Summary
我们描述了一种技术，细胞外记录和刺激神经，肌肉和个人的神经元，
Abstract
多功能的，一个外围结构的能力，生成多个不同的行为，使动物能够迅速调整自己的行为，以适应不断变化的环境。海洋软体动物 Aplysia 夜蛾提供了一个易于处理系统的多功能性的研究。 海兔的饲养过程中，产生了几种不同类型的使用相同的进给装置，颊质量的行为。控制这些行为的神经节包含了一些大型，确定了神经元的电生理研究访问。已经描述了这些神经元的活性，可分为两种类型，摄食和egestive方案上的神经活动的定时关闭食品抓取器相对的神经活动，是根据在电机的程序，protracts或缩回抓钳2。然而，在孤立的神经，肌肉的运动，会产生这些行为是不存在的，使得它更难某些电机的方案观察是否是相关的实际行为。 在体内 ，神经和肌肉的录音中已取得相应的喂养方案2,3,4，但它是非常困难的直接记录从单个神经元的5。此外， 在体内 ，摄食方案可进一步分为叮咬和燕子1,2，区别是难以在体外准备。
暂停的的口腔大量制备（ 图1）孤立的神经节和完整的动物之间架起了一座桥梁。在该制剂中，可摄食行为-包括咬和吞咽-和egestive的行为（拒绝）引出，在同一时间可以记录作为单独的神经元，刺激使用胞外电极6。与这些不同的行为的进给运动，可以收音DED，量化，直接关系到电机的程序。运动程序中的悬浮口腔大量制备似乎是更相似， 在体内观察到的是运动程序引起的孤立节。因此，电动机在此制备方案可以更直接地在体内的行为有关的，在相同的时间，单个神经元的较完整的动物更容易访问的记录和刺激。此外，作为隔离神经节和完整的动物之间的中间步骤，从暂停的颊质量结果可以有助于更加减少，更完整的设置中获得的数据的解释。暂停的的口腔大量制备是一个非常有用的工具，在海兔的神经控制的多功能特性。
Protocol
1。溶液的制备
- 为了制备氯化镁溶液是等渗的海水，其中动物保持（〜1,000 millosmolar），在所需的量的水平的一大罐马克。这个水平的约80％的蒸馏水填充的罐体，并创建333 mM的溶液的最终体积中称出适量的氯化镁六水合物。添加氯化镁的酒壶，盖上盖子，用力摇晃，直到氯化镁完全溶解，然后加入蒸馏水，直至达到最终体积。
- 为了制备海兔生理盐水，再次马克一大罐的所需量的水平，并用蒸馏水填满这个水平的约80％。将壶不小的轰动板，将搅拌棒的酒壶，打开搅拌板。
- 一个接一个，称出的壶，并添加适量的下列物质来创建这些CONcentrations最终体积：460毫摩尔氯化钠，10 mM氯化钾，22 mM氯化镁六水合物，33 mM的硫酸镁七水合物，10mM氯化钙二水合物，10mM葡萄糖，10mM的MOPS。
- 一旦溶质完全溶解，使用pH计测量该溶液的pH值。慢慢加入1 M氢氧化钠将pH提高到7.5的最终值。如果你不小心添加太多的氢氧化钠，您可以添加1 M盐酸降低pH值。
- 加入蒸馏水，直至达到最终体积。
- 为了减缓细菌的生长，存储解决方案，在冰箱，直到需要的实验。请注意，温度影响海兔电机的程序。我们不仔细地监控温度，但在安装完成后，准备通常是接近室温的温度。
2。准备录音碟
- 在实验过程中，颊的质量将被暂停在溶液中一个圆形的100毫米（直径）×50毫米（高）高硼硅菜。这个菜应该有一个为颊质量，都寄托在颊神经节Sylgard的一个狭窄的，升高的中间平台，和一个单独的，升高的后室，其中神经节中分离的前腔室。在Sylgard的一个缺口应该连接的的颊神经节的平台，丘脑室。参见图1，建设的菜时，到指定的键尺寸。
- 为了创建这个菜，开始与一个轮100×50毫米高硼硅菜。 Sylgard的准备后，提供的产品说明。将需要数盆满钵满的Sylgard的，它们之间的Sylgard的设置必须允许建设的菜。
- 的一次浇铸是创造最高水平的Sylgard的菜，墙之间的颊侧和脑腔（参见图1）。这部分的菜封锁的其他部分。建模粘土可用于构建墙阻断部分。对于一个平的壁，可以使用一块纸板与建模粘土背衬。对于弯曲壁（从而降低含有神经节的腔室的大小），单独使用建模粘土作为基础的壁。大衣所有的墙壁用保鲜膜，他们将在那里更容易去除的Sylgard的联系。
- 一旦颊，脑腔室之间的墙的空间已被封锁，如2.3中所述，确保严格密封的边缘，以最大限度地减少泄漏，倒Sylgard的近顶部的菜到这个空间。一夜之间让Sylgard的集，并确保它完全建立，然后再继续。将菜放在暖和的地方，将导致更快的设置。
- 接着，颊神经节平台和神经节室应浇（再次，请参阅图1，它显示了这些神经节的位置，在完成的菜）。删除以前的阻挡墙，并创建一个新的墙上贴了二立场0.5厘米处：Sylgard的平坦的中间部分的壁的封锁颊神经节平台。没有围墙是必要的创建的背腔将持有的神经节。倒Sylgard的两部分的高度约3毫米以下的顶级。脑腔应该是稍稍低于的颊神经节平台。再次，让Sylgard的隔夜。
- 最后，倒入前室（ 即 ，在颊质量将暂停室）。没有墙壁是必要的。倒入到适当的高度，在图1中所指明。
- 最后的步骤是切割的切口连接的的颊神经节平台和脑腔。的凹口的深度应该是相同的作为的颊神经节平台的水平。甲手术刀刀片可以用来切割的切口， 图1示出已完成的菜。
3。电极制备
- 拉外Ëlectrodes从单管的毛细玻璃用燃烧的布朗微量移液器车夫。电极的内径应该是约40微米，其电阻应该是约0.1MΩ。 FT345B长丝在拉马，我们典型的车夫程序设置是热拉的Vel 13，50，480，和时间20，但请注意，设置会有所不同不同的细丝。这个程序创建的电极在单拉不火抛光阶段。在开始实验，回填外电极与海兔盐水。
- 创建钩电极记录神经和肌肉2至由卡林斯和Chiel 4所描述的类似的协议，除了个别电极不必相互缠。步骤来创建这些电极在3.3-3.13。
- 切下一块的搪瓷涂层，0.001英寸直径的不锈钢丝的长度约为60厘米。附加的橡皮泥球的导线的每一端，保持丝在空气中在它的中间点，并围绕彼此旋转的两个球粘土包裹的导线彼此左右（这减少了电容瞬变）。
- 通过加入到一个球，和磁带暂停导线的导线的另一端的两个球粘土一起握住导线的两端。
- 大衣在家庭硅酮胶线的整个长度，水珠胶水在您的拇指，抚摸你的拇指和食指一起在电线上，他们在电线上运行。让胶水干通宵。
- 胶干燥后，放置在平坦表面上的金属丝，在双目解剖显微镜。切端部的线，这在以前的中间，从而在两个单独的导线绞合在一起。这是一个差分电极。
- 使用磁带保持到位的电极之一的端部。用镊子去掉胶和珐琅，准备两根导线的一端有大约2厘米Øf，与约1厘米的珐琅剥离导线自由线。焊料一个金连接销的每根电线，和地点实验室磁带周围的标签，以保持它们分开。
- 在其另一端的电极，准备导线有大约3毫米的免费丝。从最后的约1毫米的一个导线取出牙釉质，这根线和弯曲的方式回满分。这是基准丝。至关重要的是，这两条线没有裸露的电线相互接触。
- 卸下牙釉质从其他导线的所有方式的硅酮胶。这根线扭成钩状，并切断它的长度为约1毫米。这个钩子将附加到神经或肌肉。使用一组短钩当神经被附着在电极上时，提供了更大的稳定性。
- 使用万用表来验证的电极构造和完整的。一金连接器应该有一个相对于一个导线的前端大约200-500欧姆的电阻读数，和其他金连接或者应该有一个类似的相对于其他金属丝的读数。
- 如果没有在一根导线上的一个完整的连接，它可能会重新剥去导线末端和重新焊接的一个或两个金连接器来建立这些连接。如果两个金连接器具有与两根导线的连接，所述电极可具有两个裸线接触。它可能的另一端固定来消除这个问题，否则，电极应被丢弃。
- 重复此过程，为尽可能多的电极所需要的实验。钩电极可重新使用的，从实验实验切断的端部连接到神经，并创建新的钩，直到该导线许多用途后变得太短。每次这样做，使用万用表来验证的电极是完整的。
- 在实验过程中，标签电极和他们的电缆来跟踪不同的电极。使用不同颜色的实验室磁带是有帮助的。
- 选择健康的动物约200〜300克的重量。与海藻，动物与强烈protractions在固定的时间间隔为3-5秒产生叮咬。
- 将动物解剖托盘中，并注入约50％的体重等渗氯化镁溶液麻醉。用注射器在约15至30度的角度，在第一次注射的中间附近，和指向的动物的尾巴。注射后，轻轻按摩表面的动物传播的氯化镁。车型如指向的动物头与注射器需要额外的注射。
- 动物会停止响应柔和的触觉刺激后，脚的动物在托盘上，背了起来，的尾巴，一针一针在每个前触手。
- 使用镊子，捏和解除动物的皮肤在头部正中，背后的rhinophores。中号在任职冠状切口穿过动物的头，仅次于点举行。然后做一个正中矢状切口，朝口之间的rhinophores，露出颊质量。
- 使用产钳拉更接近你的皮肤瓣的从颊质量，并切断通过神经和结缔组织附着于体壁完全分离皮瓣，皮肤，颊质量。确保不减少任何神经或组织内的颊质量。
- 使用产钳，吸引和保持食道。通过食道后切点。上段食管拉，以解除颊质量，价格大幅下降。
- 颊质量的背后，脑，胸膜，和踏板神经节形式的环，与由脑颊连接词（全血球）颊神经节的神经节附着。离开这些环节贴颊质量，并切断所有这些神经节的其他部分投射的神经身体。
- 剪切通过颊质量周围结缔组织，继续抬起颊质量，当它变得较少连接到主体。一旦只附着在口颊质量，的食道和颊质量应举行直线上升。
- 一裁终局前的钳口从身体中释放颊质量。颊质量放置在50％的等渗氯化镁溶液和50％的海兔生理盐水的溶液，以保持电极连接时的局部麻醉。
- 颊质量放置，用溶液，用Sylgard在培养皿底部。将在胸膜和踏板切断其连接到大脑的神经节神经节。离开大脑的神经节的的颊神经节和的颊质量通过脑颊连接词（CBCS）连接到切断丘脑之间的联系和颊质量。修剪长度较短的食道和唾液腺，所以他们不这样做克等的方式。
5。钩电极附件
- 用于记录和刺激，钩电极可以连接到若干不同的神经和肌肉，作为适当的实验（ 图2）。
- 为了表征的模式，如在体内通过卡林斯和Chiel 4，附加电极的齿舌神经，I2的肌肉，和颊神经2和3。总之，这些记录显示的颊质量3,7,8内在的主要肌肉的运动神经元的活动，并允许I2记录，从颊神经的回缩阶段2和3的录音2的迁延难愈阶段的识别，5,8，和定时关闭的食物抓取的齿舌神经记录2。额外的钩电极连接到分支模式刺激一个的颊神经2，。扣押电极如下相似的过程，它演示由卡林斯和Chiel 4，并且被描述在下面的步骤。
- 对于每个电极附件，将粗操纵器上的电极。操纵器，胶带木棍与一个在其端部的鳄鱼夹，并使用剪辑以放置在电极的端部。剪辑应附加的硅氧烷涂覆的电极部分的硅氧烷涂层的端部之前，约1厘米。使用机械手定位钩附近的颊质量的电极。
- 随着在其一侧的颊质量和对反对侧的稳定的菜下，开始与齿舌神经，其中介绍了最困难的电极附件。有两种选择访问这根神经。
- 齿舌从下面的口腔神经节的神经项目，并进入下的I2肌肉的两个分支。首先，看看是否可以访问，而不削减肌肉的齿舌神经。轻轻拨开白鞘附着的颊神经的I2肌肉的;不削减套。如果神经被访问，使用镊子，尖端弯曲成钩状解除对神经的一个分支。
- 如果齿舌神经是无法访问以这种方式，第二个选项是定位下方的薄I2肌肉，神经，使一个小切口，在I2的神经暴露。此切口应去通过两层的肌肉。使用弯曲的镊子拔齿舌神经的一个分支，从下方的肌肉。
- 使用操纵器电极的定位钩神经旁边。以放置成钩神经，它是有帮助的钩状镊子按住神经，同时使用另一种对钳子创建正在举行的神经的两个半部之间的分离。
- 后神经是牢固地在钩，使用机械手解除神经远离颊质量，直到它是拉紧的，但不要过分紧张。
- 一个的Kimwipe并紧紧地拧一个角落，形成一个小芯。使用这种灯芯干端的电极和神经节被钩。
- 使用的弯尖镊子，另一组应用快速凝胶超级胶水水珠的钩神经。开始新的应用程序在电线和神经之间的接触点。请确保钩用胶水完全覆盖，并且，没有用胶水（ 图3）覆盖，基准线的前端。
- 与聚乙烯管附件从培养皿上的胶水，将诱导的胶水的表面来设置应用的解决方案中使用的注射器。一定要彻底与解决方案，以确保沐浴胶，胶水设置正确。
- 使用机械手来释放紧张的神经，然后松开电极从剪辑。这样就完成了一个钩电极的安装程序。
- I2肌肉电极应附下。我们记录肌电活动，I2是肌肉而不是ENG其支配神经活动，因为I2神经是非常SMAll和很难访问一个完整颊质量。颊神经2附近，使用钩状镊子抬起一个或两个频带的I2的肌肉，和使用另一对钳子，以帮助它们分开的其余部分的肌肉。 I2的分离的部分应该是相似的厚度为2或3颊神经。要小心，不要过分独立的（，可能denervate的肌肉）。附加的钩电极齿舌神经用于使用相同的过程。
- 下一个电极连接的是，颊神经2 分支 a。这个分支可以电刺激诱 发运动程序9。在颊神经2的横向槽下方的的I1肌肉在中，神经trifurcates;分支， 一个是分裂出去的第一家分行。分支是相当小，因此应做护理的电极附件。按照相同的步骤，将电极。
- 颊神经2和3，很容易访问。按照同样的步骤，安装电trodes大约一半的的颊神经节和横向槽之间。
- 为了帮助区分单边与双边预测的神经元，它也是有用的附加 颊神经的电极2和3的的颊质量，以及颊神经分支一的另一面，因为某些神经元的反应不同，患侧与。对侧BN2 的刺激。
6。定位节和细化的护套，
- 颊质量将被移动到圆100×50毫米耐热玻璃盘第2节中描述的。请参阅图1。
- 涂上薄薄的一层真空脂，脑和口腔室之间的缺口，用枪头挑了水珠真空油脂和传播的槽口。我们发现，真空油脂，最大限度地减少泄漏优于凡士林。填写的前室与海兔盐水。小心移动的颊质量，从培养皿中的前chamb呃这个更大的菜，确保电极没有被紧紧地，这可能会破坏神经。
- 如果菜必须转移到另一个双目显微镜鞘变薄，必须非常小心钩电极。集团颊质量的一侧上的电极一起，并且一起颊质量的另一侧上的电极组。小心地保持电极的抓实验室的磁带，包括连接器引脚，再次肯定没有的电极紧紧地。
- 的菜是定位在显微镜下，电极应轻轻地披在双方的菜和其他的平台上的菜。
- 在休息之间的实验阶段，充气盐水中的的颊质量室使用水族馆airstone。
- 引脚丘脑的脑颊连接词（CBCS）通过缺口在后面。应用更多的真空克rease在全血球，再加入更多的海兔盐水两个部分的菜，所以神经节被完全淹没。确保真空润滑脂添加的量是高于在脑或颊腔室中的水平的生理盐水，所以没有发生泄漏时在腔室之间。在此阶段，颊质量应休息的前腔室的底部上，以便不拉太强有力地对神经和神经节。
- 引脚颊神经节的中间平台上。为了避免损坏的神经，颊质量仍然会附加到，只有将两个神经鞘引脚。添加两个引脚上的全血球侧伸展，并使他们。
- 查看颊神经节平的或旋转的基础上的位置的神经元的利益。要旋转的颊神经节，用细镊子抓住一些多余的鞘的CBC和引脚2和3之间颊神经。然后大部分的细胞体，靠近背面室和不能EASI从颊神经节的顶部访问光年可以看出。最后，添加两个引脚在护套上的口腔神经节靠近到颊质量侧颊神经节的运动最小化。参见图4。
- 用细镊子抢鞘的后室靠近颊神经节，然后用细剪刀剪去多余的护套没有暴露的细胞体。为了减少损失，只能取出适量的护套需要看到的细胞体。
7。刺激和记录
- 变薄鞘完成后，将所有电极针插座上的电缆连接到放大器的。再次，要确保电极不紧紧地，而这样做。请确保电极正确连接到相应的电缆的极性是正确的。
- 要洗出任何剩余的氯化镁，更换Aplysi的生理盐水，用新鲜的海兔盐水的的颊质量室。
- 主题丝绸缝合线通过在前面的颊质量，anterodorsal钳口软骨的软组织，并使用两件造型粘土附加的缝合线的菜的边缘，从而，从它的前端的颊质量悬浮。请注意，后端被暂停由颊附着颊神经节神经。
- 保持的玻璃外电极，使得电极尖端附近的口腔神经节是一个操纵器定位。
- 要找到并确定了神经元，使用机械手轻轻地按到鞘管，外电极的尖端神经元的胞 体（ 图5）。应用的刺激电流，然后切换信道正在使用的记录模式，以便记录的胞外电极和相应的对神经的活性（ 图6）上的活动激发苏摩。参考公布的神经节的地图和神经元描述，包括帮助识别的神经元的神经预测和肌肉神经支配（ 如 7,8）。
- 对于视频记录喂养方案，位置的镜像，这样前视图和侧视图，可以同时看到颊质量（反射镜的位置在图1中示意性地示出）侧的菜。的视频摄像头，在其视野的正面和侧面的位置。
- 视频和电生理记录可以通过发送一个TTL脉冲电子计时器在相机的视图和在AxoGraph，所述计算机程序，用于记录和分析电生理数据的信道同步。这种脉冲提供了一个时间点是完全一样的，在AxoGraph和录像，在此基础上可以同步文件。
- 一个神经元位于后，其活性可被记录在不同的馈送等的行为，这些行为约n是引起如下所述。
- 为了引起排斥反应般的运动程序，刺激BN2 的一个漫长的火车2赫兹，1毫秒脉冲（我们的经验是，这样的刺激可靠地产生egestive的模式，在此设置）。模式持续的刺激的持续时间，并可以继续，直到刺激结束后不久。
- 为了促使刺骨般的运动程序12，将有少量结晶固体卡巴直接对大脑的神经节。或者，如果受控氯化氨甲酰胆碱的曝光水平是必要的，使用1和10mM之间的氯化氨甲酰胆碱在海兔生理盐水的溶液。更高的浓度是更可能产生响应。重复的图案开始普遍在5分钟内，持续大约10至15分钟，然后再开始向下运行。
- 引起吞咽，如马达方案13，适用于卡巴，等到，颊质量产生强烈的叮咬。然后，在一咬牙，把一个条海藻（紫菜），在动物的口，使齿舌握住海藻（ 图7）。带通常是0.5厘米宽5厘米的长度。
- 后氯化氨甲酰胆碱引起的图案的第一系列，它往往是可能的，以获得额外的氯化氨甲酰胆碱的反应。彻底清洗，满分海兔生理盐水中的神经节室，除去和更换盐水至少三次。卡巴再次在提出申请前，等待至少20分钟。等待了40分钟，可能会产生更可靠的结果。
这时在美国，无脊椎动物，不需要由一个机构使用动物及护理委员会的正式批准。然而，我们确保所有的治疗海兔最大限度地减少伤害和痛苦的动物，和所有的解剖，而动物是完全麻醉。
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Discussion
以前的工作特点的海兔电机计划在完整的动物和减少的准备工作，如孤立的神经。在完整的动物，虽然单个神经元的记录已经获得了5，这样的实验是非常困难的，和电极不能移动从神经元到神经元在喂养过程中。在离体神经节，神经活动引起的进给运动不能观察到。暂停的的口腔大量制备这两个极端之间架起了一座桥梁。
其他半完整制剂已被用于在以前的研究中，但悬浮颊质量制剂具有显着的优点。在一个半完整的制剂，嘴唇和颊质量仍连接，但太充分喂养运动减少制剂，观察到14。一个料头准备15,16允许的观察喂养体外变动。然而，日供料头的制备是更复杂的设置比这里所描述的暂停的颊质量，并只提供单个神经元中的神经节的访问，而不是在颊神经节。供料头准备有一个优势，在存在的嘴唇和前触须允许编译器生成的咬模式通过自然的刺激，海藻的应用。虽然它将使实验更困难，它可能是能够结合制剂，离开嘴唇连接颊质量的同时也钉扎颊访问单个神经元的神经节。
喂养方式在海兔可以被归类为摄食或egestive的基于活动的定时上的齿舌神经，它关闭食品抓取器，相对于电机方案的牵引和缩回阶段。如果发生在齿舌神经活动的同时回缩阶段，图案ingestiVE，因为抓取器关闭和收缩，因为它试图拉食物进入口腔。如果齿舌神经活动发生在牵引阶段，模式是egestive的，因为抓取器被关闭和地延长推料满分颊腔2。
摄食的模式可以被分为至少两个不同的子类型：咬入，试图把握食品，和吞咽，运输已经掌握食品1,2。然而， 在工体外 （ 如 14,17,18）只注重摄入/排遗作用的二分法，而不是试图区分咬吞咽。 在体外摄食模式进行了分类，在两个研究16,19状咬和吞咽像。在第一项研究中，观察到的模式在孤立的神经，如果相关的进给运动的颊质量可以观察到，这将加强该参数，本身的模式代表了咬及吞咽体内 。在第二项研究中，观察到的图案中的供料头准备，所以根据观察到的变动模式被归类，但得到没有录制颊神经节神经元的。
暂停的口腔大量制备提供了一种方法，观察所有三种类型的行为 - 咬，吞咽和拒绝 - 同时记录关键颊神经和肌肉的活动，从单个神经元的刺激和记录。外神经元技术是另一个关键预先在此准备，因为强大的喂养般的动作引起几乎肯定会撞出一个细胞内的电极。细胞外记录单个神经元，这些神经元的活动，在运动程序的时间确定时，这将是很难单独与神经录音，因为许多不同的单位分别是f爱菱同时进行。
我们已观察到，在暂停的颊质量出现供给变动定性在体内所看到的类似。更重要的是，使用以刺激产生咬和拒绝模式（氯化氨甲酰胆碱和颊神经2分支的刺激，分别）被用于在更降低的制剂，我们发现，刺激产生的生理变动借给他们使用在其他设置的可信度。相比之下，以产生吞咽模式，我们结合一个人工的刺激（氯化氨甲酰胆碱）与一种天然食品刺激（海藻钢带）不能施加到隔离神经节。我们还观察到，，神经模式中的悬浮颊质量似乎更类似于体内模式模式相比，减少的准备，获得感官反馈是很重要的塑造模式，由中央人民政府。例如，电机计划在孤立的团伙LIA是典型的长好几倍的时间比在完整动物的运动程序，而运动程序中的悬浮颊质量的持续时间通常更接近完整的动物（未发表的数据）的运动程序。悬浮颊质量的另一个优点是，同时侧和可以得到馈送装置的前视图。前视图提供了类似的观点，会被视为在体内的嘴，颌部肌肉收缩，从而更好地观察。侧视图，允许观察颊肌肉收缩和下方的肌肉的抓取器的向前和向后的运动，使其更容易理解在不同的行为的生物力学的变化。
在此制备中，我们已记录从五个神经（齿舌神经和双侧颊神经2和3）和I2肌肉的同时，并放置多达两个胞外超过确定的电极在神经节中的神经细胞。这将有可能记录，如果实验者所需的额外的神经和/或肌肉。它也将是可能的刺激，并记录从神经元的神经节中，这可能让洞察刺激脑颊的interneurons，一种常见的技术17,19，是否诱导电机方案相似， 在体内的行为。虽然这样做会增加编制的技术难度，颊动脉灌注15可以让准备来产生更强大和更持久的行为（未发表意见）。
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Disclosures
没有利益冲突的声明。
Acknowledgments
这项研究是由美国国立卫生研究院授予NS047073和国家科学基金会资助DMS1010434。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium chloride | Fisher Scientific | S671 | Biological, Certified |
| Potassium chloride | Fisher Scientific | P217 | Certified ACS |
| Magnesium chloride hexahydrate | Acros Organics | 19753 | 99% |
| Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Scientific | M63 | Certified ACS |
| Calcium chloride dihydrate | Fisher Scientifc | C79 | Certified ACS |
| Glucose (dextrose) | Sigma-Aldrich | G7528 | BioXtra |
| MOPS buffer | Acros Organics | 17263 | 99% |
| Carbachol | Acros Organics | 10824 | 99% |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific | SS255 | Certified |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | SA49 | Certified |
| Single-barreled capillary glass | A-M Systems | 6150 | |
| Flaming-Brown micropipette puller model P-80/PC | Sutter Instruments | Filament used: FT345B | |
| Enamel coated stainless steel wire | California Fine Wire | 0.001D, coating h | |
| Household Silicone II Glue | GE | ||
| Duro Quick-Gel superglue | Henkel corp. | ||
| A-M Systems model 1700 amplifier | A-M Systems | Filter settings:300-500 Hz nerves,10-500 Hz I2 muscle | |
| Pulsemaster Multi-Channel Stimulator | World Precision Instruments | A300 | |
| Stimulus Isolator | World Precision Instruments | A360 | |
| AxoGraph X | AxoGraph Scientific | ||
| Veeder-Root Totalizing Counter | Danaher | C342-0562 | |
| Gold Connector Pins | Bulgin | SA3148/1 | |
| Gold Connector Sockets | Bulgin | SA3149/1 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer | Dow Corning | ||
| 100 x 50 mm Crystalizing Dish | Pyrex | ||
| High Vacuum Grease | Dow Corning | ||
| Pipet Tips | Fisher Scientific | 21-375D | |
| Minutien Pins | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Modeling Clay | Sargent Art | 22-4400 | |
| Silk Sutures | Ethicon | K89OH | |
| Whisper Air Pump | Tetra | 77849 | |
| Aquarium Tubing | Eheim | 7783 | 12/16 mm |
| Elite Airstone | Hagen | A962 | |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Dumont #5 Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Yaki Sushi Nori Seaweed | Rhee Bros | ||
| Kimwipes | Kimberly-Clark | 34155 |
References
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