किडनी कॉर्टेक्स अर्क में वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर और ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन के बीच एक रैखिक संबंध का प्रदर्शन

Biology

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Summary

यहां प्रस्तुत एक कॉर्टिकल किडनी निकालने की तैयारी और कुल प्रोटीन सामान्यीकरण का उपयोग करने के लिए एक प्रोटोकॉल है जो स्तनधारी गुर्दे में संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर और ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन के बीच सहसंबंध प्रदर्शित करता है।

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Muthusamy, A., Arivalagan, A., Movsas, T. Z. Demonstrating a Linear Relationship Between Vascular Endothelial Growth Factor and Luteinizing Hormone in Kidney Cortex Extracts. J. Vis. Exp. (155), e60785, doi:10.3791/60785 (2020).

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Abstract

वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (VEGF) किडनी में एंजियोजेनेसिस और वैस्कुलर परायियता को नियंत्रित करने में मदद करता है। गुर्दे के विकार, जैसे मधुमेह नेचुरोपैथी, गुर्दे में VEGF dysregulation के साथ जुड़े हुए हैं । गुर्दे में शारीरिक स्थितियों के तहत VEGF को नियंत्रित करने वाले कारकों को अच्छी तरह से समझ में नहीं आता है। ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच), एक प्रो-एंजियोजेनिक हार्मोन, प्रजनन अंगों में शारीरिक VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में मदद करता है। यह देखते हुए कि एलएच रिसेप्टर्स गुर्दे में पाए जाते हैं, हम, Zietchick अनुसंधान संस्थान में, यहां परिकल्पना है कि LH भी गुर्दे में VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में मदद करता है के रूप में अच्छी तरह से । सबूत प्रदान करने के लिए, हम दिखाने के लिए कि एलएच के स्तर स्तनधारी गुर्दे में VEGF स्तर की भविष्यवाणी करने में सक्षम है उद्देश्य । गुर्दे से जुड़ी अधिकांश VEGF से संबंधित जांचों में मॉडल (यानी, कृंतक और खरगोश) के रूप में निचले क्रम के स्तनधारियों का उपयोग किया गया है। मानव शरीर के लिए इस काम का अनुवाद करने के लिए, उच्च क्रम स्तनधारियों (यानी, गोजातीय और पोर्सिन मॉडल) में VEGF और LH के बीच संबंधों की जांच करने का फैसला किया गया था । इस प्रोटोकॉल में किडनी कॉर्टेक्स से कुल प्रोटीन लाइसेट का इस्तेमाल होता है। इस विधि की सफलता की कुंजी में मृत्यु के तुरंत बाद कसाईघर जानवरों से गुर्दे की खरीद के साथ-साथ कुल प्रोटीन द्वारा एनालिएट स्तर (गुर्दे निकालने में) को सामान्य बनाना शामिल है। यह अध्ययन सफलतापूर्वक गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे दोनों में एलएच और VEGF के बीच एक महत्वपूर्ण रैखिक संबंध को दर्शाता है । परिणाम दो अलग-अलग प्रजातियों में प्रजनन योग्य हैं। अध्ययन सबूत है कि गायों और सूअरों से गुर्दे के अर्क का उपयोग एक उत्कृष्ट, किफायती, और गुर्दे के शरीर विज्ञान के अध्ययन के लिए प्रचुर मात्रा में संसाधन हैं, विशेष रूप से VEGF और अंय analytes के बीच संबंध की जांच के लिए समर्थन प्रदान करता है ।

Introduction

वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर ए (VEGF-A), किडनी और अन्य अंगों में एंजियोजेनेसिस और वैस्कुलर परायियता को विनियमित करने में मदद करता है1,2 (इसके बाद, VEGF-A को VEGF के रूप में संदर्भित किया जाएगा)। गुर्दे में VEGF का स्तर तंग होमोस्टैटिक नियंत्रण में है। जब गुर्दे के VEGF स्तर ऊंचा या उदास हैं, गुर्दे खराब कर सकते हैं । उदाहरण के लिए, जन्म के 3 सप्ताह के भीतर, VEGF के लिए पोडोसाइट-विशिष्ट विषमता वाले चूहों एंडोथेलियोसिस और रक्तहीन ग्लोबेरौली (यानी, मानव प्रीक्लेम्पसिया में देखे गए गुर्दे के घावों) का विकास करते हैं, और अंत चरण गुर्दे की विफलता इन विषमता में 3 महीने की उम्र तक होती है। पोडोसाइट-विशिष्ट होमोज़िगोटिक नॉकआउट जन्म के 1 दिन के भीतर हाइड्रोप्स और गुर्दे की विफलता से मर जाते हैं3,4

दूसरी ओर, गुर्दे के VEGF के अतिअभिव्यक्ति प्रोटीनयूरिया और ग्लोमर्युलर हाइपरट्रॉफी3,4का कारण बनता है । उदाहरण के लिए, वीजेएफ को ओवरएक्सप्रेस करने वाले ट्रांसजेनिक खरगोश नेचुरोपैथी के शुरुआती दौर में ग्लोमर्युलर फिल्ट्रेशन दरों में वृद्धि के साथ प्रगतिशील प्रोटीनुरिया का प्रदर्शन करते हैं, जिसके बाद बाद केचरणोंमें ग्लोमर्युलर निस्पंदन दरों में कमी आई है। मधुमेह के वयस्कों में अंतिम चरण गुर्दे की बीमारी का एक प्रमुख कारण मधुमेह नेचुरोपैथी, VEGF dysregulation2,5के साथ दृढ़ता से जुड़ा हुआ है । पैथिकपरिस्थितियोंमें VEGF अभिव्यक्ति को प्रेरित करने में हाइपोक्सिया की भूमिका पर बहुत ध्यान दिया गया है । हालांकि, शारीरिक स्थितियों (गुर्दे और अन्य अंगों दोनों में) के तहत VEGF को नियंत्रित करने वालेकारकोंको2,6अच्छी तरह से समझ में नहीं आता है। इन कारकों की पहचान करना (ऑक्सीजन को छोड़कर) जो शारीरिक और पैथोलॉजिकल VEGF विनियमन में शामिल हैं, एक महत्वपूर्ण उपक्रम है ।

ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच), एक प्रो-एंजियोजेनिक हार्मोन, अंडाशय और टेस्टिस7,8जैसे प्रजनन अंगों में शारीरिक VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में मदद करता है। पिछले अध्ययनों से इस बात के सबूत मिले हैं कि एलएच गैर-प्रजनन अंगों में VEGF को विनियमित करने में भी मदद करता है, जैसे आंखें6,9,10। एलएच रिसेप्टर्स मेदुल्ला और कॉर्टेक्स में किडनी11,12के पाए जाते हैं । ध्यान दें, गुर्दे ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं के साथ-साथ एलएच रिसेप्टर, एक्सप्रेस VEGF11,12,13,14। इन दो टिप्पणियों को एक साथ लेते हुए, हमने परिकल्पना की कि एलएच किडनी13,14में VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में भी मदद करता है। इस LH/VEGF रिश्ते के सबूत प्रदान करने के लिए, प्रस्तुत प्रोटोकॉल को दिखाने के लिए कि एलएच के स्तर गुर्दे में VEGF स्तर की भविष्यवाणी करने में सक्षम है करना है । गुर्दे से जुड़ी कई पिछले VEGF से संबंधित जांच ने निचले क्रम के स्तनपायी मॉडल (यानी, कृंतक और खरगोश)2का उपयोग किया है। मानव शरीर के लिए इस काम का अनुवाद करने के लिए, अध्ययन उच्च क्रम स्तनधारियों (यहां, गोजातीय और पोर्सिन मॉडल) में VEGF और LH के बीच संबंधों की जांच करता है । इस उद्देश्य को पूरा करने के लिए, गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे के कॉर्टेक्स क्षेत्र से कुल प्रोटीन लाइसेट तैयार किया गया था।

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Protocol

इस अध्ययन के लिए किसी जीवित या प्रायोगिक जानवरों का उपयोग नहीं किया गया था।

1. टिश्यू हैंडलिंग

  1. बूचड़खाने से वध के तुरंत बाद गोजातीय और पोर्सिन पूरी किडनी की खरीद करें। प्रयोगशाला के लिए बर्फ पर परिवहन।
  2. प्रयोगशाला में पहुंचने पर, बर्फ के 50 मिलीएम के साथ गुर्दे कुल्ला-ठंडा फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस)। रक्त को पूरी तरह से हटाने के लिए इस चरण को 2x दोहराएं।
  3. आगे निकालने तक गुर्दे को बर्फ (या रेफ्रिजरेटेड) पर रखें।

2. गुर्दे का विच्छेदन

  1. गुर्दे को विच्छेदन करने और आवश्यक ऊतक भाग को उत्पादित करने के लिए बाँझ कैंची, संदंश, एक चाकू और पेट्री व्यंजन का उपयोग करें।
  2. किडनी विच्छेदन से पहले रिपा लिसिस बफर तैयार करें। 5 एमएम एनएसीएल, 0.5 एम ईटीए, 1 एम ट्रिस (पीएच = 8.0), एनपी-40 (आईडी + जीईपल सीए-630), 10% सोडियम डिऑक्सीकोलेट, और डबल आसुत पानी में 10% एसडीएस भंग करें, फिर अच्छी तरह मिलाएं। उपयोग में नहीं होने पर रिपा लिसिस बफर को ठंडा करें।
  3. धीरे-धीरे गुर्दे को आधे (sagittal विमान) में काट लें और गुर्दे के केंद्र में कॉर्टेक्स क्षेत्र से ऊतक (50-70 मिमी2)का एक टुकड़ा काट लें (गीले वजन से 80-100 मिलीग्राम वजनी)।
  4. समरूपता प्रक्रिया की सहायता के लिए ऊतक को चाकू के साथ छोटे टुकड़ों में ब्लॉक करें।
  5. ऊतकों की माँग ने के बाद, उन्हें बर्फ-ठंडा 1x रिपा लिसिस निष्कर्षण बफर के 1 मिलील के साथ एक माइक्रोफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। ट्यूबों को आगे निकालने तक बर्फ में रखें।

3. टिश्यू समरूपीकरण

  1. ऊतक अलौकिक संग्रह के लिए विशिष्ट नमूना विवरण के साथ माइक्रोफ्यूज ट्यूबलेबल।
  2. बाँझ जांच के साथ एक हाथ में समरूपता का उपयोग करना, तो ठंड की स्थिति में 1-2 मिन के लिए ऊतकों समरूप (बर्फ बाल्टी पर नमूने) जब तक ऊतकों का कोई हिस्सा दिखाई दे रहे हैं ।
  3. 4 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिन के लिए 9,600 x ग्राम पर प्रशीतित अपकेंद्रित्र में अपकेंद्रित्र के लिए ऊतक अर्क तुरंत विषय।
  4. ट्यूबों को अपकेंद्रित्र से निकालकर बर्फ की बाल्टी पर रखें।
  5. एक नया लेबल माइक्रोफ्यूज ट्यूब में supernatant ले लीजिए और बर्फ पर स्टोर । गोली फेंकें।
  6. फ्रीज-गल चक्र से बचने के लिए एलएच और VEGF-ए एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोरबेंट परख (एलिसा) और कुल प्रोटीन विश्लेषण के लिए सुपरनेटेंट के अलग-अलग एलिकोट्स तैयार करें।

4. गोजातीय और पोर्सिन एलएच एलिसा परख

  1. वाणिज्यिक रूप से उपलब्ध ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच) एलिसा किट (सामग्री की तालिकादेखें) में शामिल सभी एलिसा परख घटकों को 2-8 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। इसमें एंटीबॉडी, एचआरपी-कॉन्जुगेट, परख प्लेट (96 वेल), कैलिब्रेटर्स, वॉश बफर (20x कंसंट्रेट), सब्सट्रेट ए, सब्सट्रेट बी और स्टॉप सॉल्यूशन शामिल हैं। निर्माता के निर्देशों द्वारा अनुशंसित सभी अभिकर्मकों को तैयार करें।
  2. परख शुरू करने से पहले, कमरे के तापमान (आरटी) के लिए सभी अभिकर्मकों और परख प्लेट लाने के लिए । परख, सील के लिए आवश्यक संख्या में कुओं का उपयोग करें, और उपयोग तक अप्रयुक्त कुओं को 4 डिग्री सेल्सियस पर रखें।
  3. डबल आसुत पानी के साथ 300 मिलील के लिए धोने बफर (20x ध्यान के 15 mL) पतला
  4. बिना किसी समाधान के कोरा कुओं की स्थापना करें।
  5. प्रत्येक कुएं (एन = 2) में मानक या नमूना के 50 माइक्रोन जोड़ें, फिर प्रत्येक कुएं में सहिजन पेरोक्सिडसे (एचआरपी) का एक और 50 माइक्रोन जोड़ें। तुरंत प्रत्येक अच्छी तरह से एंटीबॉडी समाधान का एक और 50 μL जोड़ें। प्लेट को सील करें, अच्छी तरह से मिलाएं, और 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
  6. कुओं को 1x वॉश बफर (200 माइक्रोन/वेल) से धोएं और 4x दोहराएं।
  7. प्रत्येक अच्छी तरह से सब्सट्रेट बी के सब्सट्रेट ए और 50 माइक्रोन के 50 माइक्रोन जोड़ें, और धीरे-धीरे प्लेट को टैप करके अच्छी तरह से मिलाएं। 15 मिन के लिए अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर प्लेट और इनक्यूबेट को सील करें।
  8. प्रत्येक अच्छी तरह से स्टॉप समाधान के 50 माइक्रोन जोड़ें, धीरे-धीरे प्लेट को टैप करें, और 450 एनएम तरंगदैर्ध्य के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर सेट का उपयोग करके प्लेट पढ़ें।
  9. कुल प्रोटीन के लिए गोजातीय और पोर्सिन एलएच के स्तर को सामान्य करें (सेक्शन 6 देखें)।

5. गोजातीय और पोर्सिन VEGF-एक एलिसा परख

  1. वाणिज्यिक रूप से उपलब्ध वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर-ए एलिसा किट (सामग्री की तालिकादेखें) में शामिल सभी एलिसा परख घटकों को 2-8 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। इसमें एंटीबॉडी, एचआरपी-कॉन्जुगेट, परख प्लेट (96 वेल), कैलिब्रेटर्स, वॉश बफर (20x कंसंट्रेट), सब्सट्रेट ए, सब्सट्रेट बी और स्टॉप सॉल्यूशन शामिल हैं। निर्माता के निर्देशों द्वारा अनुशंसित सभी अभिकर्मकों को तैयार करें।
  2. परख शुरू करने से पहले, सभी अभिकर्मकों और परख प्लेट को आरटी में लाएं। परख, सील के लिए आवश्यक संख्या में कुओं का उपयोग करें, और उपयोग तक अप्रयुक्त कुओं को 4 डिग्री सेल्सियस पर रखें।
  3. डबल आसुत पानी के साथ 300 मिलील के लिए धोने बफर (20x ध्यान के 15 mL) पतला
  4. प्रत्येक कुएं (एन = 2) में मानक या नमूना के 100 माइक्रोन जोड़ें। प्लेट को सील करें, अच्छी तरह से मिलाएं, और 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
  5. प्रत्येक कुएं में तरल निकालें और प्रत्येक अच्छी तरह से पता लगाने वाले अभिकर्मक ए के 100 माइक्रोन जोड़ें, प्लेट को सील करें, और 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
  6. कुओं को 1x वॉश बफर (400 माइक्रोन/वेल) से धोएं और 4x दोहराएं।
  7. प्रत्येक अच्छी तरह से पता लगाने वाले अभिकर्मक बी के 100 माइक्रोन जोड़ें और धीरे-धीरे प्लेट को टैप करके अच्छी तरह से मिलाएं। प्लेट को सील करें और प्लेट को 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
  8. कुओं को 1x वॉश बफर (400 माइक्रोन/वेल) से धोएं और 4x दोहराएं।
  9. प्रत्येक कुएं के लिए सब्सट्रेट समाधान के 90 माइक्रोन जोड़ें, धीरे-धीरे प्लेट को टैप करें, और 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
  10. प्रत्येक अच्छी तरह से स्टॉप समाधान के 50 माइक्रोन जोड़ें, धीरे-धीरे प्लेट को टैप करें, और 450 एनएम तरंगदैर्ध्य के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर सेट का उपयोग करके प्लेट पढ़ें।
  11. गोजातीय और पोर्सिन VEGF-एक स्तर को कुल प्रोटीन (सेक्शन 6) तक सामान्य करें।

6. कुल प्रोटीन अनुमान

  1. निर्माता की सिफारिशों के अनुसार एक वाणिज्यिक किट (सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करके मानक गोजातीय सीरम एल्बुमिन (बीएसए) परख द्वारा गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे के अर्क के कुल प्रोटीन का अनुमान लगाएं।

7. सांख्यिकीय विश्लेषण

  1. प्रत्येक एनालेट के मतलब, औसत और मानक विचलन की गणना करें।
  2. पैरामेट्रिक बनाम के बीच, उपयोग पर, उपयोग पर, तय करने के लिए सामान्य उपयोग कोल्मोगोरोव-स्मिरनोव टेस्ट से नमूना वितरण के विचलन कापरीक्षण करें। गैर-पैरामेट्रिक सांख्यिकीय परीक्षण। यदि डेटा सामान्य रूप से वितरित किया जाता है, तो पैरामेट्रिक परीक्षणों के माध्यम से सांख्यिकीय परीक्षण करें।
  3. उचित परिस्थितियों में (जैसे सामान्य डेटा वितरण), एलएच और VEGF-A के बीच रैखिक संबंधों की जांच करने के लिए प्रतिगमन मॉडल का उपयोग करें।

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Representative Results

पशु प्रकार और सेक्स द्वारा एलएच और VEGF का औसत और औसत स्तर तालिका 1में दिखाया गया है। सामान्य के कोल्मोगोरोव-स्मिनोव परीक्षण द्वारा डेटा की सामान्यता की पुष्टि करने के बाद, एलएच और वीजीएफ के बीच संबंधों की जांच करने के लिए रैखिक प्रतिगमन मॉडल का उपयोग किया गया था। एलएच को गोजातीय और पोर्सिन दोनों गुर्दे (गोजातीय गुर्दे मॉडल: एन = 7, आर2 = 0.86, पी = 0.002; पोर्सिन किडनी मॉडल: एन = 7) में VEGF का एक मजबूत और महत्वपूर्ण कारक पाया गया; आर2 = 0.66, पी = 0.025)।

LH/VEGF रैखिक संबंध चित्रा 1 (गोजातीय प्रतिगमन मॉडल) और चित्रा 2 (पोर्सिन प्रतिगमन मॉडल) में सचित्र है । गोजातीय रैखिक समीकरण इस प्रकार है: VEGF स्तर = 2.156 x LH स्तर + 68.75। पोर्सिन रैखिक समीकरण इस प्रकार है: VEGF स्तर = 196.7 x LH स्तर + 47.94।

नमूना प्रकार पुरुषों महिलाओं सभी
गोजातीय गुर्दे n = 4 n = 3 n = 7
एलएच (mIU/mg कुल प्रोटीन) मतलब: 27.47 (एसडी 13.3) मतलब: 19.5 (एसडी 2.1) मतलब: 24.06 (एसडी 10.8)
मीडियन: 25.7 मीडियन: 19.9 मीडियन: 19.9
VEGF (स्नातकोत्तर/मिलीग्राम कुल प्रोटीन) मतलब: 126.2 (एसडी 25.8) मतलब: 106.0 (एसडी 14.5) मतलब: 120.6 (एसडी 25.1)
मीडियन: 131.6 मीडियन: 103.5 मीडियन: 110.8
पोर्सिन किडनी n = 4 n = 3 n = 7
एलएच (mIU/mg कुल प्रोटीन) मतलब: 13.2 (एसडी 3.6) मतलब: 12.3 (एसडी 5.5) मतलब: 12.8 (एसडी 4.5)
मीडियन: 13.6 मीडियन: 10.3 मीडियन: 11.2
VEGF (स्नातकोत्तर/मिलीग्राम कुल प्रोटीन) मतलब: 2987.2 (एसडी 772.5) मतलब: 2354.1 (एसडी 932.4) मतलब: 2715.9 (एसडी 901.0)
मीडियन: 3324.67 मीडियन: 2377.3 मीडियन: 3226.4

तालिका 1: पशु प्रकार और सेक्स द्वारा मतलब और औसत एलएच और VEGF का स्तर।

Figure 1
चित्रा 1: वयस्क गोजातीय गुर्दे में LH/VEGF रैखिक संबंध (एन = 7) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: वयस्क पोर्सिन गुर्दे में LH/VEGF रैखिक संबंध (एन = 7) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

पशु मृत्यु के तुरंत बाद बूचड़खाने से गुर्दे की खरीद इस पद्धति में सफलता की कुंजी है। मानव शवों के बजाय गायों और सूअरों से अंगों का उपयोग करने का यह मुख्य लाभ है। आमतौर पर मृत्यु के समय से कम से कम 12-24 घंटे की देरी होती है जब तक कि मानव शव अंगों की खरीद नहीं हो जाती। क्योंकि शारीरिक अंगों की रासायनिक संरचना मानव शव गुर्दे में 2 एच पोस्टमार्टम15,16,VEGF-अध्ययन के भीतर काफी परिवर्तन वास्तविक जीवन की परिस्थितियों को प्रतिबिंबित नहीं कर सकते हैं । हालांकि प्रोटोकॉल निष्कर्षण के बाद बर्फ पर पशु अंगों की तत्काल खरीद और प्लेसमेंट के महत्व पर बहुत जोर देता है, यह ज्ञात नहीं है कि अन्य शोधकर्ता भी इस कदम को प्राथमिकता देते हैं या नहीं । उदाहरण के लिए, हाल ही में एक अध्ययन की पद्धति अनुभाग (एंटीबायोटिक अवशेषों का पता लगाने के लिए गोजातीय और पोर्सिन गुर्देका उपयोग) पशु मृत्यु और खरीद के बीच समय देरी निर्दिष्ट नहीं किया/

यह अध्ययन व्यावसायिक रूप से उपलब्ध, प्रजातियों-विशिष्ट ELISAs के साथ ब्याज के analytes (VEGF और LH) को मापता है । ELISAs अत्यधिक संवेदनशील, के साथ परख प्रदर्शन करने के लिए सरल हैं, और मजबूत परिणाम18उपज । प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण कदम कुल प्रोटीन द्वारा (एलिसा-मापा) का सामान्यीकरण है। कॉर्टिकल किडनी निकालने एक अत्यधिक विषम जैविक पदार्थ है। इसके आलोक में, एक सुधार कारक आवश्यक है ताकि जानवरों के बीच एनालाइट के स्तर की तुलना की जा सके। इस प्रकार, कुल प्रोटीन द्वारा सामान्यीकृत किया गया था, क्योंकि हमने और अन्य लोगों ने9,19,20के समान अन्य विषम जैविक पदार्थों (यानी मूत्र, सूखे रक्त धब्बे और विट्रस तरल पदार्थ) को सफलतापूर्वक सामान्य किया है।

एक पूर्व अध्ययन से पता चला है कि वीट्रस तरल पदार्थ (गोजातीय और पोर्सिन आंखों से) में एलएच और वीजीएफ के बीच संबंध केवल कुल प्रोटीन6द्वारा सामान्यीकरण के बाद प्रकट होता है। महत्वपूर्ण बात, इस सामान्यीकरण कदम अक्सर प्रकाशित VEGF अध्ययन में छोड़ दिया है, विशेष रूप से एलिसा assays शामिल उन में । इसके बजाय, VEGF का स्तर अक्सर पिकोग्राम प्रति मिलीलीटर जैसी इकाइयों में व्यक्त किया जाता है (और कुल प्रोटीन के प्रति मिलीग्राम पिकोग्राम के रूप में नहीं)। उदाहरण के लिए, नौ अलग-अलग एलिसा अध्ययनों में विट्रियस वीजीएफ मापन (जिन्हें एक विट्रेस वीजीएफ समीक्षा लेख में शामिल किया गया था) को किसी भी सुधार विधि21,22द्वारा सामान्यीकृत नहीं किया गया था। एलिसा अध्ययनों में वीजीएफ सामान्यीकरण की इस कमी आंशिक रूप से यह स्पष्ट हो सकती है कि VEGF को अभी तक वैध बायोमार्कर21,22के रूप में सत्यापित क्यों नहीं किया गया है ।

प्रतिनिधि डेटा (गोजातीय, एन = 7; पोर्सिन, एन = 7) के सीमित नमूना आकार के बावजूद, यह प्रोटोकॉल गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे दोनों में एलएच और VEGF के बीच एक मजबूत और महत्वपूर्ण रैखिक संबंध को दर्शाता है । उस ने कहा, लिंग के लिए समायोजित बहुवेरिएट विश्लेषण करने के लिए एक बड़ा पर्याप्त नमूना आकार नहीं था। हम इस अध्ययन को बड़े नमूना आकारों के साथ दोहराने की योजना बना रहे हैं ताकि इस तरह के विश्लेषण किए जा सकें। फिर भी, प्रस्तुत परिणाम स्तनधारी गुर्दे में एलएच और VEGF के बीच संभावित सहयोग का समर्थन करते हैं।

उम्मीद है कि इस काम से किडनी में VEGF के होमोस्टैटिक रेगुलेशन की समझ को और मदद मिलेगी । इस पद्धति की गुणवत्ता और निष्कर्षों की मजबूती दोनों दो अलग-अलग प्रजातियों में परिणामों की प्रजनन क्षमता से सचित्र हैं। क्योंकि मांस उत्पादन के लिए किस्मत में जानवरस्वस्थ हैं, कसाईघर जानवरों से गुर्दे के अर्क का उपयोग मुख्य रूप से शरीर विज्ञान का अध्ययन करने के लिए है; हालांकि, उनके अंग पैथोलॉजी का अध्ययन करने के लिए कम सहायक होते हैं, जो उनके उपयोग की मुख्य सीमा है। सभी के सभी, गायों और सूअरों से गुर्दे के अर्क का उपयोग सामान्य वयस्क गुर्दे के अध्ययन के लिए एक उत्कृष्ट, किफायती और प्रचुर मात्रा में संसाधन हैं। अंत में, प्रोटोकॉल सामान्यीकरण के लिए कुल प्रोटीन का उपयोग करने की प्रभावशीलता को दर्शाता है, खासकर जब VEGF और अन्य एनालाइट्स के बीच सहसंबंधों की जांच।

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Disclosures

Zietchick अनुसंधान संस्थान (ZRI) एक निजी (लाभ के लिए) अनुसंधान संस्थान है, और डॉ छलनी Movsas (संस्थापक और ZRI के निदेशक) एक लंबित पेटेंट आवेदन और नेत्र रोगों के उपचार में गोनाडोट्रोपिन विरोधी के उपयोग के लिए मान्य पेटेंट है और मधुमेह। जेडआरआई में कर्मचारी (बायोकेमिस्ट) होने के अलावा डॉ ए मुथुसामी के पास रिपोर्ट करने के लिए कोई अन्य वित्तीय संघर्ष नहीं है । ए Arivalagan (ZRI में ग्रीष्मकालीन प्रशिक्षु, मिशिगन विश्वविद्यालय में स्नातक छात्र) कोई अंय वित्तीय संघर्ष की रिपोर्ट है ।

Acknowledgments

लेखक गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे प्रदान करने के लिए स्कॉल के कसाईघर (आनंदफील्ड, एमआई) का शुक्रिया अदा करते हैं । इस अध्ययन के लिए अनुदान वित्तपोषण का उपयोग नहीं किया गया ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bovine LH ELISA Kit MyBiosource, San Diego, CA. MBS700951
Bovine VEGF-A ELISA Kit MyBiosource, San Diego, CA. MBS2887434
Micro BCA Protein Assay Kit ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. 23235
Porcine LH ELISA Kit MyBiosource, San Diego, CA. MBS009739
Porcine VEGF-A ELISA Ray Biotech, Norcross, GA. ELP-VEGFA-1
RIPA Lysis and Extraction Buffer ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. 89901

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References

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