Onderzoek naar het Georgia (III) Complex van EOB-DTPA en haar

Chemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Chemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Een procedure voor de isolatie van EOB-DTPA en daaropvolgende complexering met natuurlijke Ga (III) en 68Ga wordt hierin voorgesteld, alsmede een grondige analyse van verbindingen en onderzoek op labelingsefficiëntie in vitro stabiliteit en n- octanol / water verdelingscoëfficiënt van het radiogelabelde complex.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Greiser, J., Niksch, T., Weigand, W., Freesmeyer, M. Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue. J. Vis. Exp. (114), e54334, doi:10.3791/54334 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

We tonen een methode voor het isoleren van EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris (carboxymethyl) -4- (ethoxybenzyl) -undecanedioic acid) vanaf het Gd (III) complex en protocollen voor de bereiding van de nieuwe niet-radioactieve, dwz natuurlijke Ga (III) en radioactief 68Ga complex. De ligand en de Ga (III) complex gekenmerkt door kernmagnetische resonantie (NMR) spectroscopie, massaspectrometrie en elementanalyse. 68Ga werd verkregen met een standaard elutie methode in een 68 Ge / 68Ga-generator. Experimenten om de 68Ga-merkingsrendement van EOB-DTPA bij pH 3,8-4,0 werden geëvalueerd. Opgericht analysetechnieken radio TLC (dunnelaagchromatografie) en radio HPLC (hogedrukvloeistofchromatografie) werden gebruikt om de radiochemische zuiverheid van de tracer bepaald. Als een eerste onderzoek van de lipofiliciteit 68 Ga tracers 'de n- octanol / water distribution coëfficiënt 68Ga species aanwezig in een pH 7,4 oplossing werd bepaald door een extractiewerkwijze. In vitro stabiliteit metingen van de tracer in verschillende media bij fysiologische pH werden uitgevoerd, waaruit verschillende graden van afbraak.

Introduction

Dinatriumgadoxetinezuur, een algemene naam voor Gd (III) complex van het ligand EOB-DTPA 1, is een veel gebruikte contrastmiddel hepatobiliaire magnetic resonance imaging (MRI). 2,3 Vanwege zijn specifieke opname door hepatocyten en lever hoog percentage van hepatobiliaire uitscheiding het maakt de lokalisatie van focale laesies en levertumoren. 2-5 bepaalde beperkingen van de MRI-techniek (bijvoorbeeld toxiciteit van de contrastmiddelen, beperkte toepasbaarheid bij patiënten met claustrofobie of metalen implantaten) pleiten voor een alternatief diagnostisch hulpmiddel .

Positron emissie tomografie (PET) is een moleculair beeldvormingswerkwijze, waarbij een kleine hoeveelheid van een radioactieve stof (tracer) toegediend, waarna de verdeling in het lichaam wordt opgenomen door een PET-scanner. 6 PET is een dynamische methode die hoge ruimtelijke en temporele resolutie beelden en kwantificering van de resultaten, zonderomgaan met de bijwerkingen van MRI-contrastmiddelen. De informatieve waarde van de metabole verkregen informatie kan verder worden vergroot door combinatie met anatomische data ontvangen van andere beeldvormende methoden, meestal bereikt door hybride beeldvorming met computertomografie (CT) in PET / CT scanners.

De chemische structuur van een tracer geschikt voor PET moet een radioactieve isotoop die als positron emitter omvatten. Positronen hebben een korte levensduur, omdat ze vrijwel direct vernietigen met elektronen van het atoom schelpen van het omringende weefsel. Door vernietiging twee 511 keV gamma-fotonen met tegengestelde bewegingsrichting worden uitgestoten, die worden geregistreerd door de PET-scanner. 7,8 Om een tracer, PET nucliden kunnen covalent worden gebonden aan een molecuul, zoals het geval is in 2-deoxy 2- [18F] fluoroglucose (FDG), de meest intensief gebruikte PET-tracer. 7 kan echter een nuclide vormen ook coördinatieve bindingen met één of meerdere liganden (bv[68 Ga] -DOTATOC 9,10) of worden gebruikt als opgeloste anorganische zouten (bijvoorbeeld [18F] natriumfluoride 11). Geheel, de structuur van de tracer is belangrijk omdat de biologische verdeling, metabolisme en excretie gedrag bepaalt.

Een geschikte PET nuclide moeten gunstige eigenschappen als gunstig positron energie en beschikbaarheid en een halfwaardetijd voldoende voor de beoogde onderzoek combineren. De 68 Ga nuclide is uitgegroeid tot een belangrijke kracht in het gebied van PET in de afgelopen twee decennia. 12,13 Dit is voornamelijk te wijten aan de beschikbaarheid door een generator systeem, die onafhankelijk labeling on-site maakt het mogelijk uit de buurt van een cyclotron. In een generator, de moeder nuclide 68 Ge geabsorbeerd op een kolom waarvan het dochternuclide 68Ga geëlueerd en vervolgens gemerkt met een geschikte chelator. 6,14 Aangezien 68Ga nuclide bestaat als een trivalent kation net als Gd (III) 10,13, chelerende EOB-DTPA met 68 Ga in plaats daarvan zou een complex opleveren met dezelfde totale negatieve lading als gadoxetinezuur. Bijgevolg kan dat 68Ga tracer dezelfde karakteristieke lever specificiteit te combineren met de geschiktheid voor PET-beeldvorming. Hoewel gadoxetinezuur wordt gekocht en toegediend als dinatriumzout, in de volgende context zullen we verwijzen als Gd [EOB-DTPA] en de niet-radioactieve Ga (III) -complex als GA [EOB-DTPA] of 68Ga [ EOB-DTPA] bij het radioactief gemerkte component voor het gemak.

Om hun toepasbaarheid evalueren tracers voor PET, moet radioactieve metaalcomplexen uitvoerig eerst onderzocht in vitro, in vivo of ex vivo experimenten. Om de geschiktheid voor een respectievelijke medisch probleem te bepalen, verschillende tracer kenmerken, zoals biologische verdeling gedrag en de klaring profiel, stabiliteit, orgel specificiteit en cel of tissue opname moeten worden onderzocht. Vanwege hun niet-invasief karakter, zijn in vitro bepalingen vaak voorafgaand aan in vivo experimenten. Algemeen wordt erkend dat DTPA en zijn derivaten beperkt geschikt als chelatoren voor 68Ga door deze complexen ontbreken kinetische inertheid, waardoor relatief snelle afbraak bij toediening in vivo. 14-20 Dit wordt voornamelijk veroorzaakt door apo-transferrine als een concurrent voor 68Ga in plasma. Toch, onderzochten we deze nieuwe tracer met betrekking tot de mogelijke toepassing ervan in hepatobiliaire imaging, waarin diagnostische informatie binnen enkele minuten kan worden geleverd na de injectie 3,4,21-23, daardoor niet per se die langdurige tracer stabiliteit. Hiertoe die we EOB-DTPA uit gadoxetinezuur en aanvankelijk uitgevoerd complexering met natuurlijke Ga (III), die bestaat als mengsel van twee stabiele isotopen, 69 GA en 71 68 Ga. We gebruikten gevestigde methoden en tegelijkertijd geëvalueerd hun geschiktheid voor de bepaling van de efficiëntie van 68 Galabeling EOB-DTPA en de lipofiliciteit van de nieuwe 68Ga tracer en de stabiliteit ervan in verschillende media te onderzoeken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Bereiding van EOB-DTPA en Ga [EOB-DTPA]

Let op: Raadpleeg alle relevante veiligheidsinformatiebladen (VIB) van de gebruikte organische oplosmiddelen, zuren en basen voor gebruik. Voer alle stappen in een zuurkast en het gebruik van persoonlijke beschermingsmiddelen (veiligheidsbril, handschoenen, laboratoriumjas).

  1. Isolatie van EOB-DTPA van gadoxetinezuur
    1. Zet 3 ml 0,25 M gadoxetinezuur injecteerbare oplossing in een kolf. Voeg 500 mg (5,6 mmol) oxaalzuur aan de geroerde oplossing.
    2. Na roeren gedurende 1 uur, filter de suspensie door een frit onder verminderde druk. Was het residu driemaal met 3 ml water, respectievelijk.
    3. Combineer de waterige filtraten en rust de oplossing met een pH-elektrode. Voeg 12 M zoutzuur aan het filtraat totdat de pH ongeveer -0,1.
    4. Verwijder het oplosmiddel in vacuo om een kleurloze rest werd verkregen. Opslaan onder inert gas.
    5. Het residu grondig (ten minste driekeer) met ethylacetaat om de overmaat oxaalzuur verwijderen. Droog het residu onder vacuüm.
    6. Los het residu op in 2 ml water bij kamertemperatuur en vervolgens koelen van de oplossing in een ijsbad. Zonder verwijdering van het ijsbad, voeg 0,5 M waterige natriumhydroxideoplossing druppelsgewijs tot de vorming van een kleurloze vaste stof gluey waargenomen.
    7. Verwijder het water door decanteren. Was de vaste stof twee maal met 1 ml koud water. Droog de ​​vaste stof onder vacuüm om het eerste productfractie verkregen.
    8. Isoleer een tweede productfractie uit de gecombineerde fracties van gedecanteerde water via kolomchromatografie (silica, methanol / water 4/1). 24 Verwijder het oplosmiddel in vacuo.
    9. Indien de aldus verkregen vaste stof is niet zuiver wit, opnieuw op te lossen in 1 ml water, voeg 10 ml ethanol en vervolgens 10 ml diethylether om het product te precipiteren. Filtreer door een frit onder verminderde druk en droog in vacuo.
    10. Combinerenzowel vaste fracties van EOB-DTPA en het uitvoeren van NMR-spectroscopie, 25 massaspectrometrische 26 en 27 elementaire analyses.
  2. Synthese van Ga [EOB-DTPA]
    LET OP: Store vast Ga (III) chloride onder een droge inerte atmosfeer, omdat bij contact met lucht, vocht of vet afbraak plaatsvindt, wat resulteert in bijtende dampen en de vorming van geel, bruin of zwart onzuiverheden.
    1. Bereid een 0,11 M voorraadoplossing door het oplossen van 1,94 g (11,0 mmol) van Ga (III) chloride in 100 ml water. Verdun 1 ml 25% waterige ammonia-oplossing met 4 ml water.
    2. Los op 80 mg (0,15 mmol) EOB-DTPA in een kolf van 10 ml water. Eventueel verhitten het oplosmiddel volledig oplossen te bereiken.
    3. Voeg 1,4 ml (0,15 mmol) van Ga (III) chloride voorraadoplossing. Voorzie de kolf met een roerder en een pH-elektrode. Voeg verdunde waterige ammoniumhydroxideoplossing druppelsgewijs totdat de pH van de oplossing is ongeveer 4,1. Roer bij roOM temperatuur gedurende 30 minuten.
    4. Verwijder het oplosmiddel onder vacuüm. Breng het residu over in een kolf, voorzien van een stillhead met een centrale en parallelle zijhals. Voorzie de centrale hals met een verkoelende vinger en de zijkant hals met een vacuümpomp uitlaat
    5. Verwarm het residu onder verminderde druk (125 ° C, 0,6 mbar). Verwijder regelmatig gesublimeerde ammoniumchloride (zichtbaar als witte bekleding van het glasoppervlak) vanaf het koelvinger en destillatiekop, evenals uit de bovenste delen van de kolf met een licht vochtige doek. Voortzetting van het proces totdat er geen zichtbare vorming van nieuwe sublimeren.
    6. Om laatste sporen van ammonium chloride was het residu driemaal met 0,5 ml hete methanol, respectievelijk. Droog het kleurloze residu onder vacuüm. Voer NMR-spectroscopie, 25 massaspectrometrische 26 en 27 elementaire analyses.

2. Algemene Labeling Procedure

LET OP: Alle experiments inclusief direct of indirect contact met radioactieve stoffen moet worden uitgevoerd door alleen getraind personeel. Gebruik de juiste afscherming apparatuur. Verzamel radioactief afval gescheiden en op te slaan en afvoeren in overeenstemming met de geldende voorschriften.

  1. Elutie van de generator
    Opmerking: Een 40 mCi 68 Ge / Ga generator 68 met de moeder nuclide gebonden als oxide op dodecyl-3,4,5-trihydroxybenzoate silica werd gebruikt. Elutie en zuivering kan handmatig worden uitgevoerd of, zoals in deze procedure, als gecombineerde geautomatiseerd proces met een peristaltische pomp en dispensereenheid.
    1. Bereid oplossingen van 5,5 M, 1,0 M en 0,05 M zoutzuur. Bereid een oplossing van 5,0 M natriumchloride bevattende 25 pl 5,5 M zoutzuur per ml. Bereid een bufferoplossing van pH 4,6 door het combineren van 4,1 g natriumacetaat, 1 ml HCl (30%) en 2,5 ml ijsazijn en het mengsel te verdunnen met water tot 50 ml.
    2. precondition de PS-H + cartridge door langzaam te spoelen met 1 ml 1,0 M zoutzuur en vervolgens 5 ml water.
    3. Elueer het silica kolom van de generator met 4 ml 0,05 M HCl. 12 Plaats het 68Ga-eluaat op het PS-H + cartridge.
    4. Spoel de patroon met 5 ml water en vervolgens drogen met 5 ml lucht. Elueer het 68Ga uit de patroon met 1 ml 5,0 M natriumchlorideoplossing aangezuurd. 28
  2. Labeling van EOB-DTPA met 68 Ga
    1. Los 1 mg (1,9 umol) EOB-DTPA in 1 ml water. Uit deze oplossing neemt 100 pl (0,19 umol) en verdun deze met 9,9 ml water om een ​​19 pM (10 ug / ml) voorraadoplossing van EOB-DTPA bereiden.
    2. Verwijderen 50 pl (gelijk 22-29 MBq) van de oplossing die 68 Ga en in een flesje. Voeg 50 pl (0,5 ug) van een 19 mM voorraadoplossing van EOB-DTPA en 300 pl of buffer om de pH te verhogen tot 4,0. Schud kort en incubeer de oplossing bij kamertemperatuur gedurende 5 min. Verwijder een monster van 1-5 pl en zet HPLC of TLC-analyse.
    3. Voer radio HPLC analyse op een omgekeerde fase (RP) C 18 kolom 29 Gebruik de volgende mobiele fase:. A - water / trifluorazijnzuur (99,9% / 0,1%), B - acetonitril / trifluorazijnzuur (99,9% / 0,1%), gradiënt : 06 min 80% A → 0% A (0,5 ml / min), 610 min 0% A (0,5 ml / min).
    4. Bepaal de piek intensiteiten van de radio HPLC signalen gebied onder de curve. Bereken de labelingsopbrengst als radiochemische zuiverheid (RCP) van de tracer als volgt:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A + A Ga Ga-EOB-DTPA) ∙ 100%
      Een Ga-EOB-DTPA: oppervlakte onder de curve van 68 Ga [EOB-DTPA]
      A Ga: oppervlakte onder de curve van de gratis 68 Ga

3. Labeling Efficiency

  1. Voer procedures etikettering als beschrijvend in doorsnede 2. Gebruik een consistente reeks uitgangspunt vormde van 68Ga-eluaat, bijvoorbeeld 22-29 MBq (40-140 pl, afhankelijk van de versheid van het eluaat).
  2. Voeg de vereiste hoeveelheid bufferoplossing voor de pH op 3,8-4,0 (40-190 pl, afhankelijk van het volume van 68Ga-eluaat). Voeg de vereiste hoeveelheid ligand voorraadoplossing (10-70 pl van een 19 mM oplossing).
  3. Voeg de vereiste hoeveelheid water om het totale volume van elke etikettering sonde aan te passen tot 1,75 ml. Meng goed en laat het monster staan ​​voor 5 minuten bij kamertemperatuur. Voer een HPLC-analyse zoals beschreven in hoofdstuk 2 tot en met de opbrengst etikettering te bepalen.
  4. Voer procedures labeling met hoeveelheden van ligand tussen 0,1 ug en 0,7 ug in stappen van 0,1 ug. Voeren experimenten in triplo voor elke ligand concentratie. Bereken de gemiddelde opbrengst en standaarddeviatie.

4. In vitro stabiliteit

  1. General pROCEDURE en preparaten
    1. Oplossen van een tablet met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) in 200 ml gedeïoniseerd water om een ​​PBS-voorraadoplossing met een fosfaatconcentratie van 10 mM te bereiden.
    2. Voer etikettering van 22-29 MBq 68 Ga met 0,5 ul van EOB-DTPA voorraad oplossing, zoals beschreven in paragraaf 2. Afhankelijk van het volume van de 68 Ga eluaat, past u de hoeveelheid buffer, zoals beschreven in paragraaf 3. Zuig monsters van etikettering oplossing met 6-12 MBq tracer om de stabiliteit metingen uit te voeren.
    3. Voer radio TLC analyse van 80 mm silicagel gecoate aluminiumplaten gebruikt 0,1 M waterige natriumcitraat als elutiemiddel en analyseren van de platen met een radioactiviteit TLC scanner. 30 Bepaal de intensiteiten van de signalen TLC gebied onder de curve. Bereken de RCP van de tracer als volgt:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A Ga-vrij + A Ga-EOB-DTPA + A Ga-colloïdaal) ∙ 100%
      Een Ga-EOB-DTPA: oppervlakte onder de curve van 68 Ga [EOB-DTPA]
      Een Ga-vrij: oppervlakte onder de curve van de gratis 68 Ga
      Een Ga-colloïdaal: oppervlakte onder de curve van colloïdaal 68 Ga
    4. Bereken RCP t / RCP 0 voor elk tijdstip. Plot de aldus gestandaardiseerde RCP vs. tijdsverschil sinds het startpunt t = 0 min.
      RCP t = RCP van 68 Ga [EOB-DTPA] op tijdstip t.
      RCP 0 = RCP van 68 Ga [EOB-DTPA] bij t = 0 min.
  2. Stabiliteit in fosfaatgebufferde zoutoplossing (A)
    1. 65 pl labelingoplossing voeg 150 pl PBS stockoplossing en 60 pl natriumhydroxideoplossing (0,1 M) om de pH te verhogen tot 7,4. Meng grondig.
    2. Verwijder een hoeveelheid van 1-5 ul aan TLC-analyse uit te voeren ( 'uitgangspunt'). Onmiddellijk bewaar de oplossing in een incubator bij 37 ° C en verwijderen aliquots TLC analyse daarom op vertegenwoordigentieve tijdstippen gedurende 3 uur.
  3. Stabiliteit ten opzichte overmaat apo -transferrin in PBS (B)
    1. 120 pl labelingoplossing voeg 50 pl PBS voorraadoplossing en 430 gl natriumhydroxideoplossing (0,1 M) om de pH te verhogen tot 7,4. Voeg 40 ul van een oplossing van apo -transferrin (25 mg / ml). Meng grondig.
    2. Verwijder een hoeveelheid van 1-5 ul aan TLC-analyse uit te voeren ( 'uitgangspunt'). Onmiddellijk bewaar de oplossing in een incubator bij 37 ° C en verwijderen aliquots TLC analyse daarom op representatieve tijdstippen gedurende 3 uur.
  4. Stabiliteit in menselijk serum (C)
    1. Aan 500 pl humaan serum voeg 25 ul labelingoplossing en 45 gl natriumhydroxideoplossing (0,1 M) om de pH te verhogen tot 7,4. Meng grondig.
    2. Verwijder een hoeveelheid van 1-5 ul aan TLC-analyse uit te voeren ( 'uitgangspunt'). Onmiddellijk bewaar de oplossing in een Incubator bij 37 ° C en verwijderen aliquots TLC analyse daarom op representatieve tijdstippen gedurende 3 uur.

5. Vaststelling van de verdelingscoëfficiënt LogD

  1. Voer het kenmerken zoals beschreven in hoofdstuk 2. 50 pl labelingoplossing voeg 20 pl PBS voorraadoplossing en 170 gl natriumhydroxideoplossing (0,1 M) om de pH te verhogen tot 7,4.
  2. Terugtrekken 200 ul van deze oplossing en zet het in een plastic V-flacon. Voeg 200 ul van n- octanol. Sluit het flesje en vortex gedurende 2 minuten. Centrifugeer het monster bij 1600 xg gedurende 5 minuten.
  3. Verwijder drievoud van 40 pi uit de n-octanol fase en de waterfase elk en leg ze in een aparte V-flesjes. Wees niet te mengen de lagen.
  4. Meet de activiteit van elk monster in een gamma-teller goed voor 30 sec. Voor elk monster onmiddellijk herhaal de meting twee keer en daarvan berekent het gemiddelde activiteit Ᾱ t t, W1, Ᾱ t, W2 en Ᾱ t, W3 (activiteiten in waterige monsters) en Ᾱ t, O1,t, O2,t, O3 (activiteiten n- octanol) langs de respectieve tijdstip t van hun vastberadenheid.
  5. Bepaal het tijdstip van de meting van het laatste monster als t 0. Bepaal en maak een lijst At in de min door het berekenen van At = tt 0. Voer verval gecorrigeerd Ᾱ t, volgens de formule:
    0 = Ᾱ t · 2 (At / 68 min).
  6. Bereken Ᾱ 0, W als het gemiddelde van Ᾱ 0, W1,0, W2 en Ᾱ 0, W3 en Ᾱ 0, O als het gemiddelde van Ᾱ 0, O1,0, O2 en Ᾱ 0, O3. Bereken logD met behulp van de volgende formule:
    logD = log [(Ᾱ 0, W · 33 ug)].
  7. Voer het hele experiment in drievoud en berekent het gemiddelde logD samen met de standaarddeviatie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Het ligand EOB-DTPA en de niet-radioactieve Ga (III) complex werden geanalyseerd via 1H en 13C {1H} NMR-spectroscopie, massaspectrometrie en elementanalyse. De in Tabel 1 opgesomde en in Figuren 1-6 resultaten verifiëren de zuiverheid van de stoffen.

Elutie van de 68 Ge / 68 Ga generator leverde oplossingen van 400-600 MBq 68 Ga. De beschreven labeling procedure resulteert in de vorming van de gewenste tracer 68Ga [EOB-DTPA], aangeduid als radio HPLC piek vertoont een retentietijd van 2,8 minuten (Figuur 7). Vergelijking met de retentietijd van de Ga [EOB-DTPA] standaard in het UV-vis-detector bij 220 nm (2,7 min, figuur 8) bevestigde succesvol labeling. Ongecoördineerde 68 Ga wordt gedetecteerd als radio piek bij 2,1 min (Figuur7). Het 68Ga-merkingsrendement EO-BDTPA werd onderzocht door bepaling van het labelingsopbrengst als functie van de ligandconcentratie middel van HPLC (figuur 9). De opbrengsten werden bepaald in drievoud en standaardafwijkingen werden berekend.

Afhankelijk van de pH en de concentratie van anionen in oplossing aanwezig, ongecoördineerde of ongemerkte 68Ga kunnen in verschillende soorten, bijvoorbeeld gallaten of onoplosbare hydroxide. 31 De algemene term "vrij 68Ga" 32 wordt gebruikt voor alle ongemerkte in oplossing behalve het hydroxide, dat in het algemeen als "colloïdaal 68 Ga" wordt genoemd. Onder de beschreven analyse voorwaarden, gratis 68 Ga beweegt met het oplosmiddel voorzijde (R f = 1,0) op een TLC-plaat. Colloïdaal 68Ga kan niet worden gedetecteerd door middel van HPLC, terwijl het op een TLC-plaat verschijnt als activiteitsgegevensin de oorsprong (Rf = 0). Een representatief chromatogram van een TLC-plaat geanalyseerd met TLC radioactiviteit scanner getoond in figuur 10. De tracer vertoont verschillende retentiegedrag naargelang een monster van etikettering (pH 3,8-4,0, Rf = 0,3) of een monster van fysiologisch pH (Rf = 0,5) geanalyseerd.

Om de stabiliteit van de tracer, vers gemerkte 68Ga [EOB-DTPA] werd aan monsters van fysiologische pH toegevoegd, bevattende verdund PBS (fosfaat-concentratie 5,5 mM, A), overmaat apo-transferrine (1,6 mg / ml in PBS verdund onderzoeken met een fosfaatconcentratie van 0,8 mM, B) en humaan serum (C) resp. Na verloop van tijd, de radiochemische zuiverheid (RCP t) van tracer in de monsters werd bepaald door middel van TLC. Het percentage intacte tracer werd berekend als de verhouding van RCP t tegende respectievelijke tijdstippen en RCP 0 bij het ​​beginpunt (tabel 2). Dit was noodzakelijk vanwege de etikettering oplossingen die tracer van verschillende RCP 0 (93-96%). Het aldus genormaliseerde percentage intacte tracer wordt afgebeeld als functie van de tijd in figuur 11.

Voor de bepaling van logD waterige monsters van tracer in een verdunde PBS-oplossing werden bereid. De monsters werden gemengd met n- octanol, gecentrifugeerd en vervolgens werden hoeveelheden verwijderd om de concentratie activiteit in beide fasen verdeeld. Activiteitswaarden en daaropvolgende berekening van logD daarvan zijn weergegeven in Tabel 3. De gemiddelde logD waarde 3,54 ± 0,08.

Figuur 1
Figuur 1. 1H-NMR spectrum van EOB-DTPA. < / strong> Het spectrum werd opgenomen in D 2 O op 400,1 MHz. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2. 13C {1H} -NMR spectrum van EOB-DTPA. Het spectrum werd opgenomen in D 2 O op 100,6 MHz. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 3
Figuur 3. MS van EOB-DTPA (electrospray ionisatie (ESI), methanol, negatieve modus).54334fig3large.jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 4
Figuur 4. 1H-NMR-spectrum van Ga [EOB-DTPA]. Het spectrum werd opgenomen in D 2 O op 400,1 MHz. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 5
Figuur 5. 13C {1H} -NMR spectrum van Ga [EOB-DTPA]. Het spectrum werd opgenomen in D 2 O op 100,6 MHz. Klik op haar e voor een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 6
Figuur 6. MS van Ga [EOB-DTPA] (ESI, methanol, negatieve modus), samen met een gedetailleerde weergave van de isotoop patroon van de moleculaire piek. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 7
Figuur 7. Vertegenwoordiger HPLC chromatogram van een steekproef van 68 Ga [EOB-DTPA] bevat in delen ongecoördineerde 68 Ga, zoals vastgelegd door de radioactiviteit detector. Ongecoördineerde 68 Ga vertoont een retentietijd van 2,1 min, terwijl de tracer wordt gedetecteerd bij 2,8 min .target = "_ blank"> Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 8
Figuur 8. Representatieve HPLC chromatogram van de standaard stof Ga [EOB-DTPA], zoals gedetecteerd in de UV-vis kanaal bij 220 nm. De retentietijd van de kou is standaard 2.7 min. Klik hier om een grotere versie van deze foto figuur.

figuur 9
Figuur 9. Afbeelding van 68 Ga-merkingsrendement van EOB-DTPA. De labelingsopbrengst bepaald via HPLC wordt uitgezet als functie van de concentratie van EOB-DTPA (22-29 MBq uitgangspunt vormde, pH 3,8-40,0, 5 min, RT). De standaarddeviatie wordt uitgebeeld door een fout bars. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 10
Figuur 10. Representatieve TLC chromatogram onthullen verschillende 68 Ga soorten. Een monster van 68 Ga [EOB-DTPA] in verdunde PBS (fosfaat concentratie 5,5 mM, pH = 7,4) werd geanalyseerd na 110 minuten incubatie. Voorbeeldige verdeling colloïdaal 68 Ga (Rf = 0), 68Ga [EOB-DTPA] (Rf = 0,5) en vrij 68Ga (Rf = 1,0) op een 70 mm TLC plaat zoals gedetecteerd door TLC radioactiviteit scanner gepresenteerd. Tellingen zijn verval gecorrigeerd. Klik hier voor een grotere weergaveversie van deze figuur.

figuur 11
Figuur 11. Stabiliteit bepalingen van 68 Ga [EOB-DTPA] in verschillende media. Het verval gecorrigeerde, genormaliseerde percentage van intacte tracer zoals bepaald via TLC, wordt afgeschilderd als een functie van de tijd. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken .

tafel 1
Tabel 1. Resultaten van NMR-spectroscopie, MS en elementaire analyses uitgevoerd voor EOB-DTPA en Ga [EOB-DTPA]. Relatieve MS piek intensiteiten zijn gegeven in%, opdracht om pieken worden gegeven tussen vierkante haken. CHN elementaire waarden werden bere-kend voor C 23 H 33 N 3 O 11 · H2O (EOB-DTPA) en (NH4) 0,75 H 1,25 [C 23 H 28 GaN 3 O 11] · 2H 2 O (Ga [EOB-DTPA]).

tabel 2
Tabel 2. Stabiliteit bepaling van 68Ga [EOB-DTPA] in verschillende media. De RCP van 68 Ga [EOB-DTPA] in medium A, B en C werd bepaald via TLC op gegeven tijdstippen. De samenstelling van de monsters wordt gegeven als percentages% van de tracer / free 68Ga / colloïdaal 68Ga. Het percentage van intacte tracer wordt gestandaardiseerd als verhouding van RCP t / RCP 0. RCP 0 is de respectieve RCP van de tracer op t = 0 min.


. Tabel 3. Bepaling van logD Decay gecorrigeerde waarden a 0, X van drie monsters (x = 1, 2, 3) uit elke fase (W: waterig, O: n-octanol) van een monster. Alle activiteiten zijn gegeven in cpm. LogD wordt berekend zoals beschreven in hoofdstuk 5 van het protocol. Het experiment werd tweemaal herhaald.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

EOB-DTPA is toegankelijk via een meerstapssynthese 33 maar kan evengoed worden geïsoleerd uit beschikbare contrastmiddelen bevattende gadoxetinezuur. Daartoe kan de centrale Gd (III) ionen worden geprecipiteerd met een overmaat oxaalzuur. Na het verwijderen van Gd (III) oxalaat en oxaalzuur het ligand kan worden geïsoleerd door neerslaan in koud water bij pH 1,5. Echter, om opbrengsten kolomchromatografie filtraat verbetering kan worden uitgevoerd in plaats of vervolgtraject. Beide methoden levert het analytisch zuivere ligand in totaal opbrengsten van 70% (Figuren 1-3, Tabel 1).

We vonden dat om Ga isoleren [EOB-DTPA] de pH met ammonia oplossing is voordelig vergeleken met het gebruik van natriumhydroxide, aangezien het bijproduct ammoniumchloride vanaf het hydrofiele residu met sublimatie kunnen worden verwijderd. Onder de genoemde omstandigheden vindt dit proces plaats langzamely. Aangezien niet-verwaarloosbare hoeveelheden chloride na vijf dagen nog steeds detecteerbaar, werd de resterende zout uitgewassen met methanol. Hoewel dit opwerken op gedeeltelijke verlies van Ga [EOB-DTPA] Het product werd verkregen in analytische kwaliteit met een totale opbrengst van 46% (Figuren 4-6, Tabel 1). Voor de isolatie van zowel EOB-DTPA en Ga (III) complex, het gebruik van omgekeerde fase chromatografie worden beschouwd als een alternatieve zuiveringsmethode, vooral omdat afbraak silicagel waarschijnlijk die met zeer polaire oplosmiddelen.

De etikettering Werkwijze EOB-DTPA vereist het gebruik van zeer zuivere oplosmiddelen, chemicaliën en metaalvrije apparatuur om de aanwezigheid van concurrerende metaalionen, door 68Ga aanwezig is in nanomolaire hoeveelheden (2 MBq 68 Ga in een 1,75 ml monster gelijk een nuclide concentratie van 0,14 nM). Labeling van EOB-DTPA tot 68 Ga optreedt bij pH 3,8-4,0 binnen vijf minutenutes bij kamertemperatuur. Onderzoek naar de Ga-labelingsefficiëntie 68 vereist de bepaling van de labelopbrengst terwijl de reactieomstandigheden pH, temperatuur en reactietijd en uitgangspunt vormde van 68Ga constante of een gerechtvaardigde bereik. Voor elk gegevenspunt (dwz ligand concentratie) het experiment worden ten minste driemaal uitgevoerd om een redelijke betrouwbaarheid verschaffen, aangezien de concentraties van zowel ligand en 68Ga zijn zeer dun en labelingsopbrengst derhalve gevoelig voor zelfs kleine afwijkingen van de reactieomstandigheden. Bijvoorbeeld als het 68Ga-eluaat leeftijden aliquots toenemende omvang moeten worden onttrokken om een constant uitgangsactiviteit verschaffen en aldus de volumes buffer vereisen. Bovendien veroudering van het eluaat resulteert in toenemende concentraties van het vervalproduct 68 Zn, die zich kunnen fungeren als een concurrent voor 68Ga, hetgeen negatieve gevolgen Labeling efficiency. 13,34,35 Vrijwel kwantitatieve kenmerken van 22-29 MBq 68Ga verkregen onder de bovengenoemde voorwaarden hoeveelheden EOB-DTPA ≥ 0,7 ug (Figuur 9), met een inhoud van vrije 68Ga ≤ 2% en ongeveer 5 % colloïdale 68Ga aanwezig in monsters.

Terwijl HPLC ontvangen superieure basislijnscheiding van vrij 68Ga en 68Ga [EOB-DTPA], is het niet geschikt voor colloïdale 68Ga detecteren. Daarom kozen TLC de RCP tijdens stabiliteitsmetingen, waarbij de kwantificering van transferrine of eiwitgebonden 68Ga moest bepalen. We vonden basislijnscheiding aanvaardbaar hiervoor (figuur 10); Het gebruik van size exclusion chromatografie of filtratie werkwijzen 15,36 verwijderen colloïdale fracties, gevolgd door HPLC-analyse, kunnen worden beschouwd als alternatieven. De 68 Ga complex vertoont een sterkere retention op TLC-platen (Rf = 0,3) indien het monster direct uit labelingoplossing wordt teruggetrokken ten opzichte van monsters bij fysiologische pH (Rf = 0,5). Wij stellen voor deze waarneming kan worden verklaard door de verschillende protonering staten van het complex.

In vitro stabiliteit bepalingen van 68 Ga tracers meestal uitgevoerd in PBS 15,17 of andere buffersystemen nabootsen van de fysiologische pH 37, en in oplossingen die apo-transferrine 37, die de belangrijkste concurrent 68 Ga in bloed of in humaan serum 15,17. In onze experimenten werd de toevoeging van 0,1 M natriumhydroxide-oplossing PBS werd om de pH van de monsters te passen aan 7,4. We konden niet beweren dat de fosfaatconcentratie beïnvloedt de afbraaksnelheid, aangezien experimenten stabiliteit in oplossingen van variërende concentraties fosfaat (0,8 mM en 5,5 mM (A)) leverde niet gekopieerd sccible resultaten. Echter, we vonden dat een oplossing B, die apo -transferrin (1,6 mg / ml, hetgeen binnen het bereik van de normale plasma gehalte 38) en 0,8 mM fosfaat (menselijk bloed vertoont gewoonlijk een fosfaatgehalte van 0,8-1,5 mM 39,40 ), veroorzaakt ontleding met een snelheid vergelijkbaar met die waargenomen in humaan serum (C). In oplossingen AC Na 185 minuten werd de inhoud van colloïdale 68Ga was toegenomen met ongeveer 24%, terwijl het gehalte aan vrij 68Ga met 11% in oplossing A was gestegen, 17% in oplossing B en 27% in oplossing C (Tabel 2 ). Dat 68Ga gevormd door ontleding tracer voornamelijk aanwezig als vrij 68Ga in tegenstelling tot colloïdaal of eiwitgebonden 68 Ga in B en C kan worden veroorzaakt door transferrineverzadiging of relatief langzaam transferrine bindende percentages. (Figuur 11) van 68 Ga [EOB-DTPA] is vergelijkbaar met tracers die vergelijkbaar DTPA afgeleide chelatoren. 15,16,18 gewoonlijk informatie over de vroege arteriële en veneuze perfusie fase van de lever verkregen door het uitvoeren van MRI binnen de eerste 3 minuten na toediening van 4,21 Gd [EOB-DTPA], terwijl de aanwezigheid hepatocyte wordt gedetecteerd in de vertraagde fase 20 minuten 3,4,23 tot enkele uren na injectie 21,22. Na 20 minuten in humaan serum 93% van 68 Ga [EOB-DTPA] blijven intact. Zoals verwacht, zou de signaal-ruisverhouding tegen die tijd zijn verslechterd door toenemende hoeveelheden 68Ga-transferrine, die aanwezig zijn in plasma en weefsel tot expressie transferrine receptoren, evenals gratis 68Ga gallate is. 41,42

Voor het voorspellen van een tracers weefselverdeling n- octanol / water verdelingscoëfficiënten loggenP of verdelingscoëfficiënten logD kan worden bepaald als verhouding van activiteit concentraties in beide fasen. Per definitie heeft de parameter logD geen onderscheid tussen verschillende soorten in een medium, waardoor het geschikt voor onze experimenten maakt vanwege de mogelijkheid van verschillende protonering toestanden van de tracer en de afbraak in de waterfase. Om logD bepalen door extractie het waterige medium wordt gewoonlijk gebufferd met PBS om bloed voorwaarden. 17,43-45 Om voornoemde redenen waarom we gebruikten verdund PBS na te bootsen, vertonen een fosfaatconcentratie van 0,8 mm en fysiologische pH. Na extractie met n-octanol en centrifugeren, het verwijderen van meerdere monsters uit dezelfde fase maakt onnauwkeurigheden veroorzaakt door pipetteren worden verminderd. Vanwege de zeer lage concentraties activiteit n- octanol moet men voorzichtig zijn om kruisbesmetting met de waterige fase te voorkomen en kwantitatieve brengen in een afzonderlijke flesje waarborgen. Distribution coëfficiënten die door deze procedure was reproduceerbaar, en terwijl ze zorgen voor een ruwe schatting van lipofiliciteit, een directe vergelijking met een logP van Gd [EOB-DTPA] is niet mogelijk. Vanwege het specifieke karakter van Gd [EOB-DTPA] resulteert niet in de eerste plaats uit lipofiliteit maar haar hepatobiliaire opname aanvullende experimenten in levende onderwerpen of cellen nodig zou zijn om meer uitgebreide informatie over de biologische verdeling evenals de stabiliteit in vivo van 68 Ga [EOB te verstrekken -DTPA]. Al met al, een aanvraag als imaging agent voor de perfusie en het begin van de hepatobiliaire fase is denkbaar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
primovist Bayer - 0.25 M
gallium(III) chloride Sigma-Aldrich Co. 450898
water (deionized) - - tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M VWR 20252.29
sodium hydroxide Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. 810925429
oxalic acid Sigma-Aldrich Co. 75688
ethyl acetate Brenntag GmbH 10010447
silica gel Merck KGaA 1.10832.9025 Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254 Merck KGaA 1.16834.0001
methanol VWR 20903.55
ethanol Brenntag GmbH 10018366
eiethylether VWR 23807.468 stored over KOH plates
ammonia solution (25%) VWR 1133.1
pH electrode VWR 662-1657
stirring and heating unit Heidolph 505-20000-00
pump Ilmvac GmbH 322002
frit - custom design
NMR spectrometer Bruker Coorporation - Ultra Shield 400
mass spectrometer Thermo Fisher Scientific Inc. -
elemental analyser Hekatech GmbH Analysentechnik - EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O euriso-top D214 99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator ITG Isotope Technologies Garching GmbH A150
pump and dispenser system Scintomics GmbH - Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur) Merck KGaA 1.00318.1000
water (ultrapur) Merck KGaA 1.01262.1000
sodium chloride (suprapur) Merck KGaA 1.06406.0500
sodium acetate (suprapur) Merck KGaA 1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur) Merck KGaA 1.00066.0250
sodium citrate dihydrate VEB Laborchemie Apolda 10782 >98.5%
PS-H+ Cartridge (S) Macherey-Nagel 731867 Chromafix
apo-Transferrin Sigma-Aldrich Co. T2036
PBS buffer (tablets) Sigma-Aldrich Co. 79382
human serum Sigma-Aldrich Co. H4522 from human male AB plasma
flasks, columns, etc. custom design
pH electrode Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG 765-Set
binary pump (HPLC) Hewlett-Packard G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC) Hewlett-Packard G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC) EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column Advanced Chromatography Technologies Ltd. ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials GTG Glastechnik Graefenroda GmbH 8004-HP-H/i3µ
pipette Eppendorf -
plastic vials Sarstedt AG & Co. 6542.007
plastic vials Greiner Bio-One International GmbH 717201
activimeter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2010
tweezers custom design
incubator Heraeus Instruments GmbH 51008815
vortex mixer Fisons - Whirlimixer
centrifuge Heraeus Instruments GmbH 75003360
gamma well counter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2100
water for chromatography Merck KGaA 1.15333.2500
acetonitrile for chromatography Merck KGaA 1.00030.2500
trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich 91707
TLC radioactivity scanner raytest Isotopenmessgeräte GmbH B00003875 equipped with beta plastic detector

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Weinmann, H. J., et al. A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI. Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).
  2. Stroszczynski, C., et al. Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln. Radiologe. 44, 1185 (2004).
  3. Van Beers, B. E., Pastor, C. M., Hussain, H. K. Primovist, Eovist - what to expect. J. Hepatol. 57, 421-429 (2012).
  4. Zech, C. J., Herrmann, K. A., Reiser, M. F., Schoenberg, S. O. MR Imaging in Patients with Suspected Liver Metastases: Value of Liver-specific Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Magn. Reson. Med. Sci. 6, 43-52 (2007).
  5. Leonhardt, M., et al. Hepatic Uptake of the Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA: Role of Human Organic Anion Transporters. Drug Metab. Dispos. 38, 1024-1028 (2010).
  6. Wadas, T. J., Wong, E. H., Weisman, G. R., Anderson, C. Coordinating Radiometals of Copper, Gallium, Indium, Yttrium, and Zirconium for PET and SPECT Imaging of Disease. J. Chem. Rev. 110, 2858-2902 (2010).
  7. Ametamey, S. M., Honer, M., Schubiger, P. A. Molecular Imaging with PET. Chem. Rev. 108, 1501-1516 (2008).
  8. Cutler, C. S., Hennkens, H. M., Sisay, N., Huclier-Markai, S., Jurisson, S. S. Radiometals for Combined Imaging and Therapy. Chem. Rev. 113, 858-883 (2013).
  9. Henze, M., et al. PET Imaging of Somatostatin Receptors Using [68GA]DOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide: First Results in Patients with Meningiomas. J. Nucl. Med. 42, 1053-1056 (2001).
  10. Hofmann, M., et al. Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand 68Ga-DOTATOC: preliminary data. Eur. J. Nucl. Med. 28, 1751-1757 (2001).
  11. Blau, M., Nagler, W., Bender, M. A. Fluorine-18: a new isotope for bone scanning. J. Nucl. Med. 3, 332-334 (1962).
  12. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium Radiopharmaceutical Chemistry. Int. J. Radiat. Appl. Instrum. B. 16, 435-448 (1989).
  13. Rösch, F. Past, present and future of 68Ge/68Ga generators. Appl. Radiat. Isot. 76, 24-30 (2013).
  14. Liu, S. The role of coordination chemistry in the development of target-specific radiopharmaceuticals. Chem. Soc. Rev. 33, 445-461 (2004).
  15. Haubner, R., et al. Development of (68)Ga-labelled DTPA galactosyl human serum albumin for liver function imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 40, (68), 1245-1255 (2013).
  16. Yang, W., Zhang, X., Liu, Y. Asialoglycoprotein Receptor-Targeted Radiopharmaceuticals for Measurement of Liver Function. Curr. Med. Chem. 21, 4-23 (2014).
  17. Chauhan, K., et al. 68Ga based probe for Alzheimer's disease: synthesis and preclinical evaluation of homodimeric chalcone in β-amyloid imaging. Org. Biomol. Chem. 12, 7328-7337 (2014).
  18. Chakravarty, R., Chakraborty, S., Dash, A., Pillai, M. R. A. Detailed evaluation on the effect of metal ion impurities on complexation of generator eluted 68Ga with different bifunctional chelators. Nucl. Med. Biol. 40, 197-205 (2013).
  19. Clevette, D. J., Orvig, C. Comparison of ligands of differing denticity and basicity for the in vivo chelation of aluminum and gallium. Polyhedron. 9, 151-161 (1990).
  20. Prinsen, K., et al. Development and evaluation of a 68Ga labeled pamoic acid derivative for in vivo visualization of necrosis using positron emission tomography. Bioorg. Med. Chem. 18, 5274-5281 (2010).
  21. Vogl, T. J., et al. Liver tumors: comparison of MR imaging with Gd-EOB-DTPA and Gd-DTPA. Radiology. 200, 59-67 (1996).
  22. Reimer, P., et al. Phase II clinical evaluation of Gd-EOB-DTPA: dose, safety aspects, and pulse sequence. Radiology. 177-183 (1996).
  23. Ba-Ssalamah, A., et al. MRT der Leber. Radiologe. 44, 1170-1184 (2004).
  24. Scott, R. P. W. Journal of Chromatography Library. 22A, Elsevier Scientific Publishing Co. A137-A160 (1983).
  25. Reichenbaecher, M., Popp, J. Strukturanalytik organischer und anorganischer Verbindungen. 1st, B. G. Teubner Verlag. Wiesbaden. (2007).
  26. Gross, J. H. Mass Spectrometry: A Textbook. Springer. (2004).
  27. Ma, T. S., Rittner, R. C. Modern Organic Elemental Analysis. Marcel Dekker, Inc. (1979).
  28. Mueller, D., et al. Simplified NaCl Based 68Ga Concentration and Labeling Procedure for Rapid Synthesis of 68Ga Radiopharmaceuticals in High Radiochemical Purity. Bioconjugate Chem. 23, 1712-1717 (2012).
  29. Roberts, T. R. Radio-column chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 103-132 (1978).
  30. Roberts, T. R. Radio-thin-layer chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 45-83 (1978).
  31. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium radiopharmaceutical chemistry. Nucl. Med. Biol. 16, 435-448 (1989).
  32. Notni, J., Plutnar, J., Wester, H. J. Bone-seeking TRAP conjugates: surprising observations and their implications on the development of gallium-68-labeled bisphosphonates. EJNMMI Res. 2, 13 (2012).
  33. Schmitt-Willich, H., et al. Synthesis and Physicochemical Characterization of a New Gadolinium Chelate: The Liver-Specific Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Inorg. Chem. 38, 1134-1144 (1999).
  34. 68Ga generator for positron emission tomography. Zhernosekov, K., Nikula, T. DE102010037964B3 (2012).
  35. Simecek, J., Hermann, P., Wester, H. J., Notni, J. How is 68Ga Labeling of Macrocyclic Chelators Influenced by Metal Ion Contaminants in 68Ge/68Ga Generator Eluates? ChemMedChem. 8, 95-103 (2013).
  36. Baur, B., et al. Synthesis, Radiolabelling and In Vitro Characterization of the Gallium-68-, Yttrium-90- and Lutetium-177-Labelled PSMA Ligand, CHX-A''-DTPA-DUPA-Pep. Pharmaceuticals (Basel). 7, 517-529 (2014).
  37. Boros, E., et al. RGD conjugates of the H2dedpa scaffold: synthesis, labeling and imaging with 68Ga. Nucl. Med. Biol. 39, 785-794 (2012).
  38. Beck, W. S. Hematology. 5th, MIT press. Cambridge, Massachusetts. (1998).
  39. Patel, V., Morrissey, J. Practical and Professional Clinical Skills. 1, Oxford University Press Inc. New York. (2001).
  40. Bartke, A., Constanti, A. Basic Endocrinology. 1, CRC Press. (1998).
  41. Bernstein, L. R. Mechanisms of Therapeutic Activity for Gallium. Pharmacol. Rev. 50, 665-682 (1998).
  42. Clausen, J., Edeling, C. J., Fogh, J. 67Ga Binding to Human Serum Proteins and Tumor Components. Cancer Res. 34, 1931-1937 (1974).
  43. Dumont, R. A., et al. Novel 64Cu- and 68Ga-Labeled RGD conjugates show improved PET imaging of αvβ3 integrin expression and facile radiosynthesis [Erratum to document cited in CA156:116856. J. Nucl. Med. 52, 1498 (2011).
  44. Pohle, K., et al. 68Ga-NODAGA-RGD is a suitable substitute for 18F-Galacto-RGD and can be produced with high specific activity in a cGMP/GRP compliant automated process. Nucl. Med. Biol. 39, 777-784 (2012).
  45. Notni, J., Pohle, K., Wester, H. J. Be spoilt for choice with radiolabelled RGD peptides: Preclinical evaluation of 68 Ga-TRAP(RGD)3. Nucl. Med. Biol. 40, 33-41 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics