Interview: le VIH-1 Excision ADN proviral utilisant une recombinase Evolved

Biology

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Summary

Courant VIH-1 stratégies agir pour supprimer le cycle de vie du virus mais ne éradiquer efficacement l'infection. Ici, nous démontrons que l'ingénierie peut ADN recombinase efficacement accise intégré le VIH-1 proviral dans le génome des cellules infectées.

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Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

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Abstract

VIH-1 s'intègre dans le chromosome hôte des cellules infectées et persiste comme un provirus flanqué de longues répétitions terminales. Stratégies de traitement actuelles ciblent principalement les enzymes ou le virus de fusion cellulaire, supprimant le cycle de vie viral sans éradiquer l'infection. Depuis le provirus intégré n'est pas ciblée par ces approches, de nouvelles souches résistantes de VIH-1 peuvent émerger. Ici, nous déclarons que la recombinase Tre conçu (voir l'évolution moléculaire de la recombinase Tre, Buchholz, F., Institut Max Planck pour la biologie cellulaire et génétique, Dresde) excise efficacement l'ADN intégré le VIH-1 proviral dans le génome des cellules infectées. Nous avons produit contenant loxLTR pseudotypes viraux et des cellules HeLa infectées d'examiner si Tre recombinase peut accise du provirus dans le génome du VIH-1 cellules humaines infectées. Une lignée cellulaire du virus de particules de libération a été cloné et transfectées avec un plasmide exprimant Tre ou avec un vecteur de contrôle parental. L'activité recombinase et la production de virus ont été surveillés. Tous les tests ont démontré la suppression efficace des provirus partir de cellules infectées, sans effets cytotoxiques visibles. Ces résultats servent de preuve de principe qu'il est possible de faire évoluer une recombinase de cibler spécifiquement une LTR du VIH-1 et que cette recombinase est capable d'exciser les provirus VIH-1 à partir du génome du VIH-1-cellules humaines infectées.

Avant une recombinase modifiés pourraient entrer dans le domaine thérapeutique, cependant, d'importants obstacles doivent être surmontés. Parmi les problèmes les plus critiques, que nous devons faire face, sont une prestation efficace et sûr pour les cellules ciblées et l'absence d'effets secondaires.

Protocol

S'il vous plaît voir les vidéos liées intitulé Principes de la recombinase site-spécifique (SSR) Technologie et Evolution Moléculaire de la recombinase Tre pour plus d'informations sur recombinaison spécifique de site et de l'ingénierie de la spécificité du site d'enzymes recombinase.

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Comments

10 Comments

  1. Please this must be in clinical trials asap..  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 24, 2008 - 7:26 PM
  2. Moving faster with recombinase. To tell the truth i don' t trust completely in the results of the research, any kind of research, humans trial included. Kp-1461 has been halted almost at the end of phase ² humans trial.. and now seems that kp-1461 can not work in vitro too.. The koronispharma managers have to pay for this.. A LOT OF MONEY.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 25, 2008 - 8:56 AM
  3. how can I download a video protocol in my flash disc?  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 20, 2008 - 4:36 PM
  4. Dear Anonymous, please feel free to contact us at support@jove.com and we could discuss your problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 6, 2008 - 6:34 PM
  5. How can I get in touch with doctor Joachim Hauber? I am HIV positive, there isn´t a single day ever since I was diagnosed this disease that I don´t feel like my life just ended. I would do anything to get cured.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2008 - 1:37 PM
  6. Reply
    Posted by: Anonymous
    November 3, 2008 - 8:41 AM
  7. Interesting presentation on remarkable research. Worthy of further discussion

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 23, 2009 - 1:48 PM
  8. Have you sequenced the host cell genome in the wild type control vs. the HIV-1 infected vs Tre recombinase cells to
    definitively show where the HIV-1 genome is inserting, and that it is removed?

    Reply
    Posted by: Douglas C.
    October 21, 2009 - 9:41 AM
  9. why can't i get an update on this work?? i have looked everywhere. it has gotten so little publicity..i dont get it

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 25, 2010 - 1:04 AM
  10. hi
    i need full text this article
    plz
    tanx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 10, 2010 - 4:23 PM

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