머리 고정 쥐의 수염-신호 Eyeblink 클래식 컨디셔닝

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Lin, C., Disterhoft, J., Weiss, C. Whisker-signaled Eyeblink Classical Conditioning in Head-fixed Mice. J. Vis. Exp. (109), e53310, doi:10.3791/53310 (2016).

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Abstract

Introduction

Eyeblink 컨디셔닝 파블로프 에어컨의 형태와 연관 학습 및 기억의 신경 메카니즘을 연구하기위한 모델 시스템이다. 이것은 인간, 토끼, 고양이, 쥐, 생쥐 등 다양한 종에서 조사되었다. 패러다임은 두 쌍의 자극의 프레 젠 테이션을 포함한다 : 중립 조건 자극 (CS; 예를 들면, 톤, 빛의 플래시, 또는 수염 자극) 및 돌출 무조건 자극 (US, 예를 들어, 눈에 에어 퍼프를, 또는 눈 주위 충격). 미국은 무조건, 재귀 eyeblink 응답 (즉, UR)를 이끌어. 결국, 한 쌍의 CS-미국의 여러 프리젠 테이션 후, 주제는 미국과 CS를 연결 배운다. 이 학습은 조건 반응 (CR), 미국의 프리젠 테이션을 앞에 혼자 CS에 의해 유도 eyeblink의 형태로 드러난다.

추적 형태로 Eyeblink 에어컨은 몇 시간의 자극이없는 간격을 포함연사와 미국 (그림 1)을 분리 undred (밀리 초). 이 자극 우발 1의 인식을 필요로하기 때문에 추적 에어컨은 선언적인 학습의 한 형태이다. 시간적 간격이 1-6 관련되기 위해 미국과 CS 위해서는 이러한 해마와 같은 전뇌 지역에서 CS의 신경 '추적'을 유지하기 위해 동물을 필요로한다. 전뇌 지역과 함께, 추적 컨디셔닝은 소뇌 (7)에 따라 달라집니다.

Eyeblink 컨디셔닝 따라서, 인수, 합병 및 검색을 포함한 메모리의 여러 측면의 조사에 유용한 패러다임이다. eyeblink 컨디셔닝 동안, 동물의 제어 그룹은 미국 프리젠 테이션 혼자보다는 배운 CS-US 협회에 의해 발생 될 수있는 CS에 pseudoconditioning 또는 감작 반응을 테스트하기 위해 임의의 순서로 짝 자극되게된다.

일반적으로 사용되는 apparaTUS 설치류 eyeblink 컨디셔닝의 조사를 위해 설치류가 교육 과정 8 ~ 10시에 대해 자유롭게 이동하도록 허용하는 챔버입니다. 이러한 유형의 장치와 더불어, 테더는 보통 쥐의 두개골에 부착되는 헤드 피스에 부착된다. 테더는 US (때로는 CS)의 전달을 위해 그 자극 (즉, eyeblink 응답) 10 동물의 응답 송신을 허용한다. 테더 그 자체는 전달, 자극의 유형에 따라 변경 될 수 있으며 eyeblink 응답이 어떻게 기록된다.

eyeblink 컨디셔닝은 "자유롭게 움직이는"닿는 마우스를 사용하는 이유는 마우스 구속에 어려움을 겪고 있다는 점이다. 다른 종의 억제에보다 의무가있을 수 있지만, eyeblink 컨디셔닝 실험에서 쥐를 사용하는 주요 이점은 가능한 유전자 재조합 변이주의 대부분이 마우스 균주된다는 것이다. 어려움을 겪고, 완벽한 입술에 추가마우스의 traint 급성 고통을 초래한다. 스트레스를 최소화하는 헤드 고정 마우스 제제 eyeblink 컨디셔닝 동안 획득 될 수있는 생리 정보를 증가시킬 것이다. 예를 들어,이 시스템은 2 광자 현미경 (11) 피질 뉴런의 이미징을 허용한다.

헤드 고정 제제는 또한 마우스 (11)에 eyeblink 컨디셔닝을위한 플랫폼으로, 사극 어레이, 두 광자 칼슘 이미징과 설치류의 뇌의 생체 전기 생리 녹음, 이동식 뇌 이식을 통해 피질의 광학 이미징을위한 이전 실험에 사용 된 -16.

머리 고정 시스템에서 신뢰할 수있는 자극과 녹음은 마우스 (그림 2)의 완전한 구속없이 보장된다. 자유롭게 구동 시스템에 사용되는 것과 같은 투구가 마우스 두개골에 부착된다. 트레이닝 동안, 헤드 피스를 통해 막대에 부착 된 커넥터에 부착순서 원통형 디딜 방아는 설치류의 머리 (그림 2A)를 안정. 원통형 디딜 방아는 마우스가 편안하게 휴식 할 수 있지만 마우스가 그렇게 원한다면, 또한 실행하거나 산책 할 수 있습니다. 이 시스템의 사용으로, 마우스는 CS와 US 같은 온화한 안와 감전 등의 위스커 진동 (도 1)을 훈련 할 수있다. 미국은 수술로 눈에 피부의 측면 아래에 배치 전선을 통해 전달된다. 연사는 2 층 직사각형 굽힘 액츄에이터 (도 2B)에 부착 된 빗 통해 전달된다. 빗살 굽힘 액츄에이터 후 훈련 동안 적절한 위치로 이동하고, 각 동물에 대한 최적의 전달을 위해 조정되는 자성 기재에 부착된다. 빗살 선택된 수염을 걸치도록 위치된다. 연사의 배달 동안, 신호는 빗 변위와 수염 (17)의 진동에 이르게 굽힘 액츄에이터로 전송됩니다.

16,18,19에서 마우스 효과 조건화 된 자극으로 사용되어왔다. 그 이유 수염 자극이 실험 패러다임에서 CS에 대한 선택 탐사 중 체성 감각 정보 입력에 대한 자신의 코털 (vibrissae)에 쥐과 동물의 의존성이다. 수염 자극 안정적이고 효과적인 CS (20)로 도시되었다. 연사는 eyeblink 컨디셔닝 (20, 21) 학습과 관련된 대뇌 피질의 변화와 소성을 매핑하기위한 우아한 도구를 제공하기 때문에 또한, 코털 (vibrissae) 시스템 (즉, 배럴 피질), 수염 자극의 잘 설립 및 조직 대뇌 피질의 기판을 제공. 머리 고정 시스템은 자극 신경 세포와 비 자극 수염로부터의 입력을 수신하는 뉴런 사이의 응답을 비교 선택 수염의 정확한 자극 수 있습니다. 마지막으로, 생쥐의 많은 변종은 연령과 관련된 청력 손실이 상대적으로 젊은 성인을 전시 16 문제를 개선하기는하지만) 조절 된 점멸하는 동안 P> (22), 그리고 눈꺼풀 폐쇄는 시각적 인 CS를 변경합니다. 수염 자극은 이러한 합병증 중 하나에 의해 영향을받지 않습니다.

독특하고 중요한 CS와 US 전달을위한 방법을 포함 eyeblink 에어컨, 다른 머리 고정 준비에 따라 수정하고 eyeblink 응답의 인수는 여기에 표시됩니다. 이 장치 및 eyeblink 컨디셔닝 훈련 패러다임의 신뢰성을 조절 마우스 및 pseudoconditioned 대조군 (도 7a)에서 상대적으로 평평한 학습 곡선에서 곡선을 학습에 의해 입증된다.

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Protocol

마우스와 관련된 모든 절차는 건강의 국립 연구소에서 발행 한 가이드 라인에 따라 노스 웨스턴 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행 하였다.

1. 실린더 (그림 2A)

  1. Chettih 등. 그리고 Heiney 등에 의해 설명 된 바와 같이 실린더를 구축합니다. 긴 거품 실린더 14 ~ 15에서. 실린더의 10cm 길이를 잘라 축 직경 금속 막대 12.7 mm (0.5합니다.)에 맞게 중앙에 구멍을 드릴. Heiney 등. 또는 다른 지원 (예를 들어, 플렉시 유리) (15)에 의해 설명 된 바와 같이 금속 광학 브레드 보드에 자사의 축과 실린더를 탑재합니다.
  2. 실린더의 양측에 직경 12.7 mm의 두 개의 수직 금속봉 발기.
  3. 금속 막대에 두 직각 마운트를 연결합니다.
  4. 직각 마운트를 통해 (5cm 길이, 직경 12.7 mm)이 더 막대를 고정합니다. 베벨 일전자는이 막대 끝과 실린더 (그림 2G)의 중심 위에 자신의 끝을 수준.
  5. 드릴 및 장소 (그림 2G)에서 커넥터의 날개를 개최한다이 4-40 기계 나사에 맞게로드의 수평 끝 부분에 구멍을 누릅니다.

2. 조립 위스커 자극 시스템 (그림 2B)

  1. 일반 머리 빗에서 빗의 10 치아 세그먼트를 잘라.
  2. 슬릿을 잘라 2 ~ 3 mm 폭 약 5mm 2 층 사각 굽힘 액츄에이터를 수용 할 수있는 빗의 상단 부분에 깊은.
  3. 굽​​힘 액츄에이터의 각면에 하나의 전선을 납땜. 제조업체가 제공하는 솔더 및 플럭스를 사용합니다. 전류에서 마우스와 사용자를 보호하기위한 전기 테이프 액츄에이터 땜납 커버.
  4. 굴곡 액츄에이터 스트립 빗의 평면에 수직 앉는되도록 빗으로 절단 슬릿에 액츄에이터 스트립 슬립. 각도가 4 기울어 지도록 빗5 °보다 자연스럽게 마우스의 얼굴의 곡선을 따른다.
  5. 빠른 경화 에폭시와 빗살의 상단에 액추에이터 스트립의 단부를 고정.
    참고 : 굽힘 액츄에이터 스트립에 납땜 와이어 액추에이터 40 볼트를 제공하는 가감 저항기에 연결해야합니다. 이전 실험은 40 볼트 조절에 효과가 있지만 놀라게 응답을 연상하지 않는 것으로 나타났습니다.
  6. 굽​​힘 액츄에이터 및 이동 가능한 마운트에 빗를 놓습니다. 같은 일반적으로 체외 전기 생리학 설비에 사용되는 자기베이스에 부착 된 피펫 홀더는 잘 작동합니다.

3. 실린더 위에 막대에 마운트 커넥터 조립 (그림 2C, 2E)

주 : 커넥터가 3-D는 바이스 Disterhoft 및 갈베스 등에 의한 테더에 사용되는 암 페놀 221 시리즈 나일론 스트립 모델 7 구멍 스트립 인쇄 10,17한다.

  1. 0-80 X-1 스트립의 첫 번째 구멍을 누릅니다"기계 나사.이 커넥터에 헤드 피스를 고정하는 잠금 나사 될 것입니다. 손으로 나사를 돌릴 용이하게하기 위해 cyanoacrylic 접착제와 잠금 나사의 머리에 0-80 너트를 붙입니다.
  2. 합니다 (0-80 기계 너트를위한 공간을 허용하도록) 탭 구멍 후 비어있는 구멍을두고 나머지 5 구멍을 통해 오 금 도금 relia - 전술 소켓을 누릅니다.
  3. 소켓의 단부에 다섯 긴 와이어 (이더넷 케이블에서 얻은 와이어) 및 솔더 오프 코팅을 벗겨.
    주 : 처음 두 와이어는 증폭기로부터의 신호를 필터링 및 증폭 후속하는 eyeblink 응답을 검출 할 근전도 (EMG) 신호를 기록하기 위해 사용된다. 두 번째 두 자극 아이솔레이터에서 충격 신호를 제공합니다. 마지막 전선은 접지 연결 될 것입니다. 이 전선은 시간 제한 CS-US 전달에 사용되는 시스템에 연결됩니다.
  4. 멀티 포트와 전선 및 소켓 사이의 전기적 연결을 보장imeter. 연속성 설정에 멀티 미터를 넣고 와이어의 제거 끝까지 핀과 다른 프로브 프로브 중 하나를 누르십시오. 저항이 낮고, 멀티 미터 톤을 방출 할 때 핀이 상기 배선에 전기적으로 접속된다.
    1. 멀티 미터 연속성 설정이없는 경우 또는, 상기 핀과 와이어 사이의 저항을 측정한다. 측정 거의 저항이있는 경우 전기적 연속성이있다.
  5. 두 TO-220 스타일의 트랜지스터에서 커넥터의 날개를 준비합니다. 트랜지스터의 에미 터,베이스, 및 콜렉터 리드를 잘라와는 커넥터에 부착 될 수 있도록 표면 수준.
  6. 탭이 나사의 헤드 아래에 슬립 할 수 있도록 구멍을 위반 마운팅 탭의 모서리를 잘라.
  7. 커넥터에 에폭시 트랜지스터. 마운팅 탭 구멍은 상기 실린더로드에 커넥터를 고정하는 데 사용된다.
  8. PR 와이어의 기재에 에폭시 적용소켓에서 otruding 에폭시 건조 할 수 있습니다. 에폭시는 절연 및 연결을 보호 할 것입니다.

4. 투구를 준비한다 (그림 2D, 2E)

참고 :. 헤드 피스 스트립 3-D는 와이즈와 Disterhoft 및 갈베스 10,17에 의해 헤드 피스에 사용되는 암 페놀 221 시리즈 나일론 스트립에서 모델 7 홀 스트립을 인쇄합니다. 이 작품은 더 이상 상업적으로 제조되지 않습니다. 프린터 파일은이 저널의 웹 사이트에서 다운로드 할 수 있습니다.

  1. 0-80 × 1 "기계 나사의 스트립의 첫 번째 구멍을 누르고 첫 번째 구멍 후 비어있는 구멍을 둡니다.
  2. (좁은 끝을 통해) 나머지 5 구멍의 바닥을 통해 오 금 도금 핀을 밀어 넣습니다. 균등 스트립에 핀을 밀어 용이하게하기 위해 바이스를 사용합니다.
  3. 열 스트리퍼를 사용하여, (직경. 0.005)을 스테인레스 스틸 와이어의 단부 오프 폴리이 미드 코팅의 약 0.5 cm를 제거 w의 벗겨진 단부 솔더핀 중 하나의 개구부에 반사성 및 0.6-0.7 cm에 와이어를 잘랐다.
  4. 동물에게 전달하는 현재 허용하는 와이어의 단부로부터 약 0.2 cm 스트립.
  5. 반복 나머지 3 개의 와이어에 대한 4.3-4.4 단계를 반복합니다.
    참고 : 두 번째 두 동물에 충격을 전달하는 역할을합니다 동안 처음 두 와이어는 EMG 응답을 기록합니다.
  6. 마지막 (제 5) 와이어 접지선 될 것 같이, (0.005 인치 직경) 코팅 된 스테인레스 스틸 와이어의 약 5cm를 절단하고, 나머지 핀 땜납.
  7. 전선 및 멀티 미터와 핀 사이의 연속성을 확인합니다. (코팅 그라운드 와이어의 경우, 멀티 프로브는 와이어를 따라 삽입 될 수있다.)

5. 수술 준비 (그림 2 층)

  1. 헤드 피스를 포함한 모든 수술 도구를 소독. 알코올에 몸을 담근 후 멸균 식염수로 세척하여 헤드 피스를 멸균.
  2. 3~4% v의 유도 챔버에 마우스를 마취분당 산소를 1 ~ L의 유속으로 혼합 된 이소 플루 란을 aporized.
  3. 동물이 발가락 핀치와 완전히 마취 된 것을 확인. 는 발가락 핀치에 반사적으로 반응하지 않을 때 마우스가 완전히 마취 된 것입니다.
  4. 동물이 완전 마취되면, 동물의 머리 상단 면도, 진통제 (0.05 ㎎ / ㎏, SC)로서 부 프레 노르 핀 히드로 클로라이드의 투여 량을 주사 정위 프레임의베이스 상에 피복 가열 패드에 놓고 상기 동물이 완전 마취되어 있는지 확인하고, 상기 프레임에 헤드를 고정. 분당 산소를 1 ~ L의 유량으로 2 %로 전환 동물을 이소 플루 란 증기의 흐름을 유지한다. 각막에 안연고 소량을 적용한다.
  5. 둘 사이의 교류, 포비돈 - 요오드 알코올 세 시간 각각 두피를 소독.
  6. 숫자 10 또는 15 메스 블레이드, t의 전면에서 두개골을 노출 두피의 정중선을 따라 절개를interparietal 뼈 (~ 1.5 cm) 과거에 그는 눈을.
  7. 마이크로 클립 피부의 플랩을 다시 누릅니다. 좌우 두개골의 뒷면 (즉, 모두 여섯 클립을 사용)에 하나의 눈 위의 클립, 주동이의 - 꼬리 축 가운데를 따라 하나 하나를 놓습니다. 투구 찢김을 방지하기 위하여, 측면 및 후면을 포함 가능한 두개골만큼 노출. 이 접착제 합착 시멘트의인가에 대한 표면적을 증가시킬 것이다.
  8. 메스를 사용하여 골막을 제거하고, 깨끗하고 건조한 가공면을 확보하기 두개골의 상단 긁어. 3 % 과산화수소로 3 회 두개골 상부를 청소한다.
  9. 00-90 나사를 받아들이 크기 34 역 콘 버 또는 1.6 mm 조각 커터 드릴 비트와 함께 (에 0.0625을. 긴) 두개골에 두 개의 구멍을 뚫습니다. 나사는 전기 접지 연결을 제공합니다. 때 맞 조절 한 브레 그마 앞 구멍과 람다의 앞에 다른 장소, 정중선의 왼쪽t 눈. 각 구멍에 나사 하나를 놓습니다. 각 전체 회전의 두개골에 나사 0.28 mm를 낮 춥니 다; 이 전체 회전이 충분하다.
  10. 시멘트에 대한 표면적 및 악력을 증가시키기 위해 두개골에 직경이 약 0.75 mm의 여러 작은 디봇 만든다.
  11. 완성 된 투구를 타고있는 두 개의 나사 주위에 그림 8 구성에서 접지선을 바람. 접지선의 투구가 제대로 나중에 배치 할 수 있도록 약간의 여유 (헤드 피스와 나사 사이에 1.5 cm가 ~)를 허용합니다.
    주 : 그림 8은 보통 와이어와 접지 나사 사이의 양호한 전기 접속을 보장한다. 와이어는 전기 접속을 보장하기 위해 나사에 납땜 될 수있다.
  12. 접착 성 합착 시멘트를 적용합니다. 접착 성 합착 시멘트를 혼합 제조업체의 지침에 따라 또는 감기 세라믹 혼합 접시에 L-분말 믹스의 4 숟가락, 기본 8 방울, 촉매 2 방울을 섞어 (온도 스트립 O를 보장n은 혼합 요리는 완전히 검은 색입니다.) 차가운 온도는 시멘트의 작업 시간을 연장한다.
    1. 코트는 두개골과 합착 시멘트로 자유롭게 나사 및 시멘트 건조 할 수 있습니다. 이것은 단지 몇 분 정도 소요됩니다.
  13. 시멘트 건조 후, 핀 두개골 위에 서와 수직 투구 위치. 커넥터와 유사한 홀더 장소에 투구를 잡고
    참고 : 투구의 핀을 받기 위해 수 년 - 홀더는 필요 "커넥터 조립 3."금도금 소켓과 함께 다섯 홀 스트립을 참조하십시오. 홀더는 고정대의 팔에 부착된다. 홀더와 팔의 사용은 투구와 와이어의 위치 설정을 용이하게한다.
  14. 헤드 피스가 위치 된 후, 안와 주변 피부를 벗겨과 끝을 벗겨 0.2 cm가 EY 직접 꼬리를 피부 아래 휴식로부터 약 2 ~ 4 mm로 할 수 있도록 두 개의 충격 와이어를 위치이자형. 두 전선의 끝이 서로 접촉하는 것을 허용하지 않습니다. 눈 소켓 위의 근층 orbicularis 항진증에있는 두 개의 EMG 와이어를 배치합니다.
    1. 너무 긴 그들이 궤도에 상처 감염을 초래할 직접 할 수있는 것처럼 보일 경우 필요한 경우, 전선의 끝을 잘라. 와이어의 단부를 절단하는 경우, 노출 부족 나선이 있다는 것을 보장한다. 전선이 너무 긴 것 같다 경우 또는, 다시 그들이 헤드 피스에서 확장 기지에서 와이어를 구부리십시오.
    2. 전선의 기본 시멘트 (즉, 헤드 피스 니어 엔드) 접착 성 합착 시멘트의 작은 확산 두개골에 장소와는 (앞에서 설명한 부분의 사용 반) 건조 할 수 있습니다.
  15. 마이크로 클립을 제거하고 부드럽게 다시 시멘트를 통해 피부의 플랩을 접어주십시오. 눈꺼풀의 왜곡을 방지하기 위해 피부에 피부의 일부에 장력을 방지하기 위해 자연적으로 정착 할 수 있도록 상기 eyeblink 반응의 예방그리고 동물에 고통.
  16. 시멘트와 헤드 피스의 상단의 가장자리에 절개 피부에서 모든 것을 덮고, 치과 용 시멘트로 노출 된 영역을 밀봉합니다. 눈이나 투구의 핀에 시멘트 떨어지는 피하기 위해 여분의주의하십시오. 부분적으로 경화 된 시멘트는 부드럽게 및 치과 시멘트 용매에 적신 된 면봉으로 조작 할 수 있습니다. 시멘트가 헤드 피스 홀더를 분리하기 전에 완전히 건조하도록 허용합니다.
  17. 동물은 케이지 다시 동물을 교체하기 전에 예열 표면에 마취에서 회복 할 수 있습니다. Metacam (1 ㎎ / ㎏, SQ)를 관리하고 다시 새장에 동물을 배치합니다.
  18. 시험 또는 교육 전에 동물 복구 5-7 일 수 있습니다. 교육 기관의 지침에 따라 동물에 표준 수술 후 치료를 유지한다. 이 수술에서 회복 된 후 동물은 적어도 하루에 한 번 점검해야한다. 가난한 식사 및 / 또는 음주와 마음이 내키지 않는 행동의 흔적을보세요. 고통 경우완화까지 의심, Metacam 매 24 시간 (수술후의 끝에서와 동일 량)을 제공한다. 리도카인 국소 동물 긁힘이나 불편의 흔적이 경우 상처 부위에 적용될 수있다.

6. 실린더 및 교육 (그림 2G)에 마우스를 배치

  1. 실린더에 마우스를 배치하려면, 다른와 집게 손가락과 엄지 손가락으로 어깨 뒤에 마우스를 잡고 다음 한 손으로 꼬리를 잡고 의해 간단히 손으로 마우스를 억제. 마우스의 복부와 몸통 주위 나머지 손가락을 감싸.
  2. 손이 마우스를 억제하지으로 마우스의 머리에 헤드 피스에 커넥터를 연결하고 고정 나사를 켭니다.
  3. 실린더에 부드럽게 마우스를 놓고 프레임에 커넥터를 연결하면서 제자리에 고정. 실린더 위의 막대에 커넥터를 고정하는 두 개의 나사를 사용합니다.
  4. 커넥터가 실린더 프레임에 고정되면 rele마우스의 보류 ASE. 마우스를 실린더에 습관화의 두 세션의 일일를 제공합니다. 각 요법 이니 세션 각 조절 세션과 동일한 기간을 허용합니다.
    1. 기록 자발 깜박임 습관화 동안 레이트 및 사전 노출 놀람 반응의 발생을 최소화하기 위해 위스커 진동 CS에 마우스. 실제 컨디셔닝 세션 동안으로 CS를 적용하지만, 전기없이 미국을 충격.
    2. 개별 수염을 통해 빗의 이빨을 미끄러지는 동안, 마우스의 조절 측에 피에조 시스템 가까운 (약 0.5 cm) (오른쪽)를 배치하여 수염 자극 CS를 적용합니다. 같은 수염이 날부터 하루에 같은 위치에 피에조 시스템을 배치하여 매일 매일을 자극되어 있는지 확인합니다.
  5. 고전적 조건에 마우스를 훈련을 시작합니다. 5 일 동안 하루 훈련의 두 세션을 제공합니다. 각 훈련 세션 사이 약 2 시간 둡니다.
    1. 컨디셔닝 그룹, 델리에(- WPI의 A385R 자극 아이솔레이터에서 제공 3mA, 0.3 mA) 100 밀리 긴 전기 펄스 US와 짝을 250 밀리 긴 수염 진동 CS (60 Hz에서)의 세션 당 삼십 시험 버전. (그림 1) 23 해마의 작업을 따라하기 위해 250 밀리 긴 자극이없는 추적 간격으로 CS와 미국을 분리합니다.
    2. 깜짝이 유발 될 수 있도록 각 동물의 전기 충격의 강도를 조절합니다. 30 ~ 60 초 사이의 임의 intertrial 간격으로 분리 시험 (45 초, 세션 당 30 분의 총 기간의 평균.)
    3. 혼자 삼십 짝 CS를 제공하고 미국 단독으로 시험 각 조절 된 그룹에 대한 언급과 같은 자극 매개 변수를 사용하여 pseudoconditioned 그룹 (육십 시험의 총). 어떤 자극이 연속으로 두 번 이상 제공되지 않는 것을 CS 혼자 미국 혼자 시험은 pseudorandomized되어 있는지 확인합니다. 22.5 초 평균 intertrial 간격으로 각각 재판을 분리합니다.
  6. 드순서 습관화 훈련 걸쳐 65dB에서 간 배경 잡음은 수염 자극에 의​​해 발생되는 진동 소음을 마스크.

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Representative Results

8~10주 세 남성 C57BL6 / J 마우스는 머리를 고정 원통형 디딜 방아 장치에 대한 추적 eyeblink 컨디셔닝에 대한 교육을했다. 8 마우스가 페어링 CS-US 프리젠 테이션 (에어컨 그룹)와 9 마우스와 함께 훈련을받은이 부대 CS 미국 프리젠 테이션 (pseudoconditioned 그룹)와 함께 훈련을했다.

컨디셔닝 된 마우스에서 반응 조건의 예 EMG 레코딩은도 3 및도 4에 나타낸다. 각 재판 EMG 녹음 정류하고 10 msec의 시간 상수와 일체화. 5 정류 나타낸다 및 EMG 응답 흔적 (10) 조건 (A) 모두에 대한 세션 및 pseudoconditioned (B) 마우스마다 모든 실험에 걸쳐 평균을 통합 하였다. 조건 반응의 발전 반응이 가까운 US의 발병에 큰지고와도 5a에서 볼 수있다. 이 진화는 난을 볼 수 없습니다n은 그림 5B에서 응답을 pseudoconditioned.

진화 잘 초과하고, 따라서 잘 알게 조건 반응은도 6에서수있다.도 6은 CS 발병 다음 응답의 피크시의 히스토그램을 보여준다. CS 발병 후 150 밀리 초 - 0의 그래프에서 초기 피크가있다. 이러한 초기의 피크가 더 일찍 트레이닝 세션이 세션 1과 알 수있는 더 좋은 타이밍 조건 반응의 발달을 나타내는 조건 동물 사이 밀리 400-500의 그래프에서 제 2 피크의 개발에있다.

도 7a는 컨디셔닝과 pseudoconditioned 마우스에서 기록 된 평균 %의 적응 조건 반응을 보여줍니다. 적응 조건 반응은 본 적어도 20 밀리의 BEF는 상당한 활성을 갖는 것으로 간주된다광석 미국의 발병 (즉, CS 발병하기 전에 평균 활동보다 적어도 4 SD 큰 현재 250 밀리 초). 교육 세션 동안 에어컨 마우스는 컨디셔닝 마우스 pseudoconditioned 마우스 (그룹 F (1,15) = 20.62, P보다 훨씬 더 적응 조건 반응을 나타내도록 각각의 훈련보다 컨디셔닝 적응 반응을 전시하여 조절 패러다임의 점진적 학습을 보였다 <0.0005, 세션, F (1,9) = 9.987, p <0.0001, 그룹 * 세션, F (1,9) = 5.977, p <0.0001). pseudoconditioned 그룹은 일반적으로 임상 시험의 20 % 미만에 의사 CR을 전시합니다.

도 7b는 훈련 열 이상을 모두 조절 및 pseudoconditioned 생쥐에 대한 평균값 조건 반응 영역 (정류 통합 EMG 응답의 곡선 아래의 영역)이다. 라스 이상 반복 측정 ANOVA와 계획 비교t 4 회 (즉, 세션 7-10, 조절 된 그룹은 60 % CR의 학습 기준에 도달 한 후)가 CR 영역이 pseudoconditioned 그룹 게시물 학습보다 조절 군에서 더 큰 것을 나타내는 그룹의 중요한 주요 효과를 보여 기준 (그룹 F (1,14) = 5.733, p <0.05; 세션, F (1,3) = 0.486, ns의, 그룹 * 세션, F (1,3) = 0.432, NS).

도 7c는 에어컨과 pseudoconditioned 마우스에서 기록 된 평균 %의 알파 (놀라게) 응답을 보여줍니다. 알파 응답은 적어도 4SD 평균 기준 활동 이상이었다 CS 발병의 50 밀리 내에서 활동합니다. 교육 세션 동안, 컨디셔닝 및 pseudoconditioned 마우스 (그룹 F (1,15) = 2.502, ns의) 사이에 유의 한 차이로, 일반적으로 임상 시험의 25 % 미만에 알파 응답을 전시 마우스를 조절하고 pseudoconditioned. 일즉 반복 측정은 ANOVA 그러나 인해 pseudoconditioned 반응의 감소 및 컨디셔닝 된 쥐에 대해 25 %의 알파 응답의 유지 보수 (그룹 * 세션, F (1,9) = 2.074에 그룹과의 세션의 상당한 상호 작용을 나타내 않았다 P <0.05). 세션 10시 알파 응답의 증가 때문에 잘 발달 된 CR의 짧은 발병 지연 가능성이 높습니다.

그림 7D는 마우스의 두 그룹 모두에서 기록 된 평균 퍼센트 짧은 대기 시간 응답을 보여줍니다. 짧은 대기 시간 응답은 평균 기준 활동보다 4SD이었다 CS 발병 다음 50 ~ 70 밀리 초 사이의 활동을 반영합니다. 세션, F (1,9) = 3.920, P는 반복 측정 ANOVA는 조절 된 동물이 열 훈련을 통해 (그룹 F (1,15) = 5.377를, p <.05 pseudoconditioned 동물보다 더 짧은 대기 시간 응답을 전시 것으로 나타났다 <0.0005, 그룹 * 세션, F (1,9) = 3.158, p <0.005). 티조절 된 그룹이 각 교육 세션과 큰 CR을 전시 그의는 CR의 이전 시작 시간을 반영 할 수있다.

그림 1
그림 1 :. 트레이스 Eyeblink 컨디셔닝 패러다임 추적 eyeblink 컨디셔닝에 무해한 조건 자극 (CS)는 약간 유해 무조건 자극 (US)와 짝을 이루는은 eyeblink 응답을 유도하기위한 것. 연사과 미국은 23 패러다임 해마가 의존하고, 자극이없는 시간 간격에 의해 분리된다. 여기에 설명 된 패러다임에서 250 밀리 긴 수염 진동 CS는 밀리 긴 눈 주위 미국을 충격 100와 결합된다. 연사와 미국이 250 밀리 긴 시간 간격에 의해 분리된다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.


그림 2 :. 헤드 고정 준비 A, 실린더, 위스커 자극기, 커넥터 표시 B, 표시된 두 개의 층 굽힘 액츄에이터와 빗와 수염 자극과 eyeblink 컨디셔닝 헤드 고정 설정.. C, 개별 부품과 커넥터 표시 : 고정 나사, 7 구멍 스트립, 와이어를 유지하는 소켓 에폭시 납땜 와이어하는 TO-220 스타일의 트랜지스터 D 변환 날개 개별로 헤드 피스. 부를 나타낸 : 7 구멍 스트립 핀 및 코팅 스테인리스 접지선을 포함하는 핀에 납땜 와이어와 각 충격 EMG 스테인리스 와이어의 단부를 박리 폴리이 미드 코팅의 0.2 cm와 E. 커넥터와 모두 7 구멍 스트립의 각 구멍의 구성헤드 피스. F, 훈련 준비가 마우스가 실린더에 배치되는 수술로 이식 헤드 피스. G,와 마우스. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3
그림 3 :. 예 EMG 기록 파란색 라인 (250 밀리 긴)이 CS 프레젠테이션을 묘사. 빨간 선은 전기 충격 (100 밀리 초)에서 유래 이슈를 보여줍니다 미국 프리젠 테이션을 묘사. 연사와 미국은 250 밀리 초 자극이없는 간격으로 분리된다. 이 자극이없는 간격이 CR을 묘사 (베이스 라인에 비해) 더 높은 진폭 EMG 활동을하다 내. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <가 />

그림 4
그림 4 :. 예 EMG 및 해당 광학 적외선 반사 녹음 근전도 기록은 광학 적외선 응답 피크 (레드 라인)에 조건 반응의 발현 (파란 선), 대기 시간을 감지하는 반사 센서, 그리고 무조건 eyeblink 응답 개시 (만큼 정확 핑크 라인). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 5
그림 5 :. '평균 Eyeblink 흔적은 정류 한 조건 마우스 (A)와 하나의 pseudoconditioned 마우스 (B)에 대한 eyeblink 응답의 통합 된 흔적 평균. 각 추적은 평균을 나타냅니다단일 세션을 통해 모든 시험에 대한 마우스의 응답. 파란색 부분은 수염 진동 CS 프레젠테이션하는 동안 응답을 나타냅니다. 빨간 부분은 자극이없는 추적 간격 동안 응답을 나타냅니다. (A)에, 충격 미국은 추적 기간 후 어두운 회색 영역 중에 존재하는 이슈를 유도. B는 수염 ​​진동 CS 만에 응답을 보여줍니다. 혼자 CS의 프리젠 테이션 및 미국 단독 시험이 pseudoconditioning에 pseudorandomized했다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 6
. 그림 6 : (푸른 바 N = 8)과 8은 모두 그럴 필요를 위해 동물을 (빨간색 막대)를 pseudoconditioned 모든 응답 피크 시간의 응답 피크 시간 히스토그램의 히스토그램은 에어컨모든 세션에서 IALS는 (하나 pseudoconditioned 마우스 데이터는 그룹 간의 반응 수의 직접적인 비교를 허용 제외 하였다). 컨디셔닝 및 pseudoconditioned 동물이 겹치는 곳 보라색 막대가 나타냅니다. 응답 피크 시간은 CS와 미국의 발병 사이의 정류 및 통합 EMG 기록의 가장 큰 피크의 ​​시간으로 계산된다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 7
그림 7 : 조절 된 동물의 응답 곡선 (N = 8; 파란색 곡선)과 pseudoconditioned 동물 (N = 9; 붉은 곡선). A, 10 교육 세션을 통해 컨디셔닝 및 pseudoconditioned 동물에 대한 적응 조건 반응 (± SEM) '평균 비율. B 평균화 지역 컨디셔닝을위한 CR의 (± SEM)와.. (10) 교육 세션을 통해 컨디셔닝을위한 (SEM ±) D, 비율 '평균 짧은 대기 시간 응답 C, 컨디셔닝 및 pseudoconditioned 동물에 대한 비율'평균 알파 응답 (± SEM) 10 교육 세션을 동물을 pseudoconditioned 10 세션을 통해 pseudoconditioned. 여기를 클릭하십시오 이 그림의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.

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Discussion

클래식 eyeblink 컨디셔닝은 학습과 기억의 기초가되는 신경 기판을 이해하기위한 유용한 도구입니다 연관 학습의 한 형태이다. 이러한 쥐와 같은 설치류에 eyeblink 컨디셔닝 채용 이전 방법은 동물이 자유롭게 이동하도록 허용 챔버를 포함했다. 시겔 등.에 빛을 유발 추적 eyeblink 컨디셔닝 Chettih 등. 그리고 Heiney 등. 가장 최근에 사용에 의해 기술 된 장치를 사용하여 마우스 eyeblink 컨디셔닝 머리 고정 준비 등 특정 허용과 같은 여러 가지 장점을 제공합니다 절차 및 실험 (생체 이광자 칼슘 이미징 예) 수 없었던 또는 과거에 한정 되었었다 eyeblink 컨디셔닝 14-16 동안 수행된다. 제조의이 유형은 또한 사극 어레이와 생체 전기 생리학과 같은 다른 기술의 사용을 용이하게한다. 마우스는 distre 될 나타나는감금에서 ssed이 헤드 고정 제제는 필요 억제의 양을 감소시키면서 보안 헤드를 유지하기 위해 개발되었다. 이 준비 마우스는 원통형 디딜 방아에 ambulate 할 수 있지만, 다른 사람은 성공적으로 안정적인 플랫폼 (24)에 머리 고정 쥐의 행동 데이터를 수집했다.

헤드 고정 실린더 시스템의 사용으로 발생하는 특정 문제는, 그러나,이있다. 하나의 관심사는 사람이 처음 실린더 상에 훈련받지 않은 마우스를 배치 할 때, 그것은, 나머지 내용은 도보 또는 새로운 장치에서 실행하는 데 시간이 필요할 수 있다는 점이다. 대부분의 마우스는 휴식에 신속하게 학습, 도보 또는 편안하게 실린더에서 실행됩니다. 두 습관화 세션은 실린더에 마우스를 익숙하게하는 데 도움이 두 번째 세션의 중간에 의해, 대부분의 마우스는 실린더에 편안합니다. 발생하는 또 다른 문제는 투구의 적출이다. 다중 날 훈련 세션 동안 과거에 일부 문제는 있지만 접착제 합착 (C)의 사용이 있었다장담은 투구의 적출 문제를, 개선하고있다. 접착제 합착 시멘트의 사용은이 기술을 이용하여 이후 50 수술 0 % 투구 찢김 가져왔다. 올바른 사용과 두개골에 시멘트의 충분한 확산과 함께, 연구자들은 투구의 적출 아무 문제가 발생할 없습니다. 마지막으로, 습관화 세션 동안 CS를 제시하여, 잠재 억제에 대한 몇 가지 문제가있을 수 있습니다. 이는 그러나, 생쥐가 성공적으로 조절되었는지 (도 7 참조)에 명백하다. 위스커 진동의 강도가 가변 저항기로 전달되는 전압의 크기를 변경함으로써 변경 될 수 있습니다. 생쥐 학습 할 수없는 경우, 전압은 놀람 반응을 최소화하면서도 성공적으로 컨디셔닝을 지원하기 위해 증가 될 수있다. 연구원은 또한 동물에 전달되는 전기 충격 미국의 유형을 변경할 수 있습니다. 전기 충격 미국은 여기에보고 된 100 밀리 초를 지속 한 전기 펄스가 될 수 있습니다. 또한, 일 등이 프로토콜에 사용되는 전자 자극 아이솔레이터는, 연구자들은 또한뿐만 아니라 효과적인 전기 충격 미국 120 Hz에서에게 펄스 당 1 밀리 초에서 6 이상성 펄스 쌍을 사용할 수있다 이상성 펄스를 전송 할 수있다.

Boele는 외. 특정 "조건 반응은"놀라게 (알파)에서 CS 또는 짧은 지연 응답 (SLR) (25)의 응답을 발생할 수있는 가능성을 지적했다. 알파 응답은 CS 발병 후 50 밀리 초 대기 시간 이내 빠른 눈꺼풀 폐쇄로 간주됩니다. 마우스는 종종 자신의 눈이 알파 응답 다음, 시험 기간 동안 폐쇄 유지한다. 일안 리플렉스 반면에, CS 발병 50-70 밀리의 대기 시간이 통상적으로 단지 몇 CS-US 쌍들 후에 발생한다. 알파와 SLR 카메라와 SLR 카메라는 몇 CS-미국 페어링 후 발생할 수 있다는 사실 모두의 발병에 짧은 대기 시간은 가능성이 해마 - 소뇌 회로에 의해 구동되지 않는 것을 나타냅니다. Boele 검토 이러한 관찰. therefore 여기에 기록 된 CR이는 응답을 배운 여부의 질문을 구걸. 그림 7C7D 쇼로, 어느 알파 응답도 SLR 카메라는 적응 된 CR은 전뇌와 소뇌에 의해 매개되는 제안, 기록 된 CR의 대다수를 차지하고있다. CS 발병 다음 eyeblink 응답의 피크 대기 시간을 표시 그림 6의 막대 그래프는 특정 시험보다 교육 실험과 초기 발병 알파 또는 짧은 대기 시간 응답을 포함 할 수있다 동안 eyeblink 응답의 피크가 실제로 발생을 나타냅니다 이상 및 또한 타이밍 조건 반응의 발달을 나타내는 US의 개시에 가까워. 앞서 언급 한 바와 같이, 위스커 자극과 충격 강도가 놀라운 또는 지나치게 혐오 않았지만 적응 조건 반응을 생산하는데 효과적 남아있는 수준으로 감쇠되었다. 도 7b와 같이 최종적으로, 상기 CR의 크기는 (언더 면적으로서 측정조정 된 그룹은이 응답 내용 여러 세션을 요구하는 의미하는 60 %의 학습 기준에 도달하면,도 5에서와 같이 정류 통합 응답 곡선)은 SLR 카메라 알파 달리 pseudoconditioned 군보다 에어컨 그룹 크다 응답.

Boele는 등. 또한 지적 그 EMG 측정, 토끼 같은 큰 동물의 검출을 깜박의 정확한 방법은, 같은 쥐 25 작은 설치류와 같이 실용적이지 동안. 이들은 EMG 기록을 나타낼 수 위양성 신호의 검출을 피하기 위해, 자기 거리 측정 기법 (MDMT)의 사용을 추천한다. MDMT 기술은 감도 및 깜박임 감지 품질 인상하면서 또한 칩 (26)을 부착하기 위해 동물 훈련 매일 마취해야하는 단점을 나타낸다. 그 자체로이 학습 속도를 혼동 할 수 있습니다. 우리는 그 EMG 신호를 찾기여기에 설명 된 절차에 기록 용이하고 안정적​​인 측정 분석 비교적 쉽게 높은 시간 해상도로 얻어진다.

그림 4는 훈련 기간 동안 마우스의 눈에 가까이 배치 적외선 반사 광학 센서에서 해당 신호가 깜박 검출 대표 EMG 신호를 보여줍니다. 상기 EMG 신호와 광 센서 사이의 깜빡임 검출 EMG 녹음하여 깜박임 검출 정밀도를 나타내는에서 명확한 상관 관계가있다. EMG 레코딩의 장점은 가장 큰 시간 해상도를 허용한다는 것이다. 해상도는 10 msec의 시간 상수를 통해 통합 저하되지만, 하나는 눈 깜박임 활성을 검출하는 EMG 원시 데이터를 분석 할 수있다. 스파이크 카운트 CR이 18를 검출하기 위해 사용될 수있다 하나의 파라미터이다. EMG 녹음 한 가지 단점은 신호가 의심 할 여지없이 전기 충격 미국에서 오는 전기 이슈에 의해 오염 될 것입니다 (참조 예를 조절 깜박임 반응, 발병 전에 발생 자들을 기록 할 수있는 능력을 방해하지 않는다. EMG 기록을 채용하는 또 다른 단점은 CR 검출하기위한 본 기준을 사용하여, 노이즈 기준은 달리 CR로 감지 있었는지를 숨길 수 있다는 것이다.

여기에 설명 된 헤드 고정 제제 Heiney 등에 의해 제시된 것과 유사하다. (15)가있다, 그러나, 그들의 고급 시스템에서 어떤 현저한 차이. 예를 들어, 상기 방법은 eyeblink 응답이다 EMG 활성을 기록하는 안구 위에 배치 subdermally 와이어를 기록하기위한 여기에 설명. 이 기술은 eyeblink 응답 따라서 눈꺼풀 활동의 신뢰성 및 안정적인 기록을 가능하게하고. 이러한 와이어의 적절한 배치 및 고정은 적어도 2 주 실험 기간 동안 지속 녹화 품질을 보장​​한다. 높은보다는 EMG 와이어를 사용하는 이점Heiney 외. 의해 사용 된 EMG 속단 카메라 녹화가 매우 높은 시간 해상도를 가지고 있고, 카메라 (15)를 필요로하는 일 위치 교정을 필요로하지 않는다는 것이다. 카메라는, 그러나, 눈꺼풀 폐쇄의 직접적인 시각적 인 판단을 제공 않습니다.

두 시스템 사이의 또 다른 차이점은 CS 전달을위한 방법입니다. 이 특별한 머리 고정 마우스 준비는 조건 자극 등의 수염 자극을 사용합니다. 결과는 마우스 헤드 고정 토끼 위스커 진동 27 조절 될 수있는 것과 같이, CS 등의 위스커 자극을 효과적으로 조절 될 수 있음을 보여준다. Heiney는 등. 위스커 패드 (15)에 공기의 약한 퍼프를 연출하여 효과적인 CS와 수염 패드의 자극을 보여 주었다. 두 가지 기술은 효과적인 조절을 보여하지만, 선택 수염 위에 빗를 배치하고, 빗 진동하는 개별 whiske을 자극 할 수있는 기능을 허용R 행 또는 개별 수염. 이 기술은 동물 자신의 제어 역할을 할 수 있도록 이전의 연구에서 사용되어왔다 (20) (즉, 자극 위스커 행 비자극 휘스커의 행과 비교 하였다).

요약하면, 수염-신호 eyeblink 컨디셔닝 머리 고정 준비는 고급 기술 이전에 불가능하거나 수행하기 어려운 있었다 실험을 수행하기위한 보안 뇌 플랫폼 수 있습니다. 마일드 휘스커 자극 조건 자극으로서 사용하고, 약한 전기 충격 무조건 자극을 사용 하였다. Eyeblink 응답은 눈꺼풀 뒤에 subdermally 배치 전선으로 기록되었다. 신뢰할 수있는 학습은 미국과 CS 및 안와 전기 충격으로 선택 수염을 직접 자극과 쥐에서 증명되었다, 어떤 학습은 CS와 미국의 임의의 프리젠 테이션을 받았다 쥐에서 알 수 없었다. 근전도 기록은 신뢰할 확인해 제공eyeblink 응답을 기록하고 응답이 훈련을 통해 변화하는 방법을 관찰 atively 간단한 방법.

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Disclosures

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

Acknowledgements

이 작품은 국방부 (W81XWH-13-01-0243)과 국립 보건원 (R37 AG008796)에 의해 투자되었다. 우리는 머리를 고정 실린더 장치를 구축하기위한 노스 웨스턴 대학의 기계 공장에서 앨런 베이커 감사합니다. 우리는 MATLAB 및 솔리드 웍스에서 자신의 지침 박사 Shoai 핫토리 감사합니다. 우리는 실험을 제어 LabVIEW 소프트웨어에 대한 닥터 존 전원을 감사합니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Exervo TeraNova Foam Roller 36" x 6"  Amazon B002ONUM0E For cylinder
Plexiglas Custom-made; 1 cm thick
Metal Rods (12.7 mm diameter) Custom-made
4-40 machine screw (.25 in. long) Amazon Supply B00F33Q8QO For cylinder
Classic Design Hair Comb Conair 93505WG-320 For whisker stimulation
2-Layer Rectangular Bending Actuator Piezo Systems T220-A4-303X  For whisker stimulation
Solder and Flux Kit Piezo Systems MSF-003-NI For whisker stimulation
Magnetic Base Thor Labs MB175 For whisker stimulation
Threaded rod for magnetic base Custom-made
Strips based on 221 series nylon strip connectors from Electronic Connector Corp. Custom-made, based on Weiss and Disterhoft, 2008
TO-220 Style Transistor Amazon Supply B0002ZPZYO  For connector; for the wings
Relia-Tac Sockets Electronic Connector Corp. 220-S02 For connector
Relia-Tac Pins Electronic Connector Corp. 220-P02 For headpiece
0-80 stainless steel machine screw (1 in. long) Amazon Supply B000FN68EE Locking Screw
0-80 stainless steel machine screw hex nut (5/32 in. thick) Amazon Supply B000N2TK7Y Locking Screw Head
Loctite Super Glue-Liquid Loctite 1365896 Cyanoacrylic glue; for the locking screw
Quick Setting Epoxy Ace Hardware 18613 For connector and whisker stimulation system
Ethernet Cable Wires Ethernet cable can be taken apart to use the individual wires for the connector
Polyimide coated stainless steel wires (2 in. long, .005 in. diameter) PlasticsOne 005sw/2.0 37365 S-S  For headpiece, EMG and shock wires
Stainless steel uncoated wire (.005 in. diameter) AM Systems 792800 For headpiece, ground wires
Tenma Variable Autotransformer Tenma 72-110 For the whisker stimulation; rheostat to adjust current to the bending actuator
Amplifier A-M Systems 1700 Amplifier for filtering and amplifying EMG signals
WPI A385R stimulus isolator World Precision Instruments 31405 For the electrical shock
Isothesia (Isoflurane) Henry Schein: Animal Health 50031 For surgery; anesthesia
Buprenex Injectable CIII Reckett Benckiser Pharmaceuticals Inc NDC 12496-0757-1 For surgery; analgesic
Akwa Tears: Lubricant Ophthalmic Ointment  Akorn NDC 17478-062-35 Artificial tear ointment to prevent dry eyes while under anesthesia
Povidine-Iodine Prep Pads PDI NDC 10819-3883-1 For surgery; antiseptic
Alcohol Prep Pads May be purchased from any standard pharmacy
Stainless steel surgical scalpel handles (no.3) Integra Miltex  4-7. For surgery
Stainless steel surgical scalpel blades Integra Miltex 4-310 or 4-315 For surgery; number 10 or 15 scalpel blade
3% Hydrogen Peroxide May be purchased from any standard pharmacy
Micro Clip Roboz RS-5459 For surgery, to hold back skin
00-90 stainless steel machine screw (0.0625 in. long) Amazon Supply B002SG89X4  For surgery, to wrap ground wire around
Professional Rotary Tool Walnut Hollow 29637 Hand drill for surgery, to drill holes in skull
Inverted Cone Burr Roboz RS-6282C-34 Inverted cone burr size 34; for surgery, to drill holes in skull
Engraving Cutter Drill Bit Dremel 106 Engraving cutter; 1.6 mm bit; for surgery, to drill holes in skull
C&B Metabond-Quick! Cement System "B" Quick Base Parkell S398 For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion
C&B Metabond-Quick! Cement System Clear L-Powder Parkell S399 For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion
C&B Metabond-Quick! Cement System "C" Universal TBB Catalyst 0.7 ml Parkell S371 For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion
C&B Metabond-Quick! Cement System Ceramic Mixing Dish with temperature strip Parkell S387 For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion
Swiss Tweezers, style #5 World Precision Instruments 504506 For surgery
Puritan Cotton-Tipped Applicators VWR International 10806-005  For surgery
Dental Caulk Grip Cement Kit Dentsply 675570 For surgery; dental cement

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References

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