश्यक है। नई murine VFSS प्रोटोकॉल के साथ संयोजन में LabScope का उपयोग करते हुए प्रारंभिक काम उच्च ऊर्जा (यानी, पारंपरिक) fluoroscopes (3 टेबल) का उपयोग कर प्राप्त लगभग दोगुनी संख्या है, जो चूहों में लगातार मात्रात्मक हैं कि 13 उद्देश्य निगल मापदंडों की पहचान की है। इस हे जैसे, कंठिका हड्डी, ट्रेकिआ, और गर्भाशय ग्रीवा कशेरुक: utcome पारंपरिक प्रणालियों का उपयोग करते समय अनिवार्य रूप से अदृश्य थे कि कई शारीरिक संरचनाओं के दृश्य के लिए अनुमति देता है जो LabScope, चित्रा (12) की उन्नत बढ़ाई क्षमताओं को जिम्मेदार ठहराया है। एक परिणाम के रूप में, हम भी स्वरयंत्रज पैठ और आकांक्षा के सबूत के लिए वीडियो का विश्लेषण करने में सक्षम थे। न तो पैठ है और न ही आकांक्षा की परवाह किए बिना स्वास्थ्य या बीमारी की स्थिति के कारण, इस अध्ययन में किसी भी माउस के लिए मनाया गया।

    10 चित्रा
    चित्रा 10:। LabScope वाम: LabScope छोटे जानवरों के लिए एक डेस्कटॉप प्रतिदीप्तिदर्शी के रूप में कार्य करता है। अधिकार: लेबल वाले घटकों के साथ LabScope का क्लोज़-अप दृश्य। कैंची उठा तालिका दृश्य की प्रतिदीप्तिदर्शी क्षेत्र के भीतर एक अवलोकन कक्ष स्थिति है। tp_upload / 52,319 / 52319fig10highres.jpg "लक्ष्य =" _blank "> इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    11 चित्रा
    चित्रा 11:। एक कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली का उपयोग कर प्राप्त एक माउस के कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन सिस्टम चित्र। उच्च वृद्धि की क्षमता को देखने के प्रतिदीप्तिदर्शन क्षेत्र के भीतर पूरे निगल तंत्र के दृश्य को रोकता है कि ध्यान दें। वाम: स्थिति 1 - पूरे सिर और समीपस्थ वक्ष क्षेत्र के दृश्य की अनुमति देता है। निगल ट्रिगर प्वाइंट (काला तीर) अनिवार्य रूप से देखने के क्षेत्र के भीतर केंद्रित है। अधिकार: स्थिति 2 - जीई जंक्शन (सफेद तारांकन) को निगल ट्रिगर प्वाइंट (काला तीर) से परमिट दृश्य। बाहर का घेघा (सफेद तीर) के माध्यम से गुजर सांस पर ध्यान दें। g11highres.jpg "लक्ष्य =" _blank "> इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    चित्रा 12
    चित्रा 12:। शारीरिक संरचनाएं दर्शनीय यहां तक कि सबसे कम बढ़ाई सेटिंग (बाएं) पर एक कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली का प्रयोग, एक माउस के सिर और गर्दन की बोनी संरचनाओं (यानी, LabScope) हमारे कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली का उपयोग आसानी से दिखाई दे रहे हैं। काला वर्ग के भीतर शारीरिक संरचनाओं दिखाया (और लेबल) सही करने के लिए उच्च बढ़ाई जाती है। बोनी संरचनाओं के बेहतर दृश्य उच्च ऊर्जा fluoroscopes का उपयोग कर विश्लेषण करने के लिए असंभव थे कि कई अतिरिक्त निगल मापदंडों की मात्रा का ठहराव अनुमति देता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    टी "> दर और अंतर-निगल अंतराल नई murine VFSS प्रोटोकॉल के साथ संयोजन में कम या उच्च ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन सिस्टम का उपयोग मात्रा निर्धारित किया जा सकता है कि प्रतिनिधि VFSS मानकों हैं निगल इन दो निगल मापदंडों चूहों के तीन समूहों के लिए मात्रा निर्धारित किया गया था। SOD1-G93A बीमारी में (यानी, ए एल एस के एक मॉडल) (SOD1) ट्रांसजेनिक चूहों की उम्र, वृद्ध C57 चूहों (उम्र के 18-24 महीने) के 4-5 महीने के बीच अंतिम चरण, और स्वस्थ युवा (4-8 महीने की एक नियंत्रण समूह C57 चूहों और SOD1 कॉलोनी से nontransgenic littermates) आयु की। सभी डेटा एक कम या उच्च ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली का उपयोग, केवल पीने का तूफ़ान से संबंधित। कोई महत्वपूर्ण मतभेद SOD1 से युवा C57 चूहों और युवा nontransgenic (नियंत्रण) चूहों के बीच पाए गए यानी इसलिए, डेटा वृद्ध C57 चूहों और अंतिम चरण SOD1 चूहों के साथ तुलना के लिए स्वस्थ युवा चूहों की एक सामान्य "नियंत्रण" समूह में संयुक्त थे दर निगल (;। इन दो निगल मापदंडों को कॉलोनी रिश्तेदारनिर्बाध पीने की लगातार 2 सेकंड) के दौरान निगल की संख्या वृद्ध C57 चूहों और नियंत्रण की तुलना में SOD1 चूहों के लिए काफी धीमी थी। इंटर निगल अंतराल (यानी, लगातार दो निगल बीच का समय) समूहों के बीच काफी अलग नहीं था। इन निष्कर्षों को निगलने में कठिनाई प्रोफाइल के प्रत्येक रोग हालत (चित्रा 13) के लिए अलग अलग होने की संभावना है कि इस धारणा का समर्थन है।

    चित्रा 13
    चित्रा 13:। प्रारंभिक निष्कर्षों यह आंकड़ा murine VFSS प्रोटोकॉल का उपयोग मात्रा दो VFSS निगल मापदंडों के लिए प्रतिनिधि प्रारंभिक निष्कर्षों से पता चलता है: दर (बाएं) और अंतर-निगल अंतराल (दाएं) निगल। निगल दर वृद्ध C57 चूहों और नियंत्रण की तुलना में SOD1 चूहों के लिए काफी धीमी थी। कोई महत्वपूर्ण समूह मतभेद अंतर-निगल इंटर के लिए पहचान की गईवैल। सलाखों के शीर्ष पर लाइन्स, समूहों के बीच सांख्यिकीय महत्वपूर्ण मतभेद (पी <0.05) से संकेत मिलता है Bonferroni जोड़ो में तुलना का उपयोग कर की पहचान की। त्रुटि सलाखों ± 1 sem प्रतिनिधित्व करते हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    Discussion

    Murine (माउस और चूहा) मॉडल के सैकड़ों मानव रोगों का अध्ययन करने के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं। हालांकि, केवल तीन murine रोग मॉडल विशेष रूप से निगरणकष्ट के सापेक्ष जांच की गई है: पार्किंसंस रोग 12,15-17 और स्ट्रोक 18 के एक माउस ए एल एस 13,14 के मॉडल और चूहे मॉडल। इन प्रारंभिक अध्ययनों में से प्रत्येक यह असंभव प्रजातियों और रोगों के बीच सार्थक तुलना प्राप्त करने के लिए प्रतिपादन, निगलने में कठिनाई का आकलन करने के लिए अलग अलग तरीके का उपयोग किया। इस प्रमुख सीमा आत्म-खिला पशुओं में कई निगल मापदंडों के उद्देश्य मात्रा का ठहराव है कि परमिट नव विकसित murine VFSS प्रोटोकॉल का उपयोग करके भविष्य के अध्ययनों में दूर किया जा सकता है।

    सफल VFSS परिणामों तीन महत्वपूर्ण घटकों पर निर्भर कर रहे हैं: एक सीमित स्थान में अनर्गल जबकि खड़े व्यावसायिक रूप से उपलब्ध मौखिक विपरीत एजी की प्रतिकूल स्वाद / गंध मुखौटा कि, 2) व्यंजनों आत्म खिलाने की अनुमति है कि 1) परीक्षण कक्षोंपिता, और 3) निगल शरीर क्रिया विज्ञान की मात्रा का ठहराव है कि परमिट एक कदम-दर-कदम परीक्षण प्रोटोकॉल। संयुक्त प्रभाव ठेठ खिलाने और निगलने व्यवहार उदाहरण भी देते हैं कि एक आरामदायक, कम तनाव, आत्म-खिला परीक्षा वातावरण पैदा करता है। इन घटकों में से एक या एक से अधिक के उन्मूलन के अध्ययन के परिणामों पर एक हानिकारक प्रभाव पड़ेगा। नकारात्मक परिणामों के उदाहरण अपर्याप्त पीने के प्रकरणों की वजह से निगल मापदंडों यों के लिए मौखिक विपरीत एजेंट को पीने, घृणा से विचलित है कि देखने के लिए, अवांछनीय व्यवहार के प्रतिदीप्तिदर्शन क्षेत्र में पशुओं को बनाए रखने के लिए अक्षमता, और अक्षमता शामिल हैं।

    इष्टतम VFSS परिणामों को प्राप्त करने में एक बड़ी चुनौती एक उपयुक्त परीक्षण के चैम्बर डिजाइन किया गया था। हमारे प्रोटोटाइप डिजाइन के कई संशोधन पर्याप्त देखने के क्षेत्र में चूहों को बनाए रखता है और शराब पीने से विचलित है कि व्यवहार से बचाता है कि एक अवलोकन कक्ष में समापन हुआ। कक्षों वीं की वर्दी आयाम प्राप्त करने के लिए मिलिंग मशीन का उपयोग किया गयाई ट्यूब और अंत टोपियां, जिससे एक ही व्यास के कई अवलोकन कक्षों के लिए घटकों की विनिमयशीलता सुनिश्चित करने। आंतरिक आयाम (व्यास और लंबाई) पर्याप्त एक सीधी रेखा में चल रहा है और चारों ओर मोड़ है कि परमिट एक संकीर्ण परीक्षण के चैम्बर में हुई है, जो एक वयस्क माउस के शरीर के आकार की तुलना में थोड़ा बड़ा होने का मिलान किया गया। संकीर्ण डिजाइन, केवल अंत में टोंटी और खूंटी-कटोरी की रणनीतिक स्थिति के साथ संयोजन में, पीने, जबकि चैम्बर की लंबाई के साथ गठबंधन चूहों के सिर और शरीर को बनाए रखता है। पीने में लगे एक बार, चूहे परीक्षण के साथ हस्तक्षेप करने के लिए कम से कम आंदोलन विरूपण साक्ष्य है, जिसके परिणामस्वरूप एक समय में उल्लेखनीय आत्म स्थिर टोंटी या बाउल में कई सेकंड के लिए रहते हैं। इस प्रकार, यह undistorted, क्लोज-अप अवलोकन / वीडियो रिकॉर्डिंग और पार्श्व और पृष्ठीय उदर विमानों में पीने जबकि चूहों के videofluoroscopic इमेजिंग प्राप्त करने के लिए संभव है।

    चूहों (और अन्य छोटे कृन्तकों) को देखने के लिए स्वाभाविक रूप से इच्छुक हैंछोटे रिक्त स्थान में कश्मीर आश्रय। नतीजतन, वे स्वतंत्र रूप से यह इस प्रकार है (यानी, मैन्युअल जानवर उठा यह जगह से निपटने की वजह से तनाव / चिंता को नष्ट करने, घर पिंजरे में रखा गया है जब (पहले से ही एक अंत टोपी द्वारा बंद एक अंत के साथ) की परीक्षा कक्ष में प्रवेश चैम्बर में)। माउस कक्ष में प्रवेश करती है एक बार, दूसरे छोर एक 2 एन डी अंत टोपी संलग्न द्वारा बंद कर दिया है। चूहों को स्वतंत्र रूप से पता लगाने के लिए एक कम चिंता परीक्षण के चैम्बर का निर्माण करते समय इस डिजाइन भागने से बचाता है।

    चैंबर के चौकोर आकार में बनाया गया है प्रदान करता है, इस प्रकार एक मानक कृंतक पिंजरे के भीतर परीक्षण के लिए दूर करने की जरूरत है, एक मुक्त खड़े फैशन में इस्तेमाल किया जा करने के लिए अनुमति देता है जो गति स्थिरता। पूरे तंत्र को साफ करने के लिए आसान मजबूत भंडारण प्रयोजनों के लिए, हल्के, पोर्टेबल, stackable है, और autoclaved किया जा सकता है। कक्षों के शुरू में प्रतिदीप्तिदर्शन साथ प्रयोग के लिए डिजाइन किए गए थे, वे भी हाजिर फिल्म रेडियोग्राफी, न्यूरोइमेजिंग (जैसे, एमआरआई, पीईटी, सीटी), और visua के साथ संगत कर रहे हैंएल अवलोकन / विभिन्न व्यवहार की वीडियो रिकॉर्डिंग की।

    पर काबू पाने के लिए एक दूसरे प्रमुख चुनौती मौखिक विपरीत एजेंटों (यानी, बेरियम सल्फेट और iohexol) के प्रतिकूल स्वाद / गंध मास्किंग था। स्वाद संवेदनशीलता माउस उपभेदों 19-21 और शायद उम्र 22,23 के साथ बीच व्यापक रूप से भिन्न होता है कि यह देखते हुए, यह भले ही तनाव और उम्र के, सभी चूहों को स्वादिष्ट था कि एक टेस्ट मैच के समाधान की पहचान करने के लिए जरूरी हो गया था। इस परिणाम के कारण रियोलॉजिकल (जैसे, चिपचिपाहट, घनत्व, आदि) और परीक्षण समाधान के रासायनिक गुणों में अंतर के confounding परिणामों को नष्ट करते हुए, निगल समारोह / तनाव और उम्र भर में शिथिलता के प्रत्यक्ष तुलना की अनुमति के लिए आवश्यक है। यह अंत करने के लिए, हम murine VFSS दौरान मौखिक विपरीत एजेंटों की प्रतिकूल स्वाद / गंध मुखौटा करने के लिए पसंदीदा स्वाद बढ़ाने की पहचान करने के लिए एक सरल, तेजी से स्वादिष्ट स्क्रीनिंग दृष्टिकोण विकसित किया है। तरीके एक चाटना की आवश्यकता है, जो संक्षिप्त जोखिम परीक्षण, बाद मॉडलिंग गयाometer (यानी, चाटना सेंसर) प्यास 24,25 प्रेरित करने के लिए एक पानी विनियमन अवधि (यानी, रोक पानी रातोंरात) के बाद पहली दो मिनट के दौरान चाटना दरों रिकॉर्ड करने के लिए। एक lickometer इस अध्ययन के लिए उपलब्ध नहीं था; इसलिए, वरीयता व्यवहार टिप्पणियों, साथ ही पहले से हमारी प्रयोगशाला 13,14 में मान्य किया गया है कि चाटना दर के लिए मानक वीडियो रिकॉर्डिंग विधियों द्वारा मूल्यांकन किया गया था। इस स्वादिष्ट स्क्रीनिंग दृष्टिकोण का प्रयोग, चॉकलेट C57 और C57 / SJL उपभेदों द्वारा पसंद स्वाद बढ़ाने के रूप में पहचान की थी। विशेष रूप से, प्रत्येक पिंजरे में चूहों की 100% आसानी से कई चूहों को एक साथ टोंटी पर पीने के साथ, जोखिम के 30 सेकंड के भीतर चॉकलेट के स्वाद का समाधान पिया। हालांकि, बेरियम के अलावा परवाह किए बिना बेरियम या चॉकलेट एकाग्रता की, ज्यादातर चूहों द्वारा केवल संक्षिप्त पीने के मुकाबलों में हुई।

    बेरियम के लिए एक वैकल्पिक iohexol है, हाल ही में एक सुई के रूप में स्वीकार किया गया है कि एक आयोडीन आधारित विपरीत एजेंटमानव VFSS 10 के लिए बेरियम सल्फेट के लिए तालिका वैकल्पिक; इस प्रकार, यह अभी तक इस उद्देश्य के लिए मानकीकृत नहीं किया गया है। चॉकलेट के स्वाद iohexol के कई अलग अलग सांद्रता चूहों को देने की पेशकश कर रहे थे। शेयर iohexol (मिलीग्राम प्रति 350 मिलीग्राम आयोडीन) की एक 50% समाधान करने के लिए ऊपर से युक्त व्यंजनों आसानी से एक रात में पानी विनियमन अवधि के बाद सबसे चूहों द्वारा पिया गया। उच्च सांद्रता परिहार व्यवहार में हुई। एक 50% iohexol (मिलीग्राम प्रति 350 मिलीग्राम आयोडीन) समाधान कम सांद्रता स्पष्ट रूप से कम दिखाई दे रहे थे और निगल शरीर क्रिया विज्ञान की मात्रा का ठहराव रुकावट जबकि, चूहे ने निगल लिया जा रहा है, जबकि पर्याप्त radiodensity का उत्पादन किया। चॉकलेट स्वाद के साथ एक 50% iohexol समाधान जोड़ा रूप में इसलिए, चूहों के साथ VFSS के लिए इष्टतम परीक्षण समाधान की पहचान की थी। दोहराएँ स्वादिष्ट परीक्षण परिहार व्यवहार या प्रतिकूल घटनाओं में परिणाम नहीं था।

    पर काबू पाने के लिए एक तीसरा चुनौती दृश्य को धुंधला कर जो पीने जबकि उनके सिर, झुकने / मोड़ से चूहों को रोकने की गई थीVFSS दौरान निगलने तंत्र की। एक खूंटी कटोरा से पीने सिर्फ इस समस्या का समाधान चैंबर के एक छोर पर मंजिल ऊपर तैनात। एक खूंटी कटोरा के बजाय एक sipper ट्यूब बोतल का उपयोग करने के कई अतिरिक्त लाभ कर रहे हैं। उदाहरण के लिए, तरल पदार्थ की एक calibrated मात्रा अवलोकन ट्यूब के अंत टोपी में एक वेंटिलेशन छेद के माध्यम से खूंटी-कटोरी में pipetted किया जा सकता है। यह दृष्टिकोण संक्षिप्त VFSS परीक्षण अवधि के दौरान खपत परीक्षण समाधान के मिनट मात्रा की मात्रा का ठहराव परमिट। इसके अलावा, एक छोटे से sipper ट्यूब खोलने की तुलना में खूंटी-कटोरी में परीक्षण समाधान की वृद्धि की सतह क्षेत्र, आगे पीने के लिए प्रेरित करने के घ्राण उत्तेजना में वृद्धि हुई प्रदान कर सकता है। कटोरा ऊंचाई मंजिल से एक मानकीकृत दूरी के रूप में खूंटी-कटोरे, युवा या छोटे तनाव चूहों के अध्ययन के लिए बेहतर अनुकूल हो सकता है। इसके विपरीत, sipper ट्यूब लंबाई एक और संभावित confounding चर पर विचार करने के लिए कहते हैं, जो अलग-अलग आकार के चूहों को समायोजित करने के लिए समायोजित किया जाना चाहिए। इसके अलावा, माउस मोडवे आसानी से एक खूंटी कटोरा तक पहुँच सकते हैं, जबकि मस्तिष्क संबंधी बीमारियों की रास, कठिनाई के कारण अंगों की मोटर हानि के लिए एक sipper ट्यूब बोतल तक पहुंच गया हो सकता है। जीभ और / या जबड़े में शिथिलता के साथ चूहे पर्याप्त तरल का उपयोग करने की टोंटी में गेंद प्रेस करने में असमर्थ हो सकता है; खूंटी-कटोरे का उपयोग करते हुए इस उलझाना समाप्त कर सकते हैं। इन कारणों के लिए, sipper ट्यूब की बोतलों से अधिक खूंटी-कटोरे का उपयोग murine VFSS परीक्षण का पसंदीदा तरीका है। हालांकि, अवलोकन कक्षों जरूरत के रूप में टोंटी पीने को समायोजित करने के लिए डिजाइन किए गए थे। विचार करने के लिए एक महत्वपूर्ण चेतावनी चाटना दरों टोंटी और कटोरा 13,26 पीने के बीच अलग करने के लिए जाना जाता है है। इसलिए, VFSS के लिए टोंटी या खूंटी-कटोरी या तो की पसंद के भीतर और प्रयोगों के बीच अनुरूप होना चाहिए।

    एक चौथाई चुनौती सामान्यतः मानव शोध अध्ययन और नैदानिक ​​अभ्यास में इस्तेमाल VFSS मापदंडों के तुलना कर रहे हैं कि चूहों के लिए मात्रात्मक निगल मापदंडों की पहचान करने के लिए किया गया था। हमारी प्रारंभिक निष्कर्षों से पता चलाप्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली के प्रकार मापदंडों चूहों में जांच की जा सकता निगल जो निर्धारित करता है। अधिकांश अनुसंधान केन्द्रों और चिकित्सा सेटिंग्स चूहों और अन्य छोटे जानवर जब परीक्षण असाधारण गरीब छवि गुणवत्ता में जो परिणाम लोगों और बड़े जानवरों के साथ प्रयोग के लिए बनाया fluoroscopes उच्च ऊर्जा (75-95 केवी, 1-5 मा) है। एक उदाहरण के रूप में, चूहों के साथ एक उच्च ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शी का उपयोग करते हुए एक ताजा अध्ययन में केवल 4 मात्रात्मक निगल मापदंडों 12 की पहचान करने में सक्षम था, और हम इस वर्तमान अध्ययन में चूहों के लिए केवल 7 निगल मापदंडों की पहचान करने में सक्षम थे। इस प्रमुख सीमा को पार करने के लिए, हमने हाल ही में LabScope (Glenbrook टेक्नोलॉजीज) नामक एक कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली प्राप्त की। प्रणाली में 15 और 40 केवी और (अधिकतम शक्ति डब्ल्यू 8) 0.2 मा की एक चोटी ट्यूब वर्तमान के बीच फोटान ऊर्जा के साथ एक्स-रे की एक सतत कोन बीम उत्पन्न करता है कि एक लघु प्रतिदीप्तिदर्शी है। इस प्रणाली के निचले ऊर्जा के स्तर को बेहतर चूहों की पतली हड्डी और कोमल ऊतकों द्वारा तनु और इस तरह highe प्रदान कर रहे हैंपारंपरिक (यानी, उच्च ऊर्जा) से आर विपरीत संकल्प fluoroscopes। LabScope के एक्स-रे किरण पारंपरिक fluoroscopes की 15-57 सेमी व्यास छवि intensifier से स्पष्ट रूप से छोटा होता है जो एक 5 सेमी व्यास छवि intensifier, पर निर्देशित है। LabScope की न्यूनतम स्रोत-से-intensifier दूरी (सिड) बढ़ाई क्षमताओं में वृद्धि हुई प्रदान करता है जो ~ 6 सेमी (के विपरीत ~ पारंपरिक fluoroscopes के लिए 30 सेमी), है। इसके अलावा, LabScope डिजिटल सिड फेरबदल के बिना वास्तविक समय में 40 गुना तक छवि और बड़ी है कि तकनीक का पेटेंट कराया उपयोग करता है। परिणाम संक्षेप में इस तरह के एक माउस के निगलने तंत्र के रूप में ब्याज के छोटे क्षेत्रों, देखने के लिए वास्तविक समय में और बाहर ज़ूम कर सकते हैं कि एक एक्स-रे सूक्ष्मदर्शी है।

    यह कम ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन प्रणाली का एक प्रमुख लाभ विकिरण सुरक्षा सुधार हुआ है। LabScope के साथ कम विकिरण खुराक प्राप्त जानवरों के अलावा, इस प्रणाली का उपयोग करते हुए शोधकर्ताओं को उजागर कर रहे हैं काफी लेसएस विकिरण तितर बितर। सीधे नियंत्रण कक्ष में यूनिट के सामने विकिरण जोखिम 10.3 श्री / घंटा है। यूनिट के सामने एक दूरी एक मीटर की ऊंचाई पर, लोगों तक पहुंचाने के 580 μR / घंटा के लिए चला जाता है। कमरे में सबसे अन्य स्थानों में 10 μR / घंटा नीचे बहुत कम जोखिम है। इस सुधार के बावजूद, हम विकिरण सुरक्षा में सुधार करने के लिए अतिरिक्त कदम उठाए हैं। उदाहरण के लिए, लीडेड एक्रिलिक परिरक्षण बिखरे हुए एक्स-रे व्यक्तिगत परिरक्षण पहने बिना murine VFSS परीक्षण का संचालन करने के लिए सक्षम बनाता है शोधकर्ताओं जो फोटॉनों, (उदाहरण के लिए, नेतृत्व aprons, थायराइड ढाल, और चश्मा) ब्लॉक करने के लिए LabScope चारों ओर जोड़ा गया है। इसके अलावा, स्पष्ट एक्रिलिक एक दूरी से माउस के दृश्य की अनुमति देता है। इसके अलावा विकिरण सुरक्षा अन्वेषक द्वारा दूर से नियंत्रित किया जाता है, जो एक मोटर चालित कैंची उठा मेज, द्वारा प्रदान की जाती है। प्रतिदीप्तिदर्शी से 3 मीटर करने के लिए एक दूरी से, शोधकर्ताओं ने एक्स-रे BEA के भीतर अवलोकन चैंबर के ऊर्ध्वाधर और क्षैतिज स्थिति को समायोजित करने के लिए रिमोट नियंत्रित डिवाइस का उपयोग कर सकते हैंएम। माउस को स्वतंत्र रूप से अवलोकन कक्ष के भीतर चलता रहता है, जबकि एक परिणाम के रूप में, ब्याज की संरचनात्मक क्षेत्रों को देखने के प्रतिदीप्तिदर्शन क्षेत्र के भीतर रखा जा सकता है। कैंची उठा LabScope साथ प्रयोग के लिए डिजाइन किया गया था, यद्यपि यह भी शोधकर्ताओं के लिए विकिरण सुरक्षा में सुधार करने के लिए पारंपरिक fluoroscopes साथ प्रयोग के लिए संगत है। Murine VFSS तरल पदार्थ के लिए एक सिरिंज वितरण प्रणाली के उपयोग पर जोर देता के दौरान एक अंतिम कदम के विकिरण सुरक्षा में सुधार करने के लिए। इस प्रणाली के एक 3-4 पैर भी शामिल है (या अब, अगर जरूरत है) एक दूरी से खूंटी-कटोरी में तरल पदार्थ की तेज और कुशल प्रसव परमिट जो पीई ट्यूबिंग, की लंबाई। तरल पदार्थ के लिए यह सिरिंज वितरण प्रणाली, अवलोकन कक्षों के साथ संयोजन में, यह भी पारंपरिक fluoroscopes के साथ प्रयोग किया जा सकता है।

    नई murine VFSS प्रोटोकॉल के साथ संयोजन में LabScope का उपयोग करते हुए प्रारंभिक काम, पारंपरिक प्रणालियों से अधिक की एक प्रमुख लाभ दर्शाता है: मज़बूती से मैं मात्रा निर्धारित किया जा सकता है कि निगल मानकों की संख्याएस लगभग दोगुनी हो। कम या उच्च ऊर्जा प्रतिदीप्तिदर्शन सिस्टम का उपयोग हालांकि, जब चूहों के निगलने तंत्र (जैसे, जीभ, वेलुम, पीछे ग्रसनी दीवार, और उपकंठ) के कोमल ऊतक संरचनाओं आसानी से दिखाई नहीं हैं। इसलिए, हम सांस प्रवाह उपायों के बजाय निगलने के बायोमैकेनिक्स बढ़ाता पर जोर दिया। हम समय, क्षेत्र, दूरी, मात्रा, आदि, बजाय Likert प्रकार पैमाने उपायों का उपयोग करने का इकाइयों पर आधारित मात्रा निर्धारित किया जा सकता है कि मानकों में मुख्य रूप से रुचि रखते थे। कई सांस प्रवाह मापदंडों बैठक इस आवश्यकता के नाम पर कुछ करने के लिए, इस तरह के मौखिक पारगमन समय 27-29, ग्रसनी पारगमन समय 27-33, और esophageal पारगमन समय 34-36 के रूप में, मानव VFSS साहित्य में वर्णित किया गया है। मौखिक गुहा के माध्यम से सांस में परिवहन के कारण सहज पीने के दौरान छोटे सांस आकार की संभावना, चूहों में आसानी से दिखाई नहीं देता था। हालांकि, हम के रूप में अच्छी तरह से, मज़बूती से ग्रसनी और esophageal पारगमन समय यों करने में सक्षम थेसांस में प्रवाह और निकासी से संबंधित कई अन्य उपायों के रूप में। हम LabScope की क्षमताओं का अनुकूलन के रूप में अतिरिक्त translational को निगल मापदंडों की पहचान की उम्मीद है।

    इस अध्ययन के परिणामों चूहों ग्रसनी निगल ट्रिगर से पहले vallecular जगह भरने प्रत्येक छोटे तरल सांस में क्रमिक रूप से, सहज पीने के दौरान निगल प्रति कई लयबद्ध licks ले कि पता चला है। तरल 37-40 ingesting के प्राथमिक साधन के रूप में चाट का उपयोग करने वाले स्तनधारियों के लिए विशिष्ट है जो यह व्यवहार, मानव शिशु निगलने और सामान्य रूप से सभी शिशु स्तनधारियों की लयबद्ध चूसना निगल पैटर्न जैसा दिखता है। शिशु निगलने फिजियोलॉजी कई लयबद्ध की विशेषता है सामान्यतः चूसना निगल चक्र 37,41-43 के रूप में वर्णित है, एक reflexive ग्रसनी निगल द्वारा पीछा बेकार है। इस प्रकार, चूहों की ingestive चाट व्यवहार में शामिल लयबद्ध जीभ और जबड़े आंदोलनों गुंजन की चूसने व्यवहार ingestive के लिए और अधिक तुलनीय हो सकता हैबच्चों और वयस्कों द्वारा एक शिशुओं के बजाय कप पीने के। इसलिए हम मानव शिशुओं की दर चूसना और चूसना निगल अनुपात के साथ भविष्य की तुलना के लिए चूहों के चाटना दर और चाटना-निगल अनुपात बढ़ाता गया है। शायद murine VFSS अनुसंधान विकास निगलने विकारों में अंतर्दृष्टि प्रदान करेगा।

    किसी भी नए अनुसंधान विधि के साथ के रूप में, सुधार के लिए क्षेत्रों की पहचान की गई है। उदाहरण के लिए, murine VFSS प्रोटोकॉल केवल C57 और C57 / SJL माउस उपभेदों का उपयोग कर विकसित किया गया था; यह अभी तक चूहों के साथ परीक्षण नहीं किया गया। अवलोकन कक्षों चूहों का बड़ा शरीर के आकार को समायोजित करने के लिए आकार (व्यास और लंबाई) में बढ़ाया जा करने की आवश्यकता होगी। चॉकलेट के स्वाद iohexol एक सार्वभौमिक murine VFSS परीक्षण समाधान के रूप में उपयुक्त है इसके अलावा, अगर यह अज्ञात है। इसलिए, चूहों और चूहों के कई उपभेदों के साथ बड़े पैमाने पर परीक्षण इस उद्देश्य के लिए warranted है। इसके अलावा, murine VFSS के लिए एक विपरीत एजेंट के रूप में बेरियम के उपयोग की संभावना से इनकार नहीं किया जाना चाहिए। चूहे स्पष्ट रूप से iohex वरीयबेरियम से अधिक व्यंजनों राजभाषा; बेरियम की प्रतिकूल स्वाद / गंध मास्किंग में हालांकि अधिक कठोर और व्यवस्थित प्रयासों के iohexol के लिए स्वादिष्ट विकल्प प्रदान कर सकता है। स्वाद पसंद पर iohexol और बेरियम सल्फेट के प्रभाव की तुलना भविष्य के अध्ययन (और साथ ही अन्य संभावित मौखिक विपरीत एजेंटों) और निस्संदेह मानव VFSS के लिए सीधे प्रासंगिक और translational है कि महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करेगा चूहों और चूहों में शरीर विज्ञान निगल।

    मनुष्यों के साथ VFSS खाद्य पदार्थ और तरल के कई consistencies भी शामिल है, और पतली तरल पदार्थ और सूखी, ठोस खाद्य पदार्थों 44,45 निगलने जब ​​निगरणकष्ट सबसे स्पष्ट है। murine VFSS प्रोटोकॉल इसलिए रोग मॉडल में निगरणकष्ट का पता लगाने और मात्रा का ठहराव की सुविधा हो सकती है कि अतिरिक्त consistencies शामिल करने के लिए विस्तार किया जा रहा है। यह भी मानव VFSS के दौरान इस्तेमाल किया उन लोगों से मिलान करने के viscosities को समायोजित करने के क्रम में murine VFSS के लिए तरल व्यंजनों का चिपचिपापन परीक्षण का संचालन करने के लिए आवश्यक हो जाएगा। इन सीमा को संबोधित करतेations सीधे चूहों, चूहों, और मनुष्यों के बीच तुलना की जा सकती है कि निगरणकष्ट के translational VFSS बायोमार्कर की पहचान की सुविधा होगी।

    murine VFSS की उपयोगिता काफी जिससे निगलने के बायोमैकेनिक्स की जांच की अनुमति देने, अन्यथा दिखाई नहीं हैं कि निगलने तंत्र के कोमल ऊतक संरचनाओं में radiopaque मार्कर दाखिल द्वारा सुधार किया जा सकता है। इस दृष्टिकोण को सफलतापूर्वक, शिशु सूअरों में निगलने धातु क्लिप और तारों 37,42 के एक वर्गीकरण का उपयोग करने के बायोमैकेनिक्स अध्ययन करने के लिए कई वर्षों के लिए इस्तेमाल किया गया है। हम चूहों में, इसी तरह, लेकिन छोटे मार्कर का उपयोग मानव सहित बड़े स्तनधारी, साथ तुलना के लिए कई अतिरिक्त निगल मापदंडों की मात्रा का ठहराव की अनुमति होगी उम्मीद है। वर्तमान में हम जीभ में radiopaque मार्कर, कोमल तालू, ग्रसनी, गला, और इस परिकल्पना का परीक्षण करने के लिए चूहों के समीपस्थ घेघा दाखिल करने की पद्धति विकसित कर रहे हैं।

    वीडियो recordinLabScope और पारंपरिक fluoroscopes जी फ्रेम दर सेकंड (एफपीएस) 30 फ्रेम प्रति तक सीमित है। हालांकि, हमारे प्रारंभिक परिणामों स्वस्थ चूहों के लिए निगलने की पूरी ग्रसनी चरण में लगभग 10 गुना तेजी से मनुष्यों से है जो कम से कम 66 मिसे (यानी, दो फ्रेम), में होता है कि पता चला है। इस प्रकार, चूहों में निगलने की ग्रसनी चरण विवरण एक 30 एफपीएस कैमरा के साथ प्रशंसनीय नहीं कर रहे हैं कि इतनी जल्दी होता है। एक उच्च फ्रेम दर (संभावना> 100 एफपीएस) पर्याप्त कल्पना और चूहों और अन्य कृन्तकों में निगलने की ग्रसनी चरण का बहुत तेजी से और जटिल आंदोलनों यों के लिए आवश्यक हो जाएगा। एक उच्च फ्रेम दर के साथ संयोजन के रूप में, 3 डी fluoroscopic इमेजिंग के लिए biplanar प्रौद्योगिकी को शामिल निश्चित रूप से उपयोगिता murine VFSS का विस्तार होगा। इसलिए, भविष्य डिजाइन संबंधी एक उच्च फ्रेम दर कैमरा और biplanar इमेजिंग क्षमताओं को शामिल करना चाहिए।

    अन्त में, कम खुराक विकिरण में बाँझपन का कारण दिखाया गया हैजीवन अवधि के अध्ययन 46 उलझाना सकता है कि डिम्बग्रंथि उत्तेजित हार्मोन की बदल स्तर में जिसके परिणामस्वरूप महिला C57 चूहों,। VFSS परीक्षण के साथ जुड़े दोहराया कम खुराक विकिरण जोखिम के प्रभाव के लिए विशेष रूप से संबंधित परिणाम अभी तक चूहे, अन्य जानवरों, या मानव में जांच नहीं की गई है। हालांकि, मानव महिलाओं में (विकिरण जोखिम से संबंधित नहीं) डिम्बग्रंथि शिथिलता गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल गतिशीलता विकारों से जोड़ा गया है, और विशेष रूप से महिलाओं (पशुओं और मनुष्यों में शामिल हैं कि भविष्य VFSS पढ़ाई जब डिजाइनिंग विचार करने के लिए अभी तक एक और चेतावनी प्रदान करता है, जो कुछ मामलों में 47 में निगरणकष्ट, करने के लिए )। निगल समारोह में उल्लेखनीय लिंग भेद लोग 48,49 के लिए सूचित किया गया है और पता लगाने के लिए और साथ ही पशु रोग मॉडल में चिह्नित करने के लिए महत्वपूर्ण होगा के रूप में महिलाओं के बहिष्कार, बचा जाना चाहिए। इसलिए, चूहों और दोनों लिंगों के चूहों में अनुदैर्ध्य VFSS अध्ययन से परिणामों डी के सापेक्ष मनुष्य के लिए जबरदस्त translational क्षमता हैysphagia, साथ ही दोहराने VFSS परीक्षण के साथ जुड़े कम खुराक विकिरण जोखिम के जोखिम के लिए।

    Disclosures

    इस लेख के लिए ओपन एक्सेस Glenbrook द्वारा प्रायोजित है।

    Acknowledgments

    हम विनय डेटा संग्रह करने के लिए जो योगदान दिया लीवर लैब के अतिरिक्त सदस्य (Andries फरेरा, Danarae जर्मन, एलेक्सिस Mok, कैटलिन फ्लिन, एलिजाबेथ Bearce, और Matan Kadosh) और पांडुलिपि समीक्षा (Andries फरेरा, रेबेका श्नाइडर, और केट रॉबिंस) धन्यवाद। हम भी इस अध्ययन में इस्तेमाल कृंतक अवलोकन ट्यूबों के उनके डिजाइन इनपुट और निर्माण के लिए चिंटू भौतिकी मशीन शॉप से ​​Roderic Schlotzhauer और एडविन Honse स्वीकार करते हैं। और जनवरी Ivey (मिसौरी विश्वविद्यालय में रिसर्च पशु कैथ लैब के प्रबंधक - स्कूल ऑफ मेडिसिन) - हम Maleâ जनवरी Kunkel (पशु चिकित्सा कॉलेज पशु चिकित्सा में रेडियोलॉजी पर्यवेक्षक और मिसौरी विश्वविद्यालय में सर्जरी विभाग) की विशेष रूप से सराहना कर रहे हैं हम murine VFSS प्रोटोकॉल विकसित रूप में उच्च ऊर्जा fluoroscopes जबकि ऑपरेटिंग निरंतर धैर्य और प्रेरणा के प्रदर्शन के लिए। एनआईएच / NIDCD (ते लीवर), एनआईएच / NINDS (जी.के. Pavlath), Otolaryngo इस अध्ययन के लिए स्रोतों शामिल अनुदानसना हुआ - सिर और गर्दन के सर्जरी शुरू हुआ धन (ते लीवर), चिंटू प्रधान फंड (ते लीवर), Mizzou एडवांटेज (ते लीवर), और उम्र बढ़ने पर चिंटू केंद्र (ते लीवर)।

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Polycarbonate tubing for observation chambers McMaster-Carr 3161T41 Body of observation tubes, 2"X2" diameter, 0.080" thick wall
    Polycarbonate sheet  for observation chambers McMaster-Carr 9115K71 End-caps for observation tubes, 2"x12"x3/4"
    Polycarbonate sheet  for observation chambers McMaster-Carr 8574K281 Peg-bowls for observation tubes
    Silicone O-rings  for end-caps of observation chambers McMaster-Carr 9396K108 S1138 AS568-029, pack of 25
    http://www.mcmaster.com/#o-rings/=t0wt5r 
    Silicone stoppers for observation chambers McMaster-Carr 2903K22 Package of 10 stoppers to plug the oval opening in the top of the observation chamber when using a peg-bowl
    http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3803/=t0y5at
    Centrifuge tubes for sipper tube bottles Evergreen Scientific 222-3530-G80 30 ml freestanding centrifuge tubes, with caps, sterile
    https://www.evergreensci.com/labware-catalog/tubes-and-vials/30-and-50-ml-centrifuge-tubes/ 
    Silcone stoppers for sipper tube bottles Saint-Gobain Performance Plastics DX263031-10  Number 31D, size: 26 mm bottom, 32 mm top, 30 mm high; 10 pack; 
    http://www.labpure.com/en/Products.asp?ID=179&PageBrand=STOPPERS
    Stopper borers for sipper tube bottles Thomas Scientific 3276G40 Cork Borer Set that ranges from 3/16-15/16 inch 
    http://www.thomassci.com/Supplies/Corks/_/CORK-BORER-SET-316-1516-IN?q=Humboldt
    Drinking tubes for sipper tube bottles Ancare TD-100  2 1/2” long drinking tubes with 5/16” opening, straight ball-spout
    http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point 
    Iohexol for making oral contrast agent solution GE Healthcare 350 mg iodine per ml
    http://www3.gehealthcare.com/en/products/categories/contrast_media/omnipaque 
    Chocolate syrup for flavoring oral contrast agent Herseys
    10 ml syringe for syringe delivery system Becton, Dickinson and Company 309604 Luer lock tip syringe without needle, 100 per box
    http://www.bd.com/hypodermic/products/syringeswithoutneedles.asp
    Catheter tubing for syringe delivery system Becton, Dickinson and Company 427451 Polyethylene Tubing (Non-Sterile) (PE 240) 100'
    http://www.bd.com/ds/productCenter/427451.asp 
    Needle for syringe delivery system Becton, Dickinson and Company 427560 15-gauge needle, fits into PE 240 catheter tubing
    http://www.bd.com/ds/productCenter/427560.asp 
    Delrin acetal resin rod for syringe delivery system McMaster-Carr 8576K15 1/2 inch diameter, black
    http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3609/=t0wvaf 
    Acrylic sheeting for scissor lift Ponoko Laser cut
    http://www.ponoko.com 
    3D printed ABS frame Engineering Rapid Prototyping Facility, University of Missouri
    Brass rods for scissor lift Amazon TTRB-03-12-03 made into axles
    http://www.amazon.com/Brass-Seamless-Round-Tubing-Length/dp/B000FN898M
    Drawer slide for scissor lift Richelieu 10292G116 Attaches to base of scissor lift
    http://www.lowes.com/pd_380986-93052-T35072G16_0__?productId=50041754
    28BYJ-48 stepper motor for scissor lift 2 each
    ULN2003 Darlington transistor array for scissor lift Toshiba ULN2003APG Used as stepper drivers (2 each)
    ATTINY85 microcontroller for scissor lift Atmel ATTINY85-20PU 2 each
    http://www.taydaelectronics.com/attiny85-attiny85-20pu-8-bit-20mhz-microcontroller-ic.html
    Nylon spur gear McMaster-Carr 57655K34 2 each
    http://www.mcmaster.com/#57655k34/=t0yaqz
    Nylon spur gear rack McMaster-Carr 57655K62 2 each
    http://www.mcmaster.com/#57655k62/=t0ybh9
    4-40 nylon machine screws McMaster-Carr 95133A315 Lift assembly
    http://www.mcmaster.com/#95133a315/=t0yd8q
    4-40 nylon hex nuts McMaster-Carr 94812A200 Lift assembly
    http://www.mcmaster.com/#94812a200/=t0ye29
    Buna-N O-Ring AS568A Dash No. 104 McMaster-Carr 9452K318 Lift assembly
    http://www.mcmaster.com/#9452k318/=t0yem7

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