הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy. J. Vis. Exp. (127), e56231, doi:10.3791/56231 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) בעכברים הוא אחד של טכניקות כירורגיות הנפוץ ביותר עבור חקירה נסיונית של לחץ יתר-induced עזב חדרית היפרטרופיה (LVH) והתקדמות שלה כדי אי ספיקת לב. ברוב המכריע של החקירות שדווחה, הליך זה מבוצע עם צנרור ואוורור של החיה אשר הופך את תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לחיה. המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר טכניקה פשוטה של טק פולשנית ללא צנרור ואוורור של עכברים. שלבים קריטיים של הטכניקה מודגשים על מנת להשיג התמותה נמוכה ויעילות גבוהה תוך גרימת LVH.

זכר עכברים C57BL/6 (בן שבוע 10, 25-30 g, n = 60) היו מרדימים עם זריקה אחת בקרום הבטן של תערובת של קטמין חריגות השירותים הווטרינריים. ב נושם באופן ספונטני בעלי חיים לאחר 3-4 מ מ העליון חלקית sternotomy, קטע 6/0 בתפר משי מושחל דרך עינו של מכשיר מצדו היה עבר מתחת לקשת אבי העורקים וקשר על מחט 27-מד קהות. חיות המופעלים המזויפים עברה הכנת כירורגי אותו אך ללא התרחבות אבי העורקים. היעילות של ההליך ב גרימת LVH כתביהם לעליה משמעותית יחס המשקל גוף/לב. יחס זה מתקבל ימים 3, 7, 14, ו- 28 לאחר הניתוח (n = 6-10 בכל קבוצה, בכל נקודת זמן). באמצעות הטכניקה שלנו, LVH נצפית בטק לעומת בעלי החיים המזויפים מיום 7 עד 28 יום. פעיל. ומאחר (מעל 28 ימים) בהירושימה הם שניהם מאוד נמוכה ב- 1.7%.

לסיכום, הטכניקה שלנו חסכונית של טק פולשנית בעכברים נושאת בהירושימה פעיל ואחרי הניתוח נמוך מאוד, יעיל ביותר ב גרימת LVH. זה ומפשט את תהליך פעיל, ומפחיתה את המתח על החיה. זה ניתן בקלות לבצע על-ידי ביצוע השלבים הקריטיים המתוארים פרוטוקול זה.

Introduction

במהלך השנים האחרונות, המחקר של אי ספיקת לב נערכה ב קיימא החיה מודלים1. מודלים בעלי חיים קטנים לעומת מודלים בעלי חיים גדולים של אי ספיקת לב, יש יתרונות פוטנציאליים רבים. לצד העלויות הנמוכות של דיור ואחזקה, מודלים בעלי חיים קטנים נגישים לחוקרים יותר בשל המתקנים הדרושים פחות מורכב2.

העכבר אי ספיקת לב דגמים מציעים את היתרונות אותו כמו הדגמים עכברוש. בנוסף דיור מוזל עד עולה3, העכבר מודלים להפיק תועלת הזמינות של זנים (KO) רלוונטי מהונדס, נוק אאוט. האפשרות של תאים ייחודיים לסוג, inducible KO או אסטרטגיות הטרנסגניים הפוך את העכבר כלי יקר ערך ללמוד בפתוגנזה של אי ספיקת לב ולנסות לזהות את הרומן משטרי טיפולית3.

בין העכבר מודלים של אי ספיקת לב בשימוש כיום4, התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) אשר תוארה לראשונה על ידי יובל בנאי-ג'וליה5 הוא הדגם המועדף כדי ליצור לחץ יתר-induced גדילת (LVH)1 , 3. היתרון הגדול ביותר של מודל זה הוא היכולת לאפשר ריבוד של LVH2, למרות עזב חדרית שיפוץ בתגובה טק הוא משתנה בין זנים שונים בעכבר. בפרט, עכברים C57BL/6 לפתח התרחבות מהירה LV לאחר עיגול זה עלולים להופיע עם אחרים זנים4,6,7.

התפרצות פתאומית של יתר לחץ דם מושגת עם טק גורם כ 50% עלייה במסה LV בתוך 2 שבועות, ומאפשר לבחון את הפעילות של התערבויות תרופתי או המולקולריות מכוון להתכוונן על התפתחות LVH4במהירות. תנאי הגיוס חריפה של יתר לחץ דם חמור על ידי טק לא בדיוק לשחזר את גדילת מתקדמת, שיפוץ שנמדדו בסביבה קלינית של באבי העורקים או יתר לחץ דם. עם זאת, מודל זה משמש על ידי חוקרים רבים כדי לזהות ולשנות את הרומן מטרות טיפולית אי ספיקת לב4.

ביצוע טק בעכברים דורש למומחיות הכירורגית גדול יותר מהנדרש לקבלה אחרים טכניקות המשמשות לזירוז LVH ואי ספיקת לב לאחר מכן2. הסופרים לבצע הליך זה באמצעות נלוקסון ואוורור של בעלי חיים2,8, אשר גורם בהליך זה יותר תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לבעל החיים. רק כמה חוקרים השתמשו טק פולשנית במחקר שלהם עם התייחסות קצרה הליך כירורגי9,10,11.

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד טכניקה פשוטה וידידותית של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים, הדגשת השלבים הקריטיים של ההליך. על-ידי ביצוע השלבים הבאים מפתח, באפשרותך לבצע בקלות בטכניקה זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

C57BL זכר/6J עכברים (10 שבועות, 25-30 גרם, n = 60) נמצאים בשימוש בפרוטוקול זה. בעלי החיים מקבלים טיפול אנושי תואם ההנחיות שגובשו על ידי משרד הצרפתי של החקלאות ושל ההשכלה הגבוהה והמחקר, כל הפרוצדורות מתבצעות לפי ההנחיה מועצת הקהילה האירופית של 24 בנובמבר 1986 ( 86/609/EEC) ואת החוקים צרפתי. הפרוטוקול שאושר על ידי " הוועדה המחוזית אתיקה CREMEAS ניסויים בבעלי חיים " (#2016092816207606).

1. הכנה לניתוח

  1. לשמור על העכברים במשך שבוע לאחר ההגעה במתקן בעל חיים על מחזור/כהה h 12h 12, בכלובים רגילים, עם מזון (לפרטים ראה טבלה של החומרים) ומים זמינים ad libitum.
  2. ביום של המבצע, להציב העכברים בכלובים בודדים כמה דקות לפני אינדוקציה של הרדמה, כדי למנוע כל מתח נוסף לחיה. לחטא כלי ניתוח כל יום לפני הניתוח.
  3. Intra-peritoneally מזריקים מנה אחת של תערובת של קטאמין (51.4 מ"ג/ק"ג) חריגות השירותים הווטרינריים (3.3 מ"ג/ק"ג) מדולל בתמיסת (0.9% NaCl).
  4. לוודא עומק ההרדמה בגלל היעדר רפלקס הבוהן-retreat.
  5. לגלח בצוואר ובחזה של החיה עם תער זמינים מסחרית ולחטא את האזור מגולח עם אלכוהול 70%-
  6. למקם את החיה פרקדן על משטח עבודה נקי הפקק ולתקן את כפות רגליו עם דבק.

2. ניתוח

  1. סטרילי טכניקה כירורגית משמש לאורך כל ההליכים. בנושם באופן ספונטני חיה, לבצע חתך בצוואר הרחם אורכי קו האמצע מעל 10 מ מ בסכין. סכין מספר 11 מן הרמה העל-בחזה ובצלעות בחזה האמצעי על מנת לחשוף את עצם החזה ( איור 1).
  2. משכי בלוטת התריס ע י העברת בתפר פוליפרופילן השהייה ב 4/0 monofilament עם Crile-עץ המחט והדבק על משטח עבודה.
  3. נפרדים שמותחת את שרירי הנשימה מראש עם מלקחיים מיקרו-כירורגי לחשוף את קנה הנשימה.
  4. שקופית בעדינות חלקה שקצהו מעוקל מיקרו-כירורגי מלקחיים עם הלסתות סגור מעל קנה הנשימה, מאחורי עצם החזה.
  5. על ידי בקפידה פתיחה וסגירה מלתעות שקצהו חלקה מעוקל המיקרוכירורגית המלקחיים לבצע עמום תחת שרירי הנשימה מראש, מאחורי עצם החזה להרחיק את קרום הריאות.
  6. את השרירים נכון העל-בריחי עם המלקחיים ישר מיקרו-כירורגי שקצהו חלקה ומשוך בעדינות החזה של החיה למעלה.
  7. שקופית בלסת נחות של אוחז העצם מתחת לעצם החזה ולבצע של 3-4 מ מ העליון חלקית sternotomy ( איור 2). לכוון את החלק התחתון של המיני-sternotomy מעט לכיוון צד שמאל.
  8. עוברים monofilament 7/0 פוליפרופילן השהייה בתפר מ פנימה אל מחוץ לחלל הבין-צלעי השני בכל צד של המיני-sternotomy באמצעות בעל מחט מיקרו-כירורגי. . הישאר קרוב costo-פצע כדי למנוע פציעות הבין-צלעי וספינות בית החזה הפנימי או קרום הריאות.
  9. להפיץ את הקצוות בחזה ובצלעות באמצעות 7/0 monofilament פוליפרופילן התפרים בכל צד ולפתור אותן על משטח עבודה עם דבק.
  10. בעדינות להזיז הצידה את השרירים מראש בקנה הנשימה, שומן mediastinal, התימוס באמצעות שקצהו חלקה מעוקל מלקחיים המיקרוכירורגית להמחיש את קשת אבי העורקים תחת הגדלה צריכת חשמל נמוכה (2-3 X) ( איור 3). . שמור על עצמך מסוים לא כדי לגעת או נזק אדר הקודקוד כדי למנוע התפתחות חזה אוויר.
  11. לחשוף את הרקמות הרכות מתחת לקשת אבי העורקים על ידי קשירת מלקחיים ( איור 4 א), מורחים בעדינות לסתותיו. להכין מנהרה ברקמות הרכות מתחת לקשת אבי העורקים עם מלקחיים קשירת השני על ידי פתיחה וסגירה של הלסתות ברקמות הרכות בעדינות.
  12. לעבור קטע של 6/0 קשירה משי מושחל דרך עינו של מכשיר מצדו ( איור 4 B) החזיק ביד שמאל מתחת לקשת אבי העורקים ולאחזר אותה על ידי קשירת מלקחיים החזיק ביד ימין בין מקור נכון innominate ושמאלה נפוצות עורק ( איור 5).
  13. לחתוך מחט 27-מד באורך של 5 מ מ, קהה בשני הקצוות על ידי לחיצה על אותם עם בעל מחט Crile. למקם את מחט בקוטר 27 קהות בסמוך לקשת אבי העורקים ( איור 6) עם מלקחיים ישר מיקרו-כירורגי שקצהו חלקה, לקשור את התפר בנוחות סביב המחט העורקים בין שמאלה וימינה innominate שחתך את עורק הצוואר העורקים עם המלקחיים שני קשירה ( איור 7). כדי לקשור בקלות לכף את התפר, מבצעים של קשר כפול הראשונית ולאחריה ארבעה קשרים נוספים. ודא כי כל הקשרים הם שטוחים.
  14. לאחר מצדו, להסיר במהירות אבל בעדינות את המחט כדי להשיג 0.4 מ מ קוטר היצרות כיווץ העורקים לשחזור רוחבי 65-70%-
  15. בדוק hemostasis של הרקמות הרכות סביב הקימור אבי העורקים, של קצוות בחזה ובצלעות, שרירי הנשימה מראש. לשים גזה hemostatic resorbable בכל מקום נוטף דם נצפית. הסר פוליפרופילן monofilament 7/0 להישאר התפרים בשימוש להפצת הקצוות בחזה ובצלעות.
  16. לעבור פשוט 6/0 monofilament בתפר פוליפרופילן עם בעל מחט מיקרו-כירורגי מ מחוץ ל בתוך המרחב הבין-צלעי השני השמאלי ולאחר מכן מ בתוך מחוץ הרווח הבין-צלעי השני נכון. . הישאר קרוב costo-פצע כדי למנוע פציעות הבין-צלעי וספינות בית החזה הפנימי או קרום הריאות.
  17. להפגיש הקצוות בחזה ובצלעות על ידי קשירת monofilament 6/0 בתפר פוליפרופילן עם Crile-עץ המחט.
  18. לסגור את העור עם פוליפרופילן 5/0 monofilament פועל תפר בשכבה אחת עם Crile-עץ המחט.
  19. ביצוע ההליך דמה זהה לפעולת הכיווץ אך ללא קשירה בתפר סביב העורקים.

3. ההחלמה לאחר הניתוח

  1. לפקח מקרוב מאוד את החיות. להעביר את העכבר לכלוב הפרט ולמקם אותו במצב של שכיבה-
  2. אפשר בעכבר כדי לשחזר מתחת לאור התחממות כדור הארץ עד מלא ער (פחות מ 1 h לאחר גרימת הרדמה).
  3. על שיכוך כאבים לאחר הניתוח, מזריקים 0.1 מ"ג/ק"ג של הבופרנורפין intraperitoneally. חזור על זריקות תת עורית של 0.1 mg/kg של הבופרנורפין כל 8 שעות עבור שלושת הימים הראשונים, כפי שמצוין.
  4. מקום העכברים המופעלים בכלובים רגילים (מקסימום 3 עכברים לכל כלוב) ועכברים 2 מינימלי לכל כלוב.

4. לב קציר

  1. ביום של ניתוח, המתת חסד את העכבר עם פתרון של קטמין 300 מ"ג/ק"ג, חריגות השירותים הווטרינריים 20 מ"ג/ק"ג בתוך תמיסת מלח על ידי זריקה בקרום הבטן.
  2. לקצור קודם כל הדם הכלילי התחתון, ולאחר מכן דרך באותה השורה הוסף 5 מ של תמיסת 2.6 מ מ EDTA בתוך תמיסת מלח.
  3. לקצור את הלב, להסיר את אטריה, משקל הלב (החדרים ימינה ושמאלה בלי אטריה).
  4. השמאל להפריד ventr נכוןקפואה עם מחצה הנותרים את החלק השמאלי. שוקלת שתי דגימות רקמה ולהקפיא אותן בחנקן נוזלי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

פעיל. ומאחר הישרדות
פעיל ההישרדות היה גבוה מאוד, 98.3% (59 מתוך 60) של הסידרה כולה (טק ובעלי המופעלים דמה). פעיל רק מותו היה בגלל סיבוך דימום בעכבר מהוקצע לפעולה המזויפים. הישרדות לאחר הניתוח במהלך התצפית של 28 ימים גם היה מצוין, ב 98.3% (58 מתוך 59). רק לאחר מותו לאחר הניתוח אירע עכבר טק ביום (D) 16, ואולי של מקור לבבי.

אימות של הטכניקה
הטכניקה הציג הוא אמין מאוד לשחזור. המיקום הנכון של התפר בין שמאלה וימינה innominate נפוצות עורק אושר במשך הקציר רקמות חיות כל העוברים טק.

היעילות של הטכניקה כדי לעודד גדילת אומתה על ידי קביעה של הלב משקל/גוף פרופורציה (HW/BW, mg/g) ב 3, 7, 14, ו- 28 ימים לאחר הניתוח. HW הוא המשקל של החדרים ימינה ושמאלה בלי אטריה. היחס HW/BW גדל באופן משמעותי ב- המפוספסת לעומת הקבוצות דמה מ D7 שלאחר הניתוח (4.9±0.2 לעומת 4.1±0.05 mg/g, P < 0.01) על, וטרם יצא גבוה יותר באופן משמעותי עד D28 (5.8±0.3 לעומת 4.1±0.1 mg/g, P < 0.0001) לאחר הניתוח (איור 8). נצפתה עלייה ביחס HW/BW היה אך ורק בשל עלייה יחס משקל גוף/החדר השמאלי (איור 9א) מאז יחס משקל גוף/החדר הנכון נותרה דומה בין טק ובעלי המופעלים באמצעות העמדת פנים במהלך הצפייה כל תקופת (איור 9ב').

עוד, אנחנו נמדדים בתוך הרקמה החדר השמאלי הביטוי mRNA של סמנים ביולוגיים של היפרטרופיה כמו שתואר לעיל12. -D14, ביטוי mRNA של חלבון natriuretic המוח (BNP), חלבון natriuretic פרפור (ANP), אנגיוטנסין המרת אנזים (ACE), קולגן 1a1 (Col1a1) צורה של גורם גדילה ß (TGFß) היה גבוה משמעותית של אבי העורקים הסתכן בהשוואה המופעלים באמצעות העמדת פנים חיות (איור 10). לפיכך, גדילת שנצפה מאמת את היעילות של הטכניקה טק שלנו.

שגיאת תקן של ערכים רשע וב הושוו בין טק המזויפים קבוצות באמצעות חד-כיווני אנובה ואחריו מבחן פוסט-הוק של Bonferroni לשם השוואה של נתוני לזווג.

Figure 1
איור 1 : חתך.
העור הוא חרות מעל 10 מ מ חריץ בחזה ובצלעות הארץ אמצע החזה, בלוטת התריס "ניתק" בתפר השהייה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : עצם אוחז.
כלי זה מאפשר חתך קצר ומדויק על העצם עבור 3-4 מ מ העליון חלקית מעולה מיני-sternotomy. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3 : חשיפה.
בעקבות התנצלות של הקצוות בחזה ובצלעות עם 7/0 תשהו התפרים, קשת אבי העורקים, נכון innominate, עורק נפוצות השמאלי יחד עם קנה הנשימה חשופים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4 : מלקחיים א Tying. מלקחיים אלו נחוצים לבצע ניתוח בוטה ועדין מאחורי עצם החזה וליד הקשת אבי העורקים. B. סיוע מצדו. . זהו כלי המפתח למימוש מעבר עדין, atraumatic מתחת לקשת אבי העורקים הן טק ועכברים המופעלים באמצעות העמדת פנים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5 : מעבר תחת אדריכל אבי העורקים
קטע של קשירה משי 6/0 אינה עברה מתחת לקשת אבי העורקים באמצעות סיוע מצדו ונמצאת בין שמאלה וימינה innominate נפוצות בעורקים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 6
איור 6 : הכנה מצדו.
קטע קצר 2-3 מ מ מחט בקוטר 27 קהות ממוקמת מעל הקשת אבי העורקים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 7
איור 7 : כיווץ העורקים רוחבי.
התפר משי קשורה מעל את המחט, את מבחינה בין שמאלה וימינה innominate נפוצות עורק באמצעות מלקחיים קשירה. המשי במקום תפרים פוליפרופילן הוא מועדף עבור מצדו אבי העורקים בגלל שהקשר יחזיק יותר טוב. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 8
איור 8 : אימות של התרחבות אבי העורקים רוחבי.
אינדוקציה של היפרטרופיה על-ידי כיווץ העורקים רוחבי פולשנית שלנו מומחש על עלייה משמעותית יחס משקל משקל/גוף לב במפוספס (קווים שחורים) לעומת המזויפים פעלו (ברים לבן) עכברים. היפרטרופיה כבר נוכח D7 לאחר הניתוח ומגביר בהדרגה לאורך זמן עד D28 (n = 6-10 לכל הקבוצה. * * P < 0.01, * * * P < 0.001, * * * P < 0.0001). הנתונים מוצגים אומר SEM ± (קווי שגיאה). עסקת טיעוןse לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 9
איור 9 : עזב (א) ו (ב) החדר הימני לגוף יחס משקל.
במהלך תקופת תצפית, היחס בין משקל גוף/החדר השמאלי מגדיל בעוד היחס בין משקל גוף/החדר הנכון נשאר דומה בטק (קווים שחורים) בהשוואה חיות המופעלים דמה (לבן ברים). זה מאשר את גדילת ללא שינוי בהחדר הימני, ומחזקת את האימות של הטכניקה שלנו (n = 6-10 לכל הקבוצה. * * P < 0.01, * * * P < 0.001, * * * P < 0.0001). הנתונים מוצגים אומר SEM ± (קווי שגיאה). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 10
איור 10 : הביטוי BNP-mRNA.
הביטוי mRNA של חלבון natriuretic המוח (BNP), חלבון natriuretic פרפור (ANP), אנגיוטנסין המרת אנזים (ACE), קולגן 1a1 (Col1a1) ושולט צורה של גורם גדילה ß (TGFß), חיובי עבור היפרטרופיה בבר אבי העורקים שושן של רצועה (שחור) לעומת שאם חיות (בר לבן) (n = 6 לכל קבוצה)-D14. הביטוי מחושב כ- 2(-ΔCt) איפה כיל רמת ה-mRNA של הגן הפניה Gapdh. הנתונים מוצגים אומר SEM ± (קווי שגיאה). * P < 0.05, * * P < 0.01, *P < 0.001 בהשוואה לקבוצת דמה (t-מבחן). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

המטרה של פרוטוקול זה היא להציג דוגמה צעד אחר צעד של טכניקה כירורגית פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים. תיאור טכני מפורט של התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים דווחה על-ידי סופרים אחרים,2,8. עם זאת, חוקרים אלה לבצע ניתוח בעקבות צנרור ואוורור של בעלי חיים. השימוש צעד נוסף של צנרור-איוורור מגביר את המורכבות ואת משך הזמן של כל התהליך ואת הלחץ העולמי החיה הוא חשוף. מסיבות אלו, קיבלה המושג פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי קצת תשומת לב. הכיווץ של אבי העורקים רוחבי פולשנית בעכברים משמש כדי לעודד גדילת והתקדמות שלה כדי אי ספיקת לב9,10,11. מחקרים אלה להתמקד על המסלולים המעורבים היווצרותם של גדילת ואי ספיקת לב, אך לא על התיאור של טכניקה כירורגית9,10,11.

ב פרוטוקול זה, אנו מדווחים הפרטים טכניקה פשוטה and לשחזור של טק פולשנית בעכברים. מנתח מיומן יכול לעשות פעולת הכיווץ בעוד 20 דקות, פעולת דמה (ללא תפר קשירת) בתוך 15 דקות. במהלך ההוכחה טכני הראשונית שלנו, מצאנו כי המבוא של מכשיר מפתח, הסיוע מצדו, מותר התמותה נמוכה מאוד פעיל של 1.7%. זה משווה לטובה פעיל גורם לתמותה של 4% דיווחו על ידי יובל בנאי-ג'וליה ואח. al. 5, של 3.7% על ידי Liao et al. 13 של 2.7% על ידי סטאנספילד et al14. במעלה, תקופת תצפית ל-28 יום, גם מראה על התמותה לאחר הניתוח מאוחר נמוך מאוד של 1.7%. שוב, זה משתווה היטב התמותה מאוחר שדווחו על-ידי יובל בנאי-ג'וליה et al (10%)5, ליאו et al (19%)13 או סטאנספילד et al (2.6%)14.

המעבר מתחת לקשת אבי העורקים הוא השלב המכריע ביותר של כל התהליך. הפארמצבטית של שלב זה לא תוארה על ידי Hu ועמיתים לעבודה, אשר השתמשו חוט תוצרת בית עם מלכודת בקצה שלו לעבור תחת העורקים בין המקור של innominate וימינה שמאלה נפוצות עורק9, ולא על-פי Tarnavski מי למקם מלקחיים מעוקל מהצד המדיאלי תחת אבי העורקים כדי לתפוס את המשי 7/0 תפר בצד הנגדי ולהעביר אותה מתחת העורקים2. הסיוע מצדו בשימוש הטכניקה שלנו מאפשר תרגיל סטנדרטית ו לשחזור עם סיכון נמוך של אבי העורקים דמעה.

עוד צעד מכריע של ההליך הוא המתח חלה על העניבה מעל את מחט בקוטר 27 להפחית ביעילות, למשל לומן של קשת אבי העורקים. ראשית, אנו משתמשים מלקחיים קשירה, אשר מסייעים החלת אחיד ובלתי לשחזור מתח על התפר סביב קשת אבי העורקים. מיקום מתאים התפר מאומתת בעת הקציר של הלב ושל קשת אבי העורקים. אנדרסן ועמיתים לאמת המיקום המתאים של הלהקה על ידי הערכה של אותות דופלר של עורק גם לפני וגם אחרי המיקום של הלהקה אבי העורקים11. בדו ח שלהם, רצועות נאותה התקבל כאשר היחס בין מהירות דופלר הוכפל מימין עורק שמאל11. בשיטה שלנו, נרצה למדוד את היעילות של טק על ידי מידת גדילת המושרה ב רצועת בהשוואה לבעלי דמה על מנת לאמת את ההליך, מאז זה לא מחייבים כל משך מוגברת של ההליך או הרדמה משלים של בעלי החיים. בשיטה שלנו, מידת גדילת והמיקום המתאימים של פסים נבדקים בסוף הניסוי. מידת גדילת על ידי הטכניקה שלנו משווה לטובה עם התוצאות שדווחו על-ידי חוקרים אחרים ב שלושה שבועות לאחר טק עכברים15. בנוסף, הווריאציות נמוכה של היחס בין הלב למשקל הגוף שנצפה בחיות המפוספסת שלנו מעיד את התנודות נמוכה של המתח חלה על העניבה.

לסיכום, דרך הימנעות צנרור-איוורור כפי שהוצג ב פרוטוקול זה, הטכניקה שלנו של טק פולשנית בעכברים מספק מודל לשחזור ואמין. מודל זה מפחית את המתח העולמי על החיות, ואת עלות-לחיסכון בזמן בהשוואה טק באמצעות צנרור-איוורור של בעלי חיים. שיעורי התמותה פעיל ומאוחר של הליך זה נמוכים מאוד ולעשות טכניקה זו אחת השיטות של בחירה עבור אינדוקציה של גדילת בעכברים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים יש אין ניגוד אינטרסים לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי מענק (N ° 32016) של קרן לב וכלי דם שוויצרי כדי RT.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope Olympus SZX2-TR30
Razor Rowenta Nomad TN3650FO
Sutures:
Polypropylene 7/0 Ethicon BV-1X
Polypropylene 6/0 BBraun C0862061
Silk 6/0 ligature  FST 18020-60
Polypropylene 4/0 Ethicon 8683
Polypropylene 5/0 Ethicon Z303
Drugs:
Ketamin Merial Imalgène 1000, LBM154AD
Xylazine Bayer Rompun 2%, KP09PPC
Buprenorphine Ceva Vetergesic, 072013
Instruments: 
Bone nippers Fine Surgical Tools 16101-10
Ligation aid Fine Surgical Tools 18062-12
Tying forceps Fine Surgical Tools 18026-10
Needle holder Crile-Wood Fine Surgical Tools 12003-15
Microsurgery forceps  Fine Surgical Tools 11003-12
Microsurgery forceps  Fine Surgical Tools 11002-12
Tissue forceps Fine Surgical Tools 11021-12
Microsurgery needle holder Fine Surgical Tools 12076-12
Microsurgery scissors Fine Surgical Tools 91501-09
Mayo scissors Fine Surgical Tools 14511-15
11-blade knife Fine Surgical Tools 10011-00
RNA extraction and qPCR:
TriReagent Euromedex TR-118-200
Rneasy Mini kit Qiagen 74704
Qubit Fluorimetric RNA assay Fisher Scientific 10034622
RNA 6000 Nano kit Agilent 5067-1511
High Capacity cDNA kit Fisher Scientific 10400745
Taqman Master Mix Fisher Scientific 10157154
Taqman BNP primers Fisher Scientific Mm01255770_g1
Taqman ANP primers Fisher Scientific Mm01255747_g1 
Taqman ACE primers Fisher Scientific Mm00802048_m1
Taqman Col1a1 primers  Fisher Scientific Mm00801666_g1
Taqman TGFb primers Fisher Scientific Mm01178820_m1
Taqman Gapdh primers Fisher Scientific Mm99999915_g1
ABIPrism  Thermocycler Applied Biosystems 7000
Software:
GraphPad Prism GraphPad Prism 7
Animal food
Complete diet for adult rats/mice Safe UB220610R

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219, (15), 105-110 (2016).
  2. Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
  3. Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine. Ardehali, H. Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).
  4. Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present. Circ. Heart Fail. 2, (2), 138-144 (2009).
  5. Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).
  6. Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, (5), 2119-2130 (2007).
  7. Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains. J. Appl. Physiol. 97, (1), 369-376 (2004).
  8. Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. Transverse aortic constriction in mice. J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).
  9. Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285, (3), 1261-1269 (2003).
  10. Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141, (2), 492-500 (2011).
  11. Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 178, (1), 105-109 (2012).
  12. Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors. PLoS ONE. 11, (8), 0161273 (2016).
  13. Liao, Y., et al. Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282, (5), 1703-1708 (2002).
  14. Stansfield, W. E., et al. Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 142, (2), 387-393 (2007).
  15. Beetz, N., et al. Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload. J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics