Aandoeningen van de sociale ruimte in

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

McNeil, A. R., Jolley, S. N., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Milunovich, A. J., Chambers, M. C., Simon, A. F. Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (105), e53242, doi:10.3791/53242 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

De sociale ruimte assay hier beschreven kan worden gebruikt om sociale interacties van Drosophila melanogaste r kwantificeren - of andere kleine insecten - op eenvoudige wijze. Zoals we eerder aangetoond 1, in een tweedimensionale ruimte, we eerst dwingen de vliegen om een hechte vormen vervolgens zodat ze hun favoriete afstand te nemen van elkaar. Na de vliegen hebben gevestigd, meten we de afstand tot de dichtstbijzijnde buur (of sociale ruimte), het verwerken van een statisch beeld met gratis online software (ImageJ). De analyse van de afstand tot de dichtstbijzijnde buur stelt onderzoekers het effect van genetische en omgevingsfactoren op sociale interactie te bepalen, terwijl de controle voor mogelijke verstorende factoren. Diverse factoren, zoals het beklimmen van capaciteit, tijd van de dag, geslacht, en het aantal vliegen, kunnen sociale afstand van vliegen te wijzigen. We stellen daarom een ​​reeks van experimentele controles om deze verstorende effecten te verzachten. Deze test kanworden gedurende ten minste twee doelen. Ten eerste, kunnen onderzoekers bepalen hoe hun favoriete milieu-shift (zoals isolatie, de temperatuur, stress of toxines) zal beïnvloeden sociale afstand 1,2. Ten tweede, kunnen de onderzoekers ontleden de genetische en neurale onderbouwing van deze elementaire vorm van sociaal gedrag 1,3. Specifiek, we gebruikten het als een diagnostisch hulpmiddel om de rol van orthologe genen verondersteld betrokken te zijn bij sociaal gedrag in andere organismen, zoals kandidaatgenen voor autisme bij mensen 4 bestuderen.

Introduction

Sociale interacties zijn essentieel voor de goede ontwikkeling en gezondheid van individuen binnen een groep als geheel, en kan worden waargenomen bij talrijke soorten, van de mens (Homo sapiens) eenvoudiger organismen zoals fruitvliegjes (Drosophila melanogaster) 5,6. Auditieve, visuele, olfactorische, tactiele of gustation: een individuele fruitvlieg of menselijke delen gemeenschappelijke middelen om zintuiglijke informatie tijdens deze interacties, of het te verwerken. Wij en anderen veronderstellen dat er een potentieel gedeelde neurocircuitry onderliggende gedragsreacties op sociale interactie en de neuronale cellen en genen die betrokken kunnen zijn evolutionair geconserveerde 7. Zodra de eerste interactie heeft plaatsgevonden, zal de sociale ruimte tussen de interactie particulieren ofwel stijging (sociale vermijding 8) of afname (groepsvorming / aggregatie 5). Ingewikkelder interacties, zoals agressie of verkering, kan dan plaatsvinden.

Drosophila melanogaster, zoals gebruikt in de volgende studies 1-4,9. Sociale ruimte verwijst naar een maat voor de afstand tussen een vlieg en zijn naaste buur 10. Sociale ruimte is consistent voor een bepaalde populatie van D. melanogaster bij experimentele omstandigheden worden bewaard (gemiddeld ongeveer binnen 1-2 opbouwlengtes) en varieert met betrekking tot de sociale ervaring van de vliegen, waardoor als het individu is geïsoleerd 1 gehouden. Juiste visie is nodig om normale sociale afstand te bewaren, maar niet de klassieke geurstoffen of CVA perceptie 1. Maatregel van de sociale ruimte kunnen dusgebruikt als een diagnostisch hulpmiddel om sociale interacties te analyseren en te kwantificeren sociaal gedrag in D. melanogaster 1. We beschrijven hier in detail hoe deze kwantificering uit te voeren, en in welke mate gemeenschappelijke experimentele variabelen van invloed op dit gedrag.

We zien dat de oriëntatie van de kamer waarin de test wordt uitgevoerd, alsmede het aantal vliegen - tot op zekere hoogte - do beïnvloedt sociale ruimte. Het is eerder aangetoond dat de kamer geometrie beïnvloedt spontane verkennende beweging van vliegen 11,12, en dit fenomeen kan uiteindelijk van invloed zijn wanneer zij besluiten om zich te vestigen. Echter, zolang de vlieg dichtheid (vlieg / cm 2) en de kamer oriëntatie wordt gelijk gehouden, sociale ruimte van de vliegen blijft ook constant. De robuustheid van deze test wordt geïllustreerd door het feit dat onafhankelijke laboratoria met verschillende kamer maten, vorm en oriëntatie kan de weergegeven door mutanten van de wh resultaat replicerenite gen (bij oog pigmentatie), dat is een stijging van de sociale ruimte (verticale of horizontale driehoek cirkel in 1, horizontale plein met de luchtstroom in 3).

Onze resultaten geven ook aan dat handhaving van het tijdstip waarop de sociale ruimte experiment uitgevoerd is cruciaal voor de samenhang van de resultaten, zoals we zien dat mannetjes, maar niet vrouwtjes, verder uit elkaar in de avonduren. Echter, gezien de verschillen tussen de dag- en avonduren zijn niet te wijten aan verschillen in activiteit van de vliegen, en bespreken we argumenten aangeeft dat de activiteit niveaus zijn niet gecorreleerd met de sociale ruimte.

Tenslotte zijn er genetische risicofactoren voor de bepaling van de sociale ruimte, zoals aangegeven door de witte mutant reeds beschreven 1,3, en de verschillen tussen diverse ingeteelde en wilde gevangen stammen van vliegen die we hier voor te stellen.

Daarom is deze test maakt een uitstekend hulpmiddel fof het bestuderen van de effecten van genetische en omgevingsfactoren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Apparatuur en reagentia Gemaakt in-house (zie lijst van materialen voor anderen)

  1. Bereid een Drosophila koude anesthesietoestel zoals eerder beschreven 8.
  2. Bereid een vlieg aspirator zoals eerder beschreven 13.
  3. Bereid sociale ruimte kamers en houders.
    1. Bestellen of maak ruiten en acryl spacers om de sociale ruimte kamers te creëren. Elke sociale ruimte kamer bestaat uit twee vierkante glasplaten (17,6 cm bij 17,6 cm, met een dikte van 0,3 cm), twee rechthoekige driehoek acryl spacers (met een hoogte van 16,5 cm, een voet van 8,9 cm met een dikte van 0,3 cm ) en twee rechthoekige ruimten (9 cm bij 1,5 cm met een dikte van 0,3 cm) (Figuur 1A).
    2. Monteer het glas en acryl sociale ruimte kamer, zodat het identiek is aan deze kamer in figuur 1B. Om dit te doen, te beginnen door het plaatsen van een driehoekige spacer plat op de top van een vierkante ruit zodanig dat de juiste hoekvan de driehoekige afstandhouder is uitgelijnd met een van de hoeken van het vierkant paneel. Plaats vervolgens de tweede driehoekige spacer plat op de top van het plein ruit, mirroring de eerste driehoekige afstandhouder.
      OPMERKING: Zorg ervoor om handschoenen te dragen om te voorkomen dat de stukken met oliën en geuren uit je handen besmetten.
    3. Plaats twee kleine rechthoekige afstandhouders vlak boven het vierkant paneel langs de kant van de ruit die niet gedekt. De acryl afstandhouders op de top van het plein vliegtuig moet nu vormen een driehoekig arena.
    4. Plaats een tweede vierkant ruit boven het acryl- afstandhouders zodanig dat deze boven de oorspronkelijke ruit hieronder glas is uitgelijnd.
    5. Gebruik vier bindmiddel clips om de ruiten en de afstandhouders veilig samen om de sociale ruimte kamer te vormen. Plaats een klem nabij de hoek op de lange zijde van elk van de driehoekige spacers, vastzetten ze in de ruiten. Op deze zelfde zijden, plaats een clip in de aangrenzende hoek, over elk van de rechthoekige afstandhouders, het veiligstellen van hen inde kant van de ruiten.
    6. Monteer een steunpoot en een fles klem zodanig dat de klem de sociale ruimte kamer in een rechtopstaande positie te handhaven, zoals de sociale ruimte kamer rust op de rand boven het werkblad.
    7. Voor elke herhaling in het experiment, monteren van een sociale ruimte kamer en ondersteuning te staan.
  4. Bereid een klimmen assay reactie apparaat aan het klimmen vermogen van de geteste vliegen controleren.
    1. Gebruik tegenstroom inrichting, zoals eerder beschreven 14,15.
  5. Homogene lichtomstandigheden door het uitvoeren van het experiment op een werk oppervlak bedekt met een witte bank deksel en in de voorkant van een witte achtergrond.

2. Voorbereiden van de Vliegen voor het experiment

  1. Handhaven vliegen in flessen met standaard Drosophila vlieg voedsel. Hou ze in een incubatiekamer bij 25 ° C op een 12 uur licht / donker cyclus.
  2. Een tot twee dagen voor de eXperiment, verzamel en geslacht vliegen onder koud verdoving, zoals eerder beschreven 8.
    1. Koel de koude anesthesietoestel bij -4 ° C. Plaats vliegt in 50 ml plastic buizen. Volledig onderdompelen plastic buizen die vliegen in ijs in een geïsoleerde ijsemmer, wacht minstens 5 minuten voor vliegen om immobiel geworden.
    2. Plaats het vliegen op het polyetheen vel koude anesthesietoestel. Bij KT gebruik van een stereomicroscoop mannetjes scheiden van vrouwtjes. Handhaven vliegen, in groepen, in flacons met standaard Drosophila vlieg voedsel, niet meer dan 40 vliegen per flacon.
  3. Twee uur voor het begin van het experiment, dat de temperatuur van de ruimte waar het experiment wordt uitgevoerd tussen 24-25 ° C en een luchtvochtigheid van ongeveer 50%.
  4. Breng het ongedierte in nieuwe buisjes bevattend voedsel, en plaats ze gedurende 2 uur op het werkblad waar de proef wordt uitgevoerd.
    LET OP: Voor deze Experiments, de vlieg gebruikte stammen waren Drosophila melanogaster stammen: Canton-Special of Canton-S (CS), w 1118 Cs 10 (of W - w 1118 outcrossed 10 keer tot Canton-S), Oregon en Samarkand vliegen waren allemaal van ons laboratorium voorraden 16; Elwood vliegen werden verzameld in de herfst van 2011 in de buurt van Huntington Elwood, op Long Island, New York, USA 8. Behalve wanneer anders aangegeven, de gepresenteerde resultaten werden verkregen met Canton-S vliegt (in de kleuren rood).

3. Het uitvoeren van het Experiment

  1. Voeren het experiment 12:00-03:00 (Zeitgeber tijd - de tijd in uren na het begin van het licht - van ZT 4-7).
  2. Bereid de sociale ruimte kamer voor de overdracht van de vliegen.
    1. Plaats een sociale ruimte kamer plat op een werkblad, met de zijde met rechthoekige afstandhouders die het dichtst bij uw lichaam.
    2. Verwijder one clip dichtstbijzijnde uw lichaam en schuif een rechthoekige spacer naar buiten, het creëren van een ruimte van ongeveer 1 cm tussen de rechthoekige afstandhouders.
    3. Met behulp van tape en een marker, het etiket van de sociale ruimte kamer in een bovenste hoek met geslacht, stam, en herhaal nummer. Zorg ervoor dat de tape heeft geen betrekking op een deel van de binnenste driehoekige arena te verzekeren.
  3. Breng de vliegen in de sociale ruimte kamer.
    1. Transfer vliegt uit hun flacon met voedsel in een nieuwe, lege flacon. Aspireren vliegt van de lege flacon en breng ze in de sociale ruimte kamer.
      1. Adem in om de vliegen te trekken in de punt van de afzuiger. Plaats de tip in de 1 cm kloof tussen de rechthoekige afstandhouders van de sociale ruimte kamer en uitademen in een gelijkmatige om de vliegen te dwingen in de binnenste driehoekige arena.
      2. Onmiddellijk schuif de rechthoekige spacer terug op zijn plaats, het sluiten van de basis van de binnenste driehoekige arena, en plaats het bindmiddel clip weer aan.
    2. Op een beukende pad, die is gelegen op de andere bank dan, waar het experimentele werk plaatsvindt, houdt de sociale ruimte kamer rechtop, zodat de rechthoekige afstandshouders zijn aan de onderkant. Pound driemaal alle vliegen waarborgen zijn gedaald tot beneden de arena.
      LET OP: Door de acryl spacer steken van de kleinste kamer grootte (figuur 1D), bang ellebogen op werkvlak met behoud van een veilige greep op de apparaten om ervoor te zorgen de vliegen zijn gedaald naar de bodem.
    3. Start een timer.
    4. Plaats de sociale ruimte kamer op het werkvlak en gebruik het statief en fles klem om het rechtop te houden. Plaats een liniaal of een sticker van bekende lengte plat tegen de sociale ruimte kamer, maar niet met betrekking tot een deel van de binnenste driehoekige arena.
      1. Voor horizontaal geplaatst experimenten, hebben de sociale ruimte kamer in het statief niet te plaatsen; in plaats daarvan lag de sociale ruimte kamer plat op het werkvlak.
      2. Wanneer de vliegen hebben geregeld, meestal na ongeveer 30 minuten, neem een ​​foto van de sociale ruimte kamer. Zorg ervoor dat het frame bevat de volledige binnenste driehoekige arena, de heerser, en het label.
      3. Herhaal het experiment voor elk genotype en conditie (idealiter 3 interne herhalingen en 3 onafhankelijke herhalingen).

      4. Het analyseren van de sociale ruimte Gegevens

      1. Importeer de volgende macro's in ImageJ 17
        1. ImageJ is hier beschikbaar: http://rsbweb.nih.gov/ij/.
        2. U kunt een 'Meet Afstanden' commando in het Plugins menu maken door de macro's hieronder in een bestand met de naam 'Measure_Distances.txt' in de map ImageJ / plugins, in de macro submap, en het gebruik van de Help> Update-menu commando. '
        3. Exemplaar in een .txt bestand de macro's die zijn voorzien in aanvullende gegevens en werden oorspronkelijk gepubliceerd in 3.
      2. Upload de foto naar een computer en open een pictuhergebruik van ImageJ.
        1. Maak een schaal door het tekenen van een lijn van de 0 cm tot 1 cm markeringen op de liniaal op de foto, en onder de tab Analyseren, kies de Set Scale functie om een ​​schaal van 1 cm te stellen voor die afstand (dezelfde aanpak voor de sticker van bekende lengte). Kies de optie Global voordat de schaal om het beeld.
        2. Snijd de foto met behulp van de functie van het gewas onder het tabblad zodanig dat het bevat alle van de vliegen, terwijl het verwijderen van zoveel mogelijk van de rest van het beeld mogelijk.
        3. Maak het beeld zwart-wit door te kiezen voor 8-bit van de optie Type onder het tabblad Afbeelding.
        4. Verwijder alle achtergrondgeluiden van het beeld door te gaan naar de functie Threshold onder het aanpassen optie op het tabblad Afbeelding. Sleep de schuifregelaars te verbeteren of te verwijderen van het contrast, zodat het lichaam van elke vlieg duidelijk te zien zonder enige andere markeringen in de afbeelding. Als er markeringen die niet vliegen, vangen ze met de rechthoekige gereedschap en verwijder ze.
        5. Stel demetingen met behulp van de Set Metingen instrument onder de tab Analyseren. Selecteer Gebied, centrum van de massa, Zwaartepunt, en Display Label. Vervolgens kiest u de Analyseer Deeltjes voorzien onder het tabblad Analyseren van een genummerde lijst van alle zwarte vlekken die vliegen te maken.
          1. Bij gebruik analyseren deeltjes; set grootte van 0,01-0,1 (niet kiest pixel eenheid); cirkelvormigheid 0,00-1,00; Toon contouren; de resultaten weer te geven en toe te voegen aan manager.
          2. Zorg ervoor dat elke zwarte vlek (elk deeltje) is een nauwkeurige weergave van de vliegen die in het originele beeld, door het vergelijken van de genummerde lijst om de originele foto.
            LET OP: Als sommige vliegen die zeer dicht bij elkaar worden geteld als een deeltje, handmatig een witte lijn aan de twee vliegen op het binaire beeld scheiden trekken.
        6. Terwijl de lijst is geselecteerd, gebruikt de Nearest Neighbor - Lijst Afstanden macro onder de tweede macro-optie in het tabblad Plug-ins om een ​​nieuwe lijst met de afstanden te creëren, in cm, van EAch vliegen naar hun naaste buur.
      3. Kopieer de naaste buur afstanden van ImageJ en plakken in een kolom van een spreadsheet programma.
        1. Compileer alle gegevens van elke herhaling op dezelfde spreadsheet en organiseren genotype en conditie.
      4. Data-analyse uit te voeren met behulp van statistische software. In dit experiment, Graph Pad Prism (versie 6 voor MacOSX, GraphPad Software, San Diego California USA, www.graphpad.com) werd gebruikt om één-weg ANOVA en Kruskal-Wallis Test, Tukey en Dunnet's Post-hoc tests.
      5. De verdeling van de afstanden volgt een niet parametrische verdeling 1, en ​​data worden weergegeven als doos en Tukey snorharen (uitschieters elimineren).

      5. Klimmen Assay (Control Gedrag)

      1. Gebruik een klimmen assay als een controle om te testen vliegen klimvermogen 14,15,18.
        1. Gebruik de tegenstroom inrichting zodanig dat drie trials cEen worden uitgevoerd in parallel.
      2. Transfer 50-100 naïeve vliegen (vliegen die nog nooit zijn getest) in drie verschillende testen flesjes en breken ze in de 1 e, 3e en laatste gleuven onderaan tegenstroomapparaat, met verse lege flacons in tegengestelde locaties.
      3. Place verse, lege injectieflacons in de lege sleuven aan de onderzijde van de inrichting.
      4. Tik omlaag de inrichting driemaal, zodanig dat alle vliegen zijn onder aan elke buis, om het experiment te starten.
      5. Start de timer voor 15 seconden (tijd voldoende is voor ~ 100% van 3-7 dagen oud Canton-S naar de top flacon te bereiken - zie figuur 3F).
      6. Schuif het bovenste gedeelte van de tegenstroom inrichting boven flesjes verdringen één slot.
      7. Verzamel vliegen door de inrichting tikken beneden alle vliegen in de bodem flesjes brengen.
        1. 1 e en 2 e buizen (of 3 e en 4 e, 5 e en 6 e) komen overeen met respectievelijk de vliegen die niet komen naar boven en de vliegen die de top flacon bereikt.
      8. Bereken de Performance Index (PI).
        1. Tel het aantal vliegen per flacon.
        2. De PI is het percentage van de vliegen in staat te klimmen op de bovenste buis.
        3. De middelen van de PI normaal verdeeld 1, en ​​de gegevens worden weergegeven als kolomgrafieken van gemiddelde plus of min standaardafwijking van het gemiddelde (SEM).
          Opmerking: Als alternatief kan de PI worden berekend als het percentage van vliegen kan het bovenste deel van de onderste ampul (voor oudere vliegen bereikt, 5 sec is de tijd die voldoende is om een ​​verschil kwantificeren klimvermogen tussen geïnfecteerde en niet-geïnfecteerde 12 dagen oud Canton-S gekwantificeerd vanuit een stilstaand beeld: zie resultaten). Anderen hebben verschillende maatregelen van de prestaties in schrikreacties geïnduceerde negatieve geotaxis, dat ook geschikt te kwantificeren klimvermogen 19-22 zijn gebruikt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

De sociale ruimte kamer kan worden gebruikt als een instrument om het sociaal gedrag van Drosophila melanogaster kwantificeren. Acryl spacers en ruiten worden samen geklemd een binnenste driehoekige arena die een tweedimensionaal gebied waarin vliegt kan stabiele groepen te vormen zonder de aanwezigheid van een groot aantal potentieel verstorende signalen levert vormen. Bij vliegen worden overgebracht naar de verticale arena, ze geschrokken door afgeluisterd beneden en ze reageren door een vluchtgedrag: negatieve geotaxis. Ze klimmen naar de top van de rechtopstaande driehoek, gedwongen tot een hechte groep, en vervolgens worden verstrekt tijd om verder te gaan vormen met elkaar, en de arena te verkennen. Na 20 tot 40 minuten, zij stoppen met bewegen, en een stabiele groep wordt gevormd. De afstand tussen de vlieg en de naaste buur kan worden gemeten van een beeld, een kwantificering van hun favoriete sociale ruimte. Vliegen worden geacht sociale dichter zij hun buren zijn.

Vliegendichtheid niet een rol spelen in de sociale ruimte te spelen in de kamer tot het punt van ondercapaciteit. Voor een grote groep van 20 om 70 vliegt in de grotere verticale richting kamer, sociale ruimte onafhankelijk van de groep dichtheid (Figuur 2A, B). Met slechts 10 of 15 vliegt in de sociale ruimte kamer, is er waarschijnlijk onvoldoende individuen om een stabiele sociale groep te vormen, hetgeen leidt tot een toename van de sociale ruimte (Figuur 2A, B). Echter, het testen van een groot aantal vliegen niet altijd handig - onder bepaalde omstandigheden waarin het aantal mutante individuen beperkt kunnen onderzoekers niet kunnen groepen vliegen groot genoeg voor het standaardformaat van de sociale ruimte kamer verzamelen. Het kwantificeren sociale ruimte via kleine groepen vliegen vergemakkelijken, kunnen onderzoekers de sociale ruimte kamer te manipuleren zodanig dat het gebied van de tweedimensionale arena kleiner maar stippellijn per vlieg blijft constant. Getoond in Figuur 1C, D zijn twee soorten socialespace kamers aangepast voor kleinere groepen maar dezelfde dichtheid als de grotere kamer te handhaven. Op deze wijze houden de vlieg dichtheid en het verminderen van de kamerafmeting maakt het verkrijgen van een vergelijkbare sociale afstand (figuur 2C).

Dezelfde algemene trends gelden voor sociale ruimte kamers in een horizontale positie (figuur 2D). Echter, kunnen we zien dat de vliegen meestal verder uit elkaar zodanig horizontaal plaatsen, en deze niet gemakkelijk regelen 1. Groepen die slechts 15 en 20 vliegen hebben vertonen een grotere sociale ruimte dan groepen met 40 vliegen (F IGUUR 2D).

Om te bevestigen dat de overbevolking niet verantwoordelijk voor de geringere afstand tot de dichtstbijzijnde buur gezien in grotere groepen vliegen, de afstand van elke vliegen naar alle andere vliegen gemeten, zoals in 9. Kwantificeren van de afstand tot alle vliegen, versus afstand tot naaste buur, laat de beoordeling van een groep behaviof, in plaats van het gedrag van individuen binnen een groep. Zoals verwacht, de afstand tot alle vliegen verhoogd als de hoeveelheid vliegen in de groep groter is, een weerspiegeling van de groep zelf, niet van de afzonderlijke vliegen. Deze trend werd waargenomen voor zowel verticaal als horizontaal geplaatst sociale ruimte kamers (Figuur 2E, F). Daarom werden de vliegen van grotere groepen niet gedwongen om een ​​kortere afstand om hun buurman te houden als gevolg van beperkte ruimte. In plaats daarvan, vliegen vormen strakker sociale groepen als er meer dan 15 vliegen in de kamer.

Zoals voor andere gedragstesten, een beperking van het gebruik van de sociale ruimte kamer verticaal is dat het vliegen zonder geotaxis of klimmen waardeverminderingen vereist. Bijvoorbeeld, Canton-S vliegen besmet gedurende een week met Gram-negatieve bacterie Providencia rettgeri 23 bezit een klim gebrek en vertonen verschillende sociale afstand resultaten afhankelijk van de oriëntatie van de sociale tussenruimteChambers. Wanneer de test verticaal uitgevoerd, sociale ruimte van de geïnfecteerde vliegen groter dan de sociale ruimte van de controles, waarschijnlijk omdat de geïnfecteerde vliegen waren niet in staat een stabiele groep te vormen aan de bovenzijde van de kamer (figuur 3A). Wanneer de vliegen onder dezelfde omstandigheden werden vervolgens getest in de horizontaal gerichte sociale ruimte kamers waren er geen significante verschillen, wat aangeeft dat voortbeweging vermogen waarschijnlijk minder een factor van sociale ruimte in de horizontale positie ruimte sociaal kamers (figuur 3B). Terwijl de geïnfecteerde vliegen visueel minder kunnen klimmen dan controles, kan deze worden gekwantificeerd met het klimmen assay (figuur 3C). Na 5 sec, ongeveer 44% van de controle vliegen klom naar de bovenste helft van de lagere flacon en slechts 32% van de besmette vliegen. Opgemerkt zij dat alle vliegen in deze test beklimmen slecht (ze zelden bereiken boven flacon slechts het bovenste deel van de onderste flesje), dat kanworden verklaard door het feit dat ze 12 dagen na verpopping, dat is wanneer vliegt beginnen met een defect vertonen in het beklimmen door veroudering 22.

Voor stammen die geen klimmen defect, beide oriëntaties van de kamers tot dezelfde resultaten, zoals we eerder hebben aangetoond 1. In dit experiment, dezelfde toename van de sociale ruimte gezien Canton-S en W 1118 Cs 10 in het verticale driehoek of horizontale cirkelvormige kamers (figuur 3D, E - heranalyse in vak en whisker van de gepubliceerde data in 1). Er was geen verschil in klimvermogen tussen Canton-S en w 1118 Cs 10 aangeeft dat het was niet een factor voor het verschil in sociale ruimte tussen stammen in beide oriëntatie kamer (15 sec keuze - figuur 3F). Als ze 5 sec keuze 17% ± 3.3 van CS en 14% ±2,5 w 1118 Cs 10 bereikt bovenste flacon (statistisch niet verschillend, gegevens niet getoond).

Onderzoekers gebruiken de sociale ruimte kamer moet er ook voor zorgen dat ze hun experimenten te herhalen op hetzelfde tijdstip van de dag. Zowel Canton-S en W 1118 Cs 10 mannelijke vliegen, het tijdstip van de dag getroffen sociale interacties. Vergeleken met overdag uur (Zeitgeber tijd - de tijd in uren na het begin van het licht - ZT4 tot ZT7), de vliegen getest in de avond (ZT11 te ZT12 - vlak voor lichten uit) vertoonde een veel grotere sociale ruimte voor beide genotypen, hoewel hun relatieve ruimte verschil werd bewaard - dat wil zeggen, w 1118 Cs 10 vliegen zijn nog minder sociaal dan Canton-S vliegt in de avond (Figuur 4A). Interessant is alleen de maatschappelijke ruimte Canton-S mannetjes, maar niet thoed van de vrouwen vergroot in de avond, hoewel er een trend naar grotere variatie van sociale ruimte voor vrouwelijke vliegen in de avond (Figuur 4B). We hebben eerder onafhankelijk gemaakt van dezelfde waarnemingen 24.

Zoals we al eerder gemeld via een Oregon-R lijn om het effect van Bisphenol A (BPA) 2 bestuderen sociale ruimte kamer is ook gevoelig voor de genetische achtergrond van Drosophila. Hier laten we zien dat Elwood, een recent gevangen wild-type lijn, had sociale ruimte toegenomen ten opzichte van Canton-S en Samarkand, maar niet Oregon (Figuur 5). De sociale ruimtes Samarkand en Oregon waren niet significant verschillend van elkaar, maar zowel groter dan de sociale ruimte van Canton-S (figuur 5). Deze gegevens tonen aan dat in een bepaalde omgeving, anders ingeteelde en wilde-type stammen een andere sociale omgeving, hetgeen een genetische component aan het gedrag. Het geeft ook dat de SEnsitivity van deze test vereist dus dat de vliegen worden outcrossed in geschikte genetische achtergronden voorafgaand aan het experimenteren. Dit zal helpen om de verschillen te garanderen, of omgekeerd de overeenkomsten, gezien in sociale spaties vanwege de factor wordt getest.

Figuur 1
Figuur 1. Sociale ruimte kamer componenten en regeling. (A) Sociale ruimte kamers van verschillende afmetingen kunnen worden vervaardigd met dezelfde ruiten (17,6 cm bij 17,6 cm bij 0,3 cm) en acryl afstandhouders in de vorm van rechthoekige driehoeken (met een hoogte van 16,5 cm, een voet van 8,9 cm, en een dikte van 0,3 cm - aangeduid door een kleine letter a) en rechthoeken (9 cm bij 1,5 cm bij 0,3 cm. - aangeduid door een kleine letter b) (B) De grootste sociale ruimte kamer, zoals beschreven in 1 geschikt voor 30-40 vliegen. Het heeft innerlijke dimensions van 16,5 cm bij 16,5 cm bij 14,5 cm, waardoor een oppervlak van 86,45 cm2, en leidt tot een gebied van 2,16 cm 2 per vlieg voor 40 vliegen. (C) A kamerafmeting optimaal voor 20 vliegen. Het heeft binnenafmetingen van 16,5 cm bij 14,5 cm bij 5,96 cm, waarbij een oppervlakte van 43,25 cm 2, en leidt tot een gebied van 2,16 cm per 2 vliegen. (D) kleinere kamer, optimaal voor 15 vliegen. Het heeft innerlijke afmetingen van 10,2 cm bij 8,9 cm bij 8,9 cm, waardoor een gebied van 32,45 cm 2, en leidt tot een gebied van 2,16 cm 2 per vlieg. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2. Oriëntatie van de kamer en groepsgrootte, maar geen dichtheid invloed sociale omgeving. De gegevens worden weergegeven in een doosen whisker plot van de afstand tot de naaste buur in de kamer, met de doos die de 1 e kwartiel (25e procent) en het 3e kwartiel (75 th procent), de lijn in het vak die de mediaan, en Tukey's snorharen . (AB) Representatieve gegevens blijkt dat verhoging van het aantal vliegen in een kamer van dezelfde grootte leidt tot stabiele sociale ruimtemetingen. Groepen van 10 tot 70 Canton-S mannelijke vliegen werden in de grotere verticale sociale ruimte kamer te zetten en liet te regelen voor 30 min; de afstand tot de dichtstbijzijnde buur van elk vliegen werd geregistreerd. Groepen met minder dan 15 vliegen hadden significant meer sociale ruimte dan groepen met meer dan 20 vliegt in de grote ruimte. (A) Groepen 10 n = 9, 20 n = 9, 30 n = 8, 40, n = 8, Kruskal -Wallis-test p <0,0001, Dunn's meervoudige vergelijkingstest: elke letter aangeven groepen statistisch verschillend a # b p <0,0001 (B) <./ strong> Groepen 15 n = 6, 40 n = 8, 50 n = 5 60 n = 6, 70 n = 5, Kruskal-Wallis-test p <0,0001, a # b p <0,001. (C) Wanneer de grootte van de kamer wordt aangepast aan de vlieg dichtheid (respectievelijk 15 in de kleine, 20 in middelgrote en 40 in grote ruimte, telkens bij een dichtheid van 2,16 cm 2 per vlieg behouden, is geen significant verschil waargenomen wanneer verticale getest. (D ) Maar wanneer deze sociale ruimte kamers horizontaal geplaatst zijn groepen die hadden 15 of 20 vliegen had een grotere afstand tot de dichtstbijzijnde buren vergeleken met groepen met 40 vliegen (groepen van 15 n = 3, 20 n = 4, 40 n = 4, Kruskal -Wallis proef p <0,0001, meervoudige vergelijking Dunn testen a # b p <0,01). (E-F) De afstand tot alle vliegen werd gemeten groepen van 15, 20 en 40 mannelijke Canton-S vliegt geplaatst in zowel verticaal als horizontaal georiënteerde kamers. Hoe groter het aantal vliegen in de kamer, hoe groter de afstand van allevliegen ((E): groepen van 15 n = 6, 20 n = 6, 40 n = 3, Kruskal-Wallis-test p <0,0001, meervoudige vergelijking Dunn testen a # b p <0,01, (F): groepen van 15 n = 6, 20 n = 6, 40 n = 3, Kruskal-Wallis-test p <0,0001, meervoudige vergelijking Dunn testen a # b # c p <0,0001). Let op: (A, B en CF) show data verkregen in 3 verschillende geografische regio's en dus verschillende laboratorium instellingen (A) Regio 1: UCLA, Los Angeles, CA; (B) Regio 2:. York College, New York, NY; (CF) Regio 3. Western University, London, ON Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 3
Figuur 3. Oriëntatie of sociale ruimte kamer kan worden gebruikt voor het regelen verwarren geotaxis problemen (A - C). Groepen van 40 mannelijke Canton-S vliegen die hetzij waren geïnfecteerd met P. rettgeri gedurende zeven dagen of geïnjecteerd met de media als een controle in een sociale ruimte kamer werden gezet verticaal (A) of horizontaal (B) geplaatst en toegestaan ​​te regelen voor 30 min. De afstand tot de dichtstbijzijnde buur van elk vliegen werd geregistreerd. De gegevens worden weergegeven in een doos en whisker plot van de afstand tot de naaste buur in de kamer, met de doos die de 1 e kwartiel (25e procent) en de 3 e kwartiel (75 th procent), de lijn in de doos vertegenwoordigen de mediaan, en tussenklassen snorharen. (A) Vertegenwoordiger gegevens blijkt een toename van de sociale ruimte vliegen die besmet zijn met P. rettgeri en geplaatst in een verticaal geplaatste sociale ruimte kamer,vergeleken met de injectie met de media (Wilcoxon-Rank-test: elke letter aangeven groepen statistisch verschillend p <0,0001, n = 6) (B) Vertegenwoordiger gegevens blijkt sociale ruimte wordt niet beïnvloed door P.. rettgeri infectie wanneer vliegen worden gebracht in een horizontaal geplaatste social space kamer (Wilcoxon-Rank-test: p> 0,1, n = 5) (C) Een tegenstroomapparaat gebruikt om klimgedrag zowel geïnfecteerde en controle op vliegen beoordelen.. Geïnfecteerde vliegen klimmen meer slecht dan hun media-controles (vliegt ~ 12 dagen oud, grafiek vertegenwoordigen bedoel prestatie-index ± SEM:% van vliegen in de bovenste helft van de flacon op 5 sec keuze; tweezijdige t-test met Welch correctie; n = 6 van ~ 60 vliegen, elke letter aangegeven groepen statistisch verschillend p = 0,08) (D - F). verticaal en horizontaal geplaatste kamers, hetzij driehoekige of ronde, werden gebruikt om de sociale ruimte van Canton-S (vergelijk CS) metdat w 1118 Cs 10 (W). De gegevens worden weergegeven in een doos en whisker plot van de afstand tot de naaste buur in de kamer, met de doos die de 1 e kwartiel (25e procent) en de 3 e kwartiel (75 th procent), de lijn in de doos vertegenwoordigen de mediaan, en Tukey's snorharen. In zowel de sociale ruimte kamer oriëntaties en vormen, w 1118 Cs 10 had een grotere sociale ruimte dan Canton-S ((D), verticaal driehoek Kruskal-Wallis test, elke letter aangegeven groepen statistisch verschillend p <0,0001, (E), horizontale cirkel: Kruskal-Wallis test, elke letter aangegeven groepen statistisch verschillend p <0,01). (F)) Een tegenstroomapparaat gebruikt om klimmen gedrag van beide Canton-S en W 1118 Cs 10 beoordelenstammen (vliegt 3-5 dagen oud, grafiek vertegenwoordigen gemiddelde prestatie-index ± SEM:% van vliegen in top flesje bij 15 sec keuze). Er was geen verschil in vermogen tussen beide Canton-S of w 1118 Cs 10. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 4
Figuur 4. Sociale ruimte van de mannen wordt verhoogd tijdens de avond. (A) Vertegenwoordiger gegevens blijkt een toename van de sociale ruimte tussen mannelijke vliegt tijdens de avonduren ('s avonds "ZT 11-12, voorafgaand aan de lichten uit) in vergelijking met de middag uren (" dag "ZT 4-7). Groepen van 40 Canton-S vliegen en w 1118 Cs 10vliegen werden in een sociale ruimte kamer gezet tijdens ofwel daguren of avond uren en bezinken gedurende 30 min. De afstand tot de dichtstbijzijnde buur van elk vliegen werd geregistreerd. Voor beide genotypen, vliegt verhoogde sociale ruimte in de avond en de verschillen tussen de stammen werden gehouden, ongeacht de tijd van de dag (n = 6-7, Kruskal-Wallis-test p <0,0001, Dunn's meervoudige vergelijkingstest: elke letter aangeven groepen statistisch verschillend p < 0,01). (B) Als Canton-S vliegen werden gescheiden geslacht alleen mannen hebben een toename in sociale ruimte in de avond (t p <0,01), hoewel een niet-significante trend naar grotere interne variatie wordt waargenomen bij vrouwen (Kruskal -Wallis test, elke letter aangeven groepen statistisch verschillend p <0,0002). De gegevens worden weergegeven in een doos en whisker plot van de afstand tot de dichtstbijzijnde buur in de kamer, met de doos die de 1 ste kwartiel (25 th procent) en 3rd kwartiel (75 th procent), de lijn in het vak die de mediaan, en Tukey's snorharen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 5
Figuur 5. Genetische achtergrond van vliegen invloed op de sociale ruimte. Groepen van 40 Canton-S, Samarkand, Oregon, en Elwood vliegen werden in een sociale ruimte kamer gezet en bezinken gedurende 30 min. De afstand tot de dichtstbijzijnde buur van elk vliegen werd geregistreerd. Verdelingen van de verschillende groepen (Kruskal-Wallis test, p <0,0001), groepen niet gemeenschappelijk letter delen zijn significant verschillend. De gegevens worden weergegeven in een doos en whisker pVeel van de afstand tot de dichtstbijzijnde buur in de kamer, met de doos die de 1 ste kwartiel (25 th procent) en de 3e kwartiel (75 th procent), het in het vak die de mediaan en Tukey's whiskers (Dunnet meervoudige vergelijkingstest, p <0,05 [d], p <0,001 [a, b, c] 3 onafhankelijke herhalingen met 1-2 interne herhalingen, zodanig dat voor Elwood en Samarkand n = 3, Oregon en Canton-S n = 4 ). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

In dit protocol, een gedetailleerde procedure voor de kwantificering van sociale ruimte beschreven. Een aantal cruciale stappen om het experiment te verzekeren succesvol zijn: 1) Gebruik altijd handschoenen bij het schoonmaken en het opzetten van het apparaat, om uw eigen oliën en geuren af ​​te houden van de binnenkamer van het apparaat, 2) zorgen vliegen worden verzameld ten minste één dag voor het experiment om eventuele effecten van koude anesthesie te verminderen, 3) 2 uur voor het experiment bieden nieuwe flacons met vers voedsel te zorgen voor de vliegen worden niet uitgehongerd, en hebben zich gereinigd, 4) Tijdens deze 2 uur, laat de vliegen acclimatiseren aan hun nieuwe omgeving, 5) let op de temperatuur en vochtigheid bij het uitvoeren van experimenten; proberen om ze in overeenstemming tussen de 24-25 ° C en 50% luchtvochtigheid te houden, 6) Zorg ervoor dat de sociale ruimte kamers niet storen tijdens het uitvoeren van het experiment, en 7) uitvoeren van het experiment op hetzelfde tijdstip van de dag, bij voorkeur tussen Zeitgeber tijd ZT4 en ZGT7.

Sociale space is alleen afhankelijk van de dichtheid van vliegen binnen de kamer, en niet afhankelijk van de grootte van de groep, zolang er een minimale groepsgrootte voldaan.Vliegen zal dezelfde sociale afstand te houden tussen zichzelf, ongeacht het aantal leden van de groep. Echter, afstand tot alle vliegen in de kamer, zoals verwacht, wordt beïnvloed door groepsgrootte, evenals de kamer oriëntatie. Het is belangrijk op te merken dat, ondanks de horizontale richting zijn moeilijk te gebruiken (vliegen niet zo snel bezinken) en leidt tot verminderde scheiding tussen genotypen in onze handen (figuur 3D tegenover 3E), Burg et al. 3 met succes een horizontale , vierkante kamer. In de experimenten, de afstand tot de dichtstbijzijnde buur was zeer vergelijkbaar met onze verticaal georiënteerde ruimte sociaal resultaten. In hun kamer, was er een continue luchtstroom die kunnen bijdragen tot sociale afstand groep vliegen 'zijn meest op onze verticale kamer in plaats van onze horizontale trek. Een beperking voor het gebruik verticale kamers is de mogelijkheid te testen dat Drosophila hebben mobility waardeverminderingen. De sociale ruimte kamer vraagt ​​de vliegen om mobiel te zijn, zodat ze op welke afstand van hun buurman ze willen zijn kunnen kiezen. Als vliegen waren immobiel had of tekorten andere manier, kunnen zij niet in staat zijn om stabiele groepen behoren in de kamer te vormen. Een mogelijke oplossing voor de slechte motoriek zou zijn om vervolgens met horizontale kamers, of om meer tijd voor de vliegen om zich te vestigen voordat u de opname mogelijk te maken. Onderzoekers moeten ook klimvermogen en mogelijke geotactic waardeverminderingen van vliegen om te zien of de verticale sociale ruimte kamer is geschikt beoordelen. Als er tekorten in beide van deze, horizontaal geplaatste kamers worden gebruikt om ze te vermijden.

Van de nota, als het beklimmen van activiteit of de algehele conditie en de gezondheid van de vlieg zal de meting van de sociale ruimte van invloed zijn, laten we zien dat de activiteit of beweging niveaus niet gecorreleerd zijn met sociale ruimte. In een andere studie tonen we aan dat een behandeling die voortbewegen afneemt, (voeden BPA) ook afnemen socialespace 2. Maar mutanten van rugose (een Drosophila ortholoog van het autisme kandidaat-gen neurobeachin) scherm hyperactiviteit en grotere sociale ruimte 4. Tot slot, witte mutant vliegt weer een toename van de sociale ruimte 1,3, zonder een toename in de motoriek of geotaxis 18. Kortom, verschillende combinaties van activiteitenniveau en sociale afstand tot nu toe waargenomen aangeeft dat er geen correlatie tussen de twee gedragingen. In feite is de sociale ruimte niet noodzakelijkerwijs correleren met andere sociaal gedrag ook niet, zoals sociale vermijding 8,25, wat suggereert verschillende onderliggende neurale circuits. Bijvoorbeeld, mutanten van rugose / neurobeachin weergave verhoogde sociale ruimte en een verminderde sociale vermijden 4; maar wit is zowel toegenomen sociale ruimte, en zeer sterke sociale vermijden 4.

Als tijdstip beïnvloedt sociale ruimte, althans bij mannen, is critical dat onderzoekers zijn op de hoogte van de tijd van de dag wanneer hun experimenten worden uitgevoerd en wordt alles aan gedaan om een ​​constante tijd voor alle experimenten te houden. Andere overwegingen die moeten worden verwerkt zijn: leeftijd, geslacht, en paren de status van de vliegen. We weten dat sociale afstand wordt vergroot in vergelijking met maagdelijke gekoppeld individuele persoon voor zowel mannen als vrouwen 1, en ​​laten we nu mannetjes minder dicht dan vrouwen in de avond (Figuur 4B). Stam specifieke sekseverschillen in de mate van activiteit van enkele vliegen tijdens de dag eerder is beschreven, voorgesteld dat mannen hogere bewegingsactiviteit in de ochtend en avond in vergelijking met de dag tijd kan worden gerelateerd aan hun baltsgedrag 26,27. Maar in ons geval, worden de geslachten gescheiden, maar de vliegen worden gegroepeerd, en tegen de tijd dat we hun sociale ruimte te meten, hebben de vliegen geregeld. Fujii et al. Melden dat 27 circadiane ritme in paren mannelijke bewaardsamen een grillige dagelijkse ritme, zonder duidelijke pieken, toen het ritme van de vrouwelijke paren lijken op die van enkele vliegen. Dus de toegenomen afstand bij mannen in de avond is waarschijnlijk niet gerelateerd aan een toename van baltsgedrag of specifieke toename in locomotorische activiteit, en de reden achter de geslachtsdimorfisme van dit gedrag verder moet worden onderzocht.

Met dit in overweging moeten vliegen altijd gescheiden sex voor het experiment dat verschillen in sociale interactie tussen mannen en vrouwen te zien. Tot slot hebben we momenteel nog niet te weten hoe de leeftijd van invloed op de sociale interacties van vliegen. Daarom adviseren wij dat de sociale ruimte experimenten worden uitgevoerd met vliegen niet ouder zijn dan zeven dagen, zoals diverse gedrag optredens, zoals klimmen activiteit bekend te worden getroffen in vliegen meer dan een week oud 22.

Een laatste overweging voor sociale ruimte is de waargenomen in de mediane variatiessociale afstand. Sociale ruimte metingen werden genomen vanuit verschillende locaties, waaronder (Los Angeles, Californië: figuur 2A, New-York, NY: Figuur 2B, Figuur 3D, Figuur 4, Figuur 5, London, ON: figuur 2C-F, Ithaca, NY: Afbeelding 3A, B, allemaal in dezelfde Canton-S achtergrond). Onbekende variabelen die niet constant tussen geografische locaties, of het laboratorium instellingen waren, van invloed op de mediaan van sociale afstand. Mogelijke factoren zijn onder meer verschillende soorten voedsel, de hoogte, de atmosferische druk op zichzelf, en verandering in de atmosferische druk 28. Hoewel de mediaan waren niet constant tussen locaties, binnen een locatie medianen zijn zeer constant en reproduceerbaar; en de trends en patronen te zien in de sociale ruimte metingen hetzelfde gebleven onder de locaties. Daarom, zolang onderzoekers handhaven intern constante omstandigheden, zullen zij eenble om verschillen in sociale ruimte op te sporen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Stereo Zoom Microscope  Nikon   SMZ-645 Any other standard scope for fly handling would work
Small paint brushes  for pushing flies
Jazz-mix Fisher 33545 any other standard drosophila food would work
Mini-Alarm Timer/Stopwatch
 Sharpie pens
Adhesive Tape
Medium size binder clips Staples to hold the chambers together: 1-1/4" (32mm) medium clips with 5/8" capacity
small SupportStands Carolina  707161 to hold the chambers in a vertical orientation
Buret clamps Carolina 707362
Digital Camera Nikon  Coolpix S8000  to take the still pictures
small ruler to be able to scale the picture
trifold board and white bench cover to provide a white background, and a homogeneous light.
pounding pad any mouse pad works.
Prism 6 GraphPad Software Inc. Prism 6 for Mac OS X Any statistical analysis software with t-test, one-way and two ANOVA would work

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Simon, A. F., et al. A simple assay to study social behavior in Drosophila.: measurement of social space within a group. Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).
  2. Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A. Effect of bisphenol A on the behavior of Drosophila melanogaster. - Potential use of Drosophila as a model in the study of neurodevelopmental disorders. Behavioural Brain Research. (2015).
  3. Burg, E. D., Langan, S. T., Nash, H. A. Drosophila social clustering is disrupted by anesthetics and in narrow abdomen ion channel mutants. Genes Brain Behav. 12, 338-347 (2013).
  4. Wise, A., et al. The autism candidate gene Neurobeachin (Rugose) mutants in Drosophila exhibit neuro-developmental disorders, aberrant synaptic properties, altered locomotion, impaired adult social behavior and activity patterns. J Neurosci. 1-9 (2015).
  5. Parrish, J. K., Edelstein-Keshet, L. Complexity, pattern, and evolutionary trade-offs in animal aggregation. Science. 284, 99-101 (1999).
  6. Sokolowski, M. B. Social interactions in ‘‘simple’’ model systems. Neuron. 65, 780-794 (2010).
  7. Rittschof, C. C., Robinson, G. E. Genomics: moving behavioural ecology beyond the phenotypic gambit. Animal Behaviour. 92, 263-270 (2014).
  8. Fernandez, R. W., et al. Straightforward assay for quantification of social avoidance in Drosophila melanogaster. JoVE. (94), e52011 (2014).
  9. Hahn, N., et al. Monogenic heritable autism gene neuroligin impacts Drosophila. social behaviour. Behav Brain Res. 252, 450-457 (2013).
  10. Mogilner, A., Edelstein-Keshet, L., Bent, L., Spiros, A. Mutual interactions, potentials, and individual distance in a social aggregation. J Math Biol. 47, 353-389 (2003).
  11. Liu, L., Davis, R. L., Roman, G. Exploratory activity in Drosophila requires the kurtz nonvisual arrestin. Genetics. 175, 1197-1212 (2007).
  12. Soibam, B., et al. Open-field arena boundary is a primary object of exploration for Drosophila. Brain Behav. 2, 97-108 (2012).
  13. Ejima, A., Griffith, L. C. Ch. 30. Drosophila Neurobiology - A laboratory Manual., Ch. Cold Spring Harbor Press. 475-481 (2010).
  14. Benzer, S. Behavioral mutants of Drosophila melanogaster. isolated by countercurrent distribution. PNAS. 58, 1112-1119 (1967).
  15. Connolly, J. B., Tully, T. Drosophila: A practical approach. Roberts, D. B. 1, 2nd, IRL Press. 265-317 (1998).
  16. Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster. Science. 299, 1407-1410 (2003).
  17. Rasband, W. S. ImageJ. US National Institutes of Health. Maryland, U.S.A. (1997).
  18. Simon, A. F., et al. Drosophila, vesicular monoamine transporter mutants can adapt to reduced or eliminated vesicular stores of dopamine and serotonin. Genetics. 181, 525-541 (2009).
  19. Barone, M. C., Bohmann, D. Assessing neurodegenerative phenotypes in Drosophila .dopaminergic neurons by climbing assays and whole brain immunostaining. JoVE. (74), e50339 (2013).
  20. Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila. models of neurodegeneration. JoVE. e2504 (2011).
  21. Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila. Exp Gerontol. 40, 386-395 (2005).
  22. Simon, A. F., Liang, D. T., Krantz, D. E. Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster. with age. Mech Ageing Dev. 127, 647-650 (2006).
  23. Khalil, S., Jacobson, E., Chambers, M. C., Lazzaro, B. P. Systemic bacterial infection and immune defense phenotypes in Drosophila melanogaster. JoVE. (2015).
  24. Fernandez, R. W., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Simon, A. F. 54th Annual Drosophila Research Conference, Washinton D.C., (2013).
  25. Suh, G. S. B., et al. A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila. Nature. 431, 854-859 (2004).
  26. Helfrich-Förster, C. Differential control of morning and evening components in the activity rhythm of Drosophila melanogaster.--Sex-specific differences suggest a different quality of activity. J. Biol. Rhythms. 15, 135-154 (2000).
  27. Fujii, S., Krishnan, P., Hardin, P. E., Amrein, H. Nocturnal male sex drive in Drosophila. Curr Biol. 17, 244-251 (2007).
  28. Pellegrino, A. C., et al. Weather forecasting by insects: modified sexual behaviour in response to atmospheric pressure changes. PLoS One. 8, e75004 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics