שיטות להשוואה בין חומרים מזינים בBeebread נוצרו על ידי דבורים דבש Africanized ואירופאי והשפעות על titers חלבון Hemolymph

Biology
 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Degrandi-Hoffman, G., Eckholm, B., Huang, M. Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers. J. Vis. Exp. (97), e52448, doi:10.3791/52448 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

דבורי דבש להשיג חומרים מזינים מאבקה שהם אוספים וחנות בכוורת כbeebread. פיתחנו שיטות לשליטה במקור האבקה שדבורים אוספות ולהמיר לbeebread על ידי הצבת מושבות שבנבנה במיוחד אזור טיסה סגורה. שיטות שפותחו כדי לנתח את הרכב חומצות אמינו של חלבון והאבקה וbeebread. אנו גם מתארים כיצד צריכת beebread נמדדה ושיטות המשמשות לקביעת titers חלבון hemolymph הדבורה עובד מבוגר לאחר ההאכלה על beebread ל4, 7 ו -11 ימים לאחר הופעתה. שיטות יושמו כדי לקבוע אם גנוטיפ משפיע על ההמרה של אבקה לbeebread והשיעור שדבורים לצרוך ולרכוש חלבון ממנה. שני תת-מינים (דבורי דבש אירופיים וAfricanized; EHB וAHB בהתאמה) סופקו עם אותו מקור האבקה. בהתבסס על השיטות שפותחו, beebread שנעשה על ידי שני תת-המין היה ריכוזים נמוכים יותר חלבון וערכי pH מהאבקה. באופן כללי, אמין con החומצההריכוזים בbeebread שנעשו על ידי שני EHB או AHB היו דומים והתרחשו ברמות גבוהות יותר בbeebread מאשר באבקה. שני AHB וEHB צרכו יותר באופן משמעותי של beebread שנעשה על ידי AHB מאשר על ידי EHB. למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread, ריכוזי חלבון hemolymph בAHB היו גבוהים יותר מאשר בEHB. הבדלים ברכישת חלבון בין AHB וEHB עשויים לשקף עיבודים סביבתיים הקשורים לאזור הגיאוגרפי שבו כל תת-מין התפתח. הבדלים אלה יכולים לתרום להקמה המוצלחת של אוכלוסיות AHB בעולם החדש בגלל ההשפעות על גידול גוזל וצמיחת מושבה.

Introduction

תזונה משחקת תפקיד מהותי בבריאות והמרץ של מושבות דבורי דבש ובהקמתם כאוכלוסיות. חומרים מזינים ממזון מספקים אנרגיה והרכיבים ביוכימיים הנדרשים לגידול גוזל, ויסות חום, ליקוט ותגובה חיסונית. למושבות דבורי דבש, החומרים המזינים דרושים כדי לגדול אוכלוסיות מושבה ולשמור על בריאותם מגיעה מצוף ואבקה. צוף מספק פחמימות ואבקה מספקת את הדרישות תזונתיות שנותרו כגון חלבון, שומנים, ויטמינים ומינרלים 1.

תת-מין של דבורי דבש יכול להיות שונה בפרמטרי רמה-מושבה מבוססת מבחינה תזונתית כגון תוחלת חיים עובד, גידול גוזל, ומנגנוני חסינות חברתית 2-6. הבדלים אלה עשויים להיות קשורים לדרך בי מזון, במיוחד האבקה מעובד על ידי המושבה ומתעכלת ביחידים. אבקה מאוחסנת בתאי מסרק ובאמצעות תסיסה חומצת חלב microbially תיווך משתנה כימי 11-14.

כאן אנו מתארים שיטות משמשות להשוואת ההרכב והצריכה של beebread שנעשה על ידי תת-מין שונה של דבורי דבש. שיטות למדידת titers כתוצאה hemolymph החלבון בדבורים פועל גם מתוארות. מחקרים קודמים על הרכב התזונתי של beebread נעשו עם דבורי דבש אירופיים (EHB) 10,15,16. עם זאת, ייתכנו הבדלים בbeebread שנעשה על ידי דבורים של תת-מין שונה גם כאשר הם מאכילים באותו האבקה. EHB וAHB הושוו כי צוללות אלהיש לי pecies בדלים התנהגותיים ופיסיולוגיים שונים שעשויים להיות קשור לעיבוד מזון ומזין רכישה 17. חלק מההבדלים הבולטים ביותר הוא שAHB לאסוף ולצרוך יותר מאשר אבקת EHB ונראה להמיר אותו בקלות רבה יותר לגוזלים 18. יש מושבות AHB שיעורים גבוהים יותר מאשר רץ EHB ולהתחמק כאשר משאבי מזון הפכו מוגבל 19-23. Absconding הוא נדיר בEHB. AHB יש גם קצב חילוף חומרים גבוה יותר מ -24 EHB. הבסיס התזונתי להבדלים ברמה בין המושבה EHB וAHB עשוי להיות קשור לשיעור גביית אבקה וגם לתוכן התזונתי שלה (למשל, חומצות אמינו וחלבונים) אחרי שהוא מומר לbeebread. צריכת Beebread ורכישת חלבון וכתוצאה מכך גם עשויות לשחק תפקיד בהבדלים ברמה בין המושבה EHB וAHB. על פי השיטה, EHB וAHB עשו beebread מאותו מקור האבקה. Beebread לאחר מכן האכיל בחזרה לדבורים של EACתת-מין h ויכול לקבוע אם דבורים לרכוש חלבון מbeebread באופן ייחודי לתת-המין שלהם או למקור של beebread.

Protocol

1. קבלת Beebread ממושבות AHB וEHB

  1. מניחים מלכודות אבקה במושבות דבורי דבש ולאסוף אבקה. טוחנים את האבקה לאבקה דקה (בדומה לאבקה לשפוך ממאבקים) באמצעות מטחנת קפה.
  2. להקים מושבות 5 כל אחד מAHB וEHB באזור טיסה סגור (EFA), כך שדבורים ללקט רק באבקה הניתנת. כדי למנוע מעובדים נסחפו בין EHB ומושבות AHB, לחלק את EFA לחלקים נפרדים, כך שדבורים לא יכולים לעבור ביניהם. הנח EHB הבודד או מושבות AHB עם 3,500-4,000 דבורים פועל, מסרק שעווה עם צוף, דבש, להרהר בשלה ומסרק ריק בכל קטע של EFA.
    הערה: המושבות לא אחסן אבקה כאשר הוקמו. שיעור האבקה שמאוחסן יכול להיות מוגבר על ידי לא כולל מלכת הנחת במושבות.
  3. להאכיל את אבקת קרקע למושבות על ידי הנחת מגש עם האבקה בכל קטע של EFA. מתפשט על 60 גרם של אבקה על כל מגש כך foragin שדבורי g יכולים לאסוף אותו המון corbicular וכלאחסן את האבקה במושבות שלהם כbeebread. המשך מתן אבקה טרי על כל מגש יומי במשך 3 שבועות.
  4. עיין beebread מהקולוניות האירופיות כbeebread האירופי (גאות), ומן מושבות Africanized כbeebread Africanized (ABB).

2. דבורים האכלה בכלובים

  1. מסגרות מקום להרהר עובד חתום ממושבות AHB וEHB בכלובים נפרדים הופעה בחדר סביבתי נקבעו על 32-34 ° C ו 40% לחות יחסית ..
  2. כאשר העובדים לצאת ועומדים 24 שעות ישנות, להקים 12 כלובי המבדק פרספקס (ממדים = 11.5 x 7.5 x 16.5 סנטימטר 3) ולהוסיף או 100 EHB יצא זה עתה או 100 דבורים פועל AHB יצאו זה עתה לכל כלוב. הנח סעיף של מסרק עם מספר ידוע של תאים או גאות או ABB (24-30 תאים לכל כלוב) בכל כלוב כדי ליצור שילובי הטיפול הבאים: AHB fed ABB, EHB fed ABB, AHB fed גאות וEHB fed גאות. (4 טיפולים; 6כלובים לטיפול; 24 כלובים בסך הכל).
  3. להוסיף בקבוקונים של מים ודבש 50% ופתרון מים שנוסחו על ידי נפח לכל כלוב. למלא בקבוקוני דבש ומים יומיים לתקופת המחקר 11 היום.

3. דבורים דגימת עבודה וBeebread וצריכת הערכה

  1. לדוגמא 10 יצאה זה עתה עובדי EHB וAHB לפני הצבת אותם בכלובים. עיין באלה כ0 דבורי היום ויש להם לשמש כבסיס לריכוזי חלבון hemolymph.
  2. הסר 10 דבורים מכל כלוב לאחר שהאכיל בגאות או ABB עבור 4, 7, ו -11 ימים.
  3. הנח את הדבורים חיים בצינורות microcentrifuge בודדים ולהגדיר בשקיות קרח. בחר subsample של ארבעה דבורים לניתוח של ריכוז חלבון hemolymph.
  4. לאחר דגימת דבורים ביום-11, לספור את מספר תאי מסרק שעדיין מכילים beebread. זהו מדד יחסי של צריכת beebread.
  5. הסר את beebread שנותר מהתאים בכל כלוב ולאחסן בseparאכלתי צינורות microcentrifuge פי כלוב. שמור את דגימות beebread ב -80 ° C עד ניתח עבור pH, ריכוז חלבון מסיס, ותוכן של חומצות אמינו.

4. הערכת pH של אבקה וBeebread

  1. קח שש דגימות 0.3 גרם אקראיות של האבקה המוזנת לדבורים בEFA ולפזר אותו ב300 μl של מים מזוקקים. למדוד את ה- pH באמצעות חנית pH הצומת כפולה עמיד למים עם דיוק של 0.01.
  2. קח 0.3 מדגם g של beebread שנותר לאחר תקופת ההאכלה 11 היום בכל כלוב. ממיסים את beebread ב300 μl של pH מים והמידה מזוקק כפי שתואר לאבקה (4.1).

ניתוח 5. חלבון

  1. קח שש דגימות של האבקה ומדגם של גאות וABB מכל כלוב. דגימות חנות ב -20 ° C עד ניתחו לריכוז חלבון מסיס.
  2. מערבבים 20 מ"ג של אבקה או או beebread עם 1,000 μl של 0.1 פתרון M פוספט חיץ (PBS).
  3. ווrtex התערובת במשך 10 שניות ו צנטריפוגות ב XG 571.2 דקות 1.
  4. הסר מדגם 10 μl של supernatant והמקום בבארות של צלחת 96 גם שטוחה תחתונה EIA / RIA קלקר. לשכפל כל דגימה בשלוש בארות.
  5. לצייר hemolymph מדבורים שנאספו מכל כלוב על ידי החדרת צינור נימי 20 μl (שחומם ומשך לנקודת מחט החדה) לחלק לרוחב תקין של בית החזה ליד נקודת ההתקשרות של הכנפיים. לאסוף hemolymph נוסף, במידת צורך, על ידי החדרת הצינור לתוך הקרום בין tergites הבטן.
  6. הוסף 1 μl של hemolymph עד 9 μl של 0.1 M PBS. אחסן את פתרון hemolymph ב -20 ° C עד לניתוח לחלבון מסיס.
  7. לקבוע ריכוזים כולל חלבון מסיס באבקה, beebread, ודגימות hemolymph באמצעות ערכה assay החלבון מסחרית ברדפורד. בצע את הוראות היצרן.
  8. הקמת עקומת סטנדרט להעריך מסיס ג חלבוןoncentration בדגימות על ידי מדידת ספיגת חלבון עם ריכוזי חלבון ידועים באלבומין בסרום שור (BSA). למדוד ספיגת חלבון ב595 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר.

6. חומצת אמינו ניתוח

  1. דוגמאות בודדות בריכה מתאי מסרק של כל מושבה כדי ליצור מדגם מייצג של גאות וABB לניתוח.
  2. קח אבקת 50 מ"ג או מדגם beebread שקל לתוך צלוחיות autosampler, ולהוסיף 1 מיליליטר של מים מזוקקים לבקבוקון, יחד עם פתרון 50 ng / μl הפנימי סטנדרטי בהיקף של ד 4 -alanine 100 μl, ד 23 חומצת -lauric, 13 C -glucose 6 וד 39 חומצת -arachidiac.
  3. כובע המדגם sonicate במשך 5 דקות.
  4. להתנות מחסנית HLB על ידי הוספת 1 מיליליטר של מתנול, equilibrated על ידי הוספת 1 מיליליטר של מים מזוקקים ואחריו התוספת של 1 מיליליטר של מדגם beebread או אבקה. לשטוף את המחסנית עם 1 מיליליטר של 5.0% MeOH / H 2 O וelute עם 1 מיליליטר של 80% MeOH / H 2 O.
  5. להתאדות המדגם ליובש תחת זרם של חנקן. מחדש את המדגם עם 50 μl של פירידין ושל N, trifluoroacetamide O-Bis (trimethylsilyl) + Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) 100 μl.
  6. כובע דגירה המדגם ב 70 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  7. לאפשר את המדגם כדי לקרר ולהעביר אותו לבקבוקון autosampler נקי.
  8. כובע ומניחים את המדגם לתוך מסת סלקטיבי גלאי ממשק לגז כרומטוגרף לנתח הדגימות הן לתרכובות נדיפות וחומצות אורגניות. הפרד את חומצות סוכר ואורגניים הבאים derivatization TMS עם BSTFA + TMCS באמצעות טור (id 30 mx 0.25 מ"מ) בעובי 1.0 מיקרומטר סרט.
  9. הגדר את תנור הטור ב 50 צלזיוס למשך 2 דקות, ולאחר מכן להעלות את הטמפרטורה באופן ליניארי 290 ° C ב 5 C / min. ולהחזיק במשך 7 דקות. הגדר את מזרק GC וממשק / MS GC 250 ° C ו- 290 ° C, בהתאמה.
    1. השתמש בהליום כנשא בפלהשיעור w של 1.0 מיליליטר / דקה. הגדר את טמפרטורת מקור MS 230 מעלות צלזיוס.
  10. מנגינה ולכייל את ספקטרומטר המסה יומי עם Perfluorotributylamine (PFTBA). השתמש בהזרקת μl 1 של PFTBA בסריקה המלאה (35-700 האמו) מצב יון חיובי לקבל נתונים על הנוכחות וריכוזים של חומצות אמינו.

Representative Results

Beebread אוחסן ב-80 מעלות צלזיוס למשך פחות מחודש לפני שנתח לריכוז pH וחלבון, ובמשך כ 4 חודשים לפני ניתוח חומצת אמינו. Beebread שונה מהאבקה בpH וריכוז חלבון (איור 1). PH של beebread היה נמוך מהאבקה כפי שהיה ריכוז החלבון. EHB וAHB שני צרכו יותר מ ABB גאות (איור 2).

רמות של חלבון מסיס בhemolymph של AHB היו גבוהות יותר באופן משמעותי מEHB ללא תלות בסוג של beebread הם צרכו (איור 3). הבדלים אלה ברמות חלבון hemolymph התרחשו למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread. גיל הדבורים בזמן הדגימה מושפע באופן משמעותי ריכוזי חלבון מסיסים בhemolymph. ריכוזי חלבון היו נמוכים באופן משמעותי ביום-4 דבורים בהשוואה ליום-7 או 11 שלא היה שונה.

_content "> של 10 חומצות אמינו חיוניים לדבורי דבש, אבל כל היסטידין אותרו באבקה. ברוב המקרים, ריכוזי חומצת אמינו שנמדדו בbeebread היו גבוהים יותר מאשר באבקה (איור 4). לדוגמא, ריכוזים של לאוצין ותראונין היו כ -60% גבוהים יותר בהשוואה לbeebread אבקה, והריכוזים ולין היו כ -25% גבוהים יותר. אלנין, רמות חומצה, גלוטמין, ומתיונין אספרטית גם היו גבוהות יותר בbeebread מאשר באבקה. ריכוזי חומצות אמינו לא היו שונים באופן משמעותי בין ABB והגאות למעט פנילאלנין וציסטאין. רמות פנילאלנין היו על גבוהים פי שתיים בהשוואה לABB או גאות או אבקה. ריכוזי ציסטאין היו נמוכים יותר בגאות בהשוואה ל ABB או אבקה. טריפטופן היה נוכח חומצת אמינו רק בריכוזים גבוהים יותר ב אבקה מאשר בגאות או ABB. ריכוזים של פרולין באבקה וABB היתה גבוהה יותר מאשר בשפל.

"תמיד"> איור 1
איור 1: השוואות של pH () וריכוזים מסיסים חלבון (B) באבקה וbeebread שנעשה על ידי אירופאי (EHB) או דבורי דבש Africanized (AHB). PH של אבקה היה גבוה יותר באופן משמעותי מbeebread כפי שנקבע על ידי ניתוח שונות (F = 2,12 3725, p <0.0001) ואחריו מבחן השוואה מרובה Tukeys W-. ריכוז החלבון בפולן היה גבוה באופן משמעותי מאשר בbeebread שנעשה על ידי EHB (גאות) או AHB (ABB) (F = 2,27 16.49; p <0.0001). אמצעים המיושמת על ידי אותו המכתב אינם שונים באופן משמעותי ברמה 0.05.

איור 2
איור 2: האחוז הממוצע של cells מכיל beebread שנצרכו לחלוטין על מרווח של 11 יום על ידי דבורים בכלוב. beebread נעשה על ידי שני דבורים אירופיים (EHB) או Africanized (AHB) באמצעות אותו מקור האבקה. אמצעי נאמד מחמישה כלובים של כל טיפול; אלה עם אותו המכתב אינם שונים באופן משמעותי ברמה 0.05, כפי שנקבעו על ידי ניתוח דרך אחת שונות (F = 3,16 7.3, p = 0.003) ומבחן W של Tukey. איור זה שונה מ -25.

איור 3
beebread הריכוז הממוצע של חלבון בhemolymph מאירופה (EHB) או Africanized דבורים (AHB) דבש האכיל שנעשה על ידי אירופאי (גאות) או Africanized דבורים (ABB) עבור 4, 7, ו -11 ימי ניתוח מדידות חוזרים של: איור 3. שונות מצביעות על הבדלים משמעותיים בין הגיד 4קבוצות tment (F = 3,20 19.7, p <0.001). רמות של חלבון מסיס בAHB fed ABB היו גבוהות יותר באופן משמעותי מEHB fed ABB (p = 0.008) או הגאות (p = 0.018). גיל הדבורים בזמן הדגימה מושפע באופן משמעותי ריכוזי חלבון מסיסים בhemolymph. רמות היו נמוכות באופן משמעותי ביום-4 דבורים בהשוואה ליום-7 (p <0.0001) או 11 (p = 0.001). דבורי יום 7 וday11 לא היו שונים (p = 0.149). נתון זה שונה מ-25.

איור 4
איור 4:. ריכוזים של חומצות אמינו (מיקרוגרם לגרם של אבקה או beebread) באבקה או beebread עשה ממנו הגאות הוא beebread שנעשה על ידי דבורים אירופיים וABB נעשה על ידי דבורי Africanized. טריפטופן, ציסטאין, פנילאלנין ופרולין היו זממו בנפרד לצורך ההבהרה מראשsenting הכמויות שלהם. נתון זה שונה מ-25.

Discussion

שימוש בשיטות שתוארו לעיל, מצאנו כי beebread שנעשה על ידי AHB היה נצרך בכמויות גדולות יותר על ידי שני AHB וEHB. למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread, היה לי AHB titers חלבון hemolymph גבוה יותר. ממצאים מבוססים על השיטות שלנו היו דומים לדיווחים קודמים שבו רמות חלבון hemolymph בAHB היו גבוהות יותר מאשר בEHB אם כי שניהם האכילו אותו הדיאטות 26. על ידי מדידת הצריכה של גאות וABB שנצרכו בשיעורים שונים על ידי שני EHB וAHB, נקבע כי ריכוז חלבון hemolymph בכל תת-מין לא יכול להיות שהועלה על ידי הגדלת צריכת מזון. נראה שיש רמת ריכוז חלבון hemolymph בעובדים בגיל דבורת אחות וכי הנקודה להגדיר לרמה גבוהה יותר בAHB מ EHB.

ישנם כמה תנאים חשובים להקמת מושבות לייצור beebread שיהיה לייעל את קצב אחסון אבקה. ראשית, שיתוףlonies צריך מסגרות עם להרהר פתוח. בלי להרהר פתוח להאכיל, עובדים לא יגבו הרבה אבקה. שנית, המושבה חייבת להיות ללא מלכה ולכן אין להרהר נוסף מיוצרת. גידול גוזל דורש כמויות גדולות של אבקה, והאבקה עודפת רק מאוחסנת. במושבות הקטנות שהוקמו בEFA, לא יהיה אבקה קטנה לאחסון כbeebread אם אזורי הקינון התרחבו כל כך מושבות צריכים להיות ללא מלכה. לבסוף, לbeebread להתבצע, אבקה יש לאסוף כמו המון corbicular ומאוחסן בתאי מסרק. אם האבקה נאסף במלכודות אבקה, זה חייב להיות בשטח לאבקה דקה לפני הצגתו לדבורים, כדי שתוכל לאסוף אותו כהמון corbicular.

השיטות למדידת צריכת beebread נוצרה איכותית ולא הערכות מוחלטות. הצריכה היחידה שנספרה הייתה כאשר תאים התרוקנו לחלוטין לחם דבורים. הערכה מדויקת יותר מסך צריכת לחם דבורה עשויה להיות מושגת על ידי הסרת br הדבורהEAD מהתאים והופכים אותו לקציצה שיכול להישקל לפני ואחרי תקופת המחקר. עם זאת, אנחנו רוצים לשמור על לחם הדבורה בתאים, כך שהדבורים יכולים להאכיל אותו כפי שהם היו במושבה, ואולי ימשיכו לעבד אותו במהלך תקופת המחקר. ההבדל במשקל של חלקי מסרק לפני ואחרי המחקר לא היה בשימוש כאומדן לצריכה בגלל המשקל אולי עלה כי דבורי הדבש המדולל לשים האכיל אותם בחלק מהתאים.

העובדים גם היו יכולים להוסיף כמה מהדבש המדולל ללחם הדבורים. מסיבות אלה, תאים המכילים כמויות שווה של לחם דבורה לפני ואחרי תקופת ההאכלה נספרו ונוצרו מדידה איכותית. ובכל זאת, יש הבדל בולט בין שני הסוגים של beebread במספר תאי ABB הריקים נספרו לעומת גאות לאחר 11 ימים.

קביעה כאשר אבקה מאוחסנת הופכת beebread יכולה להיות דיfficult כי דבורים להוסיף הרף אבקה לתאים. המושבות המשמשות לייצור beebread הוקמו עם מסגרות של גוזלים פתוחים כל כך דבורים לאסוף אבקה. עם זאת, המושבות היו ללא מלכה כך היו זחלים להאכיל רק כ 9 ימים לאחר המושבה הוקמה. ליתרת תקופת 3 שבועות כאשר מושבות היו בEFA, האבקה שהדבורים שנאספו אוחסנו ומרה לbeebread. שמירה על האבקה מאוחסנת בתאי מסרק ל-11 ימים נוספים כאשר מאכילים אותו לדבורים בכלובים גם אפשר שהמשיכה את הטיפול באבקה לbeebread. המרה של אבקה ללחם דבורה לוקחת בערך 7 ימים 8. Beebread המוזן לEHB וAHB היה pH וריכוז חלבון מופחת בהשוואה לfed האבקה נמוכים יותר. ממצאים דומים של שינויים באבקה לאחר beebread ההמרה דווחו על ידי אחרים 7,10,27. התוצאות שלנו שונות מדיווחים קודמים עם זאת, בכך שהיו הבדלים בריכוזים oחומצות אמינו מסוימות f בין beebread ואבקת פרחים. השינויים בשני ריכוזי חומצת אמינו החלבון ויכולים להיות בגלל הפעילות של אנזימי מפרקי חלבונים, שמקורו יכול להיות הדבורים עצמם או קהילות החיידקים הוקמו בbeebread 7,8,28,29.

השיטות המשמשות למדידת ריכוז חלבון היו דומות לאלה שתוארו קודם לכן כדי לקבוע את ההשפעות של חלבון בתזונה בAfricanized ודבורים אירופיים 26. כשלוחה של השיטות, שהיינו מסוגלים להעריך חלבון מסיס באבקה וbeebread. שיטות אלה שנוצרו על ממצאים דומים לדיווחים קודמים 7,10,27. הממצאים שלנו מספקים ראיות נוספות שAHB ביעילות רבה יותר להטמיע חלבון תזונתי מאשר EHB, ושזה יכול להיות גורם מפתח בדומיננטיות האקולוגיות של AHB ברוב האזורים שבם הוא עלה והפך הוקם 30-32.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
waterproof double junction pH spear  Thermo Fisher
Coffee Grinder Mr. Coffee  model 1DS77
Dulbecco's phosphate buffer solution Emd-millipore BSS-1005-B
EIA/RIA polystyrene plate Sigma-Aldrich-Corning CLS3590-100EA
microcapillary pipets Kimble Glass Inc.
Quick Start Bradford Protein Assay Kit 2  Bio-Rad #500-0202
Spectrophotometer Biotek Synergy HT 
Mass Selective Detector  Agilent 5973N
HLB cartridge
gas chromatograph  Agilent 6930
 gas chromatography column  A J&W Scientific  DB-1701
d4-alanine  Sigma-Aldrich 488917
d23-lauric acid Sigma-Aldrich 451401
13C6-glucose Sigma-Aldrich 389374
Pyridine  Sigma-Aldrich 270970
N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoroacetamide +  
Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) Sigma-Aldrich 33148
Perfluorotributylamine (PFTBA) Sigma-Aldrich 442747-U
d39-arachidiac acid Cambridge Isotope 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Brodschneider, R., Crailsheim, K. Nutrition and health in honey bees. Apidologie. 41, (3), 278-294 (2010).
  2. Spivak, M. The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica. J. Appl. Ecol. 29, (1), 150-162 (1992).
  3. Schneider, S. S., McNally, L. C. Spatial foraging patterns and colony energy status in the African honey bee Apis mellifera scutellata. J. Insect Behav. 6, (2), 195-210 (1993).
  4. Becerra-Guzman, F., Guzman-Novoa, E., Correa-Benitez, A., Zozaya-Rubio, A. Length of life, age at first foraging and foraging life of Africanized and European honey bee (Apis mellifera) workers, during conditions of resource abundance. J. Api. Res. 44, (4), 151-156 (2005).
  5. Saltykova, E. S., Lvov, A. V., Ben’kovskaya, G. V., Poskryakov, A. V., Nikolenko, A. G. Interracial differences in expression of genes of antibacterial peptides, Abaecin, Hymenoptaecin, and Defensin, in bees Apis mellifera mellifera and Apis mellifera caucasica. J. Evol. Biochem. Phys. 41, (5), 506-510 (2005).
  6. Decanini, L. I., Collins, A. M., Evans, J. D. Variation and heritability in immune gene expression by diseased honeybees. J. Hered. 98, (3), 195-201 (2007).
  7. Gilliam, M. Microbiology of pollen and beebread: the genus Bacillus. Apidologie. 10, (3), 269-274 (1979).
  8. Gilliam, M. Microbiology of pollen and beebread: the yeasts. Apidologie. 10, (3), 43-53 (1979).
  9. Gilliam, M. Identification and roles of non-pathogenic microflora associated with honey bees. FEMS Microbiology Letters. 155, (1), 1-10 (1997).
  10. Loper, G. M., Standifer, L. N., Thompson, M. J., Gilliam, M. Biochemistry and microbiology of bee-collected almond (Prunus dulcis) pollen and beebread. I. Fatty acids, sterols, vitamins, and minerals. Apidologie. 11, (1), 63-73 (1980).
  11. Khachatryan, Z. A., et al. Predominant role of host genetics in controlling the composition of gut microbiota. PLoS ONE. 3, (8), e3064 (2008).
  12. Turnbaugh, P. J., Ley, R. E., Mahowald, M. A., Magrini, V., Mardis, E. R., Gordon, J. I. An obesity associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest. Nature. 444, (7122), 1027-1031 (2006).
  13. Ley, R. E., et al. Obesity alters gut microbial ecology. Proc. Natl. Acad. Sci. 102, (31), 11070-11075 (2005).
  14. Ley, R. E., Peterson, D. A., Gordon, J. I. Ecological and evolutionary forces shaping microbial diversity in the human intestine. Cell. 124, (4), 837-848 (2006).
  15. Standifer, L. N., McCaughey, W. F., Dixon, S. E., Gilliam, M., Loper, G. M. Biochemistry and microbiology of pollen collected by honey bees (Apis mellifera L.) from almond, Prunisdulcis. II. Protein, amino acids and enzymes. Apidologie. 11, (2), 163-171 (1980).
  16. Human, H., Nicolson, S. W. Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae). Phytochem. 67, (14), 1486-1492 (2006).
  17. Schneider, S. S., DeGrandi-Hoffman, G., Smith, D. The African honeybee: Factors contributing to a successful biological invasion. Ann. Rev. Entomol. 49, 351-376 (2004).
  18. Winston, M. The biology and management of Africanized honey bees. Annu. Rev. Entomol. 37, 173-193 (1992).
  19. Woyke, J. Brood-rearing efficiency and absconding in Indian honeybees. J. Apic. Res. 15, (3/4), 133-143 (1976).
  20. Fletcher, D. J. C. Brood rearing and absconding of tropical honey bees. African Bees. Apimondia. Pretoria, South Africa. 96-102 (1977).
  21. Winston, M. L., Otis, G. W., Taylor, O. R. Absconding behavior of the Africanized honey bee in. South America. J. Api. Res. 18, (2), 85-94 (1979).
  22. Schneider, S. S., McNally, L. C. Factors influencing seasonal absconding in colonies of the African honey bee, Apis mellifera scutellata. Insectes Soc. 39, (4), 402-423 (1992).
  23. Hepburn, H. R., Reece, S. L., Neumann, P., Moritz, R. F. A., Radloff, S. E. Absconding in honeybees (Apis mellifera) in relation to queen status and mode of worker reproduction. Insectes Soc. 46, (4), 323-326 (1999).
  24. Harrison, J. F., Fewell, J. H., Anderson, K. E., Loper, G. M. Environmental physiology of the invasion of the Americas by Africanized honeybees. Integr. Comp. Biol. 46, (6), 1110-1122 (2006).
  25. DeGrandi-Hoffman, G., Eckholm, B. J., Huang, M. H. A comparison of bee bread made by Africaized and European honey bees (Apis mellifera) and its effects on hemolymph protein titers. Apidologie. 44, (1), 52-63 (2013).
  26. Cappelari, F. A., Turcatto, A. P., Morais, M. M., DeJong, D. Africanized honey bees more efficiently convert protein diets into hemolymph protein than do Carniolan bee (Apis melliferacarnica). Genet. Mol. Res. 8, (4), 1245-1249 (2009).
  27. Human, H., Nicolson, S. W. Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae). Phytochem. 67, 1486-1492 (2006).
  28. Bonvehi, J. S., Jorda, R. E. Nutrient composition and microbiological quality of honeybee-collected pollen in Spain. J. Agric. Food Chem. 45, (3), 725-732 (1997).
  29. Anderson, K. E., et al. Microbial ecology of the hive and pollination landscape: Bacterial associates from floral nectar, the alimentary tract and stored food of honey bees (Apismellifera). PLoS ONE. 8, (12), e83125 (2013).
  30. Southwick, E. E., Roubik, D. W., Williams, J. M. Comparative energy balance in groups of Africanized and European honey bees: ecological implications. Comp. Biochem. Physiol. A. 97, (1), 1-7 (1990).
  31. Spivak, M. The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica. J. Appl. Ecol. 29, (1), 150-162 (1992).
  32. Francoy, T. M., et al. Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization. Genet. Mol. Res. 8, (2), 709-717 (2009).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics