Encyclopedia of Experiments: Biology
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- शुरू करने के लिए, एक छह लेन agarose प्लेट की प्रत्येक लेन में पांच लार्वा रखें । अतिरिक्त अंडा पानी जोड़ें, लेकिन गलियों को ओवरफिल न करें । अंडे के पानी में मेथिलीन नीला होता है, जो मोल्ड ग्रोथ को रोकता है । लार्वा को अपने तनाव को कम करने के लिए कम से 10 मिनट के लिए अनुकूलित करें ।
अब वेल प्लेट को लैपटॉप की स्क्रीन के ऊपर इमेजिंग चैंबर में रखें। कुआं प्लेट पर कैमरा फोकस करें। लेन को पूरी तरह अंडे के पानी से भर दें।
इसके बाद, समय-चूक छवियों को लेकर खाली पृष्ठभूमि पर रखे लार्वा के व्यवहार को रिकॉर्ड करें। लैपटॉप स्क्रीन पर एक चलती लाल पट्टी प्रदर्शित करें, और चलती लाल पट्टी के जवाब में लार्वा की समय चूक छवियों को लें।
लाल आकार को एक खतरा, एक अपरिवर्तनीय उत्तेजना के रूप में माना जाता है, और लार्वा तनाव का कारण बनता है। इसके जवाब में, वे बार से बचते हैं और सकारात्मक थिग्मोटैक्सिस का प्रदर्शन करते हैं। सकारात्मक थिग्मोटैक्सिस दीवार के साथ संपर्क की मांग करने वाली उत्तेजना और लेन के किनारे पर तैराकी के लिए मछली की प्रतिक्रिया है।
उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम दवा यौगिकों या पर्यावरण विषाक्त पदार्थों के साथ इलाज किए गए जेब्राफिश लार्वा के परिहार और थिज्मोटाटिक प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण करेंगे।
- छवि कैप्चर शुरू करने के लिए, लार्वा तनाव को कम करने में मदद करने के लिए पेट्री डिश से एगर उठे लेन में लार्वा को सावधानी से स्थानांतरित करें। 20 लार्वा प्रत्येक लेन में रखे जा सकते हैं, लेकिन प्रति लेन पांच लार्वा आमतौर पर तैरने की गति की सबसे सटीक ट्रैकिंग की सुविधा के लिए और प्रति प्रयोग आवश्यक लार्वा की संख्या को कम करने के लिए उपयोग किए जाते हैं।
प्रयोग के आधार पर फार्मास्यूटिकल्स या विषाक्त पदार्थों के साथ या बिना अंडे के पानी के साथ गलियों को भरें। ओवरफ्लो को रोकने के लिए इमेजिंग अलमारियाँ में रखे जाने तक गलियों को सभी तरह से न भरें। लार्वा को स्वीकार करने के लिए 10 मिनट की अनुमति दें। अनुकूलन अवधि के बाद, लैपटॉप स्क्रीन के शीर्ष पर सीधे हाथ से चार प्लेटों की स्थिति रखें।
इस समय, गलियों को अंडे के पानी या रासायनिक उपचार के साथ सबसे ऊपर किया जा सकता है ताकि यह लेन के शीर्ष के साथ स्तर हो, छवियों में गलियों के किनारों पर छाया को खत्म करने के लिए ।
समय चूक फोटोग्राफी के लिए कंप्यूटर प्रोग्राम, प्रति प्रयोग कुल 300 छवियों के लिए हर छह सेकंड में तस्वीरें लेने. वीडियो की गति से इमेजिंग के लिए एक कम संकल्प पर कैमरा सेट करें । जबकि कम संकल्प रिकॉर्डिंग को एक ही मल्टी वेल प्लेट तक सीमित करता है, वीडियो रिकॉर्डिंग तेजी से तैराकी की घटनाओं इमेजिंग के लिए उपयुक्त हैं ।
लार्वा के लिए एक अपरिवर्तनीय उत्तेजना के रूप में पावरपॉइंट प्रस्तुति का उपयोग करें। इस प्रदर्शन में, पावरपॉइंट 15 मिनट के लिए एक खाली सफेद पृष्ठभूमि के साथ शुरू होता है, इसके बाद प्लेट के शीर्ष आधे हिस्से पर एक चलती लाल पट्टी के 15 मिनट के बाद। agarose laness के भीतर तरल के वाष्पीकरण से बचने के लिए, अधिकतम इमेजिंग समय को एक घंटे से नीचे रखें।
