Encyclopedia of Experiments: Biology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Başlamak için, altı şeritli bir agarose tabağının her şeridine beş larva yerleştirin. Ek yumurta suyu ekleyin, ancak şeritleri aşırı doldurmayın. Yumurta suyu küf büyümesini önleyen metilen mavisi içerir. Larvaların streslerini azaltmak için en az 10 dakika iklimlendirmesine izin verin.
Şimdi kuyu plakasını bir dizüstü bilgisayar ekranının üzerindeki görüntüleme odasına yerleştirin. Kamerayı kuyu plakasına odaklayın. Şeridi tamamen yumurta suyuyla doldurun.
Daha sonra, zaman atlamalı görüntüler çekerek boş arka plana yerleştirilen larvaların davranışını kaydedin. Dizüstü bilgisayar ekranında hareketli bir kırmızı çubuk görüntüleyin ve hareketli kırmızı çağa yanıt olarak larvaların zaman atlamalı görüntülerini alın.
Kırmızı şekil bir tehdit, aversif bir uyaran olarak algılanır ve larva stresine neden olur. Yanıt olarak, çubuktan kaçınırlar ve pozitif tiygmotaxis gösterirler. Pozitif tiygmotaxis, balığın duvarla temas etmek ve şeridin kenarında yüzmek isteyen uyarana yanıtıdır.
Örnek protokolde, farmasötik bileşikler veya çevresel toksinlerle tedavi edilen zebra balığı larvalarının kaçınma ve thigmotactic yanıtlarını analiz edeceğiz.
- Görüntü yakalamaya başlamak için larvaları dikkatlice Petri kabından agarose şeridine taşıyarak larva stresini azaltmaya yardımcı olun. Her şeride 20'ye kadar larva yerlenebilir, ancak şerit başına beş larva tipik olarak yüzme hızının en doğru şekilde izlenmesini kolaylaştırmak ve deney başına gerekli olan larva sayısını azaltmak için kullanılır.
Deneye bağlı olarak yolları ilaçlı veya toksik maddeli veya toksik maddesiz yumurta suyu ile doldurun. Taşmayı önlemek için görüntüleme kabinlerine yerleştirilene kadar şeritleri tamamen doldurmayın. Larvaların alışması için 10 dakika bekleyin. İklimlendirme süresinden sonra, dört plakayı doğrudan dizüstü bilgisayar ekranının üzerine elle yerleştirin.
Şu anda, şeritler yumurta suyu veya kimyasal işlem ile doldurulabilir, böylece görüntülerdeki şerit kenarlarındaki gölgeleri ortadan kaldırmak için şeridin üst kısmıyla seviye atlayabilir.
Bilgisayarı zaman atlamalı fotoğrafçılık için programlayın, deney başına toplam 300 görüntü için her altı saniyede bir fotoğraf çekin. Kamerayı video hızında görüntüleme için daha düşük bir çözünürlüğe ayarlayın. Alt çözünürlük kayıtları tek bir çoklu kuyu plakasıyla sınırlarken, video kayıtları hızlı yüzme olaylarını görüntülemek için uygundur.
Bir PowerPoint sunumunu larvalar için aversive uyaran olarak kullanın. Bu gösteride, PowerPoint 15 dakika boyunca boş bir beyaz arka planla başlar, ardından plakanın üst yarısında 15 dakikalık hareketli kırmızı çubuk. Agarose şeritlerindeki sıvının buharlaşmasını önlemek için maksimum görüntüleme süresini bir saatin altında tutun.
