الجزيئية تطور Recombinase تري

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

نحن هنا تقرير من الجيل recombinase تري من خلال التطور ، وجهت الجزيئية. TRE recombinase تعترف تسلسل هدف محدد مسبقا ضمن تسلسل LTR للطليعة الفيروس HIV - 1 ، مما أسفر عن ختان البنات والقضاء على طليعة الفيروس من خلايا بشرية مصابة. في حين لا يزال في مراحله الأولى ، والتطور الجزيئي الموجه تسمح بإنشاء الأنزيمات المخصصة التي ستكون بمثابة أدوات جراحة الجزيئية والطب الجزيئي.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Buchholz, F. Molecular Evolution of the Tre Recombinase. J. Vis. Exp. (15), e791, doi:10.3791/791 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

نحن هنا تقرير من الجيل recombinase تري من خلال التطور ، وجهت الجزيئية. TRE recombinase تعترف تسلسل هدف محدد مسبقا ضمن تسلسل LTR للطليعة الفيروس HIV - 1 ، مما أسفر عن ختان البنات والقضاء على طليعة الفيروس من خلايا بشرية مصابة.

بدأنا مع لجنة المساواة العرقية ، وهو 38 كيلو دالتون recombinase ، أن تعترف 34 سنة مضت تسلسل الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل المعروفة باسم loxP. لجنة المساواة العرقية يمكن القضاء على نحو فعال تسلسل الجينوم ، شرعنا في خياط recombinase التي يمكن إزالة تسلسل بين LTR - 5' - LTR و3' من طليعة الفيروس HIV - 1 متكاملة. كخطوة أولى ضمن تسلسل حددنا مواقع LTR التي كانت مشابهة لloxP واختبارها لنشاط إعادة التركيب. فشلت لجنة المساواة العرقية في البداية والمكتبات mutagenized لجنة المساواة العرقية لإعادة تجميع المواقع loxLTR المختار من طليعة الفيروس HIV - 1. كما تبدأ في أي عملية التطور الجزيئي الموجه يتطلب ما لا يقل عن النشاط المتبقية ، تم تقسيم الأصلي متواليات loxLTR غير المتناظر إلى مجموعات فرعية واختبارها مرة أخرى لنشاط إعادة التركيب. بصفتها وسيطة ، وظهر نشاط إعادة التركيب مع مجموعات فرعية. وقد أثرى المقبل ، من خلال دورات المكتبات recombinase تطور يتكرر. في وقت لاحق ، تم تعديلا المكتبات المخصب ومعاد. أثبتت مجموعة من الطفرات والتآزر مختلفة تم إنشاؤها recombinases التي كانت قادرة على إعادة تجميع وloxLTR1 loxLTR2. كان هذا دليلا على أن استراتيجية التطور من خلال وسيطة يمكن أن تكون ناجحة. بعد ما مجموعه 126 دورات التطور وظيفيا وبنيويا تحليل recombinases الفردية. وكان 19 من الأحماض الأمينية التغييرات بالمقارنة مع لجنة المساواة العرقية -- وهو الأكثر نشاطا recombinase -- تري. وتري recombinase قادرة على استئصال طليعة الفيروس HIV - 1 من الجينوم HIV - 1 بالعدوى خلايا هيلا (انظر "HIV - 1 الحمض النووي الختان Proviral باستخدام Recombinase تطورت" ، Hauber J. ، هاينريش Pette ، معهد علم الفيروسات التجريبي وعلم المناعة ، هامبورغ ، ألمانيا). في حين لا يزال في مراحله الأولى ، والتطور الجزيئي الموجه تسمح بإنشاء الأنزيمات المخصصة التي ستكون بمثابة أدوات "جراحة الجزيئي" ، والطب الجزيئي.

Comments

3 Comments

  1. Dr. Frank Buchholz,

    Its nice to listen to the talk. I have some queries about Tre recombinase.,
     
    1, to excise a fragment using cre or tre i guess, there should be two loxp sites if you are targeting HIV LTR region it should be very specific region rather conserved region. So what happens if the LTR regions tend to mutate ?
    ², Isn't molecular evolution a long process to create such an recombinase ?

    3, There are "zinc finger nuclease" which are custom made enzyme which make specific cuts at DNA. It has the ability to bind to any piece of DNA. So will this technique be useful  for making "Zinc Finger Recombinase", which has the ability to bind LTR region and excise the whole or part of HIV genome.

    Hoping for your comments

    Roshan Padmanabhan
    India  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 26, 2008 - 12:40 PM
  2. TRE can eradiction Lentiviral Vector from transducted cell fully? if Yes you can find different beatween Tat-Dependent and Tat-Independent LV as target for eradiction 5LTR-LTR3 from genome integrated sit? Sincerely

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 22, 2008 - 7:24 AM
  3. Hello Dr. Frank Bucholz,
    Have you sequenced the host cell genome in the wild type control vs. the HIV-1 infected vs Tre recombinase cells to
    definitively show where the HIV-1 genome is inserting, and that it is removed? Much evidence points to nonrandom insertion
    of the HIV-1 genome.
    Doug Cork
    MHRP/HJF (dcork@hivresearch.org)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 21, 2009 - 10:06 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics