एक दोहराव concussive चूहे में सिर में चोट मॉडल

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Yang, Z., Lin, F., Weissman, A. S., Jaalouk, E., Xue, Q. s., Wang, K. K. A Repetitive Concussive Head Injury Model in Mice. J. Vis. Exp. (116), e54530, doi:10.3791/54530 (2016).

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Abstract

Introduction

हिलाना, यह भी कहा जाता हल्का घाव मस्तिष्क की चोट (mTBI), घाव मस्तिष्क चोट (TBI) का सबसे लगातार घटना है और संयुक्त राज्य अमेरिका में लोगों के लाखों लोगों को प्रभावित करता है। Concussions के निदान के लिए मुश्किल हो सकता है और चोट के लिए कोई विशेष इलाज नहीं है। वहाँ एक से बढ़ मान्यता और कुछ सबूत हल्के यांत्रिक आघात खेल चोटों, सैन्य मुकाबला, और अन्य शारीरिक रूप से आकर्षक व्यवसाय का परिणाम संचयी और पुरानी न्यूरोलॉजिकल परिणामों 1,2 हो सकता है। हालांकि, अब भी concussions और उनके प्रभाव के बारे में ज्ञान की कमी है। वर्तमान कार्यप्रणाली मनुष्यों में विकृति और उपचार के अध्ययन के बाद से ही प्रतिबंधित तंत्रिका संबंधी आकलन और मूल्यांकन इमेजिंग नैदानिक ​​निदान के लिए उपलब्ध हैं। पशु मॉडलों आगे निदान और mTBI के इलाज की आशा के साथ एक कुशल, कठोर, और नियंत्रित तरीके से concussions अध्ययन करने के लिए एक साधन प्रदान करते हैं।

अध्ययन पारंपरिक TBI ढाल लिया हैइस तरह नियंत्रित cortical प्रभाव (सीसीआई) के रूप में मॉडल, तरल पदार्थ से टक्कर प्रभाव (एफपीआई), वजन ड्रॉप चोट, और विस्फोट चोट mTBI प्रदर्शन और चोट के मानकों को बदलने से कम चोट कठोर अनुशासन को प्रोत्साहित करने के लिए। इन मॉडलों को मस्तिष्क आघात आकृति विज्ञान नैदानिक ​​स्थिति के लिए इसी तरह दोहराने के लिए उनकी क्षमता के कारण का उपयोग करने के लिए फायदेमंद होते हैं; हालांकि, वे भी अपनी सीमाएं हैं। एक त्वरण चोट (वजन ड्रॉप) द्वारा प्रेरित चोट की गंभीरता को अक्सर अत्यधिक चर रहा है। हल्के सीसीआई के दो परिणाम - subarachnoid नकसीर और फोकल नील - ठेठ मानव concussions के साथ तुलनीय नहीं हैं। सीसीआई और एफपीआई, एक craniotomy, जो नैदानिक प्रासंगिक नहीं है की आवश्यकता होती है, जबकि विस्फोट चोट अलग जोखिम की स्थिति और शिखर दबाव माप के संबंध में अधिक विवादास्पद मॉडल के रूप में अच्छी तरह से जोखिम 3-6 दौरान चर माध्यमिक चोट है। एक अद्यतन concussive पशु मॉडल कि नैदानिक ​​setti में पूर्व नैदानिक ​​अनुसंधान अनुवाद कर सकते हैंएनजी अनुसंधान के क्षेत्र में आवश्यक है।

हल्के TBI मॉडलिंग में प्रमुख मुद्दा प्रयोगात्मक चोट की गंभीरता है, जो सबसे निकट एक नैदानिक ​​सेटिंग में चोट प्रतिकृति को परिभाषित करने के लिए है। हाल ही में, विभिन्न अनुसंधान समूहों बंद सिर पर चोट या concussive सिर पर चोट (ची) मॉडल 7-10 विकसित की है। ची एक craniotomy बिना सीसीआई के एक संशोधन है, लेकिन यह अभी भी एक सिर प्रभाव उत्पन्न करने के लिए एक पारंपरिक इलेक्ट्रॉनिक चुंबकीय प्रभाव प्रणाली का उपयोग करता है। एक ची प्रभाव मानकों का समायोजन करके मध्यम करने के लिए एक हिलाना हल्के से लेकर पैदा कर सकते हैं। चेतना (एलओसी) के नुकसान साँस लेने की दर या सांस लेने के क्षणिक समाप्ति में कमी का पता लगाने के द्वारा एक प्रभाव के बाद तुरंत देखा जा सकता है। नियंत्रण रेखा की अवधि चोट की गंभीरता को निर्धारित करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इस पत्र चूहों में एक दोहराव ची (rCHI) मॉडल के एक से थोड़ा सुधार हुआ है और अद्यतन संस्करण, एक विस्तृत कदम-दर-कदम प्रोटोकॉल और प्रतिनिधि परिणामों के साथ शामिल है। rCHI मॉडल अनुसंधान रणनीतियों एकmTBI प्रभाव और संभावित उपचार का निर्धारण करने में लाभकारी रहे हैं, खासकर के बाद से वहाँ कोई व्यक्ति पशु मॉडल हिलाना प्रेरित रोग परिवर्तन के सभी नकल करने में सक्षम है।

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Protocol

सभी प्रक्रियाओं प्रोटोकॉल # 201207692 फ्लोरिडा विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा और देखभाल और प्रयोगशाला पशु के उपयोग के लिए स्वास्थ्य गाइड के राष्ट्रीय संस्थानों के अनुसार अनुमोदित के तहत प्रदर्शन किया गया।

1. पशु की देखभाल

  1. 3-4 महीने की उम्र में पुरुष C57BL / 6J चूहों का प्रयोग करें। बिस्तर, घोंसले के शिकार सामग्री, भोजन, और पानी यथेच्छ प्रदान करें। लगातार 12 घंटे की प्रकाश / 12 घंटे की अंधेरे के चक्र के साथ 22 डिग्री सेल्सियस - 20 पर नियंत्रित परिवेश तापमान में चूहों रखें।

2. पूर्व कसाव तैयारी

  1. एक विद्युत चुम्बकीय प्रभाव stereotaxic डिवाइस के लिए एक कस्टम बनाया सिलिकॉन रबर लेपित धातु टिप देते हैं। सुनिश्चित करें कि टिप के फ्लैट नीचे जांच टिप (चित्रा 1 ए) की सतह के समानांतर है बनाओ।
  2. 4% isoflurane 2.5% isoflurane के रखरखाव संज्ञाहरण के द्वारा पीछा के साथ माउस anesthetize। फ्लो मीटर के माध्यम से संज्ञाहरण की जाँच करें। monitoआर जानवर तक संज्ञाहरण स्तर पेडल वापसी पलटा के नुकसान दिखा कर संज्ञाहरण के एक शल्य चिकित्सा के स्तर तक पहुँचता है।
  3. एक हीटिंग पैड पर एक प्रवण स्थिति में माउस रखो। संज्ञाहरण के तहत माउस रखने के लिए एक कीप के आकार का नाक शंकु का प्रयोग करें। पूरी तरह से एक trimmer का उपयोग कर सिर दाढ़ी। जबकि संज्ञाहरण के तहत सूखापन को रोकने के लिए माउस की आँखों पर वेसिलीन नेत्र मरहम का प्रयोग करें।

3. प्रभाव मानकों की स्थापना

ध्यान दें: प्रभाव प्रणाली प्रभाव मानकों को स्थापित करने के लिए एक नियंत्रण बॉक्स, कसाव प्रदर्शन करने के लिए एक actuator, और साथ 3-आंदोलन कुल्हाड़ियों एक डिजिटल स्टीरियोटैक्टिक फ्रेम भी शामिल है।

  1. 4 मीटर / सेकंड के लिए प्रभाव डिवाइस के वेग पूर्व निर्धारित और नियंत्रण बॉक्स पर 240 मिसे के लिए समय ध्यान केन्द्रित करना।

4. पोजिशनिंग प्रभाव केंद्र

  1. जानवर के शरीर के तहत एक नरम हीटिंग पैड रखो 39 डिग्री सेल्सियस के पास शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए। एक pron में एक stereotactic फ्रेम में माउस माउंटकुंद अंत कान सलाखों के साथ ई स्थिति।
  2. प्रभाव टिप जेड ड्राइवर को ले जाकर माउस के सिर के पास कम करें। रास्ते के मध्य में एक्स और वाई-चालकों के बढ़ने के लिए लक्ष्य बाण सिवनी ऊपर निर्देशांक द्वारा फ्लैट प्रभाव टिप (9 मिमी व्यास) समायोजित करें।
  3. खड़ी दो कान (चित्रा 1 सी) के बीच तैयार एक काल्पनिक क्षैतिज रेखा के समानांतर है प्रभाव टिप का यकीन है कि एक किनारे बनाओ। प्रभाव के केंद्र interfrontal और lambdoid टांके के बीच केंद्रीय बाण सिवनी मिडवे से मेल खाती है (interaural 9 मिमी 0 मिमी, 4.5 मिमी पार्श्व interaural के लिए)।

5. प्रभाव गहराई सेटिंग

  1. सही ढंग से प्रभाव गहराई सेट करने के लिए, अछूता सिलिकॉन रबर लेपित प्रभाव टिप को बदलने के लिए अतिरिक्त जांच टिप का उपयोग करें।
  2. यकीन स्विचन सुझावों के बाद प्रभाव केंद्र का कोई बदलाव, टिप्स स्विच करने से पहले शून्य करने के लिए एक्स और डिजिटल stereotaxic नियंत्रण कक्ष पर Y चैनल सेट है बनाने के लिए।
  3. समस्या को ले जाएँमैन्युअल एक्स और वाई-ड्राइव ले जाकर प्रभाव क्षेत्र के केंद्र के लिए ई टिप।
  4. माउस की पूंछ के लिए क्लिप संपर्क सेंसर।
  5. जब तक जांच टिप प्रभाव साइट की सतह से छू नीचे impactor (जेड ड्राइव) ले जाएँ।
  6. शून्य करने के लिए stereotaxic नियंत्रण कक्ष पर जेड चैनल सेट करें।
  7. प्रभाव टिप वापस प्रभाव क्षेत्र के लिए मैन्युअल रूप से एक्स और वाई-ड्राइवरों तक एक्स और वाई-ड्राइवरों (डिजिटल stereotaxic नियंत्रण कक्ष पर शून्य बटन) का समायोजन करके ले जाएँ शून्य (जहां प्रभाव टिप पहले से तैनात किया गया था) कर रहे हैं।
  8. नियंत्रण बॉक्स पर वापस लेना स्विच ले जाकर actuator वापस लेना। मैन्युअल 4 मिमी से नीचे impactor (जेड चालक) के लिए कदम।

6. प्रभाव

  1. नियंत्रण बॉक्स पर प्रभाव स्विच क्लिक करके प्रभाव ट्रिगर और 4 मिमी की एक विकृति गहराई को प्राप्त।

7. पोस्ट-कसाव

  1. प्रभाव से समय को मापने के लिए जब तक माउस की पहली सांस एक टाइमर का उपयोग कर।
  2. जानवर एक साफ पिंजरे में वापस लौटने से पहले वसूली के लिए अनुमति दें। जब तक पूरी तरह से बरामद अन्य जानवरों की कंपनी के लिए एक जानवर वापस नहीं है।
  3. ध्यान से देखें और दैनिक चूहों का वजन। चूहों दर्द के लक्षण दिखाने के लिए, intraperitoneally 1 पर Meloxicam के साथ उन्हें इंजेक्षन - 24 घंटा - 2 मिलीग्राम / हर 12 किलो।

8. दोहराव कसाव

  1. चूहों 10 प्रारंभिक चोट (प्रभावों के बीच 72 घंटा के अंतराल) के बाद दिन 4, 7 पर अतिरिक्त चोटों दे दो, और।

9. immunohistochemistry (आईएचसी)

  1. Transcardial छिड़काव
    1. 200 मीटर / किलो pentobarbital साथ intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से चूहों anesthetize।
    2. आकलन और एक पैर की अंगुली चुटकी द्वारा शल्य विमान संज्ञाहरण आश्वासन देता हूं। सेकंडUre धीरे एक रासायनिक धूआं हुड के अंदर एक स्टायरोफोम काम की सतह के लिए forepaws और हिंद पंजे टेप से लापरवाह स्थिति में माउस।
    3. सिर्फ हंसली को जिफाएडा प्रक्रिया नीचे से वक्ष midline के साथ त्वचा के माध्यम से एक चीरा। जिफाएडा प्रक्रिया में दो अतिरिक्त त्वचा चीरों बनाओ और उदर ribcage laterally के आधार के साथ आगे बढ़ें।
    4. वक्ष गुहा खोलें और वक्ष मांसलता और ribcage के माध्यम से काटने से दिल को बेनकाब।
    5. कुंद संदंश के साथ दिल की धड़कन को सुरक्षित और एक 1 बनाने के लिए - बाएं वेंट्रिकल में 2 मिमी चीरा।
    6. इसके तत्काल बाद सही आलिंद में एक तितली सुई डालें। सिरिंज धीरे धीरे धक्का द्वारा 20 मिलीलीटर खारा के अर्क शुरू करो।
    7. खारा से 4% paraformaldehyde में स्विच करें। paraformaldehyde के 20 मिलीलीटर के साथ छिड़काव जारी रखें।
    8. माउस सिर काटना और कैंची के साथ त्वचा को हटा दें। खोपड़ी एक हड्डी कटर का उपयोग करने से मस्तिष्क अलग।
  2. सीसेक्शनिंग ryostat
    1. -80 डिग्री सेल्सियस पर इष्टतम काटने तापमान (अक्टूबर) तैयार करने और फ्रीज में एम्बेड मस्तिष्क के ऊतकों। cryostat में मस्तिष्क एक बाण के अभिविन्यास में रखें। कट मस्तिष्क वर्गों 5 माइक्रोन मोटी।
  3. धुंधला हो जाना
    1. 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर जमे हुए वर्गों सूखी।
    2. 100 0.1% ट्राइटन X-100 फॉस्फेट बफर खारा में (पीबीएस) आरटी पर 1 घंटे के लिए 2% बकरी सीरम के μl और साथ स्लाइड्स सेते हैं।
    3. स्लाइड पीबीएस के 300 μl के साथ 3 बार धोएं। 4 डिग्री सेल्सियस पर: (200 1) अलग से रात के ऊपर या विरोधी ferritin एंटीबॉडी: तो फिर विरोधी GFAP (200 1) के साथ स्लाइड्स सेते हैं।
    4. स्लाइड पीबीएस के 300 μl के साथ 3 बार धोएं। तब बायोटिन संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए स्लाइड सेते हैं।
    5. स्लाइड पीबीएस के 300 μl के साथ 3 बार धोएं। फिर कमरे के तापमान पर avidin बायोटिन परिसर (एबीसी) समाधान (1:50) 30 मिनट के लिए स्लाइड के साथ सेते हैं।
    6. स्लाइड पीबीएस के 300 μl के साथ 3 बार धोएं। 8 मिनट - तो फिर 3,3'-diaminobenzidine 5 के लिए (थपका) सब्सट्रेट समाधान (50 मिलीलीटर पीबीएस, 10 μl एच 22, 10 मिलीग्राम थपका गोली, उपयोग करने से पहले फिल्टर) में सेते हैं। खुर्दबीन के नीचे स्लाइड का निरीक्षण करें जब तक सकारात्मक कोशिकाओं दिखाई देते हैं।
    7. 5 मिनट के लिए धीमी गति से चल नल के पानी में स्लाइड्स कुल्ला। एक प्रयोगशाला पोंछ के साथ स्वच्छ स्लाइड। फिर बढ़ते मध्यम और coverslip के साथ वर्गों माउंट।

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Representative Results

इस मॉडल (चित्रा 1 एसी) में, वहाँ हांफते और उथले श्वास का संक्षिप्त अवधि के थे। चेतना (बेहोश) का नुकसान साँस लेने की दर या एक सामान्य श्वसन शुरू करने से पहले सांस लेने के क्षणिक समाप्ति में कमी के रूप में परिभाषित किया गया है। सिर के केंद्र पर एक प्रभाव अल्पकालिक बेहोशी की वजह से (7.5 ± 4.7, 7.8 ± 5.5, 10.2 ± 8.8, अलग से प्रत्येक प्रभाव में 9.5 ± 8.0 सेकंड, चित्रा -1)। माउस दिमाग एच ई ऊतकीय धुंधला हो जाना, जो प्रभाव (2A चित्रा) से उत्पन्न कोई स्पष्ट संरचनात्मक घावों या ऊतकों को नुकसान संकेत दिया द्वारा सामान्य आकृति विज्ञान दिखाया। TBI के जवाब में, astrocytes सक्रियण, प्रसार, या प्रतिक्रियाशील gliosis 11,12 सहित कुछ परिवर्तन से गुजरना करने के लिए जाना जाता है। वृद्धि glial fibrillary अम्लीय प्रोटीन (GFAP) बड़े सेल निकायों और मोटी synapses के साथ सकारात्मक कोशिकाओं को सक्रिय astrocytes हैं। corpurCHI माउस दिमाग से है callosum पिछले प्रभाव (चित्रा 2 बी) के बाद 7 दिनों में astrocytes सक्रियण के स्पष्ट लक्षण दिखाई।

ऊतक में Microbleeds mTBI में आम हैं और हीमोग्लोबिन 13 से लोहे की रिहाई के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। सीरम में आयरन अधिभार नैदानिक सेटिंग में 13 ferritin परीक्षण से पता लगाया जा सकता है। माउस कोर्टेक्स में ferritin immunopositive कोशिकाओं पिछले प्रभाव के एक दिन बाद पाया जाता है और कम से कम सात दिनों तक चली, सुझाव है कि कई impactions cortical microbleeds (चित्रा -2) में हो सकता है कर रहे थे।

आकृति 1
चित्रा 1. दोहराव concussive सिर पर चोट के एक माउस मॉडल। (ए) कस्टम-1 मिमी मोटी सिलिकॉन रबर लेपित टिप एक जांच टिप के साथ व्यास में 9 मिमी को मापने। (बी) एक माउस मीटर हैशरीर के तहत एक नरम हीटिंग पैड के साथ एक प्रवण स्थिति में एक stereotactic फ्रेम में ounted। (सी) प्रभाव केंद्र पोजीशनिंग। प्रभाव टिप के किनारे खड़ी दो कानों के बीच तैयार की गई एक काल्पनिक क्षैतिज रेखा के समानांतर है। प्रभाव केंद्र interfrontal और lambdoid टांके के बीच बीच में करने के लिए (interaural 9 मिमी 0 मिमी, 4.5 मिमी पार्श्व interaural करने के लिए) से मेल खाती है। (डी) एपनिया साँस लेने के क्षणिक समाप्ति की संक्षिप्त अवधि के रूप में परिभाषित किया गया है। मतलब और एसडी कम पैनल में दिखाया जाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. दोहराव concussive सिर में चोट के लिए प्रोटोकॉल। (ए, बाएं) एक माउस मस्तिष्क 4% paraformaldehyde के साथ छिड़काव के बाद हटा दिया गया था। कोई ऊतकों को नुकसान मिला था। (बी) के जैव रासायनिक मार्कर के gliosis (GFAP) के लिए महासंयोजिका में 7 दिन आखिरी चोट के बाद बढ़ाएँ। स्केल बार = 200 माइक्रोन। (सी) immunohistochemistry द्वारा, ferritin-एच-चेन की चोट के बाद मस्तिष्क प्रांतस्था में व्यक्त किया जा करने के लिए मिला था। डालने चित्रों सकारात्मक कोशिकाओं बढ़ाया का प्रतिनिधित्व करते हैं। स्केल बार = 200 माइक्रोन। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

मस्तिष्क की चोटों आकृति विज्ञान नैदानिक ​​स्थिति के लिए इसी तरह की नकल करने के लिए, बाद हिलाना लक्षण उम्मीद कर रहे हैं। पोस्ट-हिलाना लक्षण आम तौर पर सिर दर्द, चक्कर आना, चक्कर, थकान, स्मृति और नींद की समस्या, परेशानी को ध्यान केंद्रित करने के साथ ही चिंता है, और उदास मन शामिल हैं। चूंकि दैहिक लक्षणों अभी तक पशु मॉडल में औसत दर्जे का नहीं हो सकता है, मोटर और संज्ञानात्मक समारोह और भावनात्मक व्यवहार के परिवर्तन तर्क से पशु मॉडल में हिलाना के मूल्यांकन के लिए मापदंड के रूप में उपयोग किया जाता है। पिछले एक सूचना अध्ययन में यह दिखाया गया था कि rCHI माउस मॉडल स्थानिक सीखने, स्मृति, और चिंता 8 में घाटे लाती है। इससे भी महत्वपूर्ण बात, इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल rCHI मॉडल आक्रामक मस्तिष्क की चोट या मस्तिष्क की संरचना में फ्रैक्चर, जो दोनों के खून बह रहा है, नकसीर, सूजन, या तीव्र कोशिका मृत्यु / ऊतक नुकसान हो सकता है बिना नैदानिक ​​सेटिंग का प्रतिनिधित्व करता है।

निम्नलिखित सफलतापूर्वक लगातार concussio मॉडलिंग के लिए महत्वपूर्ण सुझाव दिए गए हैंn / mTBI एक इलेक्ट्रॉनिक चुंबक प्रभाव प्रणाली का उपयोग:

सीधे पहली मस्तिष्क में चोट है कि प्रभाव के दौरान आंदोलन की वजह से हो सकता है के बाद एक दूसरे मस्तिष्क की चोट से बचें। माउस सिर प्रभाव के दौरान थोड़ा नीचे स्थानांतरित कर सकते हैं। एक मस्तिष्क मुश्किल जमीन या सिर खींच के खिलाफ एक त्वरित आंदोलन की वजह से नील से बचने के लिए एक नरम हीटिंग पैड माउस शरीर के तहत रखा जाना चाहिए। सिर और शरीर भी क्षैतिज रखा जाना चाहिए। इसके अलावा, कुंद अंत कान सलाखों का उपयोग स्टीरियोटैक्टिक फ्रेम में माउस सिर ठीक करने के लिए, और उन्हें कान नहर के अंदर डालने नहीं है। इस आंदोलन के दौरान तेज सिरों की वजह से चोट से माउस सुरक्षा करता है।

सही ढंग से प्रभाव केंद्र की स्थिति और शून्य की स्थापना। खुले सिर पर चोट के विपरीत, प्रभाव टिप स्थिति अपेक्षाकृत मुश्किल है। प्रभाव टिप और प्रभाव केंद्र के आकार की चोट की गंभीरता और घावों प्रभावित करते हैं। माउस मस्तिष्क शरीर रचना के आधार पर, प्रभाव केंद्र रास्ते के मध्य के अनुरूप बनाया गया हैinterfrontal और lambdoid टांके के बीच (interaural 9 मिमी 0 मिमी, 4.5 मिमी पार्श्व interaural के लिए)। इस प्रकार, एक अनुकूलित 9 मिमी टिप आवश्यक है। प्रभाव टिप लक्ष्य को समायोजित किया जाना चाहिए बाण सिवनी रास्ते के मध्य में ऊपर का समन्वय, और प्रभाव टिप के एक किनारे खड़ी दो कान (चित्रा 1 सी) के बीच तैयार एक काल्पनिक क्षैतिज रेखा के समानांतर होना चाहिए। एक सिलिकॉन रबर कोटिंग ब्लॉक के साथ अछूता प्रभाव टिप संपर्क सेंसर और प्रभाव गहराई सेटिंग से बचाता है। एक जांच टिप की जरूरत है और प्रभाव नोक पर बटन की सतह के समानांतर होना चाहिए। प्रभाव के केंद्र stereotaxic साधन का संचालन करके जांच टिप छू साइट के लिए निकाला जाता है। नमक के साथ सिर स्क्रबिंग विद्युत संवेदनशीलता बढ़ जाती है। इसके अलावा, जांच हटाने योग्य या प्रभाव के दौरान मस्तिष्क को चोट नहीं बनाया गया है। एक वैकल्पिक तरीका एक ही लंबाई के साथ दो सुझाव का निर्माण होता है; एक टिप सिलिकॉन रबर और अन्य टिप के साथ लेपित धातु होगा, जो हो जाएगाएक जांच टिप के रूप में इस्तेमाल किया। दो सुझाव स्थिति और प्रभावित के बीच बंद किया जाना चाहिए।

एक प्रभाव के तुरंत बाद माउस के संक्षिप्त बेहोश लक्षणों की निगरानी। जैसा कि ऊपर चर्चा की, सबसे बाद संघट्टन लक्षण एक प्रयोगशाला माउस पशु मॉडल में तुरंत निरीक्षण करने के लिए मुश्किल हो जाता है। mTBI रोगियों की चोट के बाद चेतना का एक संक्षिप्त नुकसान का अनुभव कर सकता है। दिखाई चोट मानकों को स्थापित करने के लिए, चेतना का एक संक्षिप्त हानि इस concussive TBI मॉडल की वैधता का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल एक लक्षण था। चेतना (एलओसी) के नुकसान सामान्य रूप से TBI रोगियों में चोट की गंभीरता वर्गीकृत करने के लिए मापदंड के रूप में प्रयोग किया जाता है। सबसे खेल से संबंधित concussions में नियंत्रण रेखा की अवधि कम से कम एक मिनट 14 है। इस तरह के प्रभाव की गति और समय ध्यान केन्द्रित करना है के रूप में प्रयोगात्मक शर्तों, अनुकूलन, नियंत्रण रेखा एक प्रभाव के बाद कम से कम 10 सेकंड है। इष्टतम प्रभाव हालत एक 4 मिमी प्रभाव गहराई, 240 मिसे समय ध्यान केन्द्रित करना है, और 4 एम / एस के प्रभाव की गति। प्रभाव गति में वृद्धि हुई है और ध्यान केन्द्रित करनासमय समय की एक बड़ी राशि है, जो श्वसन अवसाद से तुरंत गंभीर मस्तिष्क की चोट या मौत में परिणाम सकता है पर तीव्र वृद्धि हुई intracranial दबाव का कारण बन सकता है। चूहे प्रत्येक प्रभाव के बाद शरीर के वजन खो देंगे, लेकिन वसूली के 72 घंटे के बाद वजन में आ जाएगा। 72 घंटा के अंतराल दोहराव अपने खेल के लिए लौटने से पहले घायल एथलीटों के लिए एक वसूली अवधि नकल करने के लिए चुना जाता है।

चेतना और श्वसन मुद्दों के नुकसान के अलावा, एक हिलाना के क्लिनिक लक्षण आक्षेप, सिर दर्द, चक्कर आना, मतली और उल्टी शामिल कर सकते हैं। मॉडल में, मस्तिष्क दर्द जानवरों के लिए बहुमत असहज लक्षण हो सकता है। शारीरिक हालत स्कोर और दर्द श्रेणी विवरण मानवीय समापन के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए। इसके अलावा, इस तरह के अनियंत्रित जब्ती, सहज चक्कर व्यवहार, संतुलन की हानि और चलना या खड़े करने में असमर्थ के रूप में अन्य विशिष्ट मस्तिष्क संबंधी समापन rCHI विशेष मानवीय समापन के रूप में माना जाना चाहिए। चूंकि यह एक मामूली चोट मॉडल, सामान्य रूप से कोई उल्लेखनीय हैदर्द की ficant संकेत पोस्ट प्रत्येक प्रभाव मनाया जाता है। दर्दनाशक दवाओं को आम तौर पर मस्तिष्क की चोट के इस स्तर पर अनावश्यक हैं। इस प्रोटोकॉल एक दोहराव concussive हल्के TBI मॉडलिंग के लिए विस्तृत महत्वपूर्ण कदम है। वेग और प्रत्येक प्रभाव की गहराई चोट के वांछित गंभीरता के आधार पर समायोजित किया जा सकता है। यह मॉडल एक इलेक्ट्रॉनिक चुंबक प्रभाव प्रणाली के प्रभावों वितरित करने के लिए उपयोग करता है। यह एक ठीक नियंत्रित वेग, समय ध्यान केन्द्रित करना, और विरूपण गहराई के साथ स्थिर है। हालांकि, क्योंकि यह एक craniotomy के बिना एक बंद सिर पर चोट है, यह असंभव ठीक माउस मस्तिष्क stereotaxic निर्देशांक का उपयोग प्रभाव की स्थिति है। इसके अलावा प्रभाव / सुझाव जांच स्विचन एक प्रभाव साइट बदलाव है, जो असंगत चोटों का प्रमुख कारण है हो सकता है। फैलाना चोट और हिलाना को ध्यान में रखते निकला उम्मीद के रूप में, इस मॉडल सटीक और नियंत्रित करने के लिए आसान रहता है।

यह मॉडल प्रभाव के प्रभाव का निर्धारण करने में अपनी सटीकता और सादगी के लिए उपयोग करने के लिए भी फायदेमंद हैसंबंधित हल्के मस्तिष्क की चोट, विशेष रूप से खेल से संबंधित हिलाना। यह एक ऐसी नैदानिक ​​और शकुन बायोमार्कर की खोज के रूप में अच्छी तरह से चिकित्सा उपकरणों, दवाओं और जीन थेरेपी के समाधान के परीक्षण के रूप में preclinical अध्ययन के लिए एक मंच के रूप में कार्य करता है। यह मॉडल भी पुरानी दर्दनाक मस्तिष्क विकृति (सीटीई), जो वर्तमान में पोस्टमार्टम नयूरोपथोलोगिकल परीक्षा के माध्यम से ही निदान है के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
anesthesia machine Eagle Eye Anesthesia, Inc Model 150  anesthesia
Electromagnetic Impactor LeicaBiosystems Impact One Stereotaxic Impactor perform impaction
Digital Stereotaxic instrument LeicaBiosystems 39462501 mount mouse and positioning tips
Sicilone rubber-coated metal tip Precision Tool & Engineering, Gainesvill FL custom-made impact tip
Lithium Ion All-in-One Trimmer WAHL Home Products 9854-600 shave mouse hair
paper clips custom-made probe tip
Cotton tipped applicators MEDLINE MDS202055 scrub head with saline
Tissue Tek O.C.T. ASKURA FINETEK USA INC 4583 tissue embedding
anti-GFAP Dako CA93013 antibody for IHC
anti Ferritin Sigma F6136 antibody for IHC
VECTASTAIN Elite ABC  kit Vector laboratories PK-6100 IHC detection system
Permount Mounting Medium Fisher Scientific SP15-100
Aperio XT ScanScope scanner Leica Microsystems Inc, slides scanning
Leica AutoStainer XL Leica the pathology Company ST2010 H&E staining
DAB  sigma D3939 IHC detection system

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References

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