Die histologische Quantifizierung der chronischen Myokardinfarktes bei Ratten

1Cardiology, Department of Medicine, University of Fribourg
Medicine

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Valentin, J., Frobert, A., Ajalbert, G., Cook, S., Giraud, M. N. Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats. J. Vis. Exp. (118), e54914, doi:10.3791/54914 (2016).

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Abstract

Introduction

Myokardinfarkt (MI) ist eine führende Ursache für Tod und Behinderung weltweit. Die koronare Herzkrankheit ist die Hauptursache; MI ergibt sich aus Ischämie in Folge einer koronaren Ereignissen wie Okklusion. Wenn Reperfusion nicht innerhalb der ersten 6 Stunden durchgeführt, induziert Ischämie irreversible myocardial necrosis. Bei Patienten, stützt sich die Charakterisierung von MI auf verschiedene Diagnose - Tools, einschließlich der klinischen Symptome, der Elektrokardiographie, die Beurteilung der Plasmaspiegel von Biomarkern, Echokardiographie, MRT - Bildgebung und histologische Analysen 1. nach dem Zeitpunkt der myokardialen Nekrose relativ zu der Zeit der Koronarverschluss akuten und chronischen MI als zwei verschiedene Phasen Verletzungs eingestuft. Die akute Phase, während der ersten 7 Tage stattfindet, wird mit dem Verlust von Kardiomyozyten, ausgedehnte Entzündungen, und die Rekrutierung von Fibroblasten. Die subakuten Phase durch Heilung des Herzgewebes und die Bildung einer Narbe gekennzeichnet, auftrittzwischen 1 und 4 - 6 Wochen. Erweiterung des Infarkts, Ventrikel Wandverdünnung und Ventrikel Dilatation charakterisieren die chronische Phase. Umfangreiche Neugestaltung des linken Ventrikels führt schrittweise in schwerer Herzinsuffizienz 2.

MI durch permanente linken vorderen absteigenden Arterie (LAD) Ligatur stellt die Standard-Nagetiermodell von chronischem Myokardinfarkt induziert. Die koronare Ligatur ahmt die Koronarokklusion. Die Größe des Infarkts hängt von der Stelle der Ligatur. Charakterisierung von myokardialen ischämischen Verletzung in einem Nagetiermodell klassisch unter Verwendung von Biomarkern Plasmaspiegel, wie Troponin ausgeführt I und T 3, Echokardiographie, MRT und Histologie 4,5. Biomarkers Pegel werden mit dem Ausmaß der Kardiomyozyten Tod korreliert. Echokardiographie wertet die linke Beeinträchtigung der Ventrikelfunktion aus regionalen Wandbewegungsstörungen. Zusätzlich können nicht-invasive Bildgebungsverfahren, wie MRI oder hochauflösendeEchokardiographie, erlauben die Beurteilung der Verringerung der Wandbewegung, das Volumen des Narbenbereich mit reduzierten Perfusion und vitales Myokard und der Wandverdünnung. LV Abmessungen ermöglichen die genaue Auswertung der Infarktgröße. Schließlich kann die Quantifizierung der lebenden und toten Myokard durchgeführt werden post mortem spezifischen Flecken von histologischen Schnitten von geernteten Herzen verwendet und ermöglicht die Überprüfung der Infarktgröße (IS). Ein weiteres wichtiges Merkmal ist die Auswertung des Infarkts Erweiterungsindex (EI) 6. Die EI wird mit dem transmuralen Infarkt und beginnt innerhalb der ersten 3 Tagen verbunden. Die EI wird durch eine progressive Verringerung der Wandstärke, einer Erhöhung in der LV Hohlraumgröße und folglich Veränderungen in LV Form charakterisiert.

Um die therapeutische Wirksamkeit von neuartigen Behandlungen zu bewerten - insbesondere die regenerative Strategien basierend auf Zellen, Matrizen und Genübertragung-genaue Beurteilung von MI bei Nagetieren ist von größter Bedeutung.Wenn auf einem einzigen Querschnitt an der Papillarmuskel Ebene erhalten gemessen, kann die IS Größe kann aufgrund der großen Variabilität vorgespannt werden, die nach LAD-Ligation in die Infarktentwicklung vorhanden ist; der Scheitel Infarkt abgedeckt werden, könnten dann. Wichtig sind für Mäuse 7-9 oder Ratten beschrieben, genauere Methoden zu bestimmt MI Größe 10. Dennoch ist nicht ausreichend, um genau LV Umbau oder therapeutisch induzierten Reduktionen (oder Verhinderungen) der Umbau zu quantifizieren. Tatsächlich wird üblicherweise als Prozentsatz der gesamten LV Volumen auf Querschnitte des Herzens beurteilt ausgedrückt. Obwohl dieses Verfahren zur Behandlung von akuter MI gültig ist, bleibt die Ausdünnung der LV Wand während des Umbaus auftretenden 11,12 untersucht. Eine vollständige morphometrische Quantifizierung der Infarktgröße und strukturelle Änderungen sollten einige Parameter, wie endokardialen und epikardialen Längen und Durchmesser sowie Infarkt und gesunde Bereiche zu quantifizieren. Wir beschreiben eine methodische ca.oach genau zu beurteilen, MI und Umbau in einem chronischen Rattenmodell.

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Protocol

Alle Tiere erhielten humane Pflege im Einklang mit der Europäischen Konvention zum Tierpflege. Chirurgische Eingriffe wurden in Übereinstimmung mit dem Schweizer Tierschutzgesetzes durchgeführt, nachdem die Erlaubnis des Staates Veterinäramt zu erhalten, Fribourg, genehmigt durch das Bundesamt für Veterinärwesen, Schweiz.

1. Herzernte

HINWEIS: Alle chirurgischen Eingriffe wurden unter Isofluran-Narkose durchgeführt. Es wurden Anstrengungen unternommen Leiden der Tiere zu verringern. Insbesondere erhielten alle Tiere eine subkutane Injektion von 0,1 mg / kg Buprenorphin Präanästhesie. Das chirurgische Protokoll für Myokardinfarkt inducting wurde bereits an anderer Stelle 13 beschrieben.

  1. Führen Sie eine Sternotomie auf einem myocardial Infarkt Tier unter Narkose (intubiert Tier, 2,5% Isofluran, richtige von Pfote Prise Reflex bestätigt Anästhesie).
    1. Öffnen Sie das Tier durch die Haut schneiden und dann die Muskelnmit chirurgische Scheren. Schneiden Sie die Rippen auf der linken und rechten Seite, und dann auf die Brust zu entfernen.
    2. Entfernen Sie die restlichen Adhäsionen nach der vorhergehenden Operation (LAD-Ligation). Schneiden Sie die Aorta und entfernen Sie das Herz. Legen Sie das Gewebe in 1 M KCl (in PBS), und dann waschen Sie es mit PBS.

2. Gewebepräparation

  1. Setzen Sie das Infarkt Herz in Längsrichtung in einem Acrylrattenherz-Matrix. Halten Sie es bei -20 ° C für 1 Stunde.
  2. Schneiden Sie das Herz direkt in der Matrix eine Rasierklinge mit einer Quer verwenden. Stellen Sie sicher, jede Scheibe ist 2 mm dick. Schneiden Sie ca. 5 bis 7 Rutschen für jedes Herz (basierend auf dem Umbau Ebene); dies ist eine systematische Probenahme genannt.
  3. Bei diesem Schritt ist es, die 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) Färbung durchführen optional (halten Sie die Ausrichtung des Herzens Scheiben Basis-Spitze).
    1. Inkubieren in 1% TTC in PBS für 50 min bei 37 ° C. Inkubieren es in 4% Paraformaldehyd (PFA) für 20 min bis 1 Std. Setzen Sie die Abschnitte between zwei Glasplatten mit 2-mm-Distanzscheiben und nehmen Sie Bilder mit einem stereo Mikroskop gekoppelt mit einer Kamera bei 15-facher Vergrößerung.
      VORSICHT! Paraformaldehyd ist giftig.
  4. Slide Einfrieren (1 st Option)
    1. Setzen Sie jede Folie in einer Kunststoff-Form (10 x 10 x 5 mm) mit Eindeckmittel für die Kryotomie (optimale Schnitttemperatur, OCT), halten Sie die Ausrichtung (der Ort, den Scheitel orientierte Seite des Abschnitts nach unten auf dem Boden der Form). Frieren Sie die Blöcke mit 2-Methyl Dämpfe unter Kühlung mit flüssigem Stickstoff 10 - 15 min. Schließlich lagern Sie das Gewebe bei -80 ° C.
  5. Paraffinization (2. Option)
    1. Platzieren Sie jede Folie in Kassetten Einbetten (halten Sie die Ausrichtung, indem die Spitze orientierte Seite des Abschnitts nach unten auf dem Boden der Kassette) und dann in 4% PFA für 24 Stunden. Legen Sie es in einem Gewebe-Prozessor-Maschine über Nacht.
      1. Inkubieren in 70% igem Ethanol für 2 Stunden. Inkubieren es in ethan95% für 2 Stunden ol. Inkubieren es in Ethanol 100% für 3 Stunden. Inkubieren es in Xylol 4 Stunden. Inkubieren es in Paraffin (geschmolzenes bei 60 ° C in einem Ofen) für 5 Std. Schließlich machen Blöcke durch jedes Herz Dia in Paraffin eingebettet wird.

3. Masson-Goldner Trichromfärbung

  1. Machen Sie Gewebeschnitte aus Paraffinblöcken mit einem manuellen Mikrotom (Dicke: 5 um) oder von Oktober Blöcke mit einem Kryostaten auf -18 ° C (Dicke: 7 & mgr; m).
  2. Stain eine Folie aus jedem Herzteil für jede Ratte (3 bis 4 Querschnitte pro Folie) mit Masson-Goldner Trichrom - Färbung (siehe Anhang).
    HINWEIS: Starten Sie von diesem Schritt für die Paraffinschnitten.
    1. Schmelzen die Objektträger bei 60 ° C in einem Ofen. Unter einem Abzug Deparaffinisieren sie in Xylol zweimal für jeweils 10 min. Rehydrieren sie in 100% Ethanol, 95% Ethanol, 70% Ethanol und destilliertem Wasser für 3 min pro.
      HINWEIS: Starten Sie von diesem Schritt für die Kryoschnittess.
    2. Fix sie in Bouin-Lösung über Nacht. Dann spülen Sie Leitungswasser für 10 in Laufen - 15 min. Spülen Sie sie in destilliertem Wasser. Inkubieren sie in Mayers Hämatoxylin für 3 min.
    3. Entfernen Sie die Folien und lassen Sie sie in destilliertem Wasser für 5 min. Dann brüten sie in Säure Fuchsin-Ponceau für 5 min. Spülen Sie sie in 1% Essigsäure für 1 min.
    4. Als nächstes für 1 min sie in Phosphomolybdänsäure Orange G inkubiert. Spülen Sie sie in 1% Essigsäure für 1 min, brüten sie in hellgrünen Farbstoff für 10 min, und spülen sie in 1% Essigsäure für 1 min.
    5. Dehydrieren sie in 70% Ethanol (30 sec), 95% Ethanol (30 sec) und 100% igem Ethanol (5 min). Geben Sie einen Tropfen eines harzigen Eindeckmedium auf den Gewebeschnitten, bedecken sie mit Deckgläsern, und lassen Sie sie trocknen.

4. Infarktgrößenanalyse

  1. Erwerben Sie ein Bild von jeder Folie auf einem Stereomikroskop (15-facher Vergrößerung) gekoppelt mit einer Kamera. Fotografieren Sie ein Lineal mit der gleichen Einstellungs.
  2. Verwenden der Bildanalyse-Software die Narbendicke in der Mitte des Infarkts, das Septum Dicke zu messen, den linken Ventrikel (LV) Hohlraumbereich, der Infarktbereich und dem Gewebe LV Bereich verwendet wird.
    1. Stellen Sie die Waage mit dem Lineal Bild (Abbildung 1A).
      1. Klicken Sie auf Messungen dann Set Umrechnungsfaktor wählen. Zeichnen Sie eine Linie auf der Kalibrierungs bar. Rechtsklick auf das Bild und klicken Sie auf End - Kalibrierung. Notieren Sie sich den Bar - Wert und dann auf OK klicken.
    2. Wählen Sie die LV aus dem gefärbten Herz Bild (Abbildung 1B). Verwenden Sie das Multiple - Segment - Tool. Wählen Sie den LV Punkt-für-Punkt, und dann einen Rechtsklick Kopieren / Einfügen überall.
    3. Messen Sie die Narbe und Septum Dicke mit dem einzigen Segment Messwerkzeug (1C
    4. Automatische Erkennung der LV Hohlraum, Infarkt und LV Bereiche der automatischen Bereich Messwerkzeug im RGB - Modus (Abbildung 1D) verwendet wird .
      1. Klicken Sie auf das Werkzeug. Aktivieren Sie nur Grenzen und Angrenzend im RGB - Modus. Schließlich, klicken Sie in den Bereich von Interesse, es zu erkennen. Falls erforderlich, Präzisionswerkzeuge.
  3. Berechne die Infarktgröße als das Verhältnis der Infarktbereich zum Bereich LV.
  4. Berechnen Sie den Erweiterungsindex wie folgt: [LV Hohlraumbereich / gesamte LV-Bereich] / [Infarktdicke / Septum Dicke], mit der gesamten LV-Bereich einschließlich der LV Hohlraum und LV Gewebebereiche.
  5. Schließlich berechnen für jedes Herz ein "durchschnittlich" wie folgt: [durchschnittlich Erweiterungsindex aus den Infarkt Dias] * [Anzahl der Infarkt Dias / Gesamtzahl der Folien].

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Representative Results

Sechs Wochen nach der LAD-Ligation, Herzen wurden von Lewis-Ratten geerntet. 2-mm-Gewebeschnitte wurden von der Spitze zur Basis erhalten. Eine TTC - Färbung Verfahren wurde ausgeführt , um den Infarktbereich sichtbar zu machen, die in weiß erscheint, und das gesunde Myokard, die in rot (Abbildung 2) erscheint. Je nach der Stelle der Ligation der LAD variiert der Infarktgröße. Für große MI wurden transmurale Infarkte von der Spitze zur Basis (2A) beobachtet. Kleinere Infarkte weiß Infarktgewebe sichtbar von der Spitze zu den mittleren Teil des Herzens (2B) dargestellt. Für kleine , nicht-transmurale Infarkte, wurde fibrotischen Gewebe auf nur ein oder zwei Abschnitte von dem Scheitelpunkt (2C) beobachtet.

Thin 5 um Abschnitte von jedem Herz Scheibe wurden geschnitten und gefärbt mit Masson-Goldner Trichrom. Bilder von den gesamten Querschnitt des Herzens warenerworben unter einem Stereomikroskop (Abbildung 3). Gesundes Gewebe erschien rot und das Bindegewebe in grün. Diskriminierung zwischen jeder Farbe kann leicht mit einer Bildanalysesoftware durchgeführt werden.

Die Dicken des Infarkts und dem Septum - Bereich der LV Hohlraum und dem LV Gesamtfläche wurden gemessen und berechnet , um den EI (Tabelle 1) zu berechnen. Die EI wurde für jeden Abschnitt berechnet. In Abhängigkeit von der Herzgröße, die Anzahl der Abschnitte von 5 bis 7. Für jeden Herz variiert, ist das EI ein Mittelwert der EI von jedem Abschnitt. Die EI variiert von 0 bis 0,278 und zeigte eine breite Palette von Myokardinfarkten, mit einem CV von 58%. Im Vergleich dazu variiert der Mittelwert des Prozentsatzes der Infarkt zur LV 0-0,241, mit einem CV von 54% (Tabelle 1). Die EI und der Prozentsatz des Infarkt signifikant korreliert; ein nicht-parametrischer Spearman Analyse zur Verfügung gestellt einen Korrelationskoeffizienten r-value von 0,491 (p = 0,005) (4A). Für eine enge EI Werte wie 0,11 und 0,13, der Anteil der Infarkt 5,8-24,1% variiert.

Herzfunktion wurde durch hochauflösende Echokardiographie bei 6 Wochen nach der LAD-Ligation an narkotisierten Tieren beurteilt und wurde durchgeführt, einmal vor Herz der Ernte. Die EI aus histologischen Quantifizierung berechnet korrelierte signifikant mit dem EF. Ein nicht-parametrischer Analyse Spearman gab einen r-Wert von -0,709 (p = 0,005) (4B).

Abbildung 1
Abbildung 1. Schritt- für -Schritt - Darstellung der Verwendung der Bildanalyse - Software. Automatische Farbabgrenzung und Längenmessungen enthalten die verschiedenen Schritte. A. Kalibrierung: Die Skala des Bildes wurde eingerichtet. Ein Bild vonein Lineal wurde im gleichen Zustand wie das Herz Abschnitt genommen. Die Länge des Herrschers wurde markiert den Skalierungsfaktor zu definieren. Umwandlung von Pixel zu Millimetern durchgeführt wurde. B. LV Auswahl: Der rechte Ventrikel wurde von dem Bild ausgeschnitten das Auswahl - Werkzeug der Software. C. LV Wand und Septum Dickenmessung: Die einzelnen Messwerkzeug verwendet wurde , Entfernungen zu quantifizieren. Die Skala Balken zeigen 3 mm. D. Automatische Bereich Quantifizierung: Automatische Farbabgrenzung wurde im RGB - Modus durchgeführt. Auto-Auswahl wurde nach der Auswahl der automatischen Auswahlmodus ausgeführt. Farbauswahl kann verändert werden; der Untersucher durchgeführt visuelle Kontrolle des grünen Gewebe ausgewählt und erhöht oder die ausgewählte Region als notwendig verringert. Die Skala Balken zeigen 3 mm. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen. Figur 2
Abbildung 2. Herz Abschnitte mit TTC gefärbt. 2-mm-Abschnitte des vollen Herzen wurden mit TTC gefärbt. Gesunde Myokard erschien in rot und fibrotische Gewebe in weiß. Drei Herzen mit unterschiedlichen Infarktgrößen vorgestellt. A: große transmuralen Infarkt, B: mittel Infarkt, und C: kleiner Infarkt. Die Skala Balken zeigen 3 mm. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

Figur 3
Abbildung 3. Herz - gefärbte Schnitte mit Masson-Goldner Trichrom. 5-um-Schnitte wurden aus jedem Herzabschnitt erhalten 6 Wochen geschnitten post-LAD-Ligation. Stained Schnitte wurden unter einem Stereomikroskop gelegt. Bilder von der Voll Schnitte wurden mit 15-facher Vergrößerung erhalten. Die repräsentative Bild, auf der Ebene der Papillarmuskeln erhalten (zurück Pfeil), zeigt gesunde Myokard in rot und fibrotische Gewebe in grün. Das Bild zeigt die automatische Farbabgrenzung mit der Bildanalyse-Software, sowie die Stelle, an der der Infarkt und Septum Dicke gemessen wurden (schwarze Linien). Die Skala Balken zeigen 3 mm. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

Abbildung 4
Abbildung 4. Korrelation zwischen dem Erweiterungsindex (EI) und der Prozentsatz des Infarkt Verwandte LV (A) oder der Ejektionsfraktion (EF) (B). Die lineare Regression (schwarze Linie) und 95% confidence Intervalle (gestrichelte Linien) dargestellt. Die nicht-parametrischer Spearman r-Wert wird berichtet. A: Der Prozentsatz des Infarkt und EI signifikant korreliert (r = 0,567; p = 0,003). Der Infarkt Erweiterungsindex (EI) wurde als [LV Hohlraumbereich / gesamte LV-Bereich] / [Infarktdicke / Septum Dicke] berechnet. Die gesamte LV-Bereich wurde als kombinierte LV Hohlraum und LV Gewebebereich gemessen. Der Anteil des Infarkts wurde als LV Gewebebereich / Infarktgewebe Fläche berechnet. B: Die Funktion beurteilt bei 6 Wochen nach der LAD - Ligation unter Verwendung einer hochauflösenden Echokardiographie signifikant mit EI korreliert. Beide Parameter waren signifikant korreliert (r = -0,709; p = 0,005). Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

Tabelle 1
Tabelle1: Parameter Gemessen an Masson Goldner-gefärbte Herz Abschnitte.

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Discussion

Kritische Schritte im Rahmen des Protokolls

Fibrotische Gewebe genau in einem chronischen MI Rattenmodell bewertet werden analysiert unter Verwendung von systematischen Probenahme des geernteten Herz und Bild von Trichromie-gefärbten histologischen Schnitten von der Basis bis zur Spitze erhalten. Zwei Schritte sind besonders wichtig für ein erfolgreiches Protokoll-Implementierung. Erstens ermöglicht die Verwendung von KCl für Herz Ernten des Herzmuskels in einem entspannten Zustand gehalten wird. Dieser Schritt ist wichtig für Vergleiche der Infarkt Dimensionen aus verschiedenen Herzen. Zweitens ist die über Nacht Fixierung des Abschnitts in Bouin-Lösung kritischen hellen Trichrom-Färbung zu erhalten.

Technische Änderungen und Fehlerbehebung

Fehlen der Färbung kann während der Fixierung des Abschnitts in Bouin-Lösung, wie reduzierte Inkubationszeit abgelaufen oder Bouin Lösungen Schwierigkeiten zurückzuführen sein. Die TTC-Färbung ist optional und could werden verwendet, um die Infarktgröße in einem schnellen, aber nicht quantitativ sichtbar zu machen. Es ist wichtig zu beachten, dass TTC kann entweder Oktober oder Paraffin für die gleiche Herz vor der Aufnahme durchgeführt werden.

Einschränkungen der Technik

Der vorliegende Ansatz erlaubt es, zwischen Paraffin eingebetteten und kryokonserviert Herzabschnitte zu wählen und kann für Immunfärbung verwendet werden. Dennoch hat die volle Herz geschnitten werden, und das Gewebe kann nicht für eine weitere Analyse, wie Western-Blot oder RT-PCR auf Expression Protein und Gen-Analysen verwendet werden.

Bedeutung der Technik in Bezug auf bestehende / Alternativmethoden

Da die Quantifizierung Verfahren und insbesondere die Anzahl der analysierten Abschnitte variieren stark zwischen den Untersuchungen, die minimale Anzahl von Abschnitten zu definieren, um eine zuverlässige Quantifizierung ist von größter Bedeutung zu erhalten. Takagawa et al. 9 gezeigt , dass die Zuverlässigkeit mit einer minimalen Herz Scheibe Zahl von 6 maximiert wird - 8 Abschnitte des ganzen Herzens einer Maus unter Verwendung von 1-mm - Raster. Im vorliegenden Protokoll, 5. - 7. Abschnitte des gesamten Rattenherzen wurden erhalten, wenn 2 mm dicke Schnitte durchführen. Darüber hinaus sind 2-mm-Abschnitte ein Standard und häufig verwendete Größe für TTC-Färbung. Außerdem ist die systemische Probenahme einfach anzuwenden und stellt einen periodischen Aspekt, der Charakterisierung des gesamten Herzens ermöglicht.

Aus jeder der 2-mm-Scheiben, 5-um-Schnitte wurden geschnitten und gefärbt. Für jede 5 um Abschnitt, Quantifizierung der Septum Dicke, Narbe Dicke und Länge, Gesamtnarbenbereich, insgesamt LV-Bereich und LV Hohlraumbereich wurden durchgeführt, und der Mittelwert der einzelnen Parameter wurden pro Tier berechnet. Wir verwendeten Masson-Goldner Färbung von Dünnschnitten statt TTC-Färbung von 2 mm-Abschnitte, die Genauigkeit sowohl der automatische Farberkennung zu verbessern und die Bewertungvon Längen. Tatsächlich ist TTC - Färbung zumeist interessant für Frühphase oder ischämischer Reperfusion Modelle für die Erfassung des Risikobereichs 8,14, eher als für die chronische Phase.

MI von LAD-Ligation induziert in Abhängigkeit von der Ligatur Ort variieren können. Im vorliegenden chronischen Infarkt-Modell wurde die Ligatur Größe für jedes Tier absichtlich geändert, und die Ergebnisse für verschiedene Bedingungen der Infarktgröße und Umbau nach 6 Wochen anwesend waren. Dementsprechend offenbart die berechnete EI eine breite Palette von Myokardinfarkten und unterstützt den Unterschied in der Herzfunktion mit EF korreliert beobachtet. Wenn umfangreiche Ausdünnung des infarzierten Segments aufgetreten ist, wurde der Bereich des Infarkt stark im Falle von transmuralen Fibrose reduziert. In diesem Zustand wird durch Berechnung der Fläche des Infarktgewebes in Bezug auf die gesamte LV die Infarktgröße zu definieren (als Prozentsatz des LV ausgedrückt) würde das Ausmaß des Infarkts schwach bewerten. Das Fehlen von consideration für Umbau induzierte LV-Dilatation und extreme Verdünnung des Infarkts LV Wand kann die Infarktgröße unterschätzen, während ein Infarkt in der Abwesenheit von Wandverdünnung würde die Infarktgröße überschätzen, wie durch die Werte außerhalb der 95% vertreten Intervall. Dieser Nachteil könnte durch die Berechnung der EI eliminiert werden.

Es hat sich gezeigt , dass die Formänderung ist positiv mit der EI und Wandverdünnung 15, 16 korreliert LV gezeigt. Obwohl EI ein Prädiktor für die LV-Funktion sein kann, ist es wichtig, dass die Echokardiographie und histologische Analysen komplementäre Methoden zu betonen den Myokardinfarkt bei der funktionalen und Gewebe-Ebene zu bewerten sind. Echokardiographie ermöglicht Langzeitstudie und histologische Analysen grundlegende Tests Endpunkt liefern, die zusätzliche Quantifizierung der LV Morphologie ermöglichen, wie zum Beispiel Wandstärke.

Zukünftige Anwendungen oder Wegbeschreibung achterner Beherrschung dieser Technik

Die systemische Abtastung des gesamten Herzens und die Berechnung der EI sind von besonderem Interesse, wenn chronische MI Beurteilung. Darüber hinaus wird dieses Verfahren für die Bewertung der Wirksamkeit der Behandlung, insbesondere für neue Behandlungen, wie zell- und matrix-basierte Behandlungen, die zur Verringerung der Infarktgröße und Umbau geeignet sein Ziel. Zuverlässige Quantifizierung der Infarktausdehnung ist von größter Bedeutung für den Vergleich zwischen unbehandelten und behandelten Tiere als Endpunkts histologischen den Vergleich der Infarktgröße vor und nach der Behandlung auszuschließen analysiert.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acrylic rat heart matrix 2 mm 72-5015 Harvard Appartus
Inspira advanced volume controlled ventilator Harvard Apparatus 557058
Catheter Insyte 14 G BD 381267
O.C.T BDHA361603E VWR
TTC T8877-10G Sigma Aldrich
Mayer hematoxylin MHS32-1L Sigma Aldrich
Acid Fuchsin
CI 42685
F8129-50G Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin
CI 16150
P2395-25G Sigma Aldrich
Orange G
CI 16230
O3756-100G Sigma Aldrich
Light green
CI 42095
L5382-25G Sigma Aldrich
KCl P9333-500G Sigma Aldrich
Xylol 10315083 HoneyWell
Ethanol absolute 10303990 HoneyWell
2-methylbutane M32631-1L Sigma Aldrich
Stereogical microscope SM2800 Nikon
Formaldehyde 99340 Reactolab
Embedding cassette K113.1 Carl Roth
Bersoft Image measurement Software Bersoft.com Licensed software

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References

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