Gene Digital Circuits Based on CRISPR-Cas Systems and Anti-CRISPR Proteins

Lifang Yu; Yadan Zhang; Mario  Andrea Marchisio

doi:10.3791/64539

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Bioengineering

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Gene Digital Circuits Based on CRISPR-Cas Systems and Anti-CRISPR Proteins

基于CRISPR-Cas系统和抗CRISPR蛋白的基因数字电路

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10:46 min

October 18, 2022

DOI: 10.3791/64539-v

Lifang Yu*¹, Yadan Zhang*¹, Mario Andrea Marchisio¹

¹School of Pharmaceutical Science and Technology,Tianjin University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

CRISPR-Cas系统和抗CRISPR蛋白被整合到 酿酒酵母的布尔门方案中。新的小逻辑电路表现出良好的性能，加深了对基于dCas9/dCas12a的转录因子和抗CRISPR蛋白性质的理解。

我们的协议解释了如何设计、构建和分析利用二型和五型CRISPR dCas系统以及相应的抗CRISPR蛋白的酵母基因数字电路。它是组装停留，因为它收集了零标准程序来组装和测试服务中的合成转录网络。首先，制备含有20至40纳克DNA模板，1微升正向引物，1微升反向引物，5微升DNTP混合物，0.5微升DNA聚合酶，10微升5x DNA聚合酶反应缓冲液和双蒸水的反应混合物，总体积为50微升。

如手稿中所述，在热循环仪上使用触地PCR程序扩增DNA序列。通过凝胶电泳分离PCR产物，并通过DNA凝胶提取试剂盒稀释琼脂糖凝胶中的DNA序列。使用Gibson组装方法，将纯化的PCR产物插入切开式穿梭载体中，方法是让等摩尔DNA混合物在50摄氏度下进入一小时。

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